Potensi Terapeutik Umbilical Cord

Mesenchymal Stem Cell-Conditioned

Medium Pada Hewan Coba Model
Penuaan Otot
Ronald Winardi Kartika
(202100140007)
Dosen Pembimbing: Dosen Pendamping: Dosen Pendamping 2:
Dr.dr. Veronika M.S, Dr. dr. Tena Djuartina, Prof .Dr.Drs. Kris H.TImotius
M.Biomed M.Biomed.

Dosen Penguji:
Dr.dr.Ignatio Rika, Sp.KO
 Bab I
LATAR BELAKANG
 Latar Belakang
• Comfort (1979), Proses penuaan : sebagai proses deteriorative,
penurunan viabilitas, dan peningkatan vulnerabilitas.
• Harman (1956) ,akumulasi kerusakan oksidatif pada sel dan jaringan
• 2 kategori besar teori :
(1) Penuaan terprogram (programmed theories of aging) :
Hayflick Phenomenon ( reprogramming), Teori Telomerase , Teori
Neuroendokrin, Teori Mutasi Somatik , Teori disdiferensiasi , Teori Imunologi
(2) Teori penuaan akibat kerusakan (error theories of aging):  
Teori Penuaan Mitokondria, Teori Pemisahan dan Keausan (Wear and Tear
Theory of Aging) , Teori Ikatan Silang (Cross-linking theory) , Error Catastrophe
Theory (akumulasi kesalahan sintesis protein , Teori Radikal Bebas

Goldman, R dan Klatz, R. 2007. Anti-Aging Revolution. Australasian Edition.

Theoris of aging
 Penuaan pada Otot Rangka
• Penuaan  atrofi otot.
• Kehilangan otot :
1. Penurunan tidak proporsional
sintesis protein otot
2.Peningkatan kerusakan protein.

• Efek penuaan pada jalur sinyal yang

terkait dengan sintesis protein dan
degradasi protein.

Merah: jalur katabolic ;

Biru: jalur anabolik.

Calvani R, Joseph AM, Adhihetty PJ, Miccheli A, Bossola M, Leeuwenburgh C, Bernabei R, Marzetti
E.Mitochondrial pathways in sarcopenia of aging and disuse muscle atrophy. Biol Chem. 2013; 394: 393-414
Penuaan Sel Otot
• Proses penuaan:
pengurangan massa otot
dikenal sebagai sarcopenia
atrofi otot terkait usia
penurunan fungsi dan
pengurangan massa otot
 Latar Belakang
• Selama proses penuaan, otot rangka disertai dengan pengurangan
massa otot, yang dikenal sebagai sarkopenia
• Sarkopenia : hilangnya massa & kekuatan otot  aging process.1
• Massa otot normal (60% dari massa tubuh)  Pegurangan masa
otot : dimulai pada usia di atas 30 tahun
 pengurangan massa otot 3-5% setiap 10 tahun.1
• ↑ Populasi sarcopenia : 2030 ( 36,2%) :prediksi 72,1 juta sarcopenia.
• Taiwan : 40,6% (20,1% untuk laki-laki dan 20,5% untuk perempuan).

J. Lexell, C.C. Taylor, M. Sjostrom, What is the cause of the ageing atrophy? Total number, size and proportion of different fiber
types studied in whole vastus lateralis muscle from 15- to 83-year-old men, J Neurol Sci, 1988; 84 (2) :275-294
 Latar Belakang
• Terapi Konvensional: Nutrisi, hormonal, Intervensi
 Belum maksimal , sulit dilakukan pasien immobilisasi lama
• Terapi Sel Punca : mahal , rejected cell, sulit pembuatan
 Terapi Sel Sekretom:
 Lebih murah
 Cell free
 Growth Factor tinggi,
 Anti-Inflamasi
 Proliferasi sel satelit  myogenesis
R.A. Fielding, B. Vellas, W.J. Evans, S. Bhasin, J.E. Morley, A.B. Newman, et al . Sarcopenia: an undiagnosed condition in older adults. Current
consensus definition: prevalence, etiology, and consequences. International working group on sarcopenia J Am Med Dir Assoc, 2011; 12 (4):249-
256
Potensi Terapeutik pada Sarcopenia
Diduga peran sekretome
Sarkopenia 1. meningkatkan peran sel satelit
1. Inflamasi Kronis 2. menurunkan stres oksidatif
2. Stres oksidasi Disfungsi Mitokondria dan disfungsi mitokondria
3. Sel satelit otot
 diferensiasi menjadi progenitor sel otot.
 menyatu dengan sel otot dewasa.
 akan teraktivasi pada cidera/kerusakan
otot

