(Cây Hòe Hoa) A FRUIT EXTRACT OF STYPHNOLOBIUM JAPONICUM (L.) COUNTERACTS OXIDATIVE STRESS AND MEDIATES NEUROPROTECTION IN CAENORHABDITIS ELEGANS

A FRUIT EXTRACT OF STYPHNOLOBIUM JAPONICUM (L.
)
COUNTERACTS OXIDATIVE STRESS AND MEDIATES
NEUROPROTECTION IN CAENORHABDITIS ELEGANS
Sara Thabit, Heba Handoussa, Nesrine S. ElSayed, Hans-Georg Breitinger, Jonathan Lam
Nguyen, Ulrike Breitinger and Michael Wink
Author information Article notes Copyright and License information PMC Disclaimer
Abstract
Background
Despite its widespread uses in Chinese and European medicine, Styphnolobium

japonicum (Chinese scholar tree, formerly Sophora japonicum) has not been extensively
investigated for its potential to protect against neurodegenerative processes and to promote
resistance to oxidative stress. In this study, we evaluated the neuroprotective activities of a
hydroalcoholic extract from Chinese scholar tree fruits that could be possibly linked to its
antioxidant properties using Caenorhabditis elegans as a well-established in vivo model.
Methods
Survival rate in mutant daf-16 and skn-1 worms, stressed by the pro-oxidant juglone and treated
with the extract, was tested. Localization of the transcription factors SKN-1 and DAF-16, and
expression of gst-4 were measured. For evaluation of neuroprotective effects, formation of
polyglutamine (polyQ40) clusters, α-synuclein aggregates, loss of amphid sensilla (ASH)
neuronal function, and amyloid β (Aβ) accumulation (as markers for Huntington’s, Parkinson’s,
and Alzheimer’s) was examined.
Results
The extract, which contains substantial amounts of phenolic phytochemicals, showed an

increase in the survival rate of worms challenged with juglone in daf-16 mutants but not in skn-
1 mutants. The transcription factor SKN-1 was activated by the extract, while DAF-16 was not
affected. Upon application of the extract, a significant decline in GST-4 levels, polyQ40 cluster
formation, number of lost ASH sensory neurons, α-synuclein aggregation, and paralysis
resulting from Aβ accumulation was observed.
Conclusions
Styphnolobium japonicum fruit extract activated the SKN-1/Nrf2 pathway, resulting in oxidative
stress resistance. It revealed promising pharmacological activities towards treatment of
Huntington’s, Parkinson’s, and Alzheimer’s diseases. Polyphenolics from Styphnolobium
japonicum may be a promising route towards treatment of CNS disorders, but need to be tested
in other in vivo systems.
Supplementary Information
The online version contains supplementary material available at 10.1186/s12906-023-04149-8.
Keywords: Caenorhabditis elegans, SKN-1/Nrf2, Oxidative stress,

Neuroprotection, Styphnolobium japonicum
Background
Styphnolobium japonicum L. (SJ, Chinese scholar tree) (Fabaceae), previously known

as Sophora japonica L., originates from East Asia. Since the tree is used as an ornamental plant,
it can be found in temperate regions around the world [1, 2]. Many parts of the plant are edible
after cooking including leaves, seeds, and flowers. The seed endosperm is also eaten as a dessert
in Northern China by cooking with sugar [3–6].
The chemical profile of SJ shows a broad variety of secondary metabolites with a wide array of
pharmacological effects. Secondary metabolites include polysaccharides and phenolic
compounds such as phytoestrogens, flavonoids, which are mostly found in flowers and buds,
and isoflavonoids, in fruits and seeds [7–9]. Major flavonoids and isoflavonoids that were
identified include quercetin, kaempferol, genistein, and most importantly rutin, a major
constituent of Flos Sophorae Immaturus (Flower of Sophora japonica L.) that is known for its
antioxidant, anti-inflammatory, and anti-edemic properties [10–14].
Numerous studies describe beneficial biological effects of different SJ extracts, such as

antibacterial, antihyperglycemic, anti-obesity, antihemorrhagic, cardiovascular, antitumor, anti-
angiogenic, anti-atherosclerotic, antioxidant, neuroprotective, and most commonly anti-
inflammatory and anti-osteoporotic activities [9, 15–19].
The antioxidant properties of an ethanol extract of SJ were manifested by its ability to prevent
the production of H2O2 using a Saccharomyces cerevisiae yeast model [16]. Neuroprotective
activities were also proposed for an extract of SJ flower buds. A previous study revealed that the
extract was able to decrease the extent of neurological deficit and cerebral infarction area in a
rat model of cerebral infarction induced by ischemia–reperfusion injury. These effects were
attributed to the ability of SJ to decrease IL-1β expression, suppress the activation of microglia,
and reduce cell apoptosis [19]. However, studies addressing the neuroprotective properties of SJ
are limited.
The process of ageing, far from being fully understood, involves the gradual decline in the
functionality of organisms, including the central nervous system. This is the main cause of many
fatal disorders such as cancer and neurological diseases. Many neurological disorders such as
Alzheimer’s disease (AD), Parkinson’s disease (PD) and Huntington’s disease (HD) have
unclear pathogenesis and no treatment to reverse progress of the disease [20–22]. Thus, search
of new agents that can help to prevent onset of the disease, or improve clinical symptoms is of
high relevance. Different theories about ageing were suggested, such as the free radical theory,
which is based upon reactive oxygen species (ROS) that are produced in the mitochondria as a
by-product of metabolism. The rise in ROS levels causes oxidative stress. ROS react with
proteins and nucleic acids, leading to mutations and can cause lipid peroxidation [23, 24].
Neurons can severely suffer from oxidative stress due to their high oxygen demand and low
antioxidant levels [25]. Hence, agents with antioxidant activities might protect against the
development of neurological disorders with age and thus preserve and enhance quality of life.
The nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) is an extensively used in vivo model for
investigations of the molecular mechanisms by which plant extracts and compounds exert
antioxidant, neuroprotective, and anti-aging effects [26, 27]. They are easy to maintain and
manipulate compared to mammalian animal models and present a simple, well-defined model
for a multicellular organism.
To our knowledge, the effects of SJ extracts on AD, PD and HD nematode models have not yet
been tested. In this study, the in vitro antioxidant properties of a hydroalcoholic extract from
dried fruits of SJ were investigated using cupric ion reducing antioxidant capacity (CUPRAC)
assay. Profiling of phenolic constituents in the extract via HPLC–PDA-ESI–MS/MS had been
carried out by our group previously [28]. Considering the potential role of oxidative stress in
neurodegeneration, the ability to counteract oxidative stress and the participation of the
transcription factors DAF-16/FOXO and SKN-1/Nrf2 in this effect were studied using different
strains of C. elegans. A survival assay was carried out utilizing daf-16 and skn-1 mutant strains.
In addition, assessment of DAF-16 and SKN-1 nuclear localization was performed and the
expression of glutathione S-transferase-4 (GST-4) was quantified. Since protein accumulation is
a characteristic feature of many CNS related disorders, the ability of SJ extract to counteract this
effect was tested using special models of C. elegans. Quantification of polyglutamine (PolyQ40)
clusters, a pathological feature in many diseases like HD, was assessed in strain AM141, and α-
synuclein aggregate accumulation, implicated in PD, in strain NL5901. Preserving functional
amphid sensilla (ASH) neurons was studied using HA759 strain. Finally, the influence of the
extract on amyloid β (Aβ) aggregation characterizing AD was evaluated through studying
paralysis in worms expressing human Aβ genes in their muscles [29, 30].
Methods
Plant extraction
Dried fruits of SJ were commercially obtained from a company specializing in medicinal plants,
Kräuter Schulte, Germany. There are no legal, ethical or other restrictions that would limit the
use of this material. A voucher specimen was deposited at Pharmaceutical Biology Department
Herbarium, German University in Cairo, Egypt (Specimen no. 0047).
A hydroalcoholic extract of 1 kg dried fruits was prepared by grinding them, followed by three
rounds of overnight maceration at 55 °C in 2.5 L of 70% methanol with agitation. The extract
was filtered, concentrated in vacuum, at 37 °C with a rotavap, and lyophilized. The crude
extract was stored at -20 °C. Profiling of phenolic constituents in the extract was performed via
HPLC–PDA-ESI–MS/MS as previously described [28].
CUPRAC assay
This assay was carried out to assess in vitro antioxidant capacity by estimating the ability of SJ
extract to reduce cupric (Cu2+) to cuprous (Cu+) ions [30]. Butylated hydroxyl anisole (BHA)
was utilized as a standard (Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany), at concentrations of 50, 100,
200, and 400 µg/mL. One mL of 7.5 mM neocuproine (Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany),
dissolved in ethanol, 1 mL of 0.01 M CuCl2, and 1 mL of 1 M NH4Ac were added to 0.3 mL of
either the standard or SJ extract (50, 100, 200, and 400 µg/mL). Purified water was added to all
test tubes to yield 4.1 mL final volume. Absorbance of the mixture was read at 450 nm versus a
blank after 30 min. Data points were plotted and fitted to a linear regression using the equation
y = ax + b; EC50 for SJ extract was calculated using the equation: EC50 = 0.5-b/a.
Strains of Caenorhabditis elegans
C. elegans strains employed in the various assays, in addition to E. coli OP50, were obtained
from Caenorhabditis Genetics Center, Minnesota University, USA. The strains utilized were
CF1038 (daf-16(mu86)I), EU1 [skn-1(zu67) IV/nT1(IV;V)], TJ356
(zIs356[daf-16p::daf-16a/b::GFP + rol-6]), LD1 [skn-1b/c::GFP + rol-6(su1006)], CL2166
(dvIs19[pAF15(gst-4::GFP::NLS)]), AM141 (rmls133[unc-54p::Q40::YFP]),
HA759 (rtIs11[osm-10p::GFP + osm10p::HtnQ150 + Dpy-20( +)]), NL5901 (Punc-54::alpha-
synuclein::YFP + unc-119), CL4176 (dvIs27[myo-3p::A-Beta (1–42)::let-851 30UTR) C rol-
6(su1006)]) X, and CL802 [smg-1(cc546) I; rol-6(su1006) II]. Plates containing nematode
growth medium supplied with E. coli OP50 as food for worms were incubated at 20 °C
incubator during experiment time. CL4176 and CL802 strains only were kept at 16 °C
incubator. To obtain worms with synchronized age, we followed a previously established
protocol of bleaching adult hermaphrodites to take their eggs using 5 M NaOH and 5% NaOCl
in a ratio of 1:3 [30].
Survival assay using juglone
Age-synchronized nematodes CF1038 (daf-16 mutant nematodes) and EU1 (skn-1 mutants) at
L1 stage were divided into eight groups (70–80 worms each) and grown using S-medium and E.
coli OP50 at 20 °C. All groups were left for 48 h after treatment. The hydroalcoholic SJ extract
(at concentrations of 100, 200, and 300 µg/mL) was given to three groups.
( −)- Epigallocatechin gallate (EGCG) (≥ 95%, Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany) at 50

