Caio Felipe Silva Gomes - Medicina T29 - Controle da expressdo génica em Eucariotos. Livros: Fundamentos de Genética, Snustad; Genética Um Enfoque Conceitual, Pierce. Diferengas entre procariotos ~> Amaioria dos genes tem seus préprios promotores. —> Aestrutura da cromatina afeta a expresso génica. © — Se os genes estiverem empacotados nao sera possivel fazer a expressdo génica. Cromatina condensada nao tem expressdo de genes. a "s 4 « ~>Amembrana nuclear separa a LLM fy y A / transcrigdo e a tradugao no tempo e no ie Ve NINE espago. Hen -> Cromossomos com maior grau de —— s ___ condensacao forma duas cromatinas. icone) in @® * Cada nucleossomo é um octamero mem oo omg san 2% _°% de histonas (H2a, H2b, H3 e HA), st Jide , “we formando uma bola pelo qual o DNA se enovela. (H1 é externa ao nucleossomo, WAIN Upton — estabiliza a bola) Nucleossomos Mudangas na estrutura da cromatina -> Trés processos afetam a regulagao génica c= te Pee ee —| of alterando a estrutura da cromatina: ein * Remodelagem da cromatina noes | Compiexo de SS atods oe do femedetagem * — Modificagdo quimica das histonas. {ator de transcriio. ce {a cromatina © Metilacdo do DNA eS ZS @G->-0= ES Remodelagem da cromatina Sto de nao ao : —> Um complexo de remodelagem da cromatina wranserigo wanscriedo "empurra” o nucleossomo pra frente desenrolando e expondo 0 sitio de ligacao do fator de transcri¢ao, permitindo que a RNA polimerase e os fatores se liguem ao DNA e iniciem a transcrigao. eS. GO 0 2G. altaModificagao quimica das histonas ~> As histonas possuem caudas que prendem o DNA nelas mesmas ~> As modificagdes quimicas sao: — Metilagao das histonas (diferente da metilagao do DNA que sera explicado depois); ¢ — Acetilagdo das histonas; ¢ — Ubiquitinagao das histonas. Metilagao das histonas ~> Adic&o/remogao de grupos metila (CH3). ~> Metiltransferases adicionam o grupo CH3 (SET, Dot1) e demetilases removem CH3 (LSD1). ~> Adig&o de grupos metila as caudas das proteinas histona produzem a ativagdo ou a repress&o da transcrigdo, dependendo de quais aminoacidos na cauda da histona sao. metilados. ~> Adicdo de metila nos residuos de aminoacido Lisina da posigao 4, 36 e 79 da histona H3 indica a expresso génica. (H3K4, H3K36 e H3K79). ~> H3 nos residuos de lisina nas posigdes 9 e 27 (H3K9 e H3K27) e no residuo de lisina H4 na posigao 20 (H4K20), diminuem a expressao génica. ~> H3 nos residuos de argenina (H3R2, H3R8, H3R17, H3R26) e H4 (H4R3). Acetilagao das histonas ~> Adig&o de grupos acetila (CH3CO) em H3 e H4. ~> Acetiltransferase e desacetilases sdo as enzimas. —> Acetilagao das histonas estimulam a transcrico. « — Acetilagao faz a cauda das histonas liberarem 0 DNA. ~> A adigo de um nico grupo acetila a lisina 16 na cauda da histona H4 impede a formagao da fibra de cromatina de 30 nm, fazendo com que a cromatina esteja em uma configuragao aberta e disponivel para “—“ transcrigdo. Ubiquitinagao das histonas —> Ligago da ubiquitina - amplamente distribuida na célula ~> Ubiquitinagao pode acontecer em H1, H2A, H2B e H3. ~> H2A monoubiquitinada (uH2A): Silencia genes envolvidos no desenvolvimento * _ Inativagao do cromossomo X ¢ Progresso do ciclo celular e nas etapas de iniciagao, alongamento e transcrigéoMetilagao do DNA ~> Metilagdo de bases de citosina ¢ Uma citosina é transformada em 5-Metilcitosina ~> A metilagao do DNA é mais comum nas bases citosina adjacentes aos nucleotidios guanina (CpG, em que p representa 0 grupo fosfato no esqueleto do DNA). ~> As regides do DNA com muitas sequéncias CpG sao chamadas de ilhas CpG e sao comumente encontradas proximo dos sitios de inicio de transcrigao. ¢ Enquanto os genes nao estado sendo transcritos, essas ilhas CpG estao metiladas, mas os grupos metila sfo removidos antes do inicio da transcrigao. ¢ Ametilagao CpG também esta associada a repressao génica a longo prazo, como. no cromossomo X inativado dos mamiferos fémeas. e — Existe uma associagao entre a metilagao do DNA e a desacetilagao das histonas, ambas reprimindo a transcrigao. ¢ Ametilagao atrai as desacetilases, que removem os grupos acetila a partir das caudas de