9
 Latar Belakang
• Belum diketahui patomekanisme dari sekretom pada terapi sarkopenia
• Belum diketahui efek sistemik dari sekretom :
 Inflamasi (CRP)
 Stres oksidatif (SOD)
 Protein katabolik otot rangka (Myostatin)
dan efek klinis
 Perubahan massa otot tungkai bawah

sehingga pada penelitian mencari potensi terapeutik sekretome pada hewan

coba model penuaan otot (sarkopenia).
Rumusan Masalah
Apakah sekretom mempunyai efek sistemik pada hewan coba
penuaan otot?

Pertanyaan Penelitian
Berdasarkan rumusan masalah disusun pertanyaan penelitian
sebagai berikut:
 Bagaimana pengaruh pemberian sekretom terhadap inflamasi
sistemik pada hewan coba model penuaan otot?
 Bagaimana pengaruh pemberian sekretom terhadap stress
oksidatif sistemik pada hewan coba model sarkopenia penuaan
otot?
 Bagaimana pengaruh pemberian sekretom terhadap protein
katabolic myostatin pada hewan coba model penuaan otot?
 Tujuan
Tujuan Khusus
Tujuan Umum 1. Mengetahui potensi terapeutik sekretom

Mengetahui potensi terhadap perubahan inflamasi sistemik

pada hewan coba model penuaan otot. 2.
terapeutik sekretomMengetahui potensi terapeutik sekretom
pada hewan coba terhadap perubahan stres oksidatif
sistemik pada hewan coba model
model penuaan penuaan otot.
otot 3. Mengetahui potensi terapeutik sekretom
terhadap perubahan protein katabolik
myostatin sistemik pada hewan coba
model penuaan otot.
Manfaat
 Menambah informasi terbaru dalam bidang akademik
 Menambah wawasan dan pengetahuan masyarakat
 Menjadi landasan baru untuk inovasi dan penelitian
berikutnya.
 Bab II
TINJAUAN PUSTAKA
 Penuaan Otot / Sarcopenia
A. Sarcopenia Primer ( Primary Sarcopenia):
– Aging
– Perubahan fisiologi, penurunan hormone, otot menurun, lemak bertambah
– Disfungsi mitochondria, celluler sennecent

B. Sarcopenia Sekunder ( Secondary Sarcopenia):

– Dissease related ( inflammatory, endocrine, keganasan, neurodegerative)
– Activity related ( tidak aktif, immobilisasi, zero grafity)
– Nutritional related ( intake diet yang tidak cukup, protein kurang , malabsorbsi,
– Anoreksia
– Iskemia
Marzetti E, Calvani R, Tosato M, Cesari M, Di Bari M, Cherubini A, et al. Sarcopenia:
an overview. Aging Clin Exp Res. 2017;29(1):11–7.

15
Faktor Risiko Sarkopenia

Diseases S, Hasni S, Diseases S. Pathogenesis and management of sarcopenia. Clin Geriatr Med.
2018;33(3):17–26.
16
Mekanisme Sarkopenia pada Aging Process
Mekanisme biomolekuler dapat menjelaskan proses hipertropi dan hiperplasia Otot:
(1) jalur anabolik mTOR (2) jalur katabolik myostatin – Smad dan
(3) jalur repair oleh Sel Satelit.