µg/mL was used as a positive control. Three negative control groups were also used, two groups
devoid of treatment and a solvent control group treated with methanol (2.1% final
concentration). One group of nematodes received 100 μg/mL of rutin. After 48 h, all groups
received a lethal dose (80 µM) of juglone (Sigma-Aldrich GmbH, Darmstadt, Germany),
followed by another 24 h of incubation (except for one of the untreated control groups). Finally,
dead and alive worms were counted and recorded. Worms were assumed to be dead when they
could not be provoked upon stimulation with a wire made of platinum. Four independent
repetitions of the experiment were performed and data calculated as mean ± SEM of the survival
rate percentage. Results were compared using GraphPad prism (5.01) and significance tested
using one-way ANOVA followed by Bonferroni’s method (post hoc) [28].
Determining localization of the transcription factor DAF-16
The C. elegans strain TJ356, having daf-16 fused to GFP, was utilized for observing the
localization of DAF-16 transcription factor. L1 synchronized larvae were divided into seven
groups (30–50 worms each) and treated as described above using S-medium + E. coli OP50 at
20 °C. TJ356 worms were investigated after 24 h using fluorescence microscopy. Worms were
fixed on glass slides using 10 mM sodium azide for paralysis. A BIOREVO BZ-9000
microscope, equipped with a mercury lamp, at an excitation and emission wavelengths of
λex 480/20 nm and λem 510/38 nm (Keyence Deutschland GmbH, Neu-Isenburg, Germany) and
an Axiostar Plus 37081 fluorescence microscope (Carl Zeiss) were used to view the nematodes.
Pictures of 30–40 worms were randomly viewed for analysis using 20X objective lens and a
constant time of exposure. Worms were counted after dividing them according to the
localization of DAF-16::GFP to cytosolic, nuclear, or intermediate localization. Analysis and
comparing nuclear results percentage between different groups were done as described above.
Three independent sets of the experiment were performed and averaged.
Determining localization of the transcription factor SKN-1
The C. elegans strain LD1, having skn-1 coupled to GFP, was used to determine localization of
SKN-1 transcription factor. L1 nematodes were divided to six groups (20–30 worms each). All
groups were kept for 48 h in S-medium supplied with E. coli OP50 at 20 °C, and visualized
afterwards with fluorescent microscope. Approximately 20 worms were visualized and analyzed
at constant exposure time using 20X magnification. Three independent assays were run and
worms were divided and counted according to SKN-1::GFP localization as cytosolic or nuclear.
Percentage of worms demonstrating nuclear localization was compared as described above.
GST-4 quantification
The CL2166 strain of C. elegans, with gst-4 fused to GFP, was used in this assay. Nematodes at
the L1 stage of development were divided to seven groups (20–30 worms each) and then left to
grow for 48 h in S-medium and E. coli OP50 at 20 °C. Imaging of 20–30 worms was done using
constant exposure time and 10X magnification. The assay was performed three different times,
and mean fluorescence intensity for the entire body of the nematodes was measured. Analysis
was done using ImageJ version 1.48 (NIH, Bethesda, MD, USA). Data comparison was
performed as described formerly.
Quantitative estimation of polyQ40 clusters
AM141 transgenic nematodes, with polyQ40 coupled to YFP, were age synchronized and used
at the L1 stage. Experimental groups were set up to eight groups, each having 30–40 worms,
and left for 72 h in S-medium + E. coli OP50 at 20 °C. Worms were viewed with fluorescent
microscopy. Around thirty worms were pictured via 10X lens with constant exposure time.
Testing was carried out three times, and the number of PolyQ40::YFP clusters, found within
muscles, was scored all over the bodies of worms. Results are shown as mean number of
clusters ± SEM. Comparison of results was done as previously described.
Chemotaxis assay
HA759 transgenic nematodes were used to assess the viability of ASH neurons in the different
treatment groups based on the chemotaxis behavior of worms as described before [31]. Age
synchronized L1 stage worms were sorted into six groups, 100–150 worms each, and kept at
20 °C in S-medium containing E. coli OP50 for 72 h. Chemotaxis 60 mm NGM plates were
divided into two halves and sodium azide (0.5 M, 1.5 μL) and 0.1% benzaldehyde dissolved in
99.8% ethanol (1.5 μL) were put to the attractant zone. The control zone on the opposite side of
the plate contained 1.5 μL of 0.5 M sodium azide and 1.5 μL of 99.8% ethanol. Afterwards, the
worms were washed using M9 buffer thrice to get rid of E. coli and around 100 worms (5 μL)
were collected from each group and put in the middle of the plates. All plates were incubated at
20 °C for 1.5 h and the number of worms on each side was counted afterwards. Chemotaxis
index was calculated using the following equation: (number of worms in the attractant zone –
number of worms in the control zone) / total number of worms. The data of three assays was
included and expressed as mean ± SEM. Data comparison was performed as mentioned
previously.
Estimation of α-synuclein accumulation
NL5901 transgenic strain was utilized for the assessment of α-synuclein aggregate
accumulation. This strain resembles PD by having human α-synuclein linked to YFP expressed
in the muscle cells of nematodes. Age-synchronized worms were categorized into six groups,
30–40 worms each, and left for 96 h in S-medium with E. coli OP50 at 20 °C. The nematodes
were observed using fluorescence microscopy as described formerly using 10X lens and
constant exposure time. Three independent experiments were carried out, and an average of 15–
20 worms was pictured in each group. Intensity of fluorescence was measured in the head and
pharynx area. Quantification was done using ImageJ, and results were compared as previously
described. Results are shown as mean ± SEM of relative fluorescence intensity.
Paralysis test
This assay uses transgenic CL4176 nematodes. They carry human Aβ gene in their muscles and
exhibit paralysis as a result of toxicity from Aβ aggregation. The control strain CL802, devoid
of Aβ gene, was also incorporated in this assay to exclude any effect arising other than that of
Aβ expression. CL4176 worms were sorted into six groups of 60–80 worms each. SJ extract
was used in two concentrations, 300 and 500 µg/mL. EGCG and rutin groups were given at
doses of 100 and 300 µg/mL, respectively. The assay was done and analyzed as previously
described [30]. Treatment was done on NGM plates and they were kept at 16 °C for duration of
24 h then E. coli OP50 was added to the middle of the plates and they were kept at 16 °C for
another 24 h. Afterwards, bleaching was done to get age-synchronized worms and about 60–80
eggs were added to the center of each plate.
NGM plates treated with worms were left for 48 h at 16 °C, followed by temperature upshift to
25 °C for stimulating Aβ gene expression. Twenty-two hours later, scoring was done for the
worms every 2 h for a period of 12 successive hours. Paralyzed worms are considered the ones
that could not be provoked after touching with a platinum wire or only moved their heads. Data
of three different runs were averaged and presented as mean ± SEM, and PT 50 was obtained
using Kaplan–Meier method of survival analysis. Comparison of results was performed via one-
way ANOVA and Bonferroni’s test.
Results
The in vitro estimation of the antioxidant capacity of the SJ extract was carried out via the
CUPRAC test. Active antioxidants in the extract reduced the CUPRAC reagent producing an
orange color whose absorbance was read at 450 nm. The positive control, BHA, showed an
EC50 of 167 ± 0.5 µg/mL, while SJ extract showed a value of 498.3 ± 0.1 µg/mL.
In a survival assay with C. elegans (CF1038 mutant), challenged by juglone (80 µM) for 24 h,
worms that were pretreated with SJ extract showed significantly higher survival rates at all
tested doses in comparison to worms treated with solvent control + juglone. The protective
effect was similar to that of the known antioxidant polyphenol EGCG from green tea, used as a
positive control. SJ at 300 µg/mL produced the highest survival rate of 71 ± 1% (p < 0.001).
Although the survival rate in the rutin group was lower than that of SJ extract, it still was a
significant increase of 52.6 ± 4.7% (p < 0.01) over solvent control (Fig. 1a). In contrast, all
treated groups of SKN1- deficient EU1 mutant nematodes ([skn-1(zu67) IV/nT1(IV;V)]) did not
show any significant difference in survival rates compared to their respective negative controls
(Fig. 1b), indicating the importance of the transcription factor SKN1.
Fig. 1
Survival rates of C. elegans mutants (pretreated with different treatments) stressed with 80 µM
juglone. a CF1038 mutants. b EU1 mutants. Data is presented as mean survival value ± SEM for
four assays. ###p < 0.001 in relation to juglone group. **p < 0.01 and ***p < 0.001 in relation to
solvent control + juglone. The error bars in untreated controls and juglone treated group are too
small to be resolved
The relocation of the transcription factor DAF-16 from cytosol to the nucleus was not affected
by SJ extracts. SJ extract-treated groups did not display a significant difference in DAF-16
nuclear localization compared to solvent control. Similarly, DAF-16 localization in rutin-treated
animals was not significantly different from control (Fig. 2).
Fig. 2
DAF-16 translocation in C. elegans worms. a Cytosolic. b Intermediate. c Nuclear. Scale bar =
100 µm. d Percentage of worms exhibiting nuclear localization. Values are expressed as the
mean ± SEM of three tests. ###p < 0.001 is the difference in comparison to the untreated control
The LD1 transgenic C. elegans strain, where the skn-1 promoter is conjugated to GFP, was used
to test the involvement of the SKN-1/Nrf2 pathway in extract activity. SJ extract, at all used
doses, led to a remarkable nuclear translocation of SKN-1 in relation to solvent control. SJ 200
µg/mL revealed the highest percentage of nuclear localization (21%) compared to solvent
control (6%). Changes in relocation were also significant in the rutin group, at 18.3% (p < 0.01)
(Fig. 3).
Fig. 3
SKN-1 translocation in C. elegans. a Cytosolic localization. b Nuclear localization. Scale bar =
200 µm. c Percentage of nematodes with nuclear localization. SJ treatment leads to a remarkable
nuclear localization of SKN-1. Values are expressed as mean ± SEM of three tests. **p < 0.01 is
given in comparison to solvent control
Gst-4 is a downstream target gene for the SKN-1/Nrf2 transcription factor, responsible for
mediating longevity and oxidative stress resistance in C. elegans. It contributes to the oxidative
stress response as a part of Phase ӀӀ detoxification [32]. A dose-dependent decline in
fluorescence intensity was noticed upon treatment with different doses of SJ extract in relation
to that of the solvent control. SJ at a concentration of 300 μg/mL revealed the highest decline in
fluorescence intensity, 47%, compared to solvent control. This result is comparable to EGCG
positive control, showing 48% decrease in fluorescence in comparison to untreated control. The
rutin treated group also significantly reduced fluorescence levels by 41% (p < 0.001) (Fig. 4).
Fig. 4
Expression of GST-4 in C. elegans. a Untreated control. b Solvent control. c SJ
100 µg/mL. d SJ 200 µg/mL. e SJ 300 µg/mL. f EGCG 50 µg/mL. g Rutin 100 µg/mL. Scale
bar = 100 µm. (h) SJ extract decreases GST-4 levels in mutant CL2166 worms relative to
solvent control. Results are expressed as mean ± SEM of three different runs. ###p < 0.001 is
the difference in comparison to untreated control. ***p < 0.001 and **p < 0.01 in comparison to
solvent control. Photos from three independent experiments are provided as Supplementary Fig.
S1 (Additional file 1)
To test for neuroprotective activities of SJ, polyQ40 cluster formation was investigated. The
number of polyQ40 clusters, corresponding to neuronal damage, was substantially reduced upon
treatment with SJ extract. The SJ extract, 300 µg/mL, showed a 72 ± 1% reduction in cluster
numbers in comparison to solvent control. The positive control EGCG group demonstrated a
similar value of 75 ± 1% reduction. The rutin control group also revealed a significant decline of
60 ± 1% (p < 0.001) (Fig. 5).
Fig. 5
Micrographs of worms showing polyQ40 clusters. a Untreated control. b Solvent control. c SJ
100 µg/mL. d SJ 200 µg/mL. e SJ 300 µg/mL. f EGCG 50 µg/mL. g Rutin 100 µg/mL. Scale
bar = 100 µm. (h) SJ extract decreases polyQ40::YFP clusters in mutant AM141 worms relative
to solvent control. Data is expressed as mean ± SEM of three independent assays. ### p < 0.001
in comparison to the untreated control and ***p < 0.001 in comparison to solvent control.
Photos from three independent experiments are provided as Supplementary Fig. S2 (Additional
file 2)
PolyQ formation also affects the function of ASH neurons leading to deficiency in the normal
chemotactic behavior of worms towards odors like that of benzaldehyde. HA759 worms treated
with SJ extract at 300 µg/mL showed high chemotaxis index of 0.54 ± 0.01 compared to the
solvent control group, having index of 0.11 ± 0.01. The rutin group expressed also a
significantly increased chemotaxis index of 0.53 ± 0.05 (p < 0.01) (Fig. 6).
Fig. 6
Chemotaxis assay utilizing HA759 nematodes. SJ extract 300 µg/mL increases chemotaxis
index compared to solvent control group. Results are presented as mean ± SEM of three assays.
**p < 0.01 versus solvent control
To characterize the neuroprotective properties of SJ extract more closely, quantification of

fluorescence intensity representing α-synuclein accumulation was performed. SJ treatment
significantly decreased α-synuclein accumulation, a decline of 43% ± 0.4% relative to the
control was observed for 300 µg/mL of SJ extract. The rutin control exhibited a significant
reduction of 22 ± 0.5% (p < 0.001) (Fig. 7).
Fig. 7
Effect of SJ extract on α-synuclein accumulation. a Untreated control. b Solvent control. c SJ
100 µg/mL. d SJ 200 µg/mL. e SJ300 µg/mL. f Rutin 100 µg/mL. Scale bar = 50 µm. g SJ
extract decreases α-synuclein accumulation in NL5901 worms in relation to the solvent control
group. Results denote mean ± SEM of three runs. ***p < 0.001 in comparison to solvent control
For further delineation of neuroprotective activities of SJ, a paralysis assay was conducted using
temperature-sensitive CL4176 worms. When the temperature rises, human Aβ peptide
accumulates in the muscles of the nematodes, and they become paralyzed [33]. PT50, the median
time when 50% of worms are paralyzed, was determined. Both SJ 300 µg/mL and SJ 500
µg/mL revealed a significant delay in PT 50 of 4.0 ± 1.2 h (p < 0.05) and 5.0 ± 0.5 h (p < 0.01),
respectively compared to solvent control. 300 µg/mL rutin revealed a non-significant 3.0 ± 1.2 h
delay, while the positive control EGCG 100 µg/mL showed a highly significant 6.6 ± 0.3 h
delay compared to untreated control (p < 0.001) (Fig. 8). Worms that did not express Aβ
(control strain) were not paralyzed upon exposure to any of the treatments.
Fig. 8
Paralysis assay using CL4176 worms. a Effect of SJ extracts on Aβ-induced paralysis. SJ
treatment caused a delay in time of paralysis compared to the solvent control group. b PT50
values for different treatments, data is shown as mean ± SEM of three assays. *p < 0.05 and **p
< 0.01 compared to the solvent control group and ###p < 0.001 compared to untreated control
group. The error bar in the solvent control group is too small to be resolved
Discussion
Aging is a normal physiological process that is accompanied by problems in protein

homeostasis. A substantial decrease in the rate of protein synthesis and concomitant loss of the
ability to degrade misfolded proteins occurs resulting in their accumulation leading to various
proteinopathies like Huntington’s disease, Parkinson’s disease, and Alzheimer’s disease [34].
Clinical studies revealed that CNS diseases like AD and PD lead to oxidative stress and damage
to DNA, lipids, and proteins of the CNS [35, 36]. Indeed, the degree of oxidative stress is
directly correlated to the process of aging and development of neurodegenerative disorders.
Therefore, antioxidants are expected to protect against and decrease the progression of
neurodegenerative diseases.
Plants rich in phenolic metabolites have previously shown the ability to interfere with protein
folding and reduce or prevent their aggregation [26, 37].
We have previously reported the phytochemical characterization of SJ hydroalcoholic extract

and identified numerous phenolic compounds including kaempferol, quercetin, and apigenin.
The extract revealed promising antioxidant activity and conferred resistance to oxidative stress
in C. elegans and mouse models, making it a good candidate as a potential neuroprotective
agent [28]. In the present study, CUPRAC reduction assay results demonstrate that the
antioxidant activity of the SJ extract is not mediated by a direct radical scavenging effect.
However, in vivo antioxidant effects depend on other factors like bioavailability, trafficking
inside different organisms, and triggering of biological mechanisms such as modulation of stress
response genes affecting antioxidant enzymes levels.
Rutin, a flavone, is known to exert several modes of antioxidant action including elevation of
enzymatic and non-enzymatic antioxidant levels, free radical scavenging, and chelation of metal
ions [38]. A rutin control was performed in all assays to examine the effect of the total extract in
comparison to a single, well-characterized, polyphenolic compound.
Longevity and stress resistance in C. elegans are mediated through two main transcription
factors, DAF-16 and SKN-1 [39]. We have previously shown that SJ extract exhibits
antioxidant and oxidative stress-reducing activities in wild type worms as demonstrated by
significantly increased survival rates, for nematodes exposed to a lethal dose of juglone, and a
concomitant decrease of basal ROS levels; in addition to enhanced superoxide dismutase-3
(SOD-3) levels [28]. To explore the involvement of DAF-16/FOXO and SKN-1/Nrf2 pathways,
two mutant strains were used for survival assays: (i) the mutant daf-16 strain, CF1038, and (ii) a
mutant skn-1 strain, EU1. Both strains were used for assaying survival after exposure to
oxidative stress upon exposure to juglone.
DAF-16 translocation was measured to assess the contribution of the transcription factor DAF-
16 to SJ extract activity. Normally, DAF-16 is found in an inactive form in the cytosol where
fluorescence is seen distributed all over the body of worms. DAF-16 activation leads to its
translocation to the nucleus, visible by punctate fluorescence. Activation and translocation of
DAF-16/FOXO are triggered by different stressors such as heat and oxidative stress. This
activation contributes to the modulation of subsequent stress response genes and genes
associated with metabolism and life span regulation [40].
The transcription factor SKN-1 of C. elegans is orthologous to mammalian Nrf2. This

transcription factor contributes to numerous regulatory pathways responsible for stress
resistance and life span extension. Stressful conditions or xenobiotics lead to its accumulation in
nuclei of the intestine with subsequent activation of downstream genes related to Phase ӀӀ
detoxification [41, 42].
Survival assays using daf-16 mutants revealed an increase in survival rate in worms pretreated
with SJ extract, demonstrating that the activity of the extract is independent of the DAF-16
transcription factor. In contrast, survival rates of skn-1 mutants were not changed by the absence
or presence of SJ extract or rutin. This indicates the importance of SKN-1in the activity of both,
SJ extract and rutin. Furthermore, SJ extract at all doses, as well as the rutin control did not
produce any significant induction of DAF-16 nuclear localization, indicating the absence of this
transcription factor in their action. A similar observation has been reported previously for rutin
[43]. In contrast, both, SJ and rutin, strongly and significantly induced nuclear translocation
of skn-1 proving its involvement in their mechanism of action. Phytochemicals like diallyl
trisulfide from garlic and baicalein from Baical skullcap have been shown to lead to activation
of the SKN-1 pathway but not of DAF-16. This in turn leads to lifespan-extending effects and
modulation of stress resistance in C. elegans [44, 45].
Extracts of plants like Ginkgo biloba and Cassia fistula have previously shown the ability to
down-regulate the expression of genes as gst-4 leading to oxidative stress resistance properties,
an effect that could be mediated through SKN-1 [30, 46]. Our observation that SJ extract
significantly reduced gst-4 expression is consistent with these previous reports, emphasizing the
contribution of SKN-1-mediated pathways to the mechanism of action of SJ extract, and rutin
[43].
Notably, the SKN-1 pathway is believed to protect the worms from oxidative stress-related
protein damage [41]. Based on its noted antioxidant activity, the extract was tested for its
neuroprotective properties. Glutamine duplications are associated with Huntington’s disease, as
well as other neurodegenerative diseases, resulting in mitochondrial impairment and
dysfunction [47]. A PolyQ40 assay revealed notable decrease in aggregate number in the
extract-treated groups compared to solvent control, consistent with potential neuroprotective
effects. Similar effects were observed for treatment of nematodes with rutin.
For further testing of the neuroprotective effect of the extract, a chemotaxis assay was
performed using the C. elegans HA759 strain expressing Htt-Q150 within ASH neurons. Htt-
Q150 is a human huntingtin protein fragment characterized by 150 repeats of CAG trinucleotide
leading to the expansion of PolyQ tract and loss of ASH neuronal function [48]. Live ASH
neurons mediate nematodes’ chemosensory behavior towards different stimuli such as odorants.
PolyQ expression results in problems in chemotaxis ability due to death of ASH neurons in C.
elegans worms [49]. Treatment with SJ extract resulted in a significant increase in chemotactic
ability of worms compared to the vehicle control group. Rutin showed similar effects. This
result confirms the ability of the extract to protect against formation of PolyQ aggregates as
found in HD, and this effect may be due to activation of SKN-1, although other mechanisms
cannot be excluded from our experiments. A previous study has also highlighted the importance
of the contribution of SKN-1 pathway in protection from toxicity caused by polyglutamine [31].
Oxidative stress has always been linked to nigral loss of dopaminergic neurons in the brains of
Parkinson’s disease patients [50]. Cells try to counteract the damaging effect of oxidants to
preserve the redox balance through activation of several antioxidant defense pathways. Upon
activation of SKN-1 and its nuclear translocation, it binds to antioxidant genes through the
antioxidant responsive element leading to oxidative stress resistance and preservation of
dopaminergic neurons [42, 51].
The formation of α-synuclein aggregates is considered an important factor in the pathogenesis

of several Lewy body disorders, such as Parkinson’s disease, multiple system atrophy, and
others. Oxidative stress was associated with the formation of fibrils, eventually leading to the
development of α-synuclein aggregates [52]. Here, we have shown that SJ extract was able to
decrease this formation of α-synuclein aggregates. This effect could be linked to constituents in
the extract including kaempferol, whose anti-fibrillogenic and α-synuclein fibril-destabilizing
properties had been shown before [53]. This effect of SJ extract could be probably due to the
activation of the SKN-1 pathway, yet involvement of other signaling pathways could be
possible. A former study also revealed the effect of certain phytochemicals from Dioscorea
alata L. tubers on reducing α-synuclein aggregates that was linked to enhanced SKN-1 nuclear
localization [54]. Consistently, rutin—an antioxidant—was also able to reduce aggregate
formation.
To study the effect of the extract on counteracting formation and toxicity of Aβ, a paralysis
assay was performed using a mutant nematode strain expressing human Aβ peptides in the
muscles. Upon increasing the temperature, a significant delay of onset of paralysis compared to
control was observed in SJ treated groups indicating the protective properties of the extract
towards Aβ toxicity. Notably, rutin treatment did not significantly delay onset of paralysis,
indicating that SJ components can target distinct pathways that are not sensitive to rutin.
Apigenin might be such a component of SJ extract. Indeed, its neurotrophic and anti-
amyloidogenic activities together with a decrease in the levels of insoluble Aβ have been
previously demonstrated in a mouse model of Alzheimer’s disease [55]. SKN-1 pathway
activation can be contributing to the observed effect as its orthologue, Nrf2, activation was
previously responsible for exerting neuroprotection against Aβ in mouse model but contribution
of other pathways cannot be excluded from our experiments [56].
The C. elegans model is a cost-effective approach for the screening of neuroactive compounds
using a variety of biochemical assays. Owing to the simplicity of the model organism, not all
aspects of immune and inflammatory responses can be assessed [57]. Therefore, complementary
studies are required to explore the specific molecular mechanism of action of SJ extract, identify
the active principles and test their efficacy and safety in more complex models, such as
mammalian organisms. Isolation of the active principles and detailed analysis of the targeted
physiological pathways are required. Moreover, for further confirmation of the SKN-1 activity
in SJ extract, expression of other antioxidant genes like gcs-1, which is downstream to SKN-1
could be measured in future studies. Also the activity of SJ extract on the expression of gst-
4 after exposure to mild oxidative stress conditions could be also assayed as the antioxidant
activity of SJ could probably be more pronounced after exposure to stressors. However, our
findings clearly identify SJ extract and its components as a source of promising novel
neuroprotective compounds. In addition, this is the first study to report that SJ extract shows
great potential towards modulating protein homeostasis and decreasing the development of age-
related diseases such as HD, PD, and AD.
Conclusions
This study confirms the mediation of stress resistance and neuroprotection by a Styphnolobium
japonicum extract. Use of the extract can help towards a healthy process of aging and offer
protection from age-associated disorders. The observed oxidative stress resistance effect,
manifested by increasing survival rate in juglone treated daf-16 mutant worms, is possibly
achieved through promoting nuclear localization of SKN-1/Nrf2 transcription factor.
Modulation of expression of the downstream gst-4 gene confirms the role of the SKN-1
pathway in the observed beneficial effects of SJ extract.
Supplementary Information
Additional file 1: Supplementary Figure S1. Representative fluorescence images of

