SPEKTROSKOPI

ULTRAVIOLET & VISIBEL

 Apakah Radiasi UV/Vis ?
Medan listrik
y

Medan Magnet
x
z

Arah rambat

Diagram was taken from : Douglas A. Skoog and James J. Leary, Principles of
Instrumental Analysis, 4th ed., Saunders College Publishing, 1992, page 61.
SPEKTRUM
ELEKTROMAGNETIK
Panjang 200 400 800 3200 (nm)
Gelombang

g Ray X-Ray UV Visible Infrared Microwave Radio

Nuclear
Vacuum Vibrational Magnetic
Ultraviolet Infrared resonance

Towards low wavelength, high energy radiation

Sifat Gelombang dari Cahaya

l = Panjang gelombang(nm / cycle, cm / cycle)

n = frekuensi (cycle / second)
c = kec. cahaya (3.0 * 1010 cm / sec)
One cycle l
1.0

0.5

0.0
nl = c
-0.5

-1.0

0 2 4 6 8 10
Sifat materi dari Cahaya

Rumus Planck’s
E = hv
h = Konstanta
s Planck' (6.63 x 1 0 -34 Joule / sec)
n = Frekuensi

n = 1/ l
n = Bilangan gelombang (cm )
-1

l = Panjang gelombang
Sifat Gelombang & Materi dari Cahaya

Energi, E = hc = hn
l

h = Konstanta Planck’s (erg sec)

c = Kec. Cahaya (cm/sec)
l = Pjg. Gelombang (cm)
n = Frekuensi(cycles/sec)
Bila Cahaya mengenai Molekul

 Energi rendah, menyebabkan

– TransisiVibrational
– Transisi Rotasional
 Energi tinggi, menyebabkan
– Transisi Elektronik
 TRANSISI ELEKTRONIK
Tingkat Energi

Kondisi eksitasi E1

Perbedaab Energi
DE e DE = E1 - E0 = hn
Radiasi

Kondisi Dasar E0
 ABSOBSI RADIASI
Energi
v2

v1
v0
E1
Transisi v2 Transition
rotational Elektronik
5
4
3 v1
8
2 Transisi Vibrasional
1
0 v0 E0
E = hn in which h is Planck’s constant (6.626 * 10-34 Joules
and n is the frequency of the radiation
APA YANG MENYEBABKAN
ABSORBSI PADA DAERAH UV/VIS?
 Beberapa ikatan tunggal
 Ikatan rangkap
 Ikatan rangkap terkonyugasi
 Beberapa logam dan senyawa
anorganik
 N, O, S, halogen
 STRUKTUR DAN ENERGI
Tingkat energi 8
Orbital p *
Unoccupied
Orbital s * level
Non-bonding Orbital 8
Orbital s Occupied
Orbital p level

n p * Transisi : Senyawa karbonil

n s * Transisi : Senyawa O, N, S dan halogen
p p * Transisi : Alkenes, carbonyl and senyawa azo,
alkynes
 ABSORPSI DARI GUGUS
KROMOFOR
Class Transisi lmax (nm) Class Transisi lmax (nm)

R - OH n  s* 180 R - NO2 n  p* 271

R-O-R n  s* 180 R - CHO p  p* 190
R - NH2 n  s* 190 n  p* 290
R - SH n  s* 210
R2C = CR2 p  p* 175 R2CO p  p* 180
R-C C-R p  p* 170 n  p* 280
R-C N n  s* 160 RCOOH n  p* 205
RCOOR’  p* 205
R-N=N-R n  s* 340 n
RCONH2 n  p* 210
ABSORPSI DARI GUGUS
KROMOFOR
Chromophore Example Solvent l max Type of
(nm) transition

Alkene C6H 13CH=CH 2 n-Heptane 177 p  p*

Alkyne C5H 11C .C-CH 3 n-Heptane 178 p  p*

196 
225 
O n-Heptane 186 n  s*
|| 280 n  p*
CH 3CCH 3
O n-Heptane 180 n  s*
|| 293 n  p*
CH 3CH
Carboxyl O Ethanol 204 n  p*
||
CH 3COH
ABSORPSI DARI GUGUS
KROMOFOR
Chromophore Example Solvent l max (nm) Type of
transition