18
 Crosstalk mitochondrial dysfunction, cellular senescence
dan sarkopenia pada aged muscle

ROS: Reactive Oxygen Species, mtDNA:

mitochondrial DNA,
ATP: Adenosine Triphosphate,
SASP: Senescence-Associated Secretory Phenotype
Ferry E, Marzetti,Calvari R, Picca A,Cesari MArosio B,
Role of Age-Related Mitochondrial Dysfunction in Sarcopenia, Int. J. Mol. Sci. 2020, 21(15), 5236-51
 Inflamasi pada Sarkopenia
• Faktor inflamasi berperan tingkat keparahan dari sarkopenia.11

• Peningkatan kadar TNF-α, IL-6 dan CRP terlihat di dalam otot rangka
individu yang lebih tua.12

• Kehilangan masa otot  ↑ sitokin proinflamasi: tumor necrosis factor

alpha (TNF-α), Interleukin-6 (IL-6) dan C-Reactive Protein (CRP)
penurunan sinyal anabolik hormonal dan promosi sinyal katabolik

• Penanda inflamasi perubahan massa otot jumlah besar CRP↑.13

12.Wen-qing Xie, Miao Morley J. Sarcopenia in the elderly patient. Eur J Phys Rehabil Med. 2013;49(1):131–43
13. Bano, G., Trevisan, C., Carraro, S., Solmi, M., Luchini, C., Stubbs, B., Manzato, E., Sergi, G., Veronese, N., 2017. Inflammation and sarcopenia: a systematic
review and meta-analysis. Maturitas 2017; 96, 10–15
 Stres Oksidatif Pada Sarkopenia
• Kerusakan oksidatif komponen seluler mitokondria
 gangguan respirasi sel, produksi energi dan gangguan
biogenesis mitokondria
 memulai proses apoptosis pada mitokondria.11

• Disfungsi mitokondria pada proses sarkopenia  kelainan metabolic: ↑

resistensi insulin kelainan kuantitatif dan kualitatif pada otot rangka.
• Aktivasi autophagy  penurunan massa otot  jalur signaling
fosfatidilinsositol-3 kinase (PI3K), myostatin, proteasome dan autophagy-
lysosome. 12

11.Sakuma K, Aoi W, Yamaguchi A. Current understanding of sarcopenia: possible candidates modulating muscle mass. Pflugers Arch Eur J Physiol. 2014;467(2):213–29
12. Wen-qing Xie, Miao Morley J. Sarcopenia in the elderly patient. Eur J Phys Rehabil Med. 2013;49(1):131–43
Myostatin Meningkat pada Aging Process

• Studi cross-sectional awal pada pria dan wanita yang

lebih muda, setengah baya dan lebih tua
 kadar myostatin serum meningkat seiring
bertambahnya usia
• Tertinggi pada wanita tua yang 'lemah secara fisik',
dan berbanding terbalik dengan massa otot rangka.

Yarasheski KE, Bhasin S, Sinha-Hikim I, Pak-Loduca J, Gonzalez-Cadavid NF: Serum myostatin-

immunoreactive protein is increased in 60- to 92-year-old women and men with muscle wasting. J
Nutr Health Aging 2002;6:343-348

22
Pathway Peningkatan Myostatin pada Sarcopenia

Peningkatan Myostatin
menyebabkan
Sarkopenia melalui
Akt/mTOR pathway. 14

Janssen I, Baumgartner RN, Ross R, Rosenberg IH, Roubenoff R. Skeletal muscle cutpoints associated with elevated
physical disability risk in older men and women. Am J Epidemiol 2004; 159:413–421
 Tata laksana sarkopenia
Konvensional:
1. Nutrisi: asam amino : essential amino
acids (EAAs) /branched-chain amino
acids (BCAAs) ;suplemen vitamin
2. obat-obatan hormonal seperti
testosteron dan metformin
3. Intervensi: latihan, terutama yang
resisten pelatihan, dan stimulasi
listrik tubuh / myostimulation.
• Perbaikan jaringan akibat hilangnya
masa otot
 sel punca alternatif terapi
sarkopenia.
A.J. CruzJentoft, J.P. Baeyens, J.M. Bauer, Y. Boirie, T. Cederholm, F. Landi, et al.
Sarcopenia: European consensus on definition and diagnosis: report of the working group
on sarcopenia in older people Age Ageing, 2010; 39 (4): 412-423
 Stem Cell pada Terapi Regeneratif
• Muscle-Derived Stem Cell (MDSC) dan sel satelit otot rangka.

efek parakrin

• penggantian langsung sel yang rusak.