Cl2166 C. elegans worms showing gst-4::GFP expression.(519K, pdf)
Additional file 2: Supplementary Figure S2. Representative fluorescence images of

AM141 C. elegans worms showing polyQ40::YFP expression.(497K, pdf)
Acknowledgements
The authors are grateful to Mr. Muhammad Anwar (muhammadanwar.com), MA in Linguistics,

Assistant Lecturer, Coventry University, for English-language editing.
Abbreviations
ASH Amphid sensilla
Aβ Amyloid β
AD Alzheimer’s disease
BHA Butylated hydroxyl anisole
C. elegans Caenorhabditis elegans

Cu+ Cuprous
Cu2+ Cupric
CUPRAC Cupric ion reducing antioxidant capacity
EGCG Epigallocatechin gallate
E. coli Escherichia coli
GST-4 Glutathione S-transferase-4
HD Huntington’s disease
PD Parkinson’s disease
PolyQ40 Polyglutamine
S. japonicum Styphnolobium japonicum
ROS Reactive oxygen species

SOD-3 Superoxide dismutase-3
Authors’ contributions
MW, ST were responsible for implementation of the project. ST, UB, HH, NS, HGB performed
experimental work and data analysis. ST did the manuscript design and writing. ST, HGB, MW
revised the manuscript. MW supervisor of the project. All authors revised and approved the
manuscript.
Funding
Open access funding provided by The Science, Technology & Innovation Funding Authority
(STDF) in cooperation with The Egyptian Knowledge Bank (EKB). This paper is based upon
work supported by Science, Technology & Innovation Funding Authority (STDF) under Project
ID: 43260.
Availability of data and materials
Data and materials will be made available to researchers upon reasonable request. Contact Dr.
Sara Thabit: sara.thabit@guc.edu.eg.
Declarations
Ethics approval and consent to participate
Plant collection and usage complied with IUCN policies and the Convention on Trade in
Endangered Species. All studies were approved by the Ethics committee of the German
University in Cairo. No endangered plant species were used in this study.
Consent for publication
Not applicable.
Competing interests
The authors declare no competing interests.
Footnotes
Publisher’s Note
Springer Nature remains neutral with regard to jurisdictional claims in published maps and
institutional affiliations.
References
1. Agroforestree Database: a tree reference and selection guide version

4.0. http://www.worldagroforestry.org/sites/treedbs/treedatabases. Accessed 2009.
2. Zheng H, Dong Z, She J. Modern study of traditional Chinese medicine. Xue Yuan Press
Beijing China. 3: Xue Yuan Press Beijing, China; 1998. p. 2057.
3. Uphof JCT. Dictionary of economic plants. New York: Stechert-Hafner, New York;
1959. [Google Scholar]
4. Hu S. Vascular plants: Pteridophytes and spermatophytes. Hong Kong: Food Plants of China,
the Chinese University Press; 2005. p. 271–752.
5. Kunkel G. Plants for human consumption: Koeltz Scientific Books; 1984.
6. Read BE. Famine foods listed in the Chiu Huang Pen Ts' ao, giving their identity, nutritional
values and notes on their preparation. Famine foods listed in the Chiu Huang Pen Ts' ao, giving
their identity, nutritional values and notes on their preparation. 1977
7. Yoon H-J, Seo C-R, Kim M, Kim Y-J, Song N-J, Jang W-S, et al. Dichloromethane extracts
of Sophora japonica L. stimulate osteoblast differentiation in mesenchymal stem cells. Nutr
Res. 2013;33(12):1053–62. 10.1016/j.nutres.2013.08.004 [PubMed]
8. Tang Y-P, Li Y-F, Hu J, Lou F-C. Isolation and identification of antioxidants from Sophora
japonica. J Asian Nat Prod Res. 2002;4(2):123–128.
doi: 10.1080/10286020290027407. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
9. Lihua W, Yufeng D, Yanli M. Studies on extraction and antioxidant function of

polysaccharides from Sophora japonica. J Northwest A & F (Nat Sci Ed) 2008;36(8):213–
8. [Google Scholar]
10. Kite GC, Veitch NC, Boalch ME, Lewis GP, Leon CJ, Simmonds MS. Flavonol
tetraglycosides from fruits of Styphnolobium japonicum (Leguminosae) and the authentication
of Fructus Sophorae and Flos Sophorae. Phytochemistry. 2009;70(6):785–794.
doi: 10.1016/j.phytochem.2009.04.003. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
11. La Casa C, Villegas I, De La Lastra CA, Motilva V, Calero MM. Evidence for protective
and antioxidant properties of rutin, a natural flavone, against ethanol induced gastric lesions. J
Ethnopharmacol. 2000;71(1–2):45–53. doi: 10.1016/S0378-8741(99)00174-9. [PubMed]
[CrossRef] [Google Scholar]
12. Kamalakkannan N, Prince P. Antihyperglycaemic and antioxidant effect of rutin, a

polyphenolic flavonoid, in streptozotocin-induced diabetic wistar rats. Basic Clin Pharmacol
Toxicol. 2006;98(1):97–103. doi: 10.1111/j.1742-7843.2006.pto_241.x. [PubMed]
13. Ihme N, Kiesewetter H, Jung Fa, Hoffmann K, Birk A, Müller A, et al. Leg oedema
protection from a buckwheat herb tea in patients with chronic venous insufficiency: a single-
centre, randomised, double-blind, placebo-controlled clinical trial. Eur J Clin
Pharmacol. 1996;50:443–7. doi: 10.1007/s002280050138. [PubMed] [CrossRef] [Google
Scholar]
14. Wanderka H. Prüfung des Phytotherapeutikums “Fagorutin” am künstlich erzeugten

Stauungsödem. Z Phytotherapie. 1981;22:225–33. [Google Scholar]
15. He X, Bai Y, Zhao Z, Wang X, Fang J, Huang L, et al. Local and traditional uses,
phytochemistry, and pharmacology of Sophora japonica L.: a review. J
Ethnopharmacol. 2016;187:160–82. doi: 10.1016/j.jep.2016.04.014. [PubMed]
16. Zhang L, Ravipati AS, Koyyalamudi SR, Jeong SC, Reddy N, Smith PT, et al. Antioxidant
and anti-inflammatory activities of selected medicinal plants containing phenolic and flavonoid
compounds. J Agric Food Chem. 2011;59(23):12361–12367. doi: 10.1021/jf203146e. [PubMed]
17. Wang Z, Sun J, Wang D, Xie Y, Wang S, Zhao W. Pharmacological studies of the large-
scaled purified genistein from Huaijiao (Sophora japonica–Leguminosae) on anti-
osteoporosis. Phytomedicine. 2006;13(9–10):718–723.
doi: 10.1016/j.phymed.2005.09.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
18. Jung CH, Zhou S, Ding GX, Kim JH, Hong MH, Shin Y-C, et al. Antihyperglycemic
activity of herb extracts on streptozotocin-induced diabetic rats. Biosci Biotechnol,
Biochem. 2006;70(10):2556–2559. doi: 10.1271/bbb.60238. [PubMed] [CrossRef] [Google
Scholar]
19. Lao C-J, Lin J-G, Kuo J-S, Chao P-DL, Cheng C-Y, Tang N-Y, et al. Microglia, apoptosis
and interleukin-1β expression in the effect of Sophora japonica L. on cerebral infarct induced by
ischemia-reperfusion in rats. Am J Chin med. 2005;33(03):425–38.
doi: 10.1142/S0192415X0500303X. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
20. Wechalekar AD, Hawkins PN, Gillmore JD. Perspectives in treatment of AL

amyloidosis. Br J Haematol. 2008;140(4):365–377. doi: 10.1111/j.1365-
2141.2007.06936.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
21. Li D, Mastaglia FL, Fletcher S, Wilton SD. Progress in the molecular pathogenesis and
nucleic acid therapeutics for Parkinson's disease in the precision medicine era. Med Res
Rev. 2020;40(6):2650–2681. doi: 10.1002/med.21718. [PMC free article] [PubMed]
22. Tabrizi SJ, Flower MD, Ross CA, Wild EJ. Huntington disease: new insights into molecular
pathogenesis and therapeutic opportunities. Nat Rev Neurol. 2020;16(10):529–546.
doi: 10.1038/s41582-020-0389-4. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
23. Birch-Machin M, Bowman A. Oxidative stress and ageing. Br J Dermatol. 2016;175:26–29.

doi: 10.1111/bjd.14906. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
24. Birch-Machin M. The role of mitochondria in ageing and carcinogenesis. Clin Exp
Dermatol. 2006;31(4):548–552. doi: 10.1111/j.1365-2230.2006.02161.x. [PubMed]
25. Di Pietro V, Lazzarino G, Amorini AM, Tavazzi B, D’Urso S, Longo S, et al. Neuroglobin
expression and oxidant/antioxidant balance after graded traumatic brain injury in the rat. Free
Radical Biol Med. 2014;69:258–264. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2014.01.032. [PubMed]
26. Roxo M, Wink M. The use of the nematode Caenorhabditis elegans to study antioxidant and
longevity-promoting plant secondary metabolites. New Find Nat Subs. 2022;6:133–63. [Google
Scholar]
27. Wink M. Current understanding of modes of action of multicomponent bioactive

phytochemicals: Potential for nutraceuticals and antimicrobials. Annu Rev Food Sci
Technol. 2022;13:337–359. doi: 10.1146/annurev-food-052720-100326. [PubMed]
28. Thabit S, Handoussa H, Roxo M, Cestari de Azevedo B, SE El Sayed N, Wink M.

Styphnolobium japonicum (L.) Schott fruits increase stress resistance and exert antioxidant
properties in Caenorhabditis elegans and mouse models. Molecules. 2019;24(14):2633.
doi: 10.3390/molecules24142633. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
29. Ma L, Zhao Y, Chen Y, Cheng B, Peng A, Huang K. Caenorhabditis elegans as a model

system for target identification and drug screening against neurodegenerative diseases. Eur J
Pharmacol. 2018;819:169–180. doi: 10.1016/j.ejphar.2017.11.051. [PubMed]
30. Thabit S, Handoussa H, Roxo M, El Sayed NS, de Azevedo BC, Wink M. Evaluation of
antioxidant and neuroprotective activities of Cassia fistula (L.) using the Caenorhabditis elegans
model. PeerJ. 2018;6:e5159. doi: 10.7717/peerj.5159. [PMC free article] [PubMed]
31. Ma X, Li J, Cui X, Li F, Wang Z. Dietary supplementation with peptides from sesame cake
protect Caenorhabditis elegans from polyglutamine-induced toxicity. J Funct
Foods. 2019;54:199–210. doi: 10.1016/j.jff.2019.01.002. [CrossRef] [Google Scholar]
32. Kahn NW, Rea SL, Moyle S, Kell A, Johnson TE. Proteasomal dysfunction activates the
transcription factor SKN-1 and produces a selective oxidative-stress response in Caenorhabditis
elegans. Biochem J. 2008;409(1):205–213. doi: 10.1042/BJ20070521. [PubMed]
33. Drake J, Link CD, Butterfield DA. Oxidative stress precedes fibrillar deposition of
Alzheimer’s disease amyloid β-peptide (1–42) in a transgenic caenorhabditis elegans
model. Neurobiol Aging. 2003;24(3):415–420. doi: 10.1016/S0197-4580(02)00225-
7. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
34. Kikis EA, Gidalevitz T, Morimoto RI. Protein homeostasis in models of aging and age-
related conformational disease. Protein Metabolism and Homeostasis in Aging: Springer; 2010.
p. 138–59. [PMC free article] [PubMed]
35. Perfeito R, Cunha-Oliveira T, Rego AC. Reprint of: revisiting oxidative stress and
mitochondrial dysfunction in the pathogenesis of Parkinson disease—resemblance to the effect
of amphetamine drugs of abuse. Free Radic Biol Med. 2013;62:186–201.
doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2012.08.569. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
36. Mancuso M, Orsucci D, LoGerfo A, Calsolaro V, Siciliano G. Clinical features and

pathogenesis of Alzheimer’s disease: involvement of mitochondria and mitochondrial
DNA. Diseases of DNA Repair: Springer; 2010. pp. 34–44. [PubMed] [Google Scholar]
37. Wink M. Evolutionary advantage and molecular modes of action of multi-component

mixtures used in phytomedicine. Curr Drug Metab. 2008;9(10):996–1009.
doi: 10.2174/138920008786927794. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
38. Kamalakkannan N, Prince P. Rutin improves the antioxidant status in streptozotocin-

induced diabetic rat tissues. Mol Cell Biochem. 2006;293(1–2):211. doi: 10.1007/s11010-006-
9244-1. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
39. Wan Q-L, Fu X, Meng X, Luo Z, Dai W, Yang J, et al. Hypotaurine promotes longevity and
stress tolerance via the stress response factors DAF-16/FOXO and SKN-1/NRF2 in
Caenorhabditis elegans. Food Funct. 2020;11(1):347–357.
doi: 10.1039/C9FO02000D. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
40. Mukhopadhyay A, Oh SW, Tissenbaum HA. Worming pathways to and from

DAF-16/FOXO. Exp Gerontol. 2006;41(10):928–934.
doi: 10.1016/j.exger.2006.05.020. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
41. Blackwell TK, Steinbaugh MJ, Hourihan JM, Ewald CY, Isik M. SKN-1/Nrf, stress
responses, and aging in Caenorhabditis elegans. Free Radical Biol Med. 2015;88:290–301.
doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2015.06.008. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google
Scholar]
42. Inoue H, Hisamoto N, An JH, Oliveira RP, Nishida E, Blackwell TK, et al. The
C. elegans p38 MAPK pathway regulates nuclear localization of the transcription factor SKN-1
in oxidative stress response. Genes Dev. 2005;19(19):2278–83.
doi: 10.1101/gad.1324805. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
43. Kampkötter A, Nkwonkam CG, Zurawski RF, Timpel C, Chovolou Y, Wätjen W, et al.
Investigations of protective effects of the flavonoids quercetin and rutin on stress resistance in
the model organism Caenorhabditis elegans. Toxicology. 2007;234(1–2):113–123.
doi: 10.1016/j.tox.2007.02.006. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
44. Powolny AA, Singh SV, Melov S, Hubbard A, Fisher AL. The garlic constituent diallyl
trisulfide increases the lifespan of C. elegans via skn-1 activation. Exp
Gerontol. 2011;46(6):441–52. doi: 10.1016/j.exger.2011.01.005. [PMC free article] [PubMed]
45. Havermann S, Humpf H-U, Wätjen W. Baicalein modulates stress-resistance and life span
in C. elegans via SKN-1 but not DAF-16. Fitoterapia. 2016;113:123–7.
doi: 10.1016/j.fitote.2016.06.018. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
46. Kampkötter A, Pielarski T, Rohrig R, Timpel C, Chovolou Y, Wätjen W, et al. The Ginkgo
biloba extract EGb761 reduces stress sensitivity, ROS accumulation and expression of catalase
and glutathione S-transferase 4 in Caenorhabditis elegans. Pharmacol Res. 2007;55(2):139–147.
doi: 10.1016/j.phrs.2006.11.006. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
47. Weber JJ, Sowa AS, Binder T, Hübener J. From pathways to targets: understanding the
mechanisms behind polyglutamine disease. Biomed Res Int. 2014
doi: 10.1155/2014/701758. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
48. Alexander AG, Marfil V, Li C. Use of Caenorhabditis elegans as a model to study

Alzheimer’s disease and other neurodegenerative diseases. Front Genet. 2014;5:279.
doi: 10.3389/fgene.2014.00279. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
49. Xiao L, Li H, Zhang J, Yang F, Huang A, Deng J, et al. Salidroside protects Caenorhabditis
elegans neurons from polyglutamine-mediated toxicity by reducing oxidative
stress. Molecules. 2014;19(6):7757–7769. doi: 10.3390/molecules19067757. [PMC free
article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
50. Jenner P. Oxidative stress in Parkinson's disease. Ann Neurol. 2003;53(S3):S26–S38.

doi: 10.1002/ana.10483. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
51. Xiong W, Garfinkel AEM, Li Y, Benowitz LI, Cepko CL. NRF2 promotes neuronal survival
in neurodegeneration and acute nerve damage. J Clin Investig. 2015;125(4):1433–1445.
doi: 10.1172/JCI79735. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
52. Trojanowski JQ, Virginia M. Parkinson's disease and related α-Synucleinopathies are brain
amyloidoses. Ann NY Acad Sci. 2003;991:107–110. doi: 10.1111/j.1749-
6632.2003.tb07468.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
53. Ono K, Yamada M. Antioxidant compounds have potent anti-fibrillogenic and fibril-
destabilizing effects for α-synuclein fibrils in vitro. J Neurochem. 2006;97(1):105–115.
doi: 10.1111/j.1471-4159.2006.03707.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
54. Govindan S, Amirthalingam M, Duraisamy K, Govindhan T, Sundararaj N, Palanisamy S.

