ANALISIS FARMASI

Spektroskopi Inframerah

Analisis perubahan struktur protein dan pengaturan kualitas surimi selama gelasi
berdasarkan spektroskopi inframerah dan pencitraan mikroskopis
 Kelompok 2 B

Ulfa Khairunnisa (08061181823022)

Sulistia (08061181823116)
Indah Nur Safitri (08061181823118)
Ref Afriyani (08061181823120) Dosen Pengampu :
Dwi Melinia (08061181823122)
Sindi Pernama Sari (08061181823124) apt. Elsa Fitria Apriani,
Mardhatillah (08061181823126) M.Farm
Risma Dona (08061181823128)
Puspa Ayu Mayang S (08061181621020)
Tri Sundari (08061181621028)
 MATERI Spektrofotometri getaran
Spektrofotometri Inframerah
Penyerapan cahaya inframerah
Informasi yang dapat diperoleh dari
spektrum inframerah
Instrumen spektrum inframerah

Analisis kualitatif IR
Surimi

Hasil Analisis IR
Komponen Pita Amide I Untuk
Surimi dan Gel
Analisis Mikrostruktur Empat Kelas
Surimi dan Gel
Kesimpulan
 Spektrofotometri Getaran

01 Definisi
Spektroskopi
adalah metode
getaran
untuk
02 Metode
spektra turunan kedua
dan spektroskopi infra
mempelajari perubahan merah korelasi dua
molekul pada protein dimensi (2DCOS-IR)
selama gelasi surimi tanpa
persiapan yang rumit

03 Teknik
Spektroskopi infra
merah transformasi
Fourier (FT-IR)
 Spektrofotometri Infra Merah

Spektroskopi inframerah adalah salah satu metode klasik untuk

penentuan
struktur molekul kecil karena kepekaannya terhadap komposisi kimia
dan bentuk molekul informasi tinggi dalam spektrum infra merah juga
dibawa ke sistem biologis. Hal ini membuat spektroskopi infra merah
menjadi alat yang berharga untuk penyelidikan struktur protein dari
mekanisme molekul reaksi protein
 Keuntungan :

Rentang aplikasi yang besar dari protein larut kecil menjadi protein
membran besar

Resolusi waktu tinggi turun menjadi 1 μ s dengan usaha sedang

Waktu pengukuran yang singkat

Jumlah sampel yang rendah (10 - 100 μ g)

Murah
 Penyerapan cahaya inframerah

Terjadi ketika frekuensi cahaya dan getaran sama ketika

momen dipol molekul berubah selama proses getaran.
Frekuensi getaran dan probabilitas penyerapan bergantung
pada kekuatan dan polaritas ikatan getar yang dipengaruhi
oleh efek intra dan antarmolekul. Perkiraan posisi pita absorpsi
infra merah ditentukan oleh massa getar dan jenis ikatan.
 Informasi yang dapat diperoleh dari spektrum
inframerah

Kebebasan konformasional Struktur kimia

Medan listrik Sifat kimia

Ikatan hydrogen Status redoks

Sudut ikatan dan

Parameter ikatan
konformasi
 Vibrasi ikatan yang melibatkan hidrogen, atom-atom
dengan massa rendah cenderung lebih mudah
Vibrasi Molekul bergerak daripada atom dengan massa lebih tinggi.

H = tetapan Planck
ΔE = h υ (6,6242 x 10-27 erg det)
υ = tetapan frekuensi (Hz)
υ = jumlah gelombang (cm-1 )
c = kecepatan cahaya (cm dt-1 )
f (m1  m2)
m1 = massa atom 1 (g)
m1 = masa atoam 2 (g)
f = tetapan gaya (dyne cm-1)
Vibrasi stretching
1 Semakin besar tetapan
2c
gaya, semakin besar
frekuensi vibrasi dan makin
m1m2 besar jarak energi diantara
tingkat-tingkat kuantum
vibrasi
 Instrumentasi Spektroskopi IR
Analisis kuantitatif :
menggunakan
senyawa standar yang
dibuat spektrumnya
pada berbagai variasi
konsentrasi.