• Pengggunaan Umbilical Cord Stem Cell (UCSC) 

regenerative medicine

sangat mahal ,reaksi penolakan tubuh terhadap UC-MSC

• Berkembang penelitian menggunakan hasil metabolit dari

sel punca yaitu sekretom

tidak mengandung sel tetapi mengandung

banyak growth factor dan memiliki efek anti- inflamasi.

Martina Sandonà, et al. Mesenchymal Stromal Cells and Their Secretome: New Therapeutic Perspectives for Skeletal Muscle
Regeneration. Front. Bioeng. Biotechnol. 9:652970. doi: 10.3389/fbioe.2021.652970
 Kandungan Sekretom
• Sekretom terdiri dari :
1. protein larut
2. vesikel ekstraseluler yang
disekresikan.

• Protein larut termasuk faktor biologis

aktif :
1. sitokin (IL-10, dan TNF -α),
2. kemokin ( eotaxin-3)
3. faktor pertumbuhan (faktor
pertumbuhan hepatosit dan TGF -β
isoform 3) .

• Extracellar vesikular termasuk :

1. eksosom
Ichim et al., 2010; Kim et al., 2015; Meregalli et al.,2013
2. mikrovesikel

27
 Peran Sekretom pada Regenerasi Jaringan
Peran Sekretome Dalam Regenerasi Jaringan:
• Sitokin
• Growth Factor
• Faktor Angiogenik
• Adipokin
• Faktor Neurotropik)

Ismail Hadisoebroto Dilogoa, Muhammad Rizqi Adhi Primaputra, Jeanne Adiwinata Pawitan, Isabella Kurnia Liem. Modified Masquelet technique
using allogeneic umbilicalcord-derived mesenchymal stem cells for infected non-union femoralshaft fracture with a 12 cm bone defect:
28 A case
report. International Journal of Surgery Case Reports. 34 (2017) 11–16.
 Peran Sekretom pada Regenerasi Jaringan
Penelitian in vitro sekretom:
•mengaktifkan kaskade pensinyalan PI3K/Akt atau FAK/ERK1/2
meningkatkan kemampuan proliferasi
dan migrasi sel kulit:
(fibroblas, keratinosit, dan sel epitel vascular).

Sekretom sebagai Terapi Adjuvant dalam Penyembuhan Robekan

Ligamen dan Tendon
- ↓ inflamasi (NF-κB) proliferasi sel mononuklear pada
darah tepi.
- ↑Proliferasi Jaringan Ikat
- ↑  tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP),
protein anti-inflamasi

• Namun
Dilogo belum
IH, Pramantha diketahui
B, Kodrat patomekanisme
E, Anggraini dari sekretom
R. Comparison of regeneration between human pada
bone terapi
marrow and sarkopenia.
adipose mesenchymal stem
cells on treatment of critical size bone defect in sprague dawley rats. Annual Research & Review in Biology. 2017; 19(3): 1-9.
30
31
D-Galaktosa : Induksi Penuaan Otot
• D-galaktosa : aldohexose ( golongan gula pereduksi ).
• Asupan galaktose  bereaksi gugus amine (NH2)
enzim Aldose reductase dan Galaktosa oxidase
• Menghasilkan metabolit berkontribusi pembentukan
reactive oxygen species (ROS).
• Pada hewan coba mencit dan tikus, D-galaktosa kronis:
efek penurunan fungsi kognitif, jantung dan mobilitas,
mirip kondisi penuaan fisiologis: menyeluruh pada
berbagai sistem organ
• Percepatan penuaan ( accelerated aging model) dari otot Gastrocnemius dan otot
Soleus dari tikus Sprague-Dawley
menunjukkan kedua jenis otot berkedut lambat setelah
pemberian d-galaktosa (60 mg/kg berat badan/hari,
intraperitoneal 0,5 mL) selama 6 minggu. 47