Phytochemicals-induced hormesis protects Caenorhabditis elegans against α-synuclein protein
aggregation and stress through modulating HSF-1 and SKN-1/Nrf2 signaling pathways. Biomed
Pharmacother. 2018;102:812–822. doi: 10.1016/j.biopha.2018.03.128. [PubMed]
55. Zhao L, Wang J-L, Liu R, Li X-X, Li J-F, Zhang L. Neuroprotective, anti-amyloidogenic
and neurotrophic effects of apigenin in an Alzheimer’s disease mouse
model. Molecules. 2013;18(8):9949–9965. doi: 10.3390/molecules18089949. [PMC free
article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
56. Kanninen K, Malm TM, Jyrkkänen H-K, Goldsteins G, Keksa-Goldsteine V, Tanila H, et al.
Nuclear factor erythroid 2-related factor 2 protects against beta amyloid. Mol Cell
Neurosci. 2008;39(3):302–313. doi: 10.1016/j.mcn.2008.07.010. [PubMed] [CrossRef] [Google
Scholar]
57. Gaud A, Simon J-M, Witzel T, Carre-Pierrat M, Wermuth CG, Ségalat L. Prednisone
reduces muscle degeneration in dystrophin-deficient Caenorhabditis elegans. Neuromuscul
Disord. 2004;14(6):365–370. doi: 10.1016/j.nmd.2004.02.011. [PubMed] [CrossRef] [Google
Scholar]
Articles from BMC Complementary Medicine and Therapies are provided here courtesy
of BMC
Vietnamese Translation
CHIẾT XUẤT TRÁI CÂY STYPHNOLOBIUM JAPONICUM (CÂY HÒE

HOA) (L.) CHỐNG CĂNG THẲNG OXI HÓA VÀ TRUNG BÌNH BẢO
VỆ THẦN KINH Ở CAENORHABDITIS ELEGANS
Sara Thabit , Heba Handoussa , Nesrine S. ElSayed , Hans-Georg Breitinger , Jonathan Lam
Nguyen, Ulrike Breitinger và Michael Wink
Thông tin tác giả bài viết ghi chú Thông tin bản quyền và giấy phép Tuyên bố từ chối trách nhiệm
của PMC
trừu tượng
Lý lịch
Mặc dù được sử dụng rộng rãi trong y học Trung Quốc và châu Âu, Styphnolobium japonicum
(cây học giả Trung Quốc, trước đây là Sophora japonicum ) vẫn chưa được nghiên cứu rộng rãi
về tiềm năng bảo vệ chống lại quá trình thoái hóa thần kinh và thúc đẩy khả năng chống lại
stress oxy hóa. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã đánh giá các hoạt động bảo vệ thần kinh của
chiết xuất hydro-alcoholic từ trái cây học giả Trung Quốc có thể liên quan đến đặc tính chống
oxy hóa của nó bằng cách sử dụng Caenorhabditis elegans như một mô hình in vivo đã được
chứng minh rõ ràng.
phương pháp
Tỷ lệ sống sót ở giun daf-16 và skn-1 đột biến, bị ức chế bởi chất chống oxy hóa juglone và
được xử lý bằng chiết xuất, đã được thử nghiệm. Đo lường mức độ định vị của các yếu tố phiên
mã SKN-1 và DAF-16 cũng như biểu hiện của gst-4 . Để đánh giá tác dụng bảo vệ thần kinh,
người ta đã kiểm tra sự hình thành các cụm polyglutamine (polyQ40), tập hợp α-synuclein, mất
chức năng tế bào thần kinh amphid sensilla (ASH) và tích tụ amyloid β (Aβ) (là dấu hiệu của
bệnh Huntington, Parkinson và Alzheimer).
Kết quả
Dịch chiết chứa một lượng đáng kể các chất hóa học thực vật phenolic, cho thấy sự gia tăng tỷ
lệ sống sót của giun bị thử thách với juglone ở các đột biến daf-16 nhưng không tăng ở các đột
biến skn-1 . Yếu tố phiên mã SKN-1 được kích hoạt bằng dịch chiết, trong khi DAF-16 không
bị ảnh hưởng. Sau khi sử dụng chiết xuất, người ta đã quan sát thấy sự sụt giảm đáng kể về nồng
độ GST-4, sự hình thành cụm polyQ40, số lượng tế bào thần kinh cảm giác ASH bị mất, sự kết
tụ α-synuclein và tình trạng tê liệt do tích lũy Aβ.
Kết luận
Styphnolobium japonicum đã kích hoạt con đường SKN-1/Nrf2, dẫn đến khả năng chống stress
oxy hóa. Nó tiết lộ các hoạt động dược lý đầy hứa hẹn trong việc điều trị các bệnh Huntington,
Parkinson và Alzheimer. Polyphenolics từ Styphnolobium japonicum có thể là một hướng đi đầy
hứa hẹn trong điều trị các rối loạn thần kinh trung ương, nhưng cần phải được thử nghiệm trên
các hệ thống in vivo khác.
Thông tin bổ sung
Phiên bản trực tuyến chứa tài liệu bổ sung có sẵn tại 10.1186/s12906-023-04149-8.
Từ khóa: Caenorhabditis elegans , SKN-1/Nrf2, Stress oxy hóa, Bảo vệ thần kinh,
Styphnolobium japonicum
Lý lịch
Styphnolobium japonicum L. (SJ, cây học giả Trung Quốc) (Fabaceae), trước đây gọi là
Sophora japonica L., có nguồn gốc từ Đông Á. Vì cây được sử dụng làm cây cảnh nên nó có thể
được tìm thấy ở các vùng ôn đới trên khắp thế giới [ 1 , 2 ]. Nhiều bộ phận của cây có thể ăn
được sau khi nấu bao gồm lá, hạt và hoa. Nội nhũ của hạt còn được dùng làm món tráng miệng
ở miền Bắc Trung Quốc bằng cách nấu với đường [ 3 – 6 ].
Hồ sơ hóa học của SJ cho thấy nhiều chất chuyển hóa thứ cấp có nhiều tác dụng dược lý. Các
chất chuyển hóa thứ cấp bao gồm polysaccharides và các hợp chất phenolic như phytoestrogen,
flavonoid, hầu hết được tìm thấy trong hoa và nụ, và isoflavonoid, trong trái cây và hạt [ 7 – 9 ].
Các flavonoid và isoflavonoid chính đã được xác định bao gồm quercetin, kaempferol, genistein
và quan trọng nhất là rutin, thành phần chính của Flos Sophorae Immaturus (Hoa của Sophora
japonica L.) được biết đến với đặc tính chống oxy hóa, chống viêm và chống phù nề. [ 10 – 14
].
Nhiều nghiên cứu mô tả tác dụng sinh học có lợi của các chiết xuất SJ khác nhau, chẳng hạn
như kháng khuẩn, hạ đường huyết, chống béo phì, chống xuất huyết, tim mạch, chống ung thư,
chống tạo mạch, chống xơ vữa động mạch, chống oxy hóa, bảo vệ thần kinh và phổ biến nhất là
các hoạt động chống viêm và chống loãng xương. [ 9 , 15 – 19 ].
Đặc tính chống oxy hóa của chiết xuất ethanol của SJ được biểu hiện bằng khả năng ngăn chặn
việc sản xuất H 2 O 2 bằng mô hình nấm men Saccharomyces cerevisiae [ 16 ]. Các hoạt động
bảo vệ thần kinh cũng được đề xuất đối với dịch chiết nụ hoa SJ. Một nghiên cứu trước đây đã
tiết lộ rằng chiết xuất này có thể làm giảm mức độ suy giảm thần kinh và vùng nhồi máu não
trong mô hình chuột bị nhồi máu não do chấn thương tái tưới máu do thiếu máu cục bộ. Những
tác động này được cho là do khả năng của SJ làm giảm biểu hiện IL-1β, ngăn chặn sự kích hoạt
của microglia và giảm quá trình chết theo chương trình của tế bào [ 19 ]. Tuy nhiên, các nghiên
cứu đề cập đến đặc tính bảo vệ thần kinh của SJ còn hạn chế.
Quá trình lão hóa, còn lâu mới được hiểu đầy đủ, liên quan đến sự suy giảm dần dần chức năng
của các sinh vật, bao gồm cả hệ thần kinh trung ương. Đây là nguyên nhân chính gây ra nhiều
rối loạn nguy hiểm như ung thư và các bệnh về thần kinh. Nhiều rối loạn thần kinh như bệnh
Alzheimer (AD), bệnh Parkinson (PD) và bệnh Huntington (HD) có cơ chế bệnh sinh không rõ
ràng và không có phương pháp điều trị để đảo ngược tiến triển của bệnh [ 20 – 22 ]. Vì vậy, việc
tìm kiếm các tác nhân mới có thể giúp ngăn ngừa sự khởi phát của bệnh hoặc cải thiện các triệu
chứng lâm sàng có ý nghĩa rất quan trọng. Các lý thuyết khác nhau về lão hóa đã được đề xuất,
chẳng hạn như lý thuyết gốc tự do, dựa trên các loại oxy phản ứng (ROS) được tạo ra trong ty
thể như một sản phẩm phụ của quá trình trao đổi chất. Sự gia tăng nồng độ ROS gây ra stress
oxy hóa. ROS phản ứng với protein và axit nucleic, dẫn đến đột biến và có thể gây ra hiện tượng
peroxid hóa lipid [ 23 , 24 ]. Các tế bào thần kinh có thể bị căng thẳng oxy hóa nghiêm trọng do
nhu cầu oxy cao và mức độ chống oxy hóa thấp [ 25 ]. Do đó, các tác nhân có hoạt tính chống
oxy hóa có thể bảo vệ chống lại sự phát triển của các rối loạn thần kinh theo tuổi tác và do đó
duy trì và nâng cao chất lượng cuộc sống.
Tuyến trùng Caenorhabditis elegans ( C. Elegans ) là một mô hình in vivo được sử dụng rộng
rãi để nghiên cứu các cơ chế phân tử mà qua đó chiết xuất và hợp chất thực vật có tác dụng
chống oxy hóa, bảo vệ thần kinh và chống lão hóa [ 26 , 27 ]. Chúng dễ bảo trì và thao tác so
với các mô hình động vật có vú và trình bày một mô hình đơn giản, được xác định rõ ràng cho
một sinh vật đa bào.
Theo hiểu biết của chúng tôi, tác dụng của chiết xuất SJ trên các mô hình tuyến trùng AD, PD
và HD vẫn chưa được thử nghiệm. Trong nghiên cứu này, các đặc tính chống oxy hóa in vitro
của chiết xuất hydro-alcoholic từ trái cây sấy khô của SJ đã được nghiên cứu bằng cách sử dụng
xét nghiệm khả năng chống oxy hóa làm giảm ion cupric (CUPRAC). Việc phân tích các thành
phần phenolic trong dịch chiết thông qua HPLC–PDA-ESI–MS/MS đã được nhóm của chúng
tôi thực hiện trước đây [ 28 ]. Xem xét vai trò tiềm ẩn của stress oxy hóa trong quá trình thoái
hóa thần kinh, khả năng chống lại stress oxy hóa và sự tham gia của các yếu tố phiên mã DAF-
16/FOXO và SKN-1/Nrf2 trong tác dụng này đã được nghiên cứu bằng cách sử dụng các chủng
C. Elegans khác nhau . Một thử nghiệm sinh tồn đã được thực hiện bằng cách sử dụng các
chủng đột biến daf-16 và skn-1 . Ngoài ra, việc đánh giá nội địa hóa hạt nhân DAF-16 và SKN-
1 đã được thực hiện và biểu hiện của glutathione S-transferase-4 (GST-4) đã được định lượng.
Vì sự tích lũy protein là một đặc điểm đặc trưng của nhiều rối loạn liên quan đến CNS nên khả
năng chống lại tác dụng này của chiết xuất SJ đã được thử nghiệm bằng cách sử dụng các mô
hình đặc biệt của C. Elegans . Định lượng cụm polyglutamine (PolyQ40), một đặc điểm bệnh lý
ở nhiều bệnh như HD, đã được đánh giá ở chủng AM141 và sự tích lũy tổng hợp α-synuclein,
liên quan đến PD, ở chủng NL5901. Bảo tồn tế bào thần kinh cảm giác lưỡng cực (ASH) chức
năng đã được nghiên cứu bằng cách sử dụng chủng HA759. Cuối cùng, ảnh hưởng của chiết
xuất lên sự tập hợp amyloid β (Aβ) đặc trưng cho AD được đánh giá thông qua nghiên cứu tình
trạng tê liệt ở giun biểu hiện gen Aβ của người trong cơ của chúng [ 29 , 30 ].
phương pháp
Khai thác thực vật
Quả sấy khô của SJ được sản xuất thương mại từ một công ty chuyên về cây thuốc, Kräuter
Schulte, Đức. Không có hạn chế pháp lý, đạo đức hoặc hạn chế nào khác có thể hạn chế việc sử
dụng tài liệu này. Một mẫu chứng từ đã được gửi tại Khoa Sinh học Dược phẩm Herbarium, Đại
học Đức ở Cairo, Ai Cập (Mẫu vật số 0047).
Chiết xuất hydro-alcoholic của 1 kg trái cây sấy khô đã được chuẩn bị bằng cách nghiền chúng,
sau đó ngâm qua đêm ba lần ở nhiệt độ 55°C trong 2,5 L metanol 70% có khuấy. Dịch chiết
được lọc, cô trong chân không ở 37°C bằng thiết bị bay hơi quay và đông khô. Dịch chiết thô
được bảo quản ở -20°C. Việc lập hồ sơ các thành phần phenolic trong dịch chiết được thực hiện
thông qua HPLC–PDA-ESI–MS/MS như đã mô tả trước đây [ 28 ].
Xét nghiệm CUPRAC

Thử nghiệm này được thực hiện để đánh giá khả năng chống oxy hóa in vitro bằng cách ước
2+
tính khả năng của chiết xuất SJ trong việc khử các ion cupric (Cu ) thành ion cuprous (Cu + ) [
30 ]. Anisole hydroxyl butylat hóa (BHA) được sử dụng làm chất chuẩn (Sigma-Aldrich,
Darmstadt, Đức), ở nồng độ 50, 100, 200 và 400 µg/mL. Một mL neocuproine 7,5 mM (Sigma-
Aldrich, Darmstadt, Đức), hòa tan trong etanol, 1 mL CuCl 2 0,01 M và 1 mL NH 4 Ac 1 M được
thêm vào 0,3 mL dung dịch chuẩn hoặc chiết xuất SJ ( 50, 100, 200 và 400 µg/mL). Nước tinh
khiết được thêm vào tất cả các ống nghiệm để thu được thể tích cuối cùng là 4,1 mL. Độ hấp thụ
của hỗn hợp được đọc ở bước sóng 450 nm so với mẫu trắng sau 30 phút. Các điểm dữ liệu
được vẽ và khớp với hồi quy tuyến tính bằng phương trình y = ax + b; EC 50 cho chiết xuất SJ
được tính toán bằng phương trình: EC 50 = 0,5-b/a.
Các chủng Caenorhabditis elegans
C. Elegans được sử dụng trong các thử nghiệm khác nhau, ngoài E. coli OP50, được lấy từ
Trung tâm Di truyền Caenorhabditis, Đại học Minnesota, Hoa Kỳ. Các chủng được sử dụng là
CF1038 ( daf-16(mu86)I ), EU1 [ skn-1(zu67) IV/nT1(IV;V )], TJ356 ( zIs356[daf-16p::daf-
16a/b::GFP + rol-6 ]), LD1 [ skn-1b/c::GFP + rol-6(su1006) ], CL2166 ( dvIs19[pAF15(gst-
4::GFP::NLS) ]), AM141 ( rmls133[unc -54p::Q40::YFP] ), HA759 (rtIs11[osm-10p::GFP +
osm10p::HtnQ150 + Dpy-20( + )]) , NL5901 ( Punc-54::alpha-synuclein::YFP + chú-119 ),
CL4176 ( dvIs27[myo-3p::A-Beta (1–42)::let-851 30UTR ) C rol-6(su1006) ]) X và CL802 [
smg-1(cc546) I ; rol-6(su1006) II ]. Các đĩa chứa môi trường phát triển tuyến trùng được cung
cấp E. coli OP50 làm thức ăn cho giun được ủ ở tủ ấm 20°C trong thời gian thí nghiệm. Các
chủng CL4176 và CL802 chỉ được ủ ở nhiệt độ 16°C. Để thu được những con giun có độ tuổi
đồng bộ, chúng tôi đã tuân theo một quy trình đã được thiết lập trước đó là tẩy trắng những con
lưỡng tính trưởng thành để lấy trứng của chúng bằng NaOH 5 M và NaOCl 5% theo tỷ lệ 1:3 [
30 ].
Xét nghiệm sinh tồn bằng cách sử dụng juglone
Tuyến trùng đồng bộ hóa theo tuổi CF1038 ( tuyến trùng đột biến daf-16 ) và EU1 (đột biến
skn-1 ) ở giai đoạn L1 được chia thành 8 nhóm (mỗi nhóm 70–80 giun) và được nuôi bằng S-
medium và E. coli OP50 ở 20 °C . Tất cả các nhóm được để lại trong 48 giờ sau khi điều trị.
Chiết xuất SJ hydro-alcoholic (ở nồng độ 100, 200 và 300 µg/mL) được trao cho ba nhóm.
( -)- Epigallocatechin gallate (EGCG) ( ≥ 95%, Sigma-Aldrich, Darmstadt, Đức) ở nồng độ 50

