2010/JANUARY

[ www.water s.com ] 反相流动相缓冲溶液选择和配制指南 Sunday Monday Tuesday Wednesday Thursday Friday

1
元旦
Saturday

十八
2
3
十九
4
二十 小寒
5 廿二
6 廿三
7 廿四
8 廿五
9
10 11 12 13 14 15 16
流动相化学名 pKa值* 缓冲pH范围 分子式 浓度 "体积或质量(/l L) 配制方法 调整pH值的酸/碱 是否MS兼容？ 廿六 廿七 廿八 廿九 三十 十二月 初二

17
初三
18
初四
19
初五
20
大寒
21
初七
22
腊八节
23
初九
冰乙酸 4.8 CH3COOH 0.10% 1.00 ml 1 是 24初十
25 26 27 28 29 30
冰乙酸 4.8 CH3COOH 10 mM 0.571 ml 1 是
十七 31 十一 十二 十三 十四 十五 十六

乙酸铵 pKa1 4.76 3.76-5.76 CH3COONH4 10 mM 0.770 g 2 氨水或醋酸 是 2010/FEBRUARY

乙酸铵 pKa2 9.2 8.2-10.2 CH3COONH4 10 mM 0.770 g 2 醋酸或氨水 是
1 2 3 4 5 6
碳酸氢铵 9.2, 10.3 8.2-11.3 NH4HCO3 10 mM 0.790 g 2 甲酸或氨水 是 十八 十九 二十 立春 廿二 廿三

7 8 9 10 11 12 13
甲酸铵 pKa 1 3.8 2.8-4.8 NH4COOH 10 mM 0.640 g 2 甲酸或氨水 是 廿四 廿五 廿六 廿七 廿八 廿九 除夕

甲酸铵 pKa2 9.2 NH4COOH 10 mM 0.640 g 2 甲酸或氨水 是

14 15 16 17 18 19 20
春节 初二 初三 初四 初五 雨水 初七

氨水 9.2 NH4OH 0.10% 1.00 ml 1 是 21 22 23 24 25 26 27

采用BEH(亚乙基桥杂化颗粒)颗粒技术 初八

28
初九 初十 十一 十二 十三 十四

氨水 9.2 NH4OH 10 mM 0.675 ml 1 是

元宵节

磷酸氢二铵 7.2, 9.2 6.2-10.2 (NH4)2HPO4 10 mM 1.32 g 2 磷酸或氨水 否

C18 2010/MARCH
甲酸 3.8 HCOOH 0.10% 1.00 ml 1 是
• 三键键合C18，全封端，键合至BEH(亚乙基桥杂化技术)颗粒 Sunday Monday Tuesday Wednesday Thursday Friday Saturday

• 颗粒：2.5, 3.5, 5, 10以及1.7m ACQUITY UPLC® BEH色谱柱技术 甲酸 3.8 HCOOH 10 mM 0.420 ml 1 是 1 2 3 4 5 6

十六 十七 十八 十九 惊蛰 廿一
• 孔径：135 Å；比表面积：185 m2/g；碳载量：18% N-甲基吡咯烷(NMP) 10.3 C5H11NO 0.10% 1.00 ml 1 是 7 8 9 10 11 12 13
• pH值范围：1-12；低pH值下的温度限：80℃；高pH值下的温度限：60℃ 廿二 妇女节 廿四 廿五 廿六 廿七 廿八
N-甲基吡咯烷(NMP) 10.3 C5H11NO 10 mM 1.04 ml 1 是
• 通用型色谱柱，方法开发的最佳选择；适合于大多数化合物分析，pH稳定范围很宽 14
廿九
15
三十
16
二月
17
初二
18
初三
19
初四
20
初五
磷酸 2.1 H3PO4 0.10% 1.00 ml 1 否
21 22 23 24 25 26 27
Shield RP18 磷酸 2.1 H3PO4 10 mM 0.580 ml 1 否 春分 初七 初八 初九 初十 十一 十二

28 29 30 31
• 嵌入极性基团C18，单键键合，全封端，键合至BEH(亚乙基桥杂化技术)颗粒 磷酸二氢钾 2.1 1.1-3.1 KH2PO4 10 mM 1.36 g 2 磷酸或氢氧化钾 否 十三 十四 十五 十六