• D-Galaktosa dosis tinggi jangka pendek pada tikus : tanda dan gejala signifikan yang
mirip dengan penuaan alami..
• 300 mg/ml/kg selama satu minggu intra peritoneal:
a.Analisis perilaku untuk gejala seperti depresi dan kecemasan
– Tes berenang paksa (FST)
– Tes transisi terang/gelap (LDT).
b.Penilaian daya ingat :
– Morris water maze (MWM)
– Passive avoidance test (PAT)
– Elevated plus maze (EPM).
c. Analisis biokimia dilakukan untuk estimasi
– enzim antioksidan dan asetilkolinesterase.
d. Penentuan amina biogenik otak dilakukan oleh HPLC-EC. 48
Sulistyoningrum, E., & Article, R. (2016). Jurnal Kedokteran dan Kesehatan Indonesia D-galactose-induced animal
model of male reproductive aging. 19–28.
K.Yanar, B. Simsek, P. Atukeren, S. Aydin, U. Cakatay. Is D-Galactose a Useful Agent for Accelerated Aging Model of
Gastrocnemius and Soleus Muscle of Sprague-Dawley Rats? , Rejuvenation Research , 2019, 20(20): 1- 8
Sekretom pada Regenerasi Jaringan
1. Penelitian mencit yang diinduksi galaktosa
injeksi sekretom 1,5 ml/ kg BB sc., sekali setiap minggu : 4 minggu
meregenerasi kulit yang mengalami penuaan oleh D-galaktosa,
peningkatam ketebalan epidermis dan dermis,
peningkatan folikel rambut
peningkatnya vaskularisasi.
Serabut kolagen di lapisan dermis menjadi sangat padat pada minggu ke-4 setelah
injeksi sekretom dibanding injeksi saline 39.

2.Penelitian lain menggunakan sekrotome 1 ml dari bahan Xenogenik

Bone Marrow manusia,
• defek pada tulang, memberikan hasil perbaikan yang bermakna, 40

A.D. Prayugo, T Budipitojo, Efek Pemberian Sekretom Secara Injektif Pada Struktur Histologi Kulit Mencit (Mus Musculus) Yang Mengalami Penuaan
Akibat Induksi D-Galaktosa
2017 ,Skripsi | S1 Kedokteran Hewan
I.H Dilogo, J. Fiolin, CA Feby, JAd Pawitan, E. Luviah, The Effect of Secretome, Xenogenic Bone MarrowDerived Mesenchymal Stem Cells, Bone
Morphogenetic Protein-2, Hydroxyapatite Granule and Mechanical Fixation in Critical-Size Defects of Rat Models, Arch Bone Jt Surg. 2022; 10(1): 17-22
 • Tidak ada perbedaan yang
signifikan secara statistik
dalam RUST Skor antara
kelompok intervensi.
• Pemberian secretome
saja sudah cukup dalam
meningkatkan
penyembuhan tulang
• CM vs MSC+CM vs
MSC+CM+BMP tidak
menunjukkan perbedaan
yang bermakan

• The RUST (Radiographic Union Score for Tibia )Score of MSC-only

group was not significantly higher than the control group.