µg/mL được sử dụng làm đối chứng dương tính. Ba nhóm đối chứng âm cũng được sử dụng, hai
nhóm không được xử lý và một nhóm đối chứng bằng dung môi được xử lý bằng metanol (nồng
độ cuối cùng là 2,1%). Một nhóm tuyến trùng nhận được 100 μg/mL rutin. Sau 48 giờ, tất cả các
nhóm đều nhận được một liều gây chết người (80 µM) juglone (Sigma-Aldrich GmbH,
Darmstadt, Đức), sau đó ủ thêm 24 giờ nữa (ngoại trừ một trong các nhóm đối chứng không
được điều trị). Cuối cùng, số giun sống và chết được đếm và ghi lại. Giun được cho là đã chết
khi chúng không thể bị kích thích khi bị kích thích bằng một sợi dây làm bằng bạch kim. Bốn
lần lặp lại thí nghiệm độc lập đã được thực hiện và dữ liệu được tính bằng trung bình ± SEM
của tỷ lệ phần trăm tỷ lệ sống. Các kết quả được so sánh bằng cách sử dụng lăng kính GraphPad
(5.01) và kiểm tra mức ý nghĩa bằng cách sử dụng ANOVA một chiều, sau đó là phương pháp
Bonferroni (post hoc) [ 28 ].
Xác định vị trí của yếu tố phiên mã DAF-16
Chủng C. Elegans TJ356, có daf-16 hợp nhất với GFP, được sử dụng để quan sát quá trình định
vị yếu tố phiên mã DAF-16. Ấu trùng đồng bộ L1 được chia thành bảy nhóm (mỗi nhóm 30
con50 giun) và được xử lý như mô tả ở trên bằng cách sử dụng S-medium + E. coli OP50 ở 20 °
C. Giun TJ356 được nghiên cứu sau 24 giờ bằng kính hiển vi huỳnh quang. Giun được cố định
trên các phiến kính bằng natri azide 10 mM để làm tê liệt. Kính hiển vi BIOREVO BZ-9000,
được trang bị đèn thủy ngân, ở bước sóng kích thích và phát xạ λ ex 480/20 nm và λ em 510/38 nm
(Keyence Deutschland GmbH, Neu-Isenburg, Đức) và huỳnh quang Axiostar Plus 37081 kính
hiển vi (Carl Zeiss) đã được sử dụng để quan sát tuyến trùng. Hình ảnh của 30 con sâu4040
được xem ngẫu nhiên để phân tích bằng vật kính 20X và thời gian phơi sáng không đổi. Giun
được đếm sau khi phân chia chúng theo nội địa hóa của DAF-16 :: GFP thành nội địa hóa tế
bào, hạt nhân hoặc trung gian. Việc phân tích và so sánh tỷ lệ phần trăm kết quả hạt nhân giữa
các nhóm khác nhau được thực hiện như mô tả ở trên. Ba bộ thí nghiệm độc lập đã được thực
hiện và tính trung bình.
Xác định nội địa hóa yếu tố phiên mã SKN-1
Chủng C. Elegans LD1, có skn-1 được ghép nối với GFP, được sử dụng để xác định vị trí của
yếu tố phiên mã SKN-1. Tuyến trùng L1 được chia thành sáu nhóm (mỗi nhóm 20 con30). Tất
cả các nhóm được giữ trong 48 giờ trong môi trường S được cung cấp E. coli OP50 ở 20°C và
sau đó được hiển thị bằng kính hiển vi huỳnh quang. Khoảng 20 con sâu đã được hiển thị và
phân tích ở thời gian phơi sáng liên tục bằng độ phóng đại 20X. Ba thử nghiệm độc lập đã được
thực hiện và giun được phân chia và đếm theo nội địa hóa SKN-1 :: GFP dưới dạng tế bào học
hoặc hạt nhân. Tỷ lệ giun biểu hiện nội địa hóa hạt nhân được so sánh như mô tả ở trên.
Định lượng GST-4
Chủng C. Elegans CL2166 , với gst-4 được hợp nhất với GFP, đã được sử dụng trong xét
nghiệm này. Tuyến trùng ở giai đoạn phát triển L1 được chia thành bảy nhóm (mỗi nhóm 20–30
giun) và sau đó để phát triển trong 48 giờ trong môi trường S và E. coli OP50 ở 20°C. Việc
chụp ảnh 20 con sâu3030 được thực hiện bằng cách sử dụng thời gian phơi sáng liên tục và độ
phóng đại 10 lần. Thử nghiệm được thực hiện ba lần khác nhau và đo cường độ huỳnh quang
trung bình trên toàn bộ cơ thể tuyến trùng. Phân tích được thực hiện bằng ImageJ phiên bản
1.48 (NIH, Bethesda, MD, USA). So sánh dữ liệu được thực hiện như mô tả trước đây.
Ước tính định lượng của cụm polyQ40
Tuyến trùng chuyển gen AM141, với polyQ40 được ghép với YFP, được đồng bộ hóa theo độ
tuổi và được sử dụng ở giai đoạn L1. Các nhóm thử nghiệm được thiết lập thành tám nhóm, mỗi
nhóm có 30–40 giun và để trong 72 giờ trong môi trường S + E. coli OP50 ở 20°C. Giun được
quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang. Khoảng ba mươi con giun được chụp qua ống kính
10X với thời gian phơi sáng liên tục. Thử nghiệm được thực hiện ba lần và số lượng cụm
PolyQ40::YFP được tìm thấy trong cơ bắp đã được ghi trên khắp cơ thể của giun. Kết quả được
hiển thị dưới dạng số cụm trung bình ± SEM. So sánh kết quả đã được thực hiện như mô tả
trước đây.
Xét nghiệm hóa ứng động
Tuyến trùng chuyển gen HA759 được sử dụng để đánh giá khả năng tồn tại của tế bào thần kinh
ASH trong các nhóm điều trị khác nhau dựa trên hành vi hóa hướng động của giun như đã mô tả
trước đây [ 31 ]. Giun giai đoạn L1 được đồng bộ hóa theo tuổi được sắp xếp thành sáu nhóm,
mỗi nhóm 100–150 giun và giữ ở 20 ° C trong môi trường S chứa E. coli OP50 trong 72 giờ.
Các tấm NGM hóa trị 60 mm được chia thành hai nửa và natri azide (0,5 M, 1,5 μL) và 0,1%
benzaldehyde hòa tan trong ethanol 99,8% (1,5 μL) được đưa vào vùng hấp dẫn. Vùng kiểm
soát ở phía đối diện của tấm chứa 1,5 μL natri azide 0,5 M và 1,5 μL ethanol 99,8%. Sau đó,
giun được rửa bằng dung dịch đệm M9 ba lần để loại bỏ vi khuẩn E. coli và khoảng 100 con
giun (5 μL) được thu thập từ mỗi nhóm và đặt vào giữa các đĩa. Tất cả các đĩa được ủ ở 20°C
trong 1,5 giờ và số lượng giun trên mỗi mặt được đếm sau đó. Chỉ số hóa hướng được tính theo
phương trình sau: (số lượng giun trong vùng hấp dẫn – số lượng giun trong vùng kiểm
soát)/tổng số giun. Dữ liệu của ba xét nghiệm được đưa vào và biểu thị dưới dạng trung bình ±
SEM. So sánh dữ liệu đã được thực hiện như đã đề cập trước đó.
Ước tính tích lũy α-synuclein
Chủng biến đổi gen NL5901 được sử dụng để đánh giá sự tích lũy tổng hợp α-synuclein. Chủng
này giống với PD ở chỗ có α-synuclein của con người liên kết với YFP được biểu hiện trong các
tế bào cơ của tuyến trùng. Giun được đồng bộ hóa theo độ tuổi được phân loại thành sáu nhóm,
mỗi nhóm 30–40 giun và để trong 96 giờ trong môi trường S với E. coli OP50 ở 20 ° C. Tuyến
trùng được quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang như mô tả trước đây sử dụng ống kính 10X
và thời gian phơi sáng liên tục. Ba thí nghiệm độc lập đã được thực hiện và trung bình có 15–20
con giun được chụp trong mỗi nhóm. Cường độ huỳnh quang được đo ở vùng đầu và hầu họng.
Việc định lượng được thực hiện bằng ImageJ và kết quả được so sánh như mô tả trước đây. Kết
quả được hiển thị dưới dạng trung bình ± SEM của cường độ huỳnh quang tương đối.
Kiểm tra liệt
Xét nghiệm này sử dụng tuyến trùng chuyển gen CL4176. Chúng mang gen Aβ của con người
trong cơ và biểu hiện tình trạng tê liệt do nhiễm độc từ sự tổng hợp Aβ. Chủng đối chứng
CL802, không có gen Aβ, cũng được đưa vào xét nghiệm này để loại trừ bất kỳ ảnh hưởng nào
phát sinh ngoài ảnh hưởng của biểu hiện Aβ. Giun CL4176 được sắp xếp thành sáu nhóm, mỗi
nhóm 60 con80. Chiết xuất SJ được sử dụng ở hai nồng độ, 300 và 500 µg/mL. Nhóm EGCG và
rutin được dùng với liều tương ứng là 100 và 300 µg/mL. Thử nghiệm đã được thực hiện và
phân tích như mô tả trước đây [ 30 ]. Việc xử lý được thực hiện trên các đĩa NGM và chúng
được giữ ở 16°C trong thời gian 24 giờ sau đó E. coli OP50 được thêm vào giữa các đĩa và
chúng được giữ ở 16°C trong 24 giờ nữa. Sau đó, quá trình tẩy trắng được thực hiện để có được
những con giun đồng bộ về độ tuổi và khoảng 60–80 quả trứng được thêm vào giữa mỗi đĩa.
Các đĩa NGM được xử lý bằng giun được để trong 48 giờ ở 16°C, sau đó tăng nhiệt độ lên 25°C
để kích thích biểu hiện gen Aβ. Hai mươi hai giờ sau, việc chấm điểm được thực hiện cho giun
cứ sau 2 giờ trong khoảng thời gian 12 giờ liên tiếp. Giun bị liệt được coi là loài không thể bị
kích động sau khi chạm vào dây bạch kim hoặc chỉ cử động đầu. Dữ liệu của ba lần chạy khác
nhau được tính trung bình và được trình bày dưới dạng trung bình ± SEM và PT 50 được lấy
bằng phương pháp phân tích tỷ lệ sống sót của Kaplan–Meier. So sánh kết quả được thực hiện
thông qua thử nghiệm ANOVA và Bonferroni một chiều.
Kết quả
Việc ước tính in vitro về khả năng chống oxy hóa của chiết xuất SJ được thực hiện thông qua
thử nghiệm CUPRAC. Các chất chống oxy hóa hoạt động trong dịch chiết làm giảm thuốc thử
CUPRAC tạo ra màu cam có độ hấp thụ được đọc ở bước sóng 450 nm. Đối chứng dương tính,
BHA, cho thấy EC 50 là 167 ± 0,5 µg/mL, trong khi chiết xuất SJ cho thấy giá trị 498,3 ± 0,1
µg/mL.
Trong một thử nghiệm sinh tồn với C. Elegans (đột biến CF1038), bị thử thách bởi juglone (80
µM) trong 24 giờ, những con giun được xử lý trước bằng chiết xuất SJ cho thấy tỷ lệ sống sót
cao hơn đáng kể ở tất cả các liều thử nghiệm so với những con giun được xử lý bằng dung môi
đối chứng + juglone . Tác dụng bảo vệ tương tự như tác dụng của chất chống oxy hóa
polyphenol EGCG được biết đến từ trà xanh, được sử dụng như một biện pháp kiểm soát tích
cực. SJ ở nồng độ 300 µg/mL tạo ra tỷ lệ sống cao nhất là 71 ± 1% ( p < 0,001). Mặc dù tỷ lệ
sống sót ở nhóm rutin thấp hơn so với chiết xuất SJ nhưng vẫn tăng đáng kể 52,6 ± 4,7% ( p <
0,01) so với kiểm soát dung môi (Hình 1 a). Ngược lại, tất cả các nhóm tuyến trùng đột biến
EU1 thiếu SKN1 được xử lý ([ skn-1(zu67) IV/nT1(IV;V )]) không cho thấy bất kỳ sự khác biệt
đáng kể nào về tỷ lệ sống sót so với nhóm đối chứng âm tương ứng của chúng (Hình 1) . b), cho
thấy tầm quan trọng của yếu tố phiên mã SKN1.
Hình 1
Tỷ lệ sống sót của các thể đột biến C. Elegans (được xử lý trước bằng các phương pháp điều trị
khác nhau) được nhấn mạnh với 80 µM juglone. đột biến CF1038. b đột biến EU1. Dữ liệu
được trình bày dưới dạng giá trị sống sót trung bình ± SEM cho bốn xét nghiệm. ### p < 0,001
so với nhóm juglone. ** p < 0,01 và *** p < 0,001 liên quan đến kiểm soát dung môi + juglone.
Các thanh lỗi trong nhóm điều khiển chưa được xử lý và nhóm được xử lý bằng juglone quá nhỏ
để có thể giải quyết
Sự di chuyển của yếu tố phiên mã DAF-16 từ cytosol vào nhân không bị ảnh hưởng bởi chiết
xuất SJ. Các nhóm được xử lý chiết xuất SJ không cho thấy sự khác biệt đáng kể về khả năng
định vị hạt nhân DAF-16 so với nhóm đối chứng bằng dung môi. Tương tự, quá trình định vị
DAF-16 ở động vật được xử lý bằng rutin không khác biệt đáng kể so với đối chứng (Hình 2 ).
Hình 2
Chuyển vị DAF-16 ở giun C. Elegans . một tế bào chất. b Trung cấp. c Hạt nhân. Thanh tỷ lệ =
100 Pha. d Tỷ lệ giun có biểu hiện định vị hạt nhân. Các giá trị được biểu thị bằng giá trị trung
bình ± SEM của ba thử nghiệm. ### p < 0,001 là sai khác so với đối chứng không xử lý
C. Elegans chuyển gen LD1 , trong đó chất kích thích skn-1 được liên hợp với GFP, được sử
dụng để kiểm tra sự liên quan của con đường SKN-1/Nrf2 trong hoạt động chiết xuất. Chiết xuất
SJ, ở tất cả các liều lượng sử dụng, đã dẫn đến sự chuyển vị hạt nhân đáng chú ý của SKN-1
liên quan đến việc kiểm soát dung môi. SJ 200 µg/mL cho thấy tỷ lệ định vị hạt nhân cao nhất
(21%) so với đối chứng bằng dung môi (6%). Những thay đổi về vị trí cũng có ý nghĩa ở nhóm
rutin, ở mức 18,3% ( p < 0,01) (Hình 3 ).
Hình 3
Chuyển vị SKN-1 ở C. Elegans . một bản địa hóa Cytosolic. b Nội địa hóa hạt nhân. Thanh tỷ
lệ = 200 µm. c Tỷ lệ tuyến trùng có vị trí hạt nhân. Việc xử lý SJ dẫn đến việc định vị hạt nhân
đáng chú ý của SKN-1. Các giá trị được biểu thị bằng giá trị trung bình ± SEM của ba lần kiểm
tra. ** p < 0,01 được đưa ra so với đối chứng bằng dung môi
Gst-4 là gen mục tiêu hạ nguồn của yếu tố phiên mã SKN-1/Nrf2, chịu trách nhiệm điều hòa
tuổi thọ và khả năng chống stress oxy hóa ở C. Elegans . Nó góp phần vào phản ứng căng thẳng
oxy hóa như là một phần của giai đoạn giải độc [ 32 ]. Sự suy giảm cường độ huỳnh quang phụ
thuộc vào liều lượng đã được nhận thấy khi điều trị bằng các liều chiết xuất SJ khác nhau so với
liều lượng đối chứng dung môi. SJ ở nồng độ 300 μg/mL cho thấy cường độ huỳnh quang giảm
cao nhất, 47%, so với đối chứng bằng dung môi. Kết quả này có thể so sánh với đối chứng
dương tính với EGCG, cho thấy độ huỳnh quang giảm 48% so với đối chứng không được điều
trị. Nhóm được điều trị bằng rutin cũng làm giảm đáng kể mức huỳnh quang tới 41% ( p <
0,001) (Hình 4 ).
Hình 4
Biểu hiện của GST-4 ở C. Elegans . một sự kiểm soát chưa được xử lý. b Kiểm soát dung môi.
c SJ 100 µg/mL. d SJ 200 µg/mL. e SJ 300 µg/mL. f EGCG 50 µg/mL. g Rutin 100 µg/mL.
Thanh tỷ lệ = 100 Pha. (h) Chiết xuất SJ làm giảm mức GST-4 ở giun CL2166 đột biến so với
kiểm soát dung môi. Kết quả được biểu thị bằng trung bình ± SEM của ba lần chạy khác nhau.
### p < 0,001 là sai khác so với đối chứng không xử lý. *** p < 0,001 và ** p < 0,01 so với đối
chứng bằng dung môi. Ảnh từ ba thí nghiệm độc lập được cung cấp dưới dạng Hình bổ sung S1
(Tệp bổ sung 1 )
Để kiểm tra hoạt động bảo vệ thần kinh của SJ, sự hình thành cụm polyQ40 đã được nghiên
cứu. Số lượng cụm polyQ40, tương ứng với tổn thương tế bào thần kinh, đã giảm đáng kể khi
điều trị bằng chiết xuất SJ. Chiết xuất SJ, 300 µg/mL, cho thấy số lượng cụm giảm 72 ± 1% so
với đối chứng bằng dung môi. Nhóm EGCG đối chứng dương cho thấy giá trị tương tự giảm 75
± 1%. Nhóm kiểm soát rutin cũng cho thấy mức giảm đáng kể là 60 ± 1% ( p < 0,001) (Hình 5 ).
Hình 5
Ảnh vi mô của giun hiển thị cụm polyQ40. một sự kiểm soát chưa được xử lý. b Kiểm soát
dung môi. c SJ 100 µg/mL. d SJ 200 µg/mL. e SJ 300 µg/mL. f EGCG 50 µg/mL. g Rutin 100
µg/mL. Thanh tỷ lệ = 100 Pha. (h) Chiết xuất SJ làm giảm cụm polyQ40::YFP ở giun AM141
đột biến so với kiểm soát dung môi. Dữ liệu được biểu thị dưới dạng trung bình ± SEM của ba
xét nghiệm độc lập. ### p < 0,001 so với đối chứng không được xử lý và *** p < 0,001 so với
đối chứng bằng dung môi. Ảnh từ ba thí nghiệm độc lập được cung cấp dưới dạng Hình bổ sung
S2 (Tệp bổ sung 2 )
Sự hình thành PolyQ cũng ảnh hưởng đến chức năng của tế bào thần kinh ASH dẫn đến sự thiếu
hụt hoạt động hóa học bình thường của giun đối với các mùi giống như mùi benzaldehyde. Giun
HA759 xử lý bằng dịch chiết SJ ở nồng độ 300 µg/mL cho thấy chỉ số hóa hướng động cao 0,54
± 0,01 so với nhóm đối chứng dung môi, có chỉ số 0,11 ± 0,01. Nhóm rutin cũng biểu hiện chỉ
số hóa ứng động tăng đáng kể là 0,53 ± 0,05 ( p < 0,01) (Hình 6 ).
Hình 6
Xét nghiệm hóa trị sử dụng tuyến trùng HA759. Chiết xuất SJ 300 µg/mL làm tăng chỉ số hóa
ứng động so với nhóm đối chứng dung môi. Kết quả được trình bày dưới dạng trung bình ±
SEM của ba xét nghiệm. ** p < 0,01 so với kiểm soát dung môi
Để mô tả các đặc tính bảo vệ thần kinh của chiết xuất SJ chặt chẽ hơn, việc định lượng cường
độ huỳnh quang biểu thị sự tích lũy α-synuclein đã được thực hiện. Việc xử lý SJ làm giảm đáng
kể sự tích lũy α-synuclein, mức giảm 43% ± 0,4% so với đối chứng được quan sát thấy đối với
300 µg/mL chiết xuất SJ. Kiểm soát rutin cho thấy mức giảm đáng kể 22 ± 0,5% ( p < 0,001)
(Hình 7 ).
Hình 7
Ảnh hưởng của chiết xuất SJ đến sự tích lũy α-synuclein. một sự kiểm soát chưa được xử lý. b
Kiểm soát dung môi. c SJ 100 µg/mL. d SJ 200 µg/mL. e SJ300 µg/mL. f Rutin 100 µg/mL.
Thanh tỷ lệ = 50 µm. g Chiết xuất SJ làm giảm sự tích lũy α-synuclein ở giun NL5901 so với
nhóm kiểm soát dung môi. Kết quả biểu thị giá trị trung bình ± SEM của ba lần chạy. *** p <
0,001 so với đối chứng bằng dung môi
Để phân định rõ hơn các hoạt động bảo vệ thần kinh của SJ, một xét nghiệm gây tê liệt đã được
tiến hành bằng cách sử dụng giun CL4176 nhạy cảm với nhiệt độ. Khi nhiệt độ tăng lên, peptide
Aβ của con người tích tụ trong cơ của tuyến trùng và chúng bị tê liệt [ 33 ]. PT 50 , thời gian
trung bình khi 50% số giun bị tê liệt, đã được xác định. Cả SJ 300 µg/mL và SJ 500 µg/mL đều
cho thấy độ trễ đáng kể trong PT 50 lần lượt là 4,0 ± 1,2 giờ ( p < 0,05) và 5,0 ± 0,5 giờ ( p < 0,01),
so với đối chứng bằng dung môi. 300 µg/mL rutin cho thấy độ trễ không đáng kể 3,0 ± 1,2 giờ,
trong khi đối chứng dương tính EGCG 100 µg/mL cho thấy độ trễ rất đáng kể 6,6 ± 0,3 giờ so
với đối chứng không được điều trị ( p < 0,001) (Hình 8 ). Những con giun không biểu hiện Aβ
(chủng đối chứng) sẽ không bị tê liệt khi tiếp xúc với bất kỳ phương pháp điều trị nào.
Hình 8
Xét nghiệm tê liệt sử dụng giun CL4176. Tác dụng của chiết xuất SJ đối với tình trạng tê liệt do
Aβ gây ra. Điều trị bằng SJ gây ra sự chậm trễ về thời gian tê liệt so với nhóm đối chứng bằng
dung môi. b Giá trị PT50 cho các phương pháp điều trị khác nhau, dữ liệu được hiển thị dưới
dạng trung bình ± SEM của ba xét nghiệm. * p < 0,05 và ** p < 0,01 so với nhóm đối chứng
bằng dung môi và ### p < 0,001 so với nhóm đối chứng không được điều trị. Thanh lỗi trong
nhóm kiểm soát dung môi quá nhỏ để có thể giải quyết
Cuộc thảo luận
Lão hóa là một quá trình sinh lý bình thường đi kèm với các vấn đề về cân bằng nội môi protein.
Sự giảm đáng kể về tốc độ tổng hợp protein và đồng thời mất khả năng phân hủy các protein bị
sai lệch xảy ra dẫn đến sự tích tụ của chúng dẫn đến các bệnh lý protein khác nhau như bệnh
Huntington, bệnh Parkinson và bệnh Alzheimer [ 34 ]. Các nghiên cứu lâm sàng cho thấy các
bệnh về hệ thần kinh trung ương như AD và PD dẫn đến stress oxy hóa và tổn thương DNA,
lipid và protein của hệ thần kinh trung ương [ 35 , 36 ]. Thật vậy, mức độ căng thẳng oxy hóa có
liên quan trực tiếp đến quá trình lão hóa và phát triển các rối loạn thoái hóa thần kinh. Do đó,
chất chống oxy hóa được kỳ vọng sẽ bảo vệ chống lại và làm giảm sự tiến triển của các bệnh
thoái hóa thần kinh.
Thực vật giàu chất chuyển hóa phenolic trước đây đã cho thấy khả năng can thiệp vào quá trình
gấp cuộn của protein và làm giảm hoặc ngăn chặn sự kết tụ của chúng [ 26 , 37 ].
Trước đây chúng tôi đã báo cáo đặc tính hóa thực vật của chiết xuất hydroalcoholic SJ và xác
định nhiều hợp chất phenolic bao gồm kaempferol, quercetin và apigenin. Chiết xuất này cho
thấy hoạt động chống oxy hóa đầy hứa hẹn và mang lại khả năng chống lại stress oxy hóa ở C.
Elegans và mô hình chuột, khiến nó trở thành một ứng cử viên sáng giá như một tác nhân bảo
vệ thần kinh tiềm năng [ 28 ]. Trong nghiên cứu hiện tại, kết quả xét nghiệm khử CUPRAC
chứng minh rằng hoạt tính chống oxy hóa của chiết xuất SJ không bị ảnh hưởng bởi tác dụng
nhặt gốc tự do trực tiếp. Tuy nhiên, tác dụng chống oxy hóa in vivo phụ thuộc vào các yếu tố
khác như khả dụng sinh học, sự di chuyển bên trong các sinh vật khác nhau và kích hoạt các cơ
chế sinh học như điều chế các gen phản ứng căng thẳng ảnh hưởng đến mức độ enzyme chống
oxy hóa.
Rutin, một flavone, được biết là có tác dụng chống oxy hóa theo một số phương thức, bao gồm
nâng cao mức độ chống oxy hóa có enzyme và không enzyme, loại bỏ gốc tự do và chelat hóa
các ion kim loại [ 38 ]. Việc kiểm soát rutin đã được thực hiện trong tất cả các thử nghiệm để
kiểm tra tác động của toàn bộ dịch chiết so với một hợp chất polyphenolic đơn lẻ có đặc tính tốt.
Tuổi thọ và khả năng chống stress ở C. Elegans được điều hòa thông qua hai yếu tố phiên mã
chính là DAF-16 và SKN-1 [ 39 ]. Trước đây chúng tôi đã chỉ ra rằng chiết xuất SJ thể hiện các
hoạt động chống oxy hóa và giảm căng thẳng oxy hóa ở giun hoang dã được chứng minh bằng
tỷ lệ sống sót tăng đáng kể, đối với tuyến trùng tiếp xúc với liều juglone gây chết người và đồng
thời giảm nồng độ ROS cơ bản; ngoài mức độ superoxide effutase-3 (SOD-3) được tăng cường
[ 28 ]. Để khám phá sự liên quan của các con đường DAF-16/FOXO và SKN-1/Nrf2, hai chủng
đột biến đã được sử dụng cho các thử nghiệm sinh tồn: (i) chủng daf -16 đột biến, CF1038 và
(ii) chủng skn-1 đột biến, EU1. Cả hai chủng đều được sử dụng để đánh giá khả năng sống sót
sau khi tiếp xúc với stress oxy hóa khi tiếp xúc với juglone.
Sự chuyển vị DAF-16 được đo lường để đánh giá sự đóng góp của yếu tố phiên mã DAF-16 vào
hoạt động chiết xuất SJ. Thông thường, DAF-16 được tìm thấy ở dạng không hoạt động trong
bào tương nơi huỳnh quang được nhìn thấy phân bố khắp cơ thể giun. Kích hoạt DAF-16 dẫn
đến sự chuyển vị trí của nó đến nhân, có thể nhìn thấy bằng huỳnh quang có dấu lấm chấm.
Kích hoạt và chuyển vị trí của DAF-16/FOXO được kích hoạt bởi các yếu tố gây căng thẳng
khác nhau như nhiệt và stress oxy hóa. Sự kích hoạt này góp phần điều chỉnh các gen phản ứng
căng thẳng tiếp theo và các gen liên quan đến quá trình trao đổi chất và điều chỉnh tuổi thọ [ 40
].
Yếu tố phiên mã SKN-1 của C. Elegans phù hợp với động vật có vú Nrf2. Yếu tố phiên mã này
góp phần vào nhiều con đường điều tiết chịu trách nhiệm chống lại căng thẳng và kéo dài tuổi
thọ. Các điều kiện căng thẳng hoặc xenobamel dẫn đến sự tích tụ của nó trong nhân ruột, sau đó
kích hoạt các gen hạ nguồn liên quan đến giai đoạn giải độc Giai đoạn 2 [ 41 , 42 ].
Các thử nghiệm sống sót sử dụng đột biến daf-16 cho thấy tỷ lệ sống sót tăng lên ở giun được
xử lý trước bằng chiết xuất SJ, chứng tỏ rằng hoạt động của chiết xuất này không phụ thuộc vào
yếu tố phiên mã DAF-16. Ngược lại, tỷ lệ sống sót của các đột biến skn-1 không thay đổi khi
không có hoặc có mặt chiết xuất SJ hoặc rutin. Điều này cho thấy tầm quan trọng của SKN-1
trong hoạt động của cả chiết xuất SJ và rutin. Hơn nữa, chiết xuất SJ ở tất cả các liều lượng,
cũng như kiểm soát rutin không tạo ra bất kỳ cảm ứng đáng kể nào về sự định vị hạt nhân DAF-
16, cho thấy sự vắng mặt của yếu tố phiên mã này trong hoạt động của chúng. Một quan sát
tương tự đã được báo cáo trước đây đối với rutin [ 43 ]. Ngược lại, cả SJ và rutin đều gây ra sự
chuyển vị hạt nhân mạnh mẽ và đáng kể của skn-1 chứng tỏ sự tham gia của nó vào cơ chế hoạt
động của chúng. Các chất hóa học thực vật như diallyl trisulfide từ tỏi và baicalein từ Baical
Skullcap đã được chứng minh là dẫn đến kích hoạt con đường SKN-1 nhưng không kích hoạt
DAF-16. Điều này lại dẫn đến tác dụng kéo dài tuổi thọ và điều chỉnh khả năng chống stress ở
C. Elegans [ 44 , 45 ].
Chất chiết xuất từ thực vật như Ginkgo biloba và Cassia rò trước đây đã cho thấy khả năng điều
chỉnh giảm sự biểu hiện của gen dưới dạng gst-4 dẫn đến đặc tính kháng stress oxy hóa, một tác
động có thể được thực hiện thông qua SKN-1 [ 30 , 46 ]. Quan sát của chúng tôi rằng chiết xuất
SJ làm giảm đáng kể biểu hiện gst-4 phù hợp với các báo cáo trước đây, nhấn mạnh sự đóng
góp của các con đường qua trung gian SKN-1 đối với cơ chế hoạt động của chiết xuất SJ và
rutin [ 43 ].
Đáng chú ý, con đường SKN-1 được cho là có tác dụng bảo vệ giun khỏi tổn thương protein liên
quan đến stress oxy hóa [ 41 ]. Dựa trên hoạt động chống oxy hóa đã được ghi nhận, chiết xuất
này đã được thử nghiệm về đặc tính bảo vệ thần kinh. Sự nhân đôi của glutamine có liên quan
đến bệnh Huntington, cũng như các bệnh thoái hóa thần kinh khác, dẫn đến suy giảm và rối loạn
chức năng ty thể [ 47 ]. Một xét nghiệm PolyQ40 cho thấy sự giảm đáng kể về số lượng tổng
hợp trong các nhóm được xử lý bằng chiết xuất so với đối chứng bằng dung môi, phù hợp với
tác dụng bảo vệ thần kinh tiềm ẩn. Tác dụng tương tự cũng được quan sát thấy khi điều trị tuyến
trùng bằng rutin.
Để thử nghiệm thêm về tác dụng bảo vệ thần kinh của chiết xuất, xét nghiệm hóa hướng động
đã được thực hiện bằng cách sử dụng chủng C. Elegans HA759 biểu hiện Htt-Q150 trong tế bào
thần kinh ASH. Htt-Q150 là một đoạn protein Huntingtin của con người được đặc trưng bởi 150
lần lặp lại của CAG trinucleotide dẫn đến sự mở rộng của đường PolyQ và mất chức năng tế
bào thần kinh ASH [ 48 ]. Tế bào thần kinh ASH sống làm trung gian cho hành vi cảm giác hóa
học của tuyến trùng đối với các kích thích khác nhau như chất tạo mùi. Biểu hiện PolyQ dẫn
đến các vấn đề về khả năng hóa ứng động do tế bào thần kinh ASH chết ở giun C. Elegans [ 49
]. Điều trị bằng chiết xuất SJ làm tăng đáng kể khả năng hoạt động hóa học của giun so với
nhóm đối chứng. Rutin cho thấy tác dụng tương tự. Kết quả này xác nhận khả năng của chiết
xuất trong việc bảo vệ chống lại sự hình thành các tập hợp PolyQ như được tìm thấy trong HD
và hiệu ứng này có thể là do kích hoạt SKN-1, mặc dù không thể loại trừ các cơ chế khác khỏi
các thử nghiệm của chúng tôi. Một nghiên cứu trước đây cũng đã nhấn mạnh tầm quan trọng
của sự đóng góp của con đường SKN-1 trong việc bảo vệ khỏi độc tính do polyglutamine gây ra
[ 31 ].
Căng thẳng oxy hóa luôn có liên quan đến sự mất nigral của các tế bào thần kinh dopaminergic
trong não của bệnh nhân mắc bệnh Parkinson [ 50 ]. Các tế bào cố gắng chống lại tác hại của
các chất oxy hóa để duy trì sự cân bằng oxy hóa khử thông qua việc kích hoạt một số con đường
bảo vệ chống oxy hóa. Sau khi kích hoạt SKN-1 và sự chuyển vị hạt nhân của nó, nó liên kết
với các gen chống oxy hóa thông qua yếu tố phản ứng chống oxy hóa dẫn đến khả năng chống
stress oxy hóa và bảo tồn các tế bào thần kinh dopaminergic [ 42 , 51 ].
Sự hình thành các tập hợp α-synuclein được coi là một yếu tố quan trọng trong cơ chế bệnh sinh
của một số rối loạn thể Lewy, chẳng hạn như bệnh Parkinson, teo đa hệ thống và các bệnh khác.
Căng thẳng oxy hóa có liên quan đến sự hình thành các sợi nhỏ, cuối cùng dẫn đến sự phát triển
của các tập hợp α-synuclein [ 52 ]. Ở đây, chúng tôi đã chỉ ra rằng chiết xuất SJ có thể làm giảm
sự hình thành các tập hợp α-synuclein này. Hiệu ứng này có thể được liên kết với các thành
phần trong chiết xuất bao gồm kaempferol, chất có đặc tính chống fibrillogen và làm mất ổn
định fibril α-synuclein đã được chứng minh trước đây [ 53 ]. Tác dụng này của chiết xuất SJ có
thể là do sự kích hoạt của con đường SKN-1, tuy nhiên vẫn có thể có sự tham gia của các con
đường truyền tín hiệu khác. Một nghiên cứu trước đây cũng tiết lộ tác dụng của một số chất
phytochemical từ củ Dioscorea alata L. trong việc giảm các tập hợp α-synuclein có liên quan
đến việc tăng cường định vị hạt nhân SKN-1 [ 54 ]. Một cách nhất quán, rutin—một chất chống
oxy hóa—cũng có thể làm giảm sự hình thành tập hợp.
Để nghiên cứu tác dụng của chiết xuất trong việc chống lại sự hình thành và độc tính của Aβ,
một thử nghiệm gây tê liệt đã được thực hiện bằng cách sử dụng một chủng tuyến trùng đột biến
biểu hiện peptide Aβ của con người trong cơ. Khi tăng nhiệt độ, người ta quan sát thấy sự khởi
phát tình trạng tê liệt chậm lại đáng kể so với nhóm đối chứng ở các nhóm được điều trị bằng SJ
cho thấy đặc tính bảo vệ của chiết xuất đối với độc tính Aβ. Đáng chú ý, việc điều trị bằng rutin
không làm chậm đáng kể sự khởi phát của tình trạng tê liệt, cho thấy các thành phần SJ có thể
nhắm vào các con đường riêng biệt không nhạy cảm với rutin. Apigenin có thể là một thành
phần của chiết xuất SJ. Thật vậy, các hoạt động dinh dưỡng thần kinh và chống amyloidogen
của nó cùng với việc giảm mức độ Aβ không hòa tan đã được chứng minh trước đây trên mô
hình chuột mắc bệnh Alzheimer [ 55 ]. Kích hoạt đường dẫn SKN-1 có thể góp phần vào hiệu
ứng được quan sát vì chỉnh hình của nó, Nrf2, kích hoạt trước đây chịu trách nhiệm thực hiện
bảo vệ thần kinh chống lại Aβ trong mô hình chuột nhưng không thể loại trừ sự đóng góp của
các con đường khác khỏi các thí nghiệm của chúng tôi [ 56 ].
Mô hình C. Elegans là một phương pháp hiệu quả về mặt chi phí để sàng lọc các hợp chất có
hoạt tính thần kinh bằng nhiều xét nghiệm sinh hóa. Do tính đơn giản của sinh vật mẫu nên
không thể đánh giá được tất cả các khía cạnh của phản ứng miễn dịch và viêm [ 57 ]. Do đó, cần
có các nghiên cứu bổ sung để khám phá cơ chế hoạt động phân tử cụ thể của chiết xuất SJ, xác
định các nguyên tắc hoạt động và kiểm tra tính hiệu quả cũng như độ an toàn của chúng trong
các mô hình phức tạp hơn, chẳng hạn như sinh vật có vú. Cần phải tách biệt các nguyên lý hoạt
động và phân tích chi tiết các con đường sinh lý mục tiêu. Hơn nữa, để xác nhận thêm về hoạt
động SKN-1 trong chiết xuất SJ, sự biểu hiện của các gen chống oxy hóa khác như gcs-1 , ở hạ
lưu SKN-1 có thể được đo lường trong các nghiên cứu trong tương lai. Ngoài ra, hoạt động của
chiết xuất SJ đối với sự biểu hiện của gst-4 sau khi tiếp xúc với điều kiện căng thẳng oxy hóa
nhẹ cũng có thể được thử nghiệm vì hoạt động chống oxy hóa của SJ có thể rõ rệt hơn sau khi
tiếp xúc với các tác nhân gây căng thẳng. Tuy nhiên, những phát hiện của chúng tôi xác định rõ
ràng chiết xuất SJ và các thành phần của nó là nguồn cung cấp các hợp chất bảo vệ thần kinh
mới đầy hứa hẹn. Ngoài ra, đây là nghiên cứu đầu tiên báo cáo rằng chiết xuất SJ cho thấy tiềm
năng lớn trong việc điều chỉnh cân bằng nội môi protein và làm giảm sự phát triển của các bệnh
liên quan đến tuổi tác như HD, PD và AD.
Kết luận
Nghiên cứu này xác nhận tác dụng trung gian của khả năng chống căng thẳng và bảo vệ thần
kinh bằng chiết xuất Styphnolobium japonicum . Việc sử dụng chiết xuất có thể giúp hướng tới
quá trình lão hóa lành mạnh và bảo vệ khỏi các rối loạn liên quan đến tuổi tác. Hiệu quả kháng
stress oxy hóa quan sát được, biểu hiện bằng việc tăng tỷ lệ sống sót ở giun đột biến daf-16
được xử lý bằng juglone, có thể đạt được thông qua việc thúc đẩy quá trình định vị hạt nhân của
yếu tố phiên mã SKN-1/Nrf2. Việc điều chỉnh biểu hiện của gen gst-4 xuôi dòng xác nhận vai
trò của con đường SKN-1 trong các tác dụng có lợi được quan sát thấy của chiết xuất SJ.
Thông tin bổ sung
Tệp bổ sung 1: Hình bổ sung S1. Hình ảnh huỳnh quang đại diện của giun Cl2166 C.
Elegans hiển thị biểu hiện gst-4 ::GFP. (519K, pdf)
Tệp bổ sung 2: Hình bổ sung S2. Hình ảnh huỳnh quang đại diện của giun AM141 C. Elegans
cho thấy biểu hiện polyQ40 :: YFP. (497K, pdf)
Sự nhìn nhận
Các tác giả xin cảm ơn ông Muhammad Anwar (muhammadanwar.com), Thạc sĩ Ngôn ngữ học,
Trợ lý Giảng viên, Đại học Coventry, đã biên tập bằng tiếng Anh.
Các từ viết tắt
TRO giác quan Amphid
Aβ Amyloid β
QUẢNG CÁO Bệnh Alzheimer