histona, estabilizando a estrutura do nucleossomo e reprimindo a transcrigao. A desmetilagao do DNA possibilita que as acetiltransferases adicionem grupos acetila, rompendo a estrutura do nucleossomo e promovendo a transcrigao ~—> N&o pode ser considerado mutag4o pois nao existe mudanga de nucleotideo. ~> Como a metilagao do DNA suprime a expresso génica? © — Ogrupo metil da 5-metilcitosina se localiza no sulco maior do DNA. — Inibe a ligagao de fatores de transcricdo e outras proteinas ¢ — Atrai desacetilases que removem grupos acetila das caudas das histonas. (Como citado anteriormente, a acetilacao estimula a transcrigao, entdo se vocé desacetila, contribui para o silenciamento génico). HL xu wANcu LAM, Gowpe e re = A of 3'-GC-s' hi i > Gitosina ©) 5.Meiitosina A regulagao do inicio da transcrigao: ativadores Sto de gato do ativador ona _ orto eo Leon ome, ~> Para que acontega a transcrigao, além da oe RNA polimerase sao necessarios fatores de SOT ‘anno transcrig&o para formar o aparto basal de coninaenewie transcrigéo ~> A proteina ativadora pode-se ligar no promotor regulador (estimula a transcrigdo), ou pode-se ligar no acentuador. ma © Oacentuador pode estar longe do Becca promotor, mas uma vez que a proteina se == liga no acentuador, ela vai interagir com a —* aparato basal estimulando a transcrigdo. Protein ativadora aa tanscrgao Na \ Protein stivadora Fatores de ie transcrigao ‘ taser ‘Aparato basal de transcrgioA ser aus, sGa90 | cals need ques GAL Se sen ~> A proteina GAL4: ativadora: se liga na regido acentuadora (UASc), porém ela nao interage com 0 aparato basal, pois é bloqueada pela proteina GAL80 (pode ser considerada uma repressora). ¢ — Agalactose quando chega no meio, ativa = a proteina GAL3, que se liga a GAL80 e muda sua conformagao, permitindo dessa forma que a GAL4 interaja com o aparato basal de transcrigao, IBA GAA 2001 pose tera e — estimulando a transcrigdo (para a Sealer caso cals BDOpedena conc degradagao da galactose) ot oie A regulagao do inicio da transcrigao: repressores —> Inibem a transcrigao; ~> Se ligam no promotor regulatério ou silenciadores (mesma coisa que um acentuador, porém como reprime é silenciador). ~>Diferente dos repressores nas bactérias, a maioria dos repressores eucaridticos nao bloqueia diretamente a RNA polimerase. ¢ —Competem com os ativadores por sitios de ligagao no DNA * — Seliga proximo aos ativadores inibindo seu contato com 0 aparato basal Interfere diretamente na montagem do aparato basal de transcrigdo. Acentuadores e Insuladores ~> Acentuadores afetam a transcricdo em promotores (mesmo se distantes); ~> Proteinas reguladoras se ligam ao acentuador e fazem com que o DNA entre o acentuador e o promotor se afrouxe, aproximando o promotor e o acentuador, e entdo as proteinas reguladoras da transcrigo so capazes de interagir diretamente com 0 aparato basal de transcrigao no promotor central. fatrarscriae ovale R cance —> Os insuladores so sequéncias de DNA que bloqueiam ou isolam o efeito dos acentuadores. (nao é um silenciador, pois nenhuma proteina repressora se liga) © Oque ocorre é que uma proteina insuladora se liga na regido insuladora e impede que um acentuador estimule um promotor. Wo wet pode esi was | ho cert pce esr 3 wansaig> dogeneA matics chetosoteogene Be | Protelna | do gene mse seu eto soba gen Ae bioguedo plo isd igadora do | boniesdo ao ise ireuador ma mene, ta mV - transiRegulagao génica coordenada ~> Varios genes eucaridticos podem ser ativados pelo mesmo estimulo, isso é necessario para ativar todos os genes necessarios em uma mesma via metabdlica por exemplo. ~> Sequéncias regulatorias em comum, em seus promotores ou acentuadores, para os diferentes genes, nome disso é lementos de resposta (sequéncia de consenso). ~> Um unico gene eucaridtico pode ser regulado por varios elementos de resposta diferentes (transcrigdo de um gene pode ser ativada por diferentes estimulos). * Um nico elemento de resposta pode ativar varios genes ao mesmo tempo, e da mesma forma, um gene pode ter varios elementos de resposta. ~> A presenca do mesmo elemento de resposta em diferentes genes