• 颗粒：2.5, 3.5, 5, 10以及1.7m ACQUITY UPLC® BEH色谱柱技术 7.2 6.2-8.2 K2HPO4 10 mM 1.74 g 2
磷酸氢二钾 磷酸或氢氧化钾 否 2010/APRIL
• 孔径：135 Å；比表面积：185 m2/g；碳载量：17%
磷酸钾 12.7 11.7-13.7 K3PO4 10 mM 2.12 g 2 磷酸或氢氧化钾 否 Sunday Monday Tuesday Wednesday Thursday Friday Saturday
• pH值范围：2-11；低pH值下的温度限：50℃；高pH值下的温度限：45℃
吡咯烷 11.3 C4H9N 0.10% 1.00 ml 1 是 1 2 3
• 同直链C18柱有互补的分离选择性，对酚类化合物有独特的选择性；耐受100%水性流动相 十七 十八 十九

吡咯烷 11.3 C4H9N 10 mM 0.833 ml 1 是 4 5 6 7 8 9 10

二十 清明节 廿二 廿三 廿四 廿五 廿六
C8 四硼酸钠 9.1,12.7,13.8 8.2-14 Na2B4O7 10 mM 2.01 g 2 H3BO4或氢氧化钠 否 11 12 13 14 15 16 17
• 三键键合C8，全封端，键合至BEH(亚乙基桥杂化技术)颗粒 廿七 廿八 廿九 三月 初二 初三 初四

柠檬酸三钠 3.1,4.8,6.4 2.1-7.4 HOC(COONa)(CH2COONa)2 10 mM 2.58 g 2 柠檬酸或氢氧化钠 否 18 19 20 21 22 23 24

• 颗粒：2.5, 3.5, 5, 10以及1.7m ACQUITY UPLC® BEH色谱柱技术 初五 初六 谷雨 初八 初九 初十 十一

• 孔径：135 Å；比表面积：185 m2/g；碳载量：13% 三乙胺TEA 11.01 (CH3CH2)3N 10 mM 1.39 ml 1 是 25 26 27 28 29 30

十二 十三 十四 十五 十六 十七
• pH值范围：1-12；低pH值下的温度限：60℃；高pH值下的温度限：60℃ "1.39 ml TEA
乙酸三乙 基胺(TEAA) 非缓冲体系 (CH3CH2)3N:CH3COONH4 10 mM 2 三乙胺或乙酸 是
• 疏水性较低，与C18柱相比，对大多数分析物保留较弱 0.571 mL 乙酸" 2010/MAY
• 通用型色谱柱，方法开发的最佳选择；适合于大多数化合物分析，pH稳定范围很宽 Sunday Monday Tuesday Wednesday Thursday Friday Saturday
"0.695 ml TEA
乙酸三乙基胺 pKa1(TEAA) 4.76 3.8-5.8 (CH3CH2)3N:CH3COONH4 (1:2) 10 mM 2 三乙胺或乙酸 是 1
Phenyl 0.571 mL 乙酸" 劳动节

2 3 4 5 6 7 8
• 三键键合C6 苯基，全封端，键合至BEH(亚乙基桥杂化技术)颗粒 "1.39 ml TEA 十九 二十 青年节 立夏 廿三 廿四 廿五
乙酸三乙基胺 pKa2(TEAA) 11.01 10.0-12.0 (CH3CH2)3N:CH3COONH4 (2:1) 10 mM 2 三乙胺或乙酸 是 9 10 11 12 13 14 15
• 颗粒：2.5, 3.5, 5, 10以及1.7m ACQUITY UPLC® BEH色谱柱技术 0.285 mL 乙酸" 廿六 廿七 廿八 廿九 三十 四月 初二
• 孔径：135 Å；比表面积：185 m2/g；碳载量：15% 16 17 18 19 20 21 22
"1.39 ml TEA
• pH值范围：1-12；低pH值下的温度限：80℃；高pH值下的温度限：60℃ 甲酸三乙基胺(TEAF) 非缓冲体系 (CH3CH2)3N:NH4COOH 10 mM 2 三乙胺或甲酸 是
初三 初四 初五 初六 初七 小满 初九

0.420 mL 甲酸" 23初十

24十一
25 26 27 28 29
• 具有互补选择性的优良的方法开发色谱柱，尤其适用于聚芳香族化合物 十七 30 十八 31 十二 十三 十四 十五 十六

• 方法开发的最佳选择，提供互补的分离选择性，对芳香族化合物有独特选择性，pH稳定范围很宽 "0.695 ml TEA

甲酸三乙基胺 pKa 1(TEAF) 3.75 2.8-4.8 (CH3CH2)3N:NH4COOH (1:2) 10 mM 2 三乙胺或甲酸 是 2010/JUNE
0.420 mL 甲酸"
HILIC "1.39 ml TEA
Sunday Monday Tuesday Wednesday Thursday Friday Saturday