I.H Dilogo, J. Fiolin, CA Feby, JAd Pawitan, E. Luviah, The Effect of Secretome, Xenogenic Bone MarrowDerived
Mesenchymal Stem Cells, Bone Morphogenetic Protein-2, Hydroxyapatite Granule and Mechanical Fixation in
Critical-Size Defects of Rat Models, Arch Bone Jt Surg. 2022; 10(1): 17-22
 Kerangka Teori
Perubahah Hormonal ↓Fungsi Neuron ↑Inflamasi Sistemik Malnutrisi Life Style Ischemia

↓ IGF-1 Myostatin Motor Unit ↑ mediator pro inflamasi ↓ Kalori +Prot. Intake ↓Phsiscla Activity Obesitas aliran
↓Testosteron darah
↓Estrogen ActR2B ↑ Denervasi ↑Apotosis ↑ Insulin kapiler
↓DHEA ↑ CRP ↑TNF-α ↑IL-6 ↑ Lipolisis Resistensi
Smad 2,3,4 pre synapsis neuron ↑Ensom Caspase 1
x
↑ ROS ↑NF-ƙb JAK/STAT ↑leptin
akt2, mTOR Ekspresi Glut 4 sitokin pro inflamasi Adiponectin
Atrogin-1 MRFs Oksidasi b ↑Hipoksia
Sintesa Protein ↓ Insulin Sensitivity ↑ mitocondria H2)2 ROS Jaringan
MURF-1 Apoptosis
Anabolik x Peroksidase Lipid

↓Masa Otot ↓Uptke Glucose ↑ Protein mitocondria ↑Disfungsi Biogenesis

Degradation dIsfunction Mitokondria

↓Kekuatan Otot x Stres Oksidasi

x SARKOPENIA
IGF-1 IL-1-, IL1b, IL-10
Sekretom :
EGF, FGF, KGF Growth
IGF,Factor:
VEGF, EGF, FGF, KGF, PDGF VEGF
meningkatkan Cytokine
IL-1-, IL1b,IL-6, IL7, IL-10
menghambat Pro-angionic Factor: β-FGF,VEGF,HGF, Ang-1,Ang-2, PDGF
TNF-α:, IL-6, IL-8, MCP-1
x action Adipokine
 Bab III
KERANGKA KONSEP
&
HIPOTESIS
Kerangka Konsep
Variabel
Variabel Bebas :
Penyuntikan sekretom i.m. pada otot soleus tikus
sarkopenia dengan dosis 1,5 cc

Variabel Terikat :
1.Inflamasi
2. Stres Oksidatif
3.Protein Katabolik Otot Myostatin

Variable pengganggu :
variasi individu hewan coba
stres hewan coba saat pemeliharaan
 Definisi Operasional
Variable Definisi operasional Alat ukur Cara Hasil Skala
ukur ukur ukur

sekretom Penyuntikan lokal sekretom Spuit 3 cc Jumlah cc Ratio

pada otot soleus tikus sekretom
sarkopenia dengan dosis 1,5 cc
(1 ml / mg protein) secara intra
muskular
 

sarkopenia Penurunan massa otot dan Lingkat otot Diameter cm Ratio

fungsi otot soleus Otot
Soleus
Variable Definisi operasional Alat ukur Cara Hasil Skala
Ukur ukur ukur
C- Rective CRP, penanda inflamasi fase akut Kimia Serum mg/L Ratio
Protein dan kronis untuk mengevaluasi darah Plasma
keadaan inflamasi. Darah
Kadar CRP diketahui meningkat
sebagai respons terhadap infeksi
dan cedera. Selain itu, tingkat CRP
yang tinggi dikaitkan dengan risiko
yang lebih tinggi perkembangan
penyakit kronis seperti, diabetes
tipe 2, penyakit diovaskular dan
sarcopenia, kombinasi dari massa
otot yang rendah, kekuatan dan
performa fisik (Bano et al., 2017;
Cesari et al., 2003;
Freeman dkk., 2002; Koenig dkk.,
2008).
CRP paling sering digunakan oleh
bidang penelitian ini untuk menilai
hubungan antara inflamasi sistemik
dan menurunkan kekuatan otot atau
massa otot. Peningkatan kadar CRP
juga telah dikaitkan dengan
sarcopenia (Bano et al., 2017).
Variable Definisi operasional Alat ukur Cara Hasil Skala
ukur ukur ukur
Super Oxide Sebagai penanda yang digunakan Spektofotomet Serum U/mL Ratio
Dismutase untuk menyelidiki kerusakan oksidatif ri Plasma
dalam perjalanan penyakit sarkopenia darah
pada manusia. Terjadi peningkatan
kadar SOD plasma yang menunjukkan
oksidasi yang dipercepat
selama penuaan (Całyniuk et al.,
2016).
Myostatin Myostatin (juga dikenal sebagai faktor Elisa Serum pg/mL Ratio
diferensiasi pertumbuhan 8, disingkat Plasma
GDF8) adalah miokin, protein yang darah
diproduksi dan dilepaskan oleh miosit
yang bekerja pada sel otot untuk
menghambat pertumbuhan sel otot.
[ Saunders, Matthew A,2006]
 