BHA Anisol hydroxyl đã butyl hóa
C. thanh lịch Caenorhabd viêm Elegans
Cu + hình ly
Cu 2+ đồng vị
CUPRAC Ion Cupric làm giảm khả năng chống oxy hóa
EGCG Epigallocatechin galat
E coli Escherichia coli
GST-4 Glutathione S-transferase-4
HD bệnh Huntington
PD bệnh Parkinson
PolyQ40 Polyglutamine
S. japonicum Styphnolobium japonicum
ROS Các loại oxy phản ứng
SOD-3 Superoxide dismutase-3
Tác giả đóng góp
MW, ST chịu trách nhiệm thực hiện dự án. ST, UB, HH, NS, HGB thực hiện công việc thử
nghiệm và phân tích dữ liệu. ST đã thiết kế và viết bản thảo. ST, HGB, MW sửa lại bản thảo.
Giám sát MW của dự án. Tất cả các tác giả đã sửa đổi và phê duyệt bản thảo.
Kinh phí
Tài trợ truy cập mở được cung cấp bởi Cơ quan Tài trợ Khoa học, Công nghệ & Đổi mới
(STDF) phối hợp với Ngân hàng Tri thức Ai Cập (EKB). Bài viết này dựa trên công trình được
hỗ trợ bởi Cơ quan tài trợ khoa học, công nghệ và đổi mới (STDF) trong ID dự án: 43260.
Sự sẵn có của dữ liệu và tài liệu
Dữ liệu và tài liệu sẽ được cung cấp cho các nhà nghiên cứu theo yêu cầu hợp lý. Liên hệ với
Tiến sĩ Sara Thabit: sara.thabit@guc.edu.eg.
Tuyên bố
Phê duyệt đạo đức và đồng ý tham gia
Việc thu hái và sử dụng thực vật tuân thủ các chính sách của IUCN và Công ước về buôn bán
các loài có nguy cơ tuyệt chủng. Tất cả các nghiên cứu đã được phê duyệt bởi ủy ban Đạo đức
của Đại học Đức ở Cairo. Không có loài thực vật có nguy cơ tuyệt chủng nào được sử dụng
trong nghiên cứu này.
Đồng ý xuất bản
Không áp dụng được.
Lợi ích cạnh tranh
Các tác giả tuyên bố không có lợi ích cạnh tranh.
Chú thích cuối trang
Ghi chú của nhà xuất bản
Springer Nature vẫn trung lập đối với các yêu cầu về quyền tài phán trong các bản đồ được xuất
bản và các tổ chức liên kết.
Người giới thiệu
1. Cơ sở dữ liệu nông lâm kết hợp: hướng dẫn tham khảo và lựa chọn cây phiên bản 4.0.
http://www.worldagroforestry.org/sites/treedbs/treedatabases . Đã truy cập năm 2009.
2. Zheng H, Dong Z, She J. Nghiên cứu hiện đại về y học cổ truyền Trung Quốc. Xue Yuan
Press Bắc Kinh Trung Quốc. 3: Xue Yuan Press Bắc Kinh, Trung Quốc; 1998. tr. 2057.
3. Uphof JCT. Từ điển thực vật kinh tế. New York: Stechert-Hafner, New York; 1959. [ Học giả
Google ]
4. Hu S. Thực vật có mạch: Pteridophytes và Speratophytes. Hồng Kông: Cây lương thực Trung
Quốc, Nhà xuất bản Đại học Trung Quốc; 2005. tr. 271–752.
5. Kunkel G. Cây dùng cho con người: Sách khoa học Koeltz; 1984.
6. Đọc BE. Các loại thực phẩm dành cho nạn đói được liệt kê trong Chiu Huang Pen Ts' ao, đưa
ra danh tính, giá trị dinh dưỡng và ghi chú khi chế biến chúng. Các loại thực phẩm dành cho nạn
đói được liệt kê trong Chiu Huang Pen Ts' ao, đưa ra danh tính, giá trị dinh dưỡng và ghi chú
khi chế biến chúng. 1977
7. Yoon HJ, Seo CR, Kim M, Kim YJ, Song NJ, Jang WS, và những người khác. Chiết xuất
dichloromethane của Sophora japonica L. kích thích sự biệt hóa nguyên bào xương trong tế bào
gốc trung mô. Chất dinh dưỡng Res. 2013;33(12):1053–62. 10.1016/j.nutres.2013.08.004 [
PubMed ]
8. Tang YP, Li YF, Hu J, Lou FC. Phân lập và xác định chất chống oxy hóa từ Sophora
japonica. J Châu Á Nat Prod Res. 2002; 4 (2):123–128. doi: 10.1080/10286020290027407. [
PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
9. Lihua W, Yufeng D, Yanli M. Nghiên cứu về chiết xuất và chức năng chống oxy hóa của
polysaccharides từ Sophora japonica. J Tây Bắc A & F (Nat Sci Ed) 2008; 36 (8):213–8. [ Học
giả Google ]
10. Kite GC, Veitch NC, Boalch ME, Lewis GP, Leon CJ, Simmonds MS. Flavonol
tetraglycoside từ quả của Styphnolobium japonicum (Leguminosae) và xác thực của Fructus
Sophorae và Flos Sophorae. Hóa thực vật. 2009; 70 (6):785–794. doi:
10.1016/j.phytochem.2009.04.003. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
11. La Casa C, Villegas I, De La Lastra CA, Motilva V, Calero MM. Bằng chứng về đặc tính
bảo vệ và chống oxy hóa của rutin, một flavone tự nhiên, chống lại các tổn thương dạ dày do
ethanol gây ra. J Ethnopharmacol. 2000; 71 (1–2):45–53. doi: 10.1016/S0378-8741(99)00174-
9. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
12. Kamalakkannan N, Prince P. Tác dụng hạ đường huyết và chống oxy hóa của rutin, một
flavonoid polyphenolic, ở chuột mắc bệnh tiểu đường do streptozotocin gây ra. Basic Clin
Pharmacol Toxicol. 2006; 98 (1):97–103. doi: 10.1111/j.1742-7843.2006.pto_241.x. [ PubMed
] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
13. Ihme N, Kiesewetter H, Jung Fa, Hoffmann K, Birk A, Müller A, et al. Bảo vệ phù chân từ
trà thảo mộc kiều mạch ở bệnh nhân suy tĩnh mạch mãn tính: một thử nghiệm lâm sàng đối
chứng giả dược, ngẫu nhiên, mù đôi, đơn trung tâm. Dược phẩm Eur J Clinic. 1996; 50 :443–7.
doi: 10.1007/s002280050138. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
14. Wanderka H. Prüfung des Phytotherapeutikums “Fagorutin” am künstlich erzeugten
Stauungsödem. Liệu pháp thực vật Z. 1981; 22 :225–33. [ Học giả Google ]
15. He X, Bai Y, Zhao Z, Wang X, Fang J, Huang L, et al. Sử dụng địa phương và truyền thống,
hóa thực vật và dược lý của Sophora japonica L.: đánh giá. J Ethnopharmacol. 2016; 187 : 160–
82. doi: 10.1016/j.jep.2016.04.014. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
16. Zhang L, Ravipati AS, Koyyalamudi SR, Jeong SC, Reddy N, Smith PT, và cộng sự. Hoạt
động chống oxy hóa và chống viêm của các cây thuốc chọn lọc có chứa hợp chất phenolic và
flavonoid. J Agric Thực phẩm Chem. 2011; 59 (23):12361–12367. doi: 10.1021/jf203146e. [
17. Wang Z, Sun J, Wang D, Xie Y, Wang S, Zhao W. Nghiên cứu dược lý về genistein tinh
khiết quy mô lớn từ Huaijiao (Sophora japonica–Leguminosae) về chống loãng xương. Thuốc
thực vật. 2006; 13 (9–10):718–723. doi: 10.1016/j.phymed.2005.09.005. [ PubMed ] [ CrossRef
] [ Google Scholar ]
18. Jung CH, Chu S, Ding GX, Kim JH, Hong MH, Shin YC, và cộng sự. Hoạt động hạ đường
huyết của chiết xuất thảo dược trên chuột mắc bệnh tiểu đường do streptozotocin gây ra. Công
nghệ sinh học Biosci, Hóa sinh. 2006; 70 (10):2556–2559. doi: 10.1271/bbb.60238. [ PubMed ]
[ CrossRef ] [ Google Scholar ]
19. Lào CJ, Lin JG, Kuo JS, Chao P-DL, Cheng CY, Tang NY, et al. Biểu hiện microglia,
apoptosis và interleukin-1β trong tác dụng của Sophora japonica L. đối với chứng nhồi máu não
do tái tưới máu do thiếu máu cục bộ ở chuột. Tôi là bác sĩ J Chin. 2005; 33 (03):425–38. doi:
10.1142/S0192415X0500303X. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
20. Wechalekar AD, Hawkins PN, Gillmore JD. Quan điểm trong điều trị bệnh amyloid AL. Br
J Haematol. 2008; 140 (4):365–377. doi: 10.1111/j.1365-2141.2007.06936.x. [ PubMed ] [
CrossRef ] [ Google Scholar ]
21. Li D, Mastaglia FL, Fletcher S, Wilton SD. Tiến bộ trong cơ chế bệnh sinh phân tử và
phương pháp điều trị bằng axit nucleic đối với bệnh Parkinson trong kỷ nguyên y học chính xác.
Med Res Rev. 2020; 40 (6):2650–2681. doi: 10.1002/med.21718. [ Bài viết miễn phí của PMC ]
[ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
22. Tabrizi SJ, Flower MD, Ross CA, Wild EJ. Bệnh Huntington: những hiểu biết mới về sinh
bệnh học phân tử và cơ hội điều trị. Nat Rev Neurol. 2020; 16 (10):529–546. doi:
10.1038/s41582-020-0389-4. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
23. Birch-Machin M, Bowman A. Căng thẳng oxy hóa và lão hóa. Bác sĩ Dermatol. 2016; 175 :
26–29. doi: 10.1111/bjd.14906. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
24. Birch-Machin M. Vai trò của ty thể trong quá trình lão hóa và gây ung thư. Lâm sàng Exp
Dermatol. 2006; 31 (4):548–552. doi: 10.1111/j.1365-2230.2006.02161.x. [ PubMed ] [
25. Di Pietro V, Lazzarino G, Amorini AM, Tavazzi B, D'Urso S, Longo S, et al. Biểu hiện
Neuroglobin và sự cân bằng oxy hóa/chống oxy hóa sau chấn thương sọ não được phân loại ở
chuột. Biol Med cấp tiến miễn phí. 2014; 69 :258–264. doi:
10.1016/j.freeradbiomed.2014.01.032. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
26. Roxo M, Wink M. Việc sử dụng tuyến trùng Caenorhabditis elegans để nghiên cứu các chất
chuyển hóa thứ cấp thực vật chống oxy hóa và tăng cường tuổi thọ. Tìm người đăng ký Nat mới.
2022; 6 :133–63. [ Học giả Google ]
27. Wink M. Hiểu biết hiện tại về các phương thức hoạt động của các chất hóa học thực vật có
hoạt tính sinh học đa thành phần: Tiềm năng về dược phẩm dinh dưỡng và thuốc chống vi trùng.
Annu Rev Food Sci Technol. 2022; 13 :337–359. doi: 10.1146/annurev-food-052720-100326. [
28. Thabit S, Handoussa H, Roxo M, Cestari de Azevedo B, SE El Sayed N, Wink M.