Amido O Water 214 n  p*

||
CH3CNH2

Azo CH3N=NCH3 Ethanol 339 n  p*

Nitro CH3NO2 Isooctane 280 n  p*

Nitroso C4H9NO Ethyl ether 300 ----

665 n  p*

Nitrate C2H5ONO2 Dioxane 270 n  p*

 ABSORPSI DARI GUGUS
MULTI-KROMOFOR

Compound Type l max (nm)

CH3(CH2)2CH=CH2 Olefin 184

CH2=CH(CH2)2CH=CH2 Diolefin (unconjugated) 185

H2C-CHCH-CH2 Diolefin (conjugated) 217

H2C=CHCH=CHCH=CH2 Triolefin (conjugated) 250

ABSORBSI DARI GUGUS
MULTI-KROMOFOR
Compound Type l max (nm)

O Ketone 278
||
CH3(CH2)3CCH3

O Unsaturated ketone 324

|| (unconjugated)
CH2=CH(CH2)2CCH3

O   - Unsaturated 219
|| ketone (conjugated)
CH2-CHCCH3
 SOLVENT CUT-OFFS

Acetonitrile 190 nm n-Hexane 201 nm

Chloroform 240 Methanol 205

Cyclohexane 195 Isooctane 195

1,4-Dioxane 215 Water 190

95% Ethanol 205 Trimethyl 210

phosphate
STUKTUR MOLEKUL
COOMASSIE BRILLIANT BLUE
CH3 H3C

-
O3S CH2N C NCH2
C2H5 C2H5
SO3-

NH

OC2H5
SPEKTRUM COOMASSIE
BRILLIANT BLUE
 SPEKTRUM ANTHRACENE
C14H10
Absorbance

Wavelength (nm)
 PENGARUH SUBSTITUEN
e HIperkromik

Hipsokromik Batokromik
(blue shift) (red shift)

Hipokromik

BLUE RED

(nm) 100 200 300 400 500 600 700 800

Diagram was taken from : Donald L. Pavia et. al., Introduction to Spectroscopy,
Saunders Golden Sunburst Series, 1979, page 191
 PENGARUH KONYUGASI
Spektrum Dimetilpolienes CH3 (CH = CH)n CH3
Log e B
C
A n=5
n=4
n=3

200 300 380

Wavelength, nm
Diagram was taken from : Donald L. Pavia et. al., Introduction to Spectroscopy,
Saunders Golden Sunburst Series, 1979, page 192
KALIBRASI DAN HUKUM BEER
Kuvet yang berisi analit

Sinar Transmisi Sinar Datang

Ke I1 I0
Dari sumber
Detektor
Cahaya

Optical path length

I0
Transmittan T =
I1
TEORI LAMBERT-BEER
8
1
Absorban A = log = eCl
8T

dimana
T : Transmitan
e : Koeffisien Ekstinsi Molar
l : Optical Path length
C : Konsentrasi Analit
 ABSORBSI & KONSENTRASI
NOTE : DIASUMSIKAN DALAM KEADAAN IDEAL

Dari
Monokromator

T=50% T=50% T=50% Detektor Amplifier

% 100
100
75
50 50 T = I/ I0
25 50
0 12.5
LOG
A 0.903 CONVERTER
1.00
0.602
0.75
0.50 0.301
0.25
0 0 A = LOG I0/ I
HUKUM LAMBERT-BEER

HUKUM LAMBERT’S :

T = I / I0 dimana I = Intensitas cahaya yang ditrasmisikan setelah

mengenai sampel
I0= Intensitas cahaya yang ditransmisikan oleh
sumber cahaya
HUKUM BEER’S :

A = log I0 / I = log 100/T = e cb

dimana A= absorban
e = absortivitas molar (dm3mol-1cm-1)
c =konsentrasi molar (mol dm-3)
b = path length (cm)
Cat :
e adalah fungsi panjang gelombang, Jadi Hukum Lambert-Beer berlaku
untuk satu panjang gelombang (cahaya monokromatis)
 HUKUM LAMBERT-BEER

T 

Konsentrasi Konsentrasi

Transmisi terhadap konsentrasi Absorban terhadap konsentrasi

I0 = 100%T
Setelah S1= 1x0,5 = 50%T..................................................A setelah S1 = 0,301
S2=50%x0,5 = 25%T..............................................................S2 = 0,602
S3=25%x0,5 = 12,5%T ..........................................................S3 = 0,903
 KETERBATASAN TEORI BEER

