TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP HCM

KHOA CÔNG NGHỆ HÓA HỌC

TIỂU LUẬN MÔN

PHÂN TÍCH SẮC KÝ

TÌM HIỂU VỀ CÁC LOẠI CỘT TRONG

PHÂN TÍCH SẮC KÝ LỎNG

GVHD: TRẦN NGUYỄN AN SA

SVTH : TRẦN VĂN LỘC MSSV: 10080021
BÙI TRÌNH THU HiỀN 10232531
PHAN VĂN ĐỨC 10045881
 Cấu tạo, vị trí, cơ chế tách của cột
I trên máy sắc ký

Phân loại cột và tác dụng mỗi loại

II cột.

Bảo vệ cột, rửa cột sau khi sử

III dụng.
1.CẤU TẠO CHUNG CỦA MỘT CỘT SẮC KÝ.

 Lớp vỏ bảo vệ làm bằng hợp chất không gỉ hoặc thủy tinh.

 Lớp vỏ phân tích:chứa pha tĩnh

 Pha tĩnh:là những hợp chất hữu cơ được gắn lên chất mang rắn
silica hoặc cấu thành từ silica .

 Chất nhồi cột: bao gồm một hỗn hợp nước hoặc dung dịch đệm với
một hoặc nhiều dung môi hữu cơ phân cực tan được trong nước.
2.VỊ TRÍ CỘT TRÊN MÁY
 Cột tách là nơi xảy ra Lò cột (column ovent)
quá trình tách. Gồm Dùng để điều khiển cột
cột tách và cột bảo vệ. tách
 1.Cột sắc ký hấp phụ.

 2.Cột sắc ký phân bố.

 3.một số loại cột chuyên dụng khác.

1.CỘT SẮC KÝ HẤP PHỤ.

 Pha tĩnh thường là chất rắn có khả năng hấp phụ.

 Thường là hợp chất vô cơ phân cực: SiO2,Al2O3.hay không phân cực

như than hoạt tính.

 Được dùng cho những hợp chất hữu cơ và chủ yếu tan trong dung môi

hữu cơ ít tan trong nước.

 Hấp phụ tốt những sản phẩm dầu mỏ,các axit béo và este của

chúng.các amin thơm và các hợp chất hữu cơ khác.

2.CỘT SẮC KÝ PHÂN BỐ:

1. Cột đảo pha.

2. Cột pha thường .

. A. CỘT PHA ĐẢO

-Có chiều dài khác nhau:10-25 cm.đường kính 2=5 mm

-Tính chất:pha tĩnh mang tính chất không phân cực

-Gồm có:cột RP C18 (ODS),cột C8(octyl), cột C4, cột phenyl,cộtTMS…

-nguyên tắc: nó được dùng để phân tích những hợp chất từ ít phân cực
đến phân cực trung bình
 -Được sử dụng trong phân tích các hợp chất trọng lượng phân tử
thấp như thuốc hóa dược, các hợp chất pháp y, amino acid,
carbohydrates, steroid, chất béo, các acid béo, các acid nucleic,
nucleotid...
*.cột đảo pha điển hình c18
 Cột C18 ( RP-18, ODS...) là loại cột có nền là silica, được biến tính
gắn vào mạnh hydrocacbon C18H37 -(CH2)17-CH3. Các "dây" C18
chĩa ra để "nắm bắt, lưu giữ" các cấu tử.
 C18 là một cột không phân cực điển hình.

 Có nhiều kích thước và chiều dài khác nhau Ví dụ:cột pha đảo
phenominex c18: 150-2mm.pha tĩnh 5 micromet. cột tách pha
đảo là Reprosil Pur C18-AQ và Reprosil. 80 ODS-2 (150mm x
4.6mm, 5µm)
các loai cột đảo pha c18:

 Cột đảo pha silicat: Sử dụng phân tích các hợp chất trọng lượng

phân tử thấp như thuốc hóa dược, amino acid, carbohydrates,

steroid, các acid béo..

 Cột TSKgel Silica: có kích thước lỗ đồng đều 10, 14, 15 hoặc 25

nm, ngoài được phủ một lớp monomer hoặc polymer là sự trùng

hợp của octadecyl, cyano, hoặc nhóm phenyl.

 cột đảo pha polymer:

Polymethacrylate-là được cấu trúc với các cỡ hạt khác nhau. Cho phép

phân tích nhiều hợp chất cơ bản, làm giảm hấp phụ thứ cấp, nâng cao

chất lượng phục hồi cho các peptide và protein do tương tác thứ cấp giảm.