Spektrofotometer FTIR 8300/8700

Analisis kualitatif dilakukan dengan melihat bentuk

Spektrofotometer inframerah model
spektrumnya yaitu dengan melihat puncak-puncak
710b Perkin –Elmer
spesifik yang menunjukan jenis gugus fungsional
yang dimiliki oleh senyawa tersebut
 Preparasi Sampel
Sampel cair

Sampel cair harus Tekanlah kedua

bebas air NaCl Window Sampel siap dianalisis

Oleskan sampel Masukkan sampel dalam

pada NaCl Window Demountable Cell.
 Preparasi Sampel
Sampel padat
Metode DRS – 8000

Sampel padat + Tempatkan pada

serbuk KBr 5 – 10 % sampel pan Sampel siap dianalisis

Sampel padat + Dibuat pellet KBr (pil KBr)

Metode Pelet KBr dengan Mini hand press
serbuk KBr 5 – 10 %
Analisis kualitatif dengan IR
 Daerah IR

 Daerah IR dekat (0,7-2,5 μ)

 Daerah fundamental (2,5-5,0 μ)

 Daerah IR jauh (50-500 μ)

 Daerah sidik jari (6,7-14 μ).

 Daerah ulur hidrogen (3700-
2700 cm-1 )
01 

Puncak terjadi karena vibrasi ulur
Frekuensinya besar
 Puncak absorpsi 3700-3100 cm-1
 Ikatan hidrogen puncak melebar dan bergeser
 Vibrasi C-H alifatik timbul pada 3000-2850 cm-1
 Ikatan C=H timbul pada 3300 cm-1 .
 Hidrogen pada gugus karbonil aldehid 2745-2710 cm-1

Daerah ikatan rangkap tiga

(2700-1850 cm-1 )
 Gugus-gugus yang mengabsorpsi terbatas
02
Vibrasi ulur ikatan rangkap 2250-2225 cm-1
 Puncak SH adalah pada 2600-2550 cm-1
 pH pada 2240-2350 cm -1
 SiH pada 2260-2090 cm-1
 Daerah ikatan rangkap dua
(1950 – 1550 cm-1 )
03  Aldehid, asam, aminola, karbonat pada puncak 1700 cm-1
 Ester, halida-halida asam, anhidrida-anhidida asam, mengabsorpsi pada
1770-1725 cm-1
 Konjugasi menyebabkan puncak absorpsi menjadi lebih rendah = 1700 cm-
1
 Puncak vibrasi ulur dari –C=C- dan C=N 1690-1600 cm-1 untuk identifikasi
olefin
 Cincin aromatik pada daerah 1650-1450 cm-1
Daerah sidik jari (1500-1700
cm-1)
04
 Struktur dan susunan molekul berbeda akan menyebabkan distribusi
puncak absorpsi berubah
 Untuk memastikan suatu senyawa organik dengan membandingkan
dengan perbandingannya
 Pita absorpsi disebabkan karena bermacam-macam interaksi
 SURIMI
• Surimi adalah protein miofibril ikan yang telah distabilisasikan dan
diproduksi melalui tahap proses secara kontinu yang meliputi
penghilangan kepala, penghilangan tulang, pelumatan daging,
pencucian, penghilangan air, dan pembekuan dengan cryoprotectant,
juga dapat diartikan sebagai suatu proses pencucian dan
penghilangan air pada daging lumat ikan dari protein sarkoplasma,
lemak, dan bahan- bahan yang tak diinginkan seperti kulit dan
tulang.
• Kata surimi berasal dari Jepang yang telah diterima secara
internasional untuk menggambarkan hancuran daging ikan yang
telah mengalami berbagai proses yang diperlukan untuk
mengawetkannya
• Gelasi merupakan hasil dari denaturasi protein, proses memerlukan
asosiasi panjang rantai protein myofbrillar yang menghasilkan
jaringan protein tiga dimensi kontinyu
Hasil Analisis Berdasarkan Inframerah (IR)