 Peningkatan konsentrasi analit

 Deviasi karena interaksi fisiko-kimia
 Stray light
 Fluoresensi oleh molekul lain
 Perubahan refraktif indeks analit
 Non-parallel light beam
 Keterbatasan Instrumen karena adanya noise
PENGARUH KONSENTRASI
ANALIT

 Deviasi dari linearitas terjadi pada konsentrasi

tinggi (> 0.01 M)
 Encerkan sampel hingga konsentrasi rendah

Pada konsentrasi
tinggi,lebih banyak
molekul dalam larutan
PENGARUH INTERAKSI KIMIA

 Deviasi dari linearitas dapat disebabkan

oleh
– Dissosiasi dari analit
– Assosiasi dari analit
– Reaksi kimia dengan solven yang menghasilkan
senyawa yang memiliki spektrum absorbsi yang
berbeda dengan analit
 PENGARUH STRAY LIGHT
I 0.0 %
2.0 Stray light = s * 100 0.2 %
Io
Absorban
1.0 %

5.0 %
1.0

0 2.5 5.0 7.5 10.0

Konsentrsi, M * 10 3

Diagram was taken from : Douglas A. Skoog and James J. Leary, Principles of
Instrumental Analysis, 4th ed., Saunders College Publishing, 1992, page 131.
 PENGARUH STRAY LIGHT
Nila1 Absorban dengan adanya stray light (A’)

1
A’ = log
T+r
dimana
T : Transmitan dengan adanya stray radiation
r : Stray radiation readout fraction to the ideal
reference signal

Adanya stray light menyebabkan deviasi negatif terhadap

linearity
 PENGARUH NILAI pH
Spektrum Absorbsi Fenol Merah pada beberapa pH
1.0 10
0.9
9
0.8
8
Absorban 0.7
0.6
6
0.5
6.5
0.4 6.8
0.3 7
8
0.2 9 6.8
0.1 6
0
325 400 475 550 625 700 (nm)
Diagram taken from: James D. Ingle Jr. and Stanley R. Crouch, Spectrochemical
Analysis, prentice-Hall International Editions, page 374
ABSORPTION AND
SCATTERING BY CELL WALL
Absorbtion and Absorption and
scattering by scattering by
cell wall solution

Radiation loses in a sample

REFLECTION AND SCATTERING
LOSSES
Kuvet berisi larutan
Scattering losses
in solution
Incident beam Emergent beam
Io I1
Reflection losses Reflection losses
at interfaces at interfaces

Optical path length

ANALISIS KUANTITATIF
1. Membandingkan nilai absorban standar dengan analit (sampel yang akan
dianalisis).

Cc = Ac X Cs
As

2. Membuat deret standar (kurva kalibrasi).

3. Menggunakan nilai ekstingsi spesifik.

A = a b c
 KURVA KALIBRASI
Abs = m*Concentration + K0
Absorbance

Slope m = e l

Analyte concentration (ppm)

KUANTITATIF 2 l

A1 = B1 + C1
A2 = B2 + C2
A1-A2 = (B1+C1) - (B2 + C2)
= B1 + C1 - B2 - C2.......................C1=C2
= B1 - B2
A = B1 - B2 ...................................B = kb
= k1b - k2b
= (k1-k2) b
 MULTI KOMPONEN
A=kC l1 ----- A 1 = K11C1 + K12C2 + K13C3
l2 ----- A 2 = K21C2 + K22C2 + K23C3
A =  n i=1 Ai =  n i=1 KiCi
l3 ----- A 3 = K31C1 + K32C2 + K33C3

C11 C12 C1m P11 P12 P1l P1o A11 A12 A1m
C21 ........... P21 ...........
Cnj Cnm = Pni Pn2 Pnl Pno
A21
Anj
...........
Anm

matrix nxm nx(l+1) (l+1)xm m > = n+1

n<=l <= m+1

n = jumlah matriks yang terdapat dalam campuran

m = jumlah standar yang digunakan
C = P A l = jumlah panjang gelombang yang digunakan dalam analisa
P = CAt (AAt) -1 C = matriks konsentrasi
X = matriks konsentrasi sampel
X = P S
S = matriks absorbsi sampel