Lingkar otot Ukuran diameter otot soleus Metline / Pita Menggunakan cm ratio
soleus ektremitas tikus kaki kanan, digunakan Ukur Diameter otot
ukuran terbersar dari otot soleus soleus
terbesar
 Hipotesis

• Hipotesis Nol:
Tidak terdapat potensi terapeutik sekretome
terhadap penurunan inflamasi, stres oksidatif dan
myostatin pada penuaan otot (sarkopenia)

• Hipotesis Alternatif:
Terdapat pengaruh terapeutik sekretome
terhadap penurunan inflamasi, stres oksidatif
dan myostatin pada penuaan otot (sarkopenia)
 Bab IV
METODOLOGI PENELITIAN
Desain Penelitian
• Studi analitik  desain eksperimental in vivo
untuk potensi terapeutik umbilical cord
mesenchymal stem cell-conditioned medium
hewan coba penuaan otot (sarkopenia)

Lokasi dan Waktu Penelitian

• Lokasi Penelitian
Laboratorium bersama FKIK Unika Atma Jaya
Indonesia.
• Waktu Penelitian:
Januari – Desember 2022.
.
 Populasi dan Sampel Penelitian
• Populasi Target
Tikus Putih (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley.

• Populasi Terjangkau
Tikus Putih (Rattus norvegicus) galur Sprague
dawley dari Balai POM DKI Jakarta

• Sampel
Sampel pada penelitian ini adalah Tikus Putih (Rattus
norvegicus) galur Sprague dawley dari
Laboratorium Balai POM DKI Jakarta
 Kriteria Sampel
Kriteria Inklusi
1.Tikus Putih (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley jenis kelamin jantan
2.Tikus Putih (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley usia 5 minggu
 induksi dengan D-galactose i.p dosis 300 mg/kg/hari selama 7 hari
3.Tikus Putih (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley 200-300 gram

Kriteria Eksklusi
1. Tikus sakit saat penelitian berlangsung
(penyakit tempat pembalutan menyebabkan otot rusak.
2. Tikus tidak mau makan dan minum
3. Tikus mati sebelum diberikan intervensi

Kriteria Penghentian Penelitian

Penelitian akan dihentikan apabila lebih dari sama dengan 20% total sampel
mati selama penelitian berlangsung.
Estimasi Besar Sampel
• Hewan uji dibagi ke dalam 4 kelompok acak (random)
• Sampel minimal tiap kelompok  rumus Degree of freedom ANOVA :
E = (n × t) – t
Keterangan :
E = Degree of freedom (10 ≤ E ≤ 20)
n = Jumlah sampel minimal pada tiap kelompok penelitian
t = Jumlah total kelompok pada penelitian = 4 kelompok

Minimal : E = (n × t) – t ; 10 = 4n – 4 ; 4n = 14 n ≥ 3,5
Maksimal : E = (n × t) – t ; 20 = 4n – 4 ; 4n = 24 n ≥ 6