01 Spektrum IR empat tingkat

surimi dan gel 02 Spektrum IR turunan kedua
dari empat kelas surimi dan
gel

03
Spektrum 2DCOS- IR dari
empat tingkat surimi dan gel
Spektrum IR empat tingkat surimi dan gel

• Hasil yang didapatkan pada puncak lipid dan

sukrosa memiliki bentuk puncak dan intensitas luas
puncak yang sama, menunjukkan bahwa
kandungannya hampir berubah sedikit sebelum dan
setelah gelasi, sehingga dapat disimpulkan bahwa
lipid dan sukrosa memiliki pengaruh yang kecil
dalam pembentukan gel surimi. Namun, pita serapan
amida I dan II telah diperluas secara signifikan
(20%) setelah gelasi, yang menunjukkan adanya
perubahan struktur protein selama proses gelasi,
misalnya, reduksi ikatan hydrogen. Hal ini
dikarenakan suhu dinaikkan secara bertahap, ikatan
hidrogen, ikatan ionik, dan ikatan lemah lainnya
dalam protein mungkin rusak.
• Hasil yang didapatkan bahwa spektrum
empat jenis surimi, sangat mirip karena
spesies ikan yang sama. Namun
intensitas puncak karakteristik pada
1744 cm​−−1 ​secara bertahap meningkat
dari A ke SA, menunjukkan bahwa
kandungan lipid di semua sampel (A,
AA, SA, FA) harus meningkat dan ini
dibuktikan dengan analisis kimia
sebelumnya.
Spektrum IR Turunan Kedua Dari Empat Kelas Surimi Dan Gel

Spektroskopi IR turunan kedua umumnya digunakan untuk memisahkan beberapa puncak

serapan yang tumpang tindih dan puncak bahu yang tidak dibedakan dalam spektrum asli.
Spektrum turunan kedua surimi dan gel dengan nilai yang berbeda. Puncak pada 1656 cm​−1,
1630 cm​−1, 1563 cm​−1 ​dan 1514 cm​−1 ​gel surimi lebih lemah daripada surimi, sementara surimi
gel memiliki puncak serapan yang lebih kuat pada 1501 cm​−1​. Perbandingan spectrum turunan
kedua surimi dan surimi gel berada di wilayah 1700 ~ 1600 cm−1​.
Spektrum 2DCOS- IR Dari Empat Tingkat Surimi Dan Gel