Styphnolobium japonicum (L.) Quả Schott làm tăng khả năng chống stress và phát huy đặc tính
chống oxy hóa ở Caenorhabditis elegans và mô hình chuột. Phân tử. 2019; 24 (14):2633. doi:
10.3390/phân tử24142633. [ Bài viết miễn phí của PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google
Scholar ]
29. Ma L, Zhao Y, Chen Y, Cheng B, Peng A, Huang K. Caenorhabditis Elegans như một hệ
thống kiểu mẫu để xác định mục tiêu và sàng lọc thuốc chống lại các bệnh thoái hóa thần kinh.
Dược phẩm Eur J. 2018; 819 : 169–180. doi: 10.1016/j.ejphar.2017.11.051. [ PubMed ] [
30. Thabit S, Handoussa H, Roxo M, El Sayed NS, de Azevedo BC, Wink M. Đánh giá hoạt
động chống oxy hóa và bảo vệ thần kinh của Cassia Fistula (L.) bằng mô hình Caenorhabditis
Elegans. ngang hàngJ. 2018; 6 :e5159. doi: 10.7717/peerj.5159. [ Bài viết miễn phí của PMC ] [
31. Ma X, Li J, Cui X, Li F, Wang Z. Bổ sung peptide từ bánh mè vào chế độ ăn uống giúp bảo
vệ Caenorhabditis elegans khỏi độc tính do polyglutamine gây ra. Thực phẩm chức năng J.
2019; 54 : 199–210. doi: 10.1016/j.jff.2019.01.002. [ CrossRef ] [ Học giả Google ]
32. Kahn NW, Rea SL, Moyle S, Kell A, Johnson TE. Rối loạn chức năng bảo vệ kích hoạt yếu
tố phiên mã SKN-1 và tạo ra phản ứng căng thẳng oxy hóa có chọn lọc ở Caenorhabditis
Elegans. Hóa sinh J. 2008; 409 (1):205–213. doi: 10.1042/BJ20070521. [ PubMed ] [ CrossRef
] [ Google Scholar ]
33. Drake J, Link CD, Butterfield DA. Căng thẳng oxy hóa xảy ra trước sự lắng đọng sợi cơ của
bệnh Alzheimer amyloid β-peptide (1–42) trong mô hình caenorhabditis elegans chuyển gen.
Lão hóa thần kinh. 2003; 24 (3):415–420. doi: 10.1016/S0197-4580(02)00225-7. [ PubMed ] [
34. Kikis EA, Gidalevitz T, Morimoto RI. Cân bằng nội môi protein trong các mô hình lão hóa
và bệnh về hình dạng liên quan đến tuổi tác. Chuyển hóa protein và cân bằng nội môi trong quá
trình lão hóa: Springer; 2010. tr. 138–59. [ Bài viết miễn phí của PMC ] [ PubMed ]
35. Perfeito R, Cunha-Oliveira T, Rego AC. In lại: xem xét lại căng thẳng oxy hóa và rối loạn
chức năng ty thể trong cơ chế bệnh sinh của bệnh Parkinson - tương tự như tác dụng của việc
lạm dụng thuốc amphetamine. Radic Biol Med miễn phí. 2013; 62 :186–201. doi:
10.1016/j.freeradbiomed.2012.08.569. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
36. Mancuso M, Orsucci D, LoGerfo A, Calsolaro V, Siciliano G. Đặc điểm lâm sàng và cơ chế
bệnh sinh của bệnh Alzheimer: sự liên quan của ty thể và DNA ty thể. Bệnh sửa chữa DNA:
Springer; 2010. trang 34–44. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
37. Wink M. Ưu điểm tiến hóa và phương thức hoạt động phân tử của hỗn hợp nhiều thành phần
được sử dụng trong y học thực vật. Metab thuốc Curr. 2008; 9 (10):996–1009. doi:
10.2174/138920008786927794. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
38. Kamalakkannan N, Prince P. Rutin cải thiện tình trạng chống oxy hóa trong các mô chuột
mắc bệnh tiểu đường do streptozotocin gây ra. Hóa sinh tế bào Mol. 2006; 293 (1–2): 211. doi:
10.1007/s11010-006-9244-1. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
39. Wan QL, Fu X, Meng X, Luo Z, Dai W, Yang J, et al. Hypotaurine thúc đẩy tuổi thọ và khả
năng chịu đựng căng thẳng thông qua các yếu tố phản ứng căng thẳng DAF-16/FOXO và SKN-
1/NRF2 ở Caenorhabditis elegans. Chức năng thực phẩm. 2020; 11 (1):347–357. doi:
10.1039/C9FO02000D. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
40. Mukhopadhyay A, Oh SW, Tissenbaum HA. Con đường tẩy giun đến và đi từ
DAF-16/FOXO. Exp Gerontol. 2006; 41 (10):928–934. doi: 10.1016/j.exger.2006.05.020. [
41. Blackwell TK, Steinbaugh MJ, Hourihan JM, Ewald CY, Isik M. SKN-1/Nrf, phản ứng
căng thẳng và lão hóa ở Caenorhabditis elegans. Biol Med cấp tiến miễn phí. 2015; 88 : 290–
301. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2015.06.008. [ Bài viết miễn phí của PMC ] [ PubMed ] [
42. Inoue H, Hisamoto N, An JH, Oliveira RP, Nishida E, Blackwell TK, et al. Con đường
MAPK của C. Elegans p38 điều chỉnh quá trình định vị hạt nhân của yếu tố phiên mã SKN-1
trong phản ứng stress oxy hóa. Gen Dev. 2005; 19 (19):2278–83. doi: 10.1101/gad.1324805. [
Bài viết miễn phí của PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
43. Kampkötter A, Nkwonkam CG, Zurawski RF, Timpel C, Chovolou Y, Wätjen W, et al.
Nghiên cứu tác dụng bảo vệ của flavonoid quercetin và rutin đối với khả năng chống stress ở
sinh vật mẫu Caenorhabditis elegans. Độc học. 2007; 234 (1–2): 113–123. doi:
10.1016/j.tox.2007.02.006. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
44. Powolny AA, Singh SV, Melov S, Hubbard A, Fisher AL. Thành phần diallyl trisulfide của
tỏi làm tăng tuổi thọ của C. Elegans thông qua kích hoạt skn-1. Exp Gerontol. 2011; 46 (6):441–
52. doi: 10.1016/j.exger.2011.01.005. [ Bài viết miễn phí của PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [
Google Scholar ]
45. Havermann S, Humpf HU, Wätjen W. Baicalein điều chỉnh khả năng chống stress và tuổi
thọ ở C. Elegans thông qua SKN-1 chứ không phải DAF-16. Fitoterapia. 2016; 113 :123–7.
doi: 10.1016/j.fitote.2016.06.018. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
46. Kampkötter A, Pielarski T, Rohrig R, Timpel C, Chovolou Y, Wätjen W, et al. Chiết xuất
Ginkgo biloba EGb761 làm giảm độ nhạy cảm với stress, tích tụ ROS và biểu hiện catalase và
glutathione S-transferase 4 trong Caenorhabditis elegans. Dược phẩm Res. 2007; 55 (2):139–
147. doi: 10.1016/j.phrs.2006.11.006. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
47. Weber JJ, Sowa AS, Binder T, Hübener J. Từ con đường đến mục tiêu: tìm hiểu cơ chế đằng
sau bệnh polyglutamine. Biomed Res Int. 2014 doi: 10.1155/2014/701758. [ Bài viết miễn phí
của PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
48. Alexander AG, Marfil V, Li C. Sử dụng Caenorhabditis Elegans làm mô hình để nghiên cứu
bệnh Alzheimer và các bệnh thoái hóa thần kinh khác. Genet phía trước. 2014; 5 : 279. doi:
10.3389/fgene.2014.00279. [ Bài viết miễn phí của PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google
Scholar ]
49. Xiao L, Li H, Zhang J, Yang F, Huang A, Deng J, et al. Salidroside bảo vệ tế bào thần kinh
Caenorhabditis Elegans khỏi độc tính qua trung gian polyglutamine bằng cách giảm căng thẳng
oxy hóa. Phân tử. 2014; 19 (6):7757–7769. doi: 10.3390/phân tử19067757. [ Bài viết miễn phí
của PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
50. Jenner P. Căng thẳng oxy hóa trong bệnh Parkinson. Ann Neurol. 2003; 53 (S3):S26–S38.
doi: 10.1002/ana.10483. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
51. Xiong W, Garfinkel AEM, Li Y, Benowitz LI, Cepko CL. NRF2 thúc đẩy sự tồn tại của tế
bào thần kinh trong quá trình thoái hóa thần kinh và tổn thương thần kinh cấp tính. Điều tra lâm
sàng J. 2015; 125 (4):1433–1445. doi: 10.1172/JCI79735. [ Bài viết miễn phí của PMC ] [
52. Trojanowski JQ, bệnh Virginia M. Parkinson và các bệnh lý α-Synucleinopathies liên quan
là bệnh amyloidoses ở não. Ann NY Acad Sci. 2003; 991 : 107–110. doi: 10.1111/j.1749-
6632.2003.tb07468.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
53. Ono K, Yamada M. Các hợp chất chống oxy hóa có tác dụng chống tạo sợi và làm mất ổn
định sợi fibril mạnh mẽ đối với các sợi fibril α-synuclein trong ống nghiệm. J Neurochem. 2006;
97 (1):105–115. doi: 10.1111/j.1471-4159.2006.03707.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google
Scholar ]
54. Govindan S, Amirthalingam M, Duraisamy K, Govindhan T, Sundararaj N, Palanisamy S.

