MICROSCOPUL

ELECTRONIC

SBIRCEA SARA
PETICILA BIANCA
 Un microscop (din greaca veche mikrós „mic” și
skopéō „a privi la; a examina”) este un instrument
de laborator folosit pentru a examina obiecte care
sunt prea mici pentru a fi văzute cu ochiul liber.

Microscopia este știința de a investiga obiecte și structuri

mici folosind un microscop. Microscopic înseamnă a fi
invizibil pentru ochi, dacă nu este ajutat de un microscop.
• Deși obiectele asemănătoare lentilelor datează de 4.000 de ani și există relatări grecești despre proprietățile optice
ale sferelor umplute cu apă (sec.V î.Hr.), urmate de multe secole de scrieri despre optică, cea mai timpurie
utilizare cunoscută a microscoapelor simple (lupe) datează de la utilizarea pe scară largă a lentilelor în ochelarii de
vedere în secolul al XIII-lea.

• Cele mai vechi exemple cunoscute de microscoape compuse, care combină o lentilă obiectiv lângă specimen cu un
ocular pentru a vizualiza o imagine reală, au apărut în Europa în jurul anului 1620. Inventatorul este necunoscut,
chiar dacă multe afirmații au fost făcute de-a lungul anilor.

• Galileo Galilei (uneori citat și ca inventator al microscopului compus) pare să fi descoperit după 1610 că își putea
concentra telescopul pentru a vedea obiecte mici și, după ce a văzut un microscop compus construit de Drebbel
expus la Roma în 1624, și-a construit propriul său. versiune îmbunătățită. Giovanni Faber a inventat denumirea de
microscop pentru microscopul compus pe care Galileo l-a prezentat la Accademia dei Lincei în 1625 (Galileo îl
numea occhiolino „ochiul mic”).

• René Descartes (Dioptrique , 1637) descrie microscoape în care o oglindă concavă, cu concavitatea sa către obiect,
este utilizată, împreună cu o lentilă, pentru iluminarea obiectului, care este montat pe un punct care îl fixează la
focarul oglinzii.

INFO ISTORICE
 TIPURI

Există multe tipuri de microscoape și pot fi grupate în

moduri diferite. O modalitate este de a descrie metoda pe
care o folosește un instrument pentru a interacționa cu o
probă și a produce imagini:

• prin trimiterea unui fascicul de lumină sau de electroni

printr-o probă pe calea sa optică

• prin detectarea emisiilor de fotoni dintr-o probă

• prin scanarea printr-un distanță mică de suprafața unei

probe folosind o sondă.
cel mai comun si
primul inventat

optic

folosește lentile
pentru a refracta
lumina vizibilă
cu
fluorescență

cu transmisie
electronic
cu sondă de
cu scanare
scanare
 01
MICROSCOP
OPTIC
 Acesta este un instrument optic care conține una sau mai multe lentile care produc o imagine mărită a unei
probe plasate în planul focal. Microscoapele optice au sticlă refractivă (ocazional plastic sau cuarț ), pentru a
focaliza lumina pe ochi sau pe un alt detector de lumină. Microscoapele optice pe bază de oglindă funcționează
în același mod.

 Mărirea tipică a unui microscop cu lumină, presupunând lumina vizibilă, este de până la 1.250× cu o limită
teoretică de rezoluție de aproximativ 0,250 mmetri sau 250 nm. Acest lucru limitează mărirea practică la
~1.500×. Tehnicile specializate pot depăși această mărire, dar rezoluția este limitată de difracție. Utilizarea
unor lungimi de undă mai scurte de lumină, cum ar fi ultravioletele, este o modalitate de a îmbunătăți rezoluția
spațială a microscopului optic, la fel ca dispozitive precum microscopul optic cu scanare în câmp apropiat.

 Sarfus este o tehnică optică recentă care crește sensibilitatea unui microscop optic standard până la un punct în
care este posibil să se vizualizeze direct filme nanometrice (până la 0,3 nm) și nano-obiecte izolate (până la 2
nm diametru).

