ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI

Viện Công Nghệ Sinh Học

Báo cáo thực tập kỹ thuật
Cơ sở thực tập
Phòng thí nghiệm Di truyền phân tử, Bộ môn Kỹ thuật Di
truyền, Viện Di truyền Nông nghiệp

GVHD: PGS. TS. Khuất Hữu Thanh

TS. Đỗ Thị Thu Hà

HÀ NỘI - 2018
 Danh sách sinh viên thực tập nhóm SHPT
STT Mã SV Họ và tên Tên lớp
20150095 Nguyễn Hải Anh KTSH 2 – K60
1
2
3
4
5
6
7

1
 NỘI DUNG
• Mở đầu

• Nội dung thực tập

• Phương pháp nghiên cứu ứng dụng trong quá trình thực tập

• Kết quả thực tập

• Thảo luận và kiến nghị

2
 Mở đầu
1. Giới thiệu về Viện Di truyền Nông nghiệp
Địa chỉ: Km2 - Phạm Văn Đồng, Từ Liêm,
Hà Nội, Việt Nam

Nguồn: Nguồn:
http://www.agi.gov.vn/vi/lich-su-hinh-thanh-va-phat- https://www.google.com/maps/place/Agricultural+Ge
trien netics+Institute+(AGI)

Hình 1. Viện Di truyền Nông nghiệp

• Viện Di truyền Nông nghiệp có bề dày lịch sử trên 30 năm (1986 – Nay).
• Trong suốt quá trình hoạt động, Viện đã công bố nhiều thành tựu đáng kể trong công tác chọn tạo
giống.
• Viện là nơi đặt nền móng cho nền nông nghiệp công nghệ cao tại Việt Nam.
3
2. Sơ đồ tổ chức bộ máy Viện Di truyền Nông nghiệp

Ban lãnh đạo

Hội đồng tư vấn, hội đồng Bộ môn Kỹ thuật Di

khoa học truyền

Phòng tổ chức hành chính, phòng
tài chính kế toán, phòng khoa học
và HTQT
Phòng thí nghiệm trọng điểm quốc
gia, trung tâm thực nghiệm SHNN
công nghệ cao, trung tâm nghiên
cứu và phát triển nấm
Bộ môn bệnh học phân tử, Công
nghệ vi sinh, sinh học phân tử,
đột biến và ưu thế lai, phòng
GMO
Nguồn:
http://www.agi.gov.vn/vi/co-cau-to-chuc/75/co-cau-
to-chuc-vien-di-truyen-nong-nghiep
4
 NỘI DUNG THỰC TẬP
1. TÁCH CHIẾT DNA
2. ĐIỆN DI KIỂM TRA SẢN PHẨM DNA SAU TÁCH CHIẾT
3. TIẾN HÀNH PHẢN ỨNG PCR VỚI CẶP MỒI ĐẶC HIỆU ITS
4. ĐIỆN DI KIỂM TRA SẢN PHẨM PCR

5
 Phương pháp nghiên cứu ứng dụng trong quá trình thực tập

B1: 13 mẫu thực vật khác nhau được sử B2: điện di kiểm tra sản phẩm B3: Ảnh điện di được chụp bằng máy
dụng để tách chiết ADN (Keb-Llanes, 2002) DNA sau tách MultiDoc-It của hãng UVP

B5: Điện di sản

B4: chạy PCR 6
phẩm PCR
Các bước thực hiện tách chiết ADN tổng số:

Biến tính protein Loại bỏ protein và tạp chất

B1: Thu mẫu lá vào sáng B2: phá vỡ màng tế bào bằng B3: Ủ mẫu 20 ph ở 65 oC, 5 B4: Bổ sung 800 µl chloroform,
sớm, nghiền trong nitơ lỏng CTAB và SDS 10% ph đảo mẫu cho dịch trộn đều Ly tâm, thu dịch nổi trên bề mặt

Rửa tủa DNA

Làm khô DNA ở nhiệt độ
phòng
Hòa tan DNA trong nước cất
tiêm
Thu tủa ADN Bảo quản DNA
B5: Bổ sung isopropanol (1:1), B6: Bổ sung 800ml cồn 70%.
Ly tâm 12000 vòng/phút B7: Giữ ADN trong tủ lạnh
trộn đều, ủ lạnh trong 1 giờ, Ly
tâm thu tủa trong 15 phút. Loại dịch sâu (-20oC)

7
Phương pháp kiểm tra ADN (điện di trên gel agarose 1,0%):

B1: Chuẩn bị gel agarose. B2: Đun sôi dung dịch bằng lò vi B3: Chuẩn bị khay gel, cắm B4: Rút lược, đặt gel vào bể điện
1,0% 1 g agarose/100ml sóng tạo thành một dung dịch lược, rót hỗn hợp gel agarose di. Đổ 0,5X TBE ngập mặt gel
TAE đồng nhất EtBr vào khay gel khoảng 2mm

B5: Hút DNA trộn đều với 2µl

Ethidium bromide. Load giếng B6: Tiến hành điện di 300V B6: đặt gel vào máy soi UV và chụp ảnh.
8
 Các bước thực hiện chu trình của phản ứng PCR với các mồi ITS:

+ Biến tính: Ở chu kỳ đầu tiên biến tính mẫu ADN ở nhiệt độ 94oC trong 5 phút 55 giây.
+ Gắn mồi: thực hiện ở nhiệt độ 58oC trong 50 giây. Nhiệt độ gắn mồi - có thể thay đổi tùy theo từng cặp mồi ITS
cụ thể.
+ Kéo dài: thực hiện ở nhiệt độ 72oC trong 1 phút 5 giây.

Bảng 4. Thành phần các chất dùng cho mỗi phản

ứng PCR với mồi ITS
STT Thành phần Thể tích (l)
1 H2O cất khử trùng 4,9
2 Buffer 10X 1,2
3 dNTP (1mM) 0,2
4 Taq DNA polymeraza (5U) 0,5
Hình: Sơ đồ chu trình nhiệt của phản ứng PCR
5 Primer forward 5M 0,6
Thực hiện các bước trên với 35 chu kỳ sau đó ở chu kỳ
6 Primer Revert 5M 0,6
cuối cùng chạy thêm bước 72oC trong 7 phút sau đó bảo
7 DNA 2,0 quản ở 4 oC. 9
 Chú ý
Trước khi thực hiện phản ứng ta tiến hành pha loãng DNA ở 2 mức độ 5 lần và 10 lần bằng nước
cất tiêm
 Tiến hành điện di sản phẩm PCR trên gel agarose 1% tương tự

10
KẾT QUẢ ĐIỆN DI SẢN PHẨM DNA SAU TÁCH CHIẾT

11
KẾT QUẢ ĐIỆN DI SẢN PHẨM SAU PCR

12
EM XIN CHÂN THÀNH
CẢM ƠN.!.

13