permite que um Unico estimulo ative varios genes e um mesmo gene pode ser ativado por diferentes estimulos. ‘Acentuador Acentuador RE 2 oes a Proteina ativadora para MRE Protea API ativadora parame | Proteina receptora de esteroide [Varias proteinas podem se ligar a elementos de | ‘esposta upstream para estimularatransctigao. Figura 17:9 Elementos multipios de resposta (MRES) s80 encontrados ‘aparato basal de transcrigdo so ig prox & TATA box. Em resposta 20s TATA Thicio da transcricao RNA polimerase ee eo: Fatores de transcrigio ‘Aparato basal de transcrigio Regulagao génica por splicing alternativo Sitos de recomposicio ateratva 3 PD PemaNA ro 5am a > es teens, a pitas {com aco sachs, tcompoaao 3 sade ostio Sopra twat. Se econposeto " J 3 socom, at protina iron fm tomoinon co maa : BB restora ecto un ‘donde para prematia ro mA, ao foci AE QD rote a yetuns pes | Tratucto itera [taste Fendtipo _Fenstipo domacho da ftmen eH ~> A recomposigao (splicing) alternativa possibilita que um pré-mRNA seja unido de varias maneiras, gerando diferentes proteinas em diferentes tecidos ou em distintos periodos do desenvolvimento. Muitos genes eucaridticos sofrem a recomposigao alternativa, e a regulagdo da recomposigao é um meio importante do controle da express&o génica nas células eucaridticas. ~—> Os genes eucariéticos podem ser regulados por controle do processamento do mRNA. A selegao de sitios de recomposigao alternativa leva a produgao de diferentes proteinas.Regulagao génica por degradagao do RNA ~> A quantidade sintetizada de uma proteina depende da quantidade de mRNA disponivel para tradugao. ¢ — Aquantidade de mRNA disponivel, por outro lado, depende tanto da taxa de sintese de mRNA quanto da taxa de degradagado do mRNA. ¢ Os mRNAs eucaridticos sao mais estaveis que os MRNAs bacterianos, que tipicamente duram apenas alguns minutos antes de serem degradados. Contudo, existe uma grande variagao na estabilidade do mRNA eucaridtico: alguns mRNAS duram apenas alguns minutos; outros duram horas, dias ou até meses. Essas variagdes podem produzir grandes diferengas na quantidade de proteina sintetizada. ~> O RNA celular é degradado por ribonucleases. ~> Parte da degradagdo do RNA ocorre em complexos especializados chamados corpusculos P. Entretanto, os corptisculos P podem armazenar temporariamente as moléculas de mRNA, que mais tarde podem ser liberadas e traduzidas. Assim, os corpusculos P ajudam a controlar a expressao dos genes ao regular quais moléculas de RNA s&o degradadas e quais séo sequestradas para serem liberadas posteriormente. A_ deqradagao do RNA facilitada pelos pequenos RNAs interferentes (siRNAs) também ocorre nos corpusculos P. Regulagao génica por pequenos RNAs ~> microRNAs (miRNAs) © De 20 a 30 nucleotideos, que séo transcritos e processados por duas enzimas: Drosha e Dicer. — Interage com uma classe de proteinas ‘Ago (Argonauta) atuando como reguladores pés- transcricionais ¢ Esse complexo de miRNA com Ago atua no mRNA alvo (outro RNA que foi transcrito e que vocé quer inibir) inibindo a sua tradugao. ~> RNAs de interferéncia curtos (siRNAs) * — Semelhantes aos miRNAs, se associam com a Ago. is ates ssn oes» Srominso orem partir de RNAs de fita dupla (dsRNA) longos. Regulagao génica pelo nivel de ferro ~> Tradugao da ferritina (armazena ferro) e do receptor de transferrina (transporte do ferro). * Ambos os genes (da ferritina e da transferrina) possuem elementos de resposta ao ferro (IRE). * OsIREs sao reconhecidos pela proteina reguladora de ferro (IRP)Deficiéncia de ferro ‘Abundancia de ferro IRP inativa mana e IRPs- VY 7 Deficiéncia de ferro ‘Abundancia de ferro ines IRP inativa ae A eee — SimaNA ’ oY x ote ~> Em deficiéncia de ferro, a proteina IRP se liga ao elemento de resposta do ferro (IRE) do mRNA do receptor da transferrina e estabiliza esse MRNA contra a degracao. ~> Em reposta a deficiéncia de ferro, IRP se liga a IRE bloqueando a tradugao do mRNA, reduzindo a sintese de ferritina., ~—> Em abundancia de ferro a IRP esta inativa, para que ocorre a tradugao do MRNA, produgao da ferritina armazenamento do ferro abundante.