• 未键合的BEH(亚乙基桥杂化技术)颗粒 1 2 3 4 5
甲酸三乙基胺 pKa 2(TEAF) 11.01 10.0-12.0 (CH3CH2)3N:NH4COOH (2:1) 10 mM 2 三乙胺或甲酸 是 儿童节 二十 廿一 廿二 廿三

• 颗粒：2.5, 3.5, 5, 10以及1.7m ACQUITY UPLC® BEH色谱柱技术 0.210 mL 甲酸"

6 7 8 9 10 11 12
芒种 廿五 廿六 廿七 廿八 廿九 五月
• 孔径：135 Å；比表面积：185 m2/g 三氟乙酸(TFA) 0.3 CF3COOH 0.10% 1.0 mL 1 是
13 14 15 16 17 18 19
• pH值范围：1-8 三氟乙酸(TFA) 0.3 CF3COOH 10 mM 0.743 mL 1 是
初二 初三 初四 端午节 初六 初七 初八

• 特别适合保留强极性碱性水溶性化合物，专门设计用于HILIC分离，使用含有高比例有机溶剂的流动相 20 21 22 23 24 25 26
初九 夏至 十一 十二 十三 十四 十五

配制方法： 27 28 29 30
* 缓冲溶液的pKa值和缓冲pH范围数据是基于水相体系的，加入有机溶剂可能会改变溶液的表观pH值。 十六 十七 十八 十九

2010/JULY
Sunday Monday Tuesday Wednesday Thursday Friday Saturday
1. 在950mL超纯水(预先经HPLC专用0.2m滤膜过滤处理)中加入表中指定量的流动相试剂； 表1 表3 1 2 3
混合均匀；
20
10µm 粒径
1970’s HPLC 14 建党节 廿一 廿二

13 中性化合物 (N) 4 5 6 7 8 9 10
测量溶液pH值； B A 廿三 廿四 廿五 小暑 廿七 廿八 廿九
12 N
用超纯水(预先经HPLC专用0.2m滤膜过滤处理)配制至1L；
5 µm 粒径
pH 2 11 12 13 14 15 16 17
11 三十 六月 初二 初三 初四 初五 初六
15 1980’s
转入流动相储液瓶
Atlantis 10
酸性有机化合物 (A)
18
初七
19
初八
20
初九
21
初十
22
十一
23
大暑
24
十三

HETP (µm)
9 0 1 2 3
最佳流速范围 25 26 27 28 29 30 31
2. 在400 mL超纯水中加入表中指定量的流动相试剂；
T3 10 3.5 µm 粒径
1990’s
8
A,B
十四 十五 十六 十七 十八 十九 二十

保留因子(k)
• 混合均匀； 7
三键键合C18，全封端，键合至超纯硅胶颗粒 N
pH 5
2010/AUGUST
• 颗粒：3, 5, 10m 用HPLC专用0.2m滤膜过滤； 6
5
• 孔径：100 Å；比表面积：330 m2/g；碳载量：14% 用指定的试剂调节pH值； 1.7 µm 粒径 5
2004 1 2 3 4 5 6 7
• pH值范围：2-8；低pH值下的温度限：45℃；高pH值下的温度限：45℃ 4 0 1 2 3 建军节 廿二 廿三 廿四 廿五 廿六 廿七
用超纯水(预先经HPLC专用0.2m滤膜过滤处理)配制至1L，脱气后转移到流动相储液瓶 ACQUITY UPLC ®系统 8 9 10 11 12 13 14
• 与100%纯水相流动相条件兼容 0
3 B
立秋 廿九 七月 初二 初三 初四 初五
0 1 2 3 4 5 6 7 2
N 15 16 17 18 19 20 21
HILIC 线速度(µ, mm/sec) 1
A
pH 10
初六 初七 初八 初九 初十 十一 十二

• 未键合的超纯硅胶颗粒
沃特世反相色谱柱选择性表 体积流速[mL/min]:
0
碱性有机化合物 (B)
22 23 24 25 26 27 28
十三 处暑 十五 十六 十七 十八 十九
柱内径= 1.0 mm 0.04 0.07 0.10 0.13 0.17 0.20 0.24 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
• 颗粒：3, 5m 29 30 31
柱内径 = 2.1 mm 0.15 0.03 0.45 0.6 0.75 0.9 1.05 0 1 2 3
• 孔径：100 Å；比表面积：330 m2/g pH 二十 廿一 廿二