• Jumlah sampel (tikus galur Sprague dawley) minimum tiap kelompok : 6 ekor.
Untuk menghindari resiko drop out : 7 ekor tikus tiap kelompok
28 ekor tikus galur Sprague dawley.
Alokasi Subjek Penelitian
Subjek penelitian 4 kelompok : 3 kelompok perlakuan dan 1 kelompok kontrol (@ 7 ekor
tikus.
Pembagian kelompok tersebut adalah seperti berikut :
Kelompok 1 : Kelompok Normal
Tikus tidak dilakukan induksi ( tidak sarkopenia) dan tidak dilakukan injeksi
Jumlah 7 tikus
Kelompok 2 : Kelompok kontrol negatif
Tikus tidak dilakukan induksi ( tidak sarkopenia) dan dilakukan injeksi NaCl
Jumlah 7 tikus
Kelompok 3 : Kelompok kontrol positif
Tikus dilakukan induksi (sarkopenia) dan dilakukan injeksi NaCl
Jumlah 7 tikus
Kelompok 4 : Kelompok Intervensi
Tikus dilakukan induksi (sarkopenia) dan dilakukan injeksi Sekretom
Jumlah 7 tikus
Alur Penelitian
Pembuatan Model Penuaan Otot
• D-Galactose accelerated Aging Model Gastrocnemius and
Soleus Muscle of Sprague-Dawley Rats
• D-Galaktosa (60 mg/kg berat badan/hari, intraperitoneal 0,5
mL) selama 6 minggu
• age-related neurobehavioral outcomes , mitochondrial
oxidative metabolism, ↑ asam laktat

Karolin Yanar, Bahadir Simsek, Is D-Galactose a Useful Agent for Accelerated

Aging Model of Gastrocnemius and Soleus Muscle of Sprague-Dawley Rats?
Rejuvenation Research , 2019, 22(6): 1-8
Model demensia diinduksi dengan injeksi D-
galaktosa
• Tikus model demensia diinduksi dengan injeksi D-galaktosa
intra peritoneal dosis 100 mg/kg/hari selama 8 minggu.
Dummy Table
Daftar Pustaka
ronald.kartika@ukrida.ac.id 081219876879
 1. PREPARATION OF UC-MSCs
• Isolate UC-MSCs, Wharton’s jelly was sliced into 5-mm explants
after removing the umbilical vessels
• The slices were subsequently attached and cultured in T-175
culture flasks (SPL Life Sciences Co., Pocheon, Korea) in
Minimum Essential Medium Eagle Alpha Modification ( α-MEM;
Hyclone Laboratories, Inc., Logan, UT, USA) supplemented with
10% FBS (Hyclone) and 100 mg/mL streptomycin plus 100 IU/mL
penicillin (Hyclone).
• UC-MSCs were used at passage 4–5 for all experiments. Cells
were maintained at 37◦C in a humidified incubator with an
atmosphere of 5% CO2(v/v), and the medium was replaced
every 3 days.

65
2. Cell proliferation and viability analysis

Fig. 1B. Determination of

optimal harvesting time point of
UC-CM.
(A) Increased release of
cytokines, growth factors,
and active protein
components into UC-CM
over time.(
(B) Growth curve of UC-MSCs
and total protein content in
UC-CM under serum-free
conditions at 0, 6, 12, 24,
36, 48, and 72 h of culture.1

66
 3. UC-MSC COLLECTION
• UC-MSCs were seeded at a density of 2 × 106cells in T-175culture flasks.
• The CM was lyophilized using a freeze dryer (FDU-8612; Operon Co., Gimpo, Korea),
and the desiccated matter was placed into a 5 mL sterile glass vial and stored at 4◦C
until use.
• The CM was resuspended in normal saline(0.9% w/v) for use in in vivo experiments .
4. CYTOKINE ASSAY
 Protein profiles in the UC-CM were analyzed for 507 growth
factors, cytokines, and other active factors using the RayBio®
Biotin Label-based Human Antibody Array I Kit (Ray Biotech, Inc.,
Nor-cross, GA, USA).

67
 Alur penelitian

• 1. Ektremitas kaki tikus

dilakukan
• dua perlakuan :
• - ischemia dengan elastic
• verband
•  otot ischemia
• - Imobilisasi dengan plester
• Velcro  atrofi

68