Cột TSKgel RPC có thể được làm sạch và loại bỏ nội độc tố bằng cách sử

dụng Acid hoặc base mạnh.Cột TSKgel RPC sử dụng các loại nhựa không

xốp (NPR) hoặc với các loại nhựa xốp có kích thước khác nhau.
**các lọa cột pha đảo khác.
.

. Cột sắc ký pha đảo C8, kích thước cột L x ID : 250 x 4,6 mm, kích thước

hạt 5 mm.

 Cột đảo pha c4

 Cột đảo pha phenyl

 Cột đảo pha TMS.

 Hiện nay trên thị trường có rất nhiều dòng cột đảo pha khác nhau và

ngày càng tiên tiến và hiện con người.

C.CỘT PHA THƯỜNG

1. Cột silical trung tính

2. Cột silical trên nền mạch cacbon

3. Cột cyano
*.cột silical trung tính
**.cột trên nền mạch cacbonsilical

 -SI-CH2-CH2-CN

 SI-CH2-CH2-NH

 SI-CH2-CH2-CH2OCH(OH)-CH2(OH)
***.CỘT CYANO:

 Đa mục đích

 Khả năng tương thích với các dung dịch nước trong pha động cao.

 Ít kỵ nước để rửa giải nhanh chóng của các phân tử kỵ nước.

 Duy trì và phân tách các chất phân tích mạnh mẽ cơ bản, bao gồm cả
bậc bốn muối amoni.

 Đặc biệt ổn định và tuổi thọ cột, từ pH 2 pH 8.

 Hầu hết các hợp chất
hữu cơ có mạch carbon
dài (ít phân cực) Do đó, SKPĐ
được ứng dụng
nhiều và phổ biến
hơn SKPT.
Dung môi sử dụng trong
sắc ký pha đảo là các dung
môi phân cực, rẻ tiền
3.CÁC LOẠI CỘT CHUYÊN DỤNG CHO TỪNG
NHÓM CHẤT

 A.Cột sắc ký phân loại theo kích thước: sử dụng phân tách các hợp

chất hữu cơ cao phân tử: protein, polymer sinh học, các hợp chất hữu

cơ tan trong nước, tan trong dung môi…

b.Cột sắc ký trong phân tách protin: TSKgel SW-loại cột được cấu trúc

từ các hạt silica. Được gắn các nhóm Diol tương tác với các mẫu protein.
 C..Cột sắc ký ái lực :Kỹ thuật này hoạt động bằng cách cho phép các

protein có ái lực với các ion kim loại được giữ lại trong một cột có chứa

các ion kim loại cố định, chẳng hạn như coban, đồng, niken để thanh lọc

histidine có chứa protein hoặc peptide, sắt, kẽm hoặc gallium để thanh

lọc của phosphoryl hóa protein hoặc peptide.

 .
 D .Cột trao đổi ion :phân tách các hợp chất hữu cơ bằng phương pháp

trao đổi anion hoăc cation. Được sử dụng để phân tích các protein,

peptide, oligonucleotide DNA và RNA

 Cột trao đổi anion mạnh SAX (R4N+)

 Cột trao đổi anion yếu WCX (RCOO-)

 Cột trao đổi cation :

 Cột trao đổi cation mạnh SAX (R4N+)

 Cột trao đổi cation yếu WAX (DEAE- dimethyamion-etyth)

III.Bảo vệ cột, rửa cột sau khi sử dụng.
Nếu sử dụng chất ghép cặp là amine tứ cấp hoặc TBA cột cần rửa

ngay sau khi kết thúc phân tích. Và dung dịch rửa thường là muối

sodium perchlorate có ái lực rất mạnh đối với các hợp chất amine.
 TÀI LIỆU THAM KHẢO

 [1] . Các quá trình tách trong sắc kí lỏng của Ts. Nguyễn Bá Hoài

Anh_Trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên, 2000_65tr

 [2] . Đại cương về sắc ký lỏng của Ts . Nguyễn Bá Hoài Anh_ ĐH KHTN

TP. HCM_23tr

 [3] . Tổng quan về sắc ký lỏng . www.tailieu.vn

 [4] . Cột sắc ký hplc_trên thị trường. http://www.case.vn/vi-

VN/34/96/118/details.case
 
 Thanks for
listening!!!