Hormesis do phytochemicals gây ra bảo vệ Caenorhabditis Elegans chống lại sự tổng hợp và
căng thẳng của protein α-synuclein thông qua việc điều chỉnh các con đường truyền tín hiệu
HSF-1 và SKN-1/Nrf2. Dược sĩ sinh học. 2018; 102 : 812–822. doi:
10.1016/j.biopha.2018.03.128. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
55. Zhao L, Wang JL, Liu R, Li XX, Li JF, Zhang L. Tác dụng bảo vệ thần kinh, chống
amyloidogen và gây suy nhược thần kinh của apigenin trong mô hình chuột mắc bệnh
Alzheimer. Phân tử. 2013; 18 (8):9949–9965. doi: 10.3390/phân tử18089949. [ Bài viết miễn
phí của PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
56. Kanninen K, Malm TM, Jyrkkänen HK, Goldsteins G, Keksa-Goldsteine V, Tanila H, et al.
Yếu tố hạt nhân erythroid 2 liên quan đến yếu tố 2 bảo vệ chống lại beta amyloid. Khoa học
thần kinh tế bào Mol. 2008; 39 (3):302–313. doi: 10.1016/j.mcn.2008.07.010. [ PubMed ] [
57. Gaud A, Simon JM, Witzel T, Carre-Pierrat M, Wermuth CG, Ségalat L. Prednisone làm
giảm sự thoái hóa cơ ở bệnh Caenorhabditis elegans thiếu hụt dystrophin. Rối loạn thần kinh cơ.
2004; 14 (6):365–370. doi: 10.1016/j.nmd.2004.02.011. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google
Scholar ]
Các bài viết từ Y học và Trị liệu Bổ sung BMC được cung cấp tại đây với sự giúp đỡ của BMC

(Cây Hòe Hoa) A FRUIT EXTRACT OF STYPHNOLOBIUM JAPONICUM (L.) COUNTERACTS OXIDATIVE STRESS AND MEDIATES NEUROPROTECTION IN CAENORHABDITIS ELEGANS

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

(Cây Hòe Hoa) A FRUIT EXTRACT OF STYPHNOLOBIUM JAPONICUM (L.) COUNTERACTS OXIDATIVE STRESS AND MEDIATES NEUROPROTECTION IN CAENORHABDITIS ELEGANS

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

A FRUIT EXTRACT OF STYPHNOLOBIUM JAPONICUM (L.

Despite its widespread uses in Chinese and European medicine, Styphnolobium

The extract, which contains substantial amounts of phenolic phytochemicals, showed an

The online version contains supplementary material available at 10.1186/s12906-023-04149-8.

Keywords: Caenorhabditis elegans, SKN-1/Nrf2, Oxidative stress,

Styphnolobium japonicum L. (SJ, Chinese scholar tree) (Fabaceae), previously known

Numerous studies describe beneficial biological effects of different SJ extracts, such as

Strains of Caenorhabditis elegans

Survival assay using juglone

( −)- Epigallocatechin gallate (EGCG) (≥ 95%, Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany) at 50

Determining localization of the transcription factor DAF-16

Determining localization of the transcription factor SKN-1

Quantitative estimation of polyQ40 clusters

Estimation of α-synuclein accumulation

To characterize the neuroprotective properties of SJ extract more closely, quantification of

Aging is a normal physiological process that is accompanied by problems in protein

We have previously reported the phytochemical characterization of SJ hydroalcoholic extract

The transcription factor SKN-1 of C. elegans is orthologous to mammalian Nrf2. This

The formation of α-synuclein aggregates is considered an important factor in the pathogenesis

Additional file 1: Supplementary Figure S1. Representative fluorescence images of

Additional file 2: Supplementary Figure S2. Representative fluorescence images of

The authors are grateful to Mr. Muhammad Anwar (muhammadanwar.com), MA in Linguistics,

ASH Amphid sensilla

BHA Butylated hydroxyl anisole

C. elegans Caenorhabditis elegans

CUPRAC Cupric ion reducing antioxidant capacity

EGCG Epigallocatechin gallate

E. coli Escherichia coli

GST-4 Glutathione S-transferase-4

S. japonicum Styphnolobium japonicum

ROS Reactive oxygen species

Availability of data and materials

Ethics approval and consent to participate

The authors declare no competing interests.

1. Agroforestree Database: a tree reference and selection guide version

5. Kunkel G. Plants for human consumption: Koeltz Scientific Books; 1984.

9. Lihua W, Yufeng D, Yanli M. Studies on extraction and antioxidant function of

12. Kamalakkannan N, Prince P. Antihyperglycaemic and antioxidant effect of rutin, a

14. Wanderka H. Prüfung des Phytotherapeutikums “Fagorutin” am künstlich erzeugten

20. Wechalekar AD, Hawkins PN, Gillmore JD. Perspectives in treatment of AL

23. Birch-Machin M, Bowman A. Oxidative stress and ageing. Br J Dermatol. 2016;175:26–29.

27. Wink M. Current understanding of modes of action of multicomponent bioactive

28. Thabit S, Handoussa H, Roxo M, Cestari de Azevedo B, SE El Sayed N, Wink M.

29. Ma L, Zhao Y, Chen Y, Cheng B, Peng A, Huang K. Caenorhabditis elegans as a model

36. Mancuso M, Orsucci D, LoGerfo A, Calsolaro V, Siciliano G. Clinical features and

37. Wink M. Evolutionary advantage and molecular modes of action of multi-component

38. Kamalakkannan N, Prince P. Rutin improves the antioxidant status in streptozotocin-

40. Mukhopadhyay A, Oh SW, Tissenbaum HA. Worming pathways to and from

48. Alexander AG, Marfil V, Li C. Use of Caenorhabditis elegans as a model to study

50. Jenner P. Oxidative stress in Parkinson's disease. Ann Neurol. 2003;53(S3):S26–S38.

54. Govindan S, Amirthalingam M, Duraisamy K, Govindhan T, Sundararaj N, Palanisamy S.

CHIẾT XUẤT TRÁI CÂY STYPHNOLOBIUM JAPONICUM (CÂY HÒE

Thông tin bổ sung

Khai thác thực vật

Xét nghiệm CUPRAC

Các chủng Caenorhabditis elegans

Xét nghiệm sinh tồn bằng cách sử dụng juglone

( -)- Epigallocatechin gallate (EGCG) ( ≥ 95%, Sigma-Aldrich, Darmstadt, Đức) ở nồng độ 50

Xác định vị trí của yếu tố phiên mã DAF-16

Xác định nội địa hóa yếu tố phiên mã SKN-1

Ước tính định lượng của cụm polyQ40

Xét nghiệm hóa ứng động

Kiểm tra liệt