• Spektrum 2DCOS-IR dari empat tingkat surimi dan gel bahwa 2DCOS-IR
merupakan Salinan spektrum inframerah korelasi dua dimensi yang digunakan
dalam kisaran rentang 1680–1600 cm−1.
• Area merah atau hijau mengacu pada korelasi positif, menunjukkan sekelompok
pita serapan berubah secara bersamaan (baik lebih kuat atau lebih lemah),
sedangkan area biru hanya kebalikannya.
 • Komponen pita Amide I untuk surimi
Komponen Pita Amide I Untuk dan gel untuk Pita amida I terlentak
antara 1600 dan 1700 cm−1, sangat
Surimi dan Gel berguna dalam analisis spektroskopi infra
merah dari struktur sekunder protein,
rentang tersebut biasanya direfleksikan
oleh komponen sebagai berikut: 1610 ~
1640 cm−1 dan 1670 ~ 1690 cm−1 untuk
β-sheet; 1640 ~ 1650 cm−1 untuk
kumparan acak; 1650 ~ 1658 cm−1 untuk
α-helix; 1660 ~ 1700 cm−1 untuk β-putar.
• Salah satu pengamatan utama yaitu α-
helix yang merupakan konformasi utama
protein surimi, dan kandungan α-helix
berkurang dan isi βstruktur-sheet, β-turn
dan kumparan acak meningkat,
menunjukkan bahwa α-helix dari myosin
sebagian berubah menjadi β-sheet, β-turn
dan random coil selama surimi gelation .
pada analisis struktur menjelaskan meningkatnya kekuatan gel dari A ke SA dapat
diketahui melalui Tabel 3 yang menunjukan bahwa surimi dengan kadar yang lebih
tinggi memiliki gel surimi yang lebih baik, hal ini disebabkan oleh perbedaan profil
protein dalam surimi dengan tingkat kualitas yang bervariasi. Tabel 2 menunjukan
adanya kombinasi, dengan begitu dapat disimpulkan bahwa β-sheet dan struktur
kumparan acak adalah konformasi protein utama yang menjaga kerangka surimi gel,
dan β-sheet memberikan kontribusi utama terhadap kekuatan gel.
Analisis Mikrostruktur Empat Kelas
Surimi dan Gel
Melalui Foto hasil SEM surimi
menampilkan matriks protein halus
dengan rongga yang lebih sedikit tetapi
lebih besar daripada gel, sedangkan gel
menunjukkan bahwa semuanya memiliki
struktur jaringan, yang memungkinkan
gel surimi untuk mempertahankan
karakteristik elastis tertentu seperti yang
tertera pada gambar 5. Selain itu,
jaringan pada gel surimi kelas AA, FA
dan SA bila dibandingkan dengan kelas A
lebih padat serta dilengkapi dengan pita
tipis yang dapat diamati, dikarenakan
adanya gel termal yang menahan volume
air yang besar di dalam jaringan molekul
myosin.
 KESIMPULAN
● Selama proses gelasi, ikatan hidrogen, ikatan ionik dan ikatan lemah lainnya
dalam molekul protein terputus, yang mengakibatkan rusaknya struktur
protein. Perubahan struktur sekunder protein adalah penurunan α-​heliks
dan peningkatan β-​struktursheet, β​-turn dan kumparan acak.
● Kemampuan pembentukan gel terkait dengan konversi yang diubah α​-helix
menjadi jenis struktur sekunder lainnya, seperti β-​sheet dan random coil,
dan β​-sheet berkontribusi lebih untuk meningkatkan kekuatan gel. Surimi
tingkat tinggi membentuk struktur jaringan protein yang lebih padat dan
lebih padat yang menyebabkan kekuatan gelnya yang tinggi.
● Telah dibuktikan bahwa tiga langkah FT-IR spektroskopi yang dikombinasikan
dengan peak-ftting dapat menjadi alat ilmiah dan cepat untuk penyelidikan
mendalam tentang perubahan konformasi protein surimi selama gelasi.
 DAFTAR PUSTAKA
MT Zanni, MC Asplund, RM Hochstrasser, Dua-dimensi gema foton inframerah
heterodyned dan terstimulasi dari N- methylacetamide- D, J. Chem. Phys.
114 (2001) 4579 - 4590.
AK Dioumaev, Metode inframerah untuk memantau status protonasi asam amino
karboksilat dalam siklus foto bakteriorhodopsin, Biokimia (Moskow) 66
(2001) 1269 – 1276
S.-Y.Lin, M.-J. Li, W.-T. Cheng, FT-IR dan getaran Raman mikrospektroskopi
digunakan untuk biodiagnosis spektral jaringan manusia, Spektroskopi 21 (2007) 1
– 30
KC Schultz, L. Supekova, Y. Ryu, J. Xie, R. Perera, PG Schultz, A probe
inframerah yang dikodekan secara genetik, J. Am. Chem. Soc. 128 (2006) 13984 -
13985
Khopkar SM. (1990). Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta : UI Press.
Larry G Hargis. (1988). Analytical Chemistry. Principles And Technigues. New Jersey :
Prentice Hall Inc
L A MP I R A N