• pH值范围：2-7 登陆www.waters.com/selectivitychart下载反相色谱柱选择软件 柱内径 = 4.6 mm 0.7 1.4 2.1 2.8 3.5 4.2 4.9
2010/SEPT EMBER
• 特别适合保留强极性碱性水溶性化合物，专门设计用于HILIC分离，使用含有高比例有机溶剂的流动相
Sunday Monday Tuesday Wednesday Thursday Friday Saturday

廿三
1 廿四
2 廿五
3 廿六
4
表2 5 6 7 8 9 10 11
相对洗脱强度 表1：Van Deemter曲线 廿七 廿八 廿九 白露 初二 教师节 初四

100% 每一种不同大小的颗粒都对应其最佳线速度/流速，本表中的数据是基于分子量低于500的化合物； 12 13 14 15 16 17 18
初五 初六 初七 初八 初九 初十 十一

90% 对于大分子，需要适当降低流速。 19 20 21 22 23 24 25
十二 十三 十四 中秋节 秋分 十七 十八

80% 26 27 28 29 30
表2：溶剂洗脱强度 十九 二十 廿一 廿二 廿三

70%
Acetonitrile
反相色谱最常用的三种有机溶剂的洗脱强度对应表。 2010/OCTOBER
% 乙腈或四氢呋喃

60% Sunday Monday Tuesday Wednesday Thursday Friday Saturday

50% 表3：反相保留图 1 2
国庆节 廿五
THF
Sunfire 40%
流动相pH值是方法开发中调节可离子化化合物出峰顺序的最有效工具，在极端pH条件下得到的方法
耐受性最好。
3
廿六
4
廿七 廿八
5
廿九
6
三十
7
寒露
8
初二
9
30% 10 11 12 13 14 15 16
C18 初三 初四 初五 初六 初七 初八 重阳节

20% 17 18 19 20 21 22 23
• 两键键合C18，全封端，键合至超纯硅胶颗粒 初十 十一 十二 十三 十四 十五 霜降

• 颗粒：2.5, 3.5, 5, 10m 10% 24十七

25 26 27 28 29 30
廿四 31 十八 十九 二十 廿一 廿二 廿三

• 孔径：100 Å；比表面积：340 m2/g；碳载量：16% 0%

• pH值范围：2-7；低pH值下的温度限：50℃；高pH值下的温度限：40℃ 0% 20% 40% 60% 80% 100% 2010/NOV EMBER

• 通用型的方法开发色谱柱，柱容量很高，峰形好，特别适合在酸性流动相条件下分析碱性化合物； % 甲醇 Sunday Monday Tuesday Wednesday Thursday Friday Saturday

也是制备纯化和杂质分析的理想选择 1 2 3 4 5 6
廿五 廿六 廿七 廿八 廿九 十月

7 8 9 10 11 12 13
C8
立冬 初三 初四 初五 初六 初七 初八
反相色谱柱选择性表代表了不同反相色谱柱的疏水性(X轴)和表面活性(Y轴)，对选择反相
14 15 16 17 18 19 20
• 两键键合C8，全封端，键合至超纯硅胶颗粒 色谱柱是一个有用的工具。 初九 初十 十一 十二 十三 十四 十五

• 颗粒：2.5, 3.5, 5, 10m 21 22 23 24 25 26 27

十六 小雪 十八 十九 二十 廿一 廿二

• 孔径：100 Å；比表面积：340 m2/g；碳载量：11.5% 28 29 30

廿三 廿四 廿五
• pH值范围：2-7；低pH值下的温度限：40℃；高pH值下的温度限：40℃
• 通用型的方法开发色谱柱，柱容量很高，峰形好，特别适合在酸性流动相条件下分析碱性化合物； 2010/DECEMBER
疏水性较C18弱，因此对大多数化合物的保留比C18弱 Sunday Monday Tuesday Wednesday Thursday Friday Saturday

1 2 3 4
廿六 廿七 廿八 廿九

5 6 7 8 9 10 11
三十 十一月 大雪 初三 初四 初五 初六

12 13 14 15 16 17 18
初七 初八 初九 初十 十一 十二 十三
* 建议在色谱柱允许的pH和温度条件下使用，以保障最长的柱寿命
19 20 21 22 23 24 25
十四 十五 十六 冬至 十八 十九 圣诞节

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26 27 28 29 30 31
廿一 廿二 廿三 廿四 廿五 廿六