 Microscopul optic tradițional a evoluat mai recent în microscopul digital . În loc de vizualizarea directă a
obiectului prin oculare, se folosește un tip de senzor similar cu cel utilizat într-o cameră digitală pentru a
obține o imagine, care este apoi afișată pe monitorul unui computer.
• Microscopia cu contrast de fază este o
tehnică de iluminare microscopică optică
în care micile schimbări de fază ale luminii
care trece printr-un specimen transparent
sunt convertite în modificări de
amplitudine sau contrast în imagine.

• Utilizarea contrastului de fază nu necesită

colorare pentru a vizualiza diapozitivul.

• Această tehnică de microscop a făcut

Celulele necolorate vizualizate prin câmp luminos tipic
posibilă studierea ciclului celular în
(stânga) în comparație cu microscopia cu contrast de fază
celulele vii. (dreapta)
 02

MICROSCOAPE
CU
FLUORESCENTA
 Cele mai recente evoluții în microscopul luminos se concentrează în mare parte pe
creșterea microscopiei cu fluorescență în biologie. În ultimele decenii ale secolului
al XX-lea, au fost dezvoltate multe tehnici de colorare fluorescentă a structurilor
celulare.

 Principalele grupuri de tehnici implică colorarea chimică țintită a unor structuri

celulare particulare, de exemplu, compusul chimic DAPI pentru a marca ADN-ul.
Aceste tehnici folosesc acești fluorofori diferiți pentru analiza structurii celulare la
nivel molecular atât în ​probele vii, cât și în cele fixe.

 Creșterea microscopiei cu fluorescență a condus la dezvoltarea unui design modern

de microscop major, microscopul confocal . Principiul a fost brevetat în 1957 de
Marvin Minsky , deși tehnologia laser a limitat aplicarea practică a tehnicii. Abia în
1978, Thomas și Christoph Cremer au dezvoltat primul microscop practic de
scanare laser confocal , iar tehnica a câștigat rapid popularitate prin anii 1980.
 03
MICROSCOAPE
ELECTRONICE
 La începutul secolului al XX-lea a fost dezvoltată o alternativă semnificativă la microscopul luminos, un instrument
care utilizează un fascicul de electroni mai degrabă decât lumină pentru a genera o imagine, permite o rezoluție mult
mai mare.

 Fizicianul german Ernst Ruska, în colaborare cu inginerul electric Max Knoll , a dezvoltat primul prototip de
microscop electronic în 1931, un microscop electronic cu transmisie (TEM), care funcționează pe principii similare cu
un microscop optic, dar folosește electroni în locul luminii și electromagneți în locul lentilelor de sticlă.

 Dezvoltarea microscopului electronic cu transmisie a fost urmată rapid în 1935 de dezvoltarea microscopului electronic
cu scanare (SEM) de către Max Knoll.

 Deși TEM-urile au fost folosite pentru cercetare înainte de al Doilea Război Mondial și au devenit populare după aceea,
SEM nu a fost disponibil comercial până în 1965. Microscoapele electronice cu transmisie au devenit populare după
cel de-al Doilea Război Mondial. Ernst Ruska, care lucrează la Siemens, a dezvoltat primul microscop electronic cu
transmisie comercial și, în anii 1950, au început să aibă loc conferințe științifice majore despre microscopia electronică.

 În 1965, primul microscop electronic cu scanare comercial a fost dezvoltat de profesorul Sir Charles Oatley și
studentul său postuniversitar Gary Stewart și comercializat de Cambridge Instrument Company sub numele de
„Stereoscan”.
 Într-un TEM, electronii trec prin eșantion, în mod analog cu microscopia
optică de bază. Acest lucru necesită o pregătire atentă a probei, deoarece
electronii sunt împrăștiați puternic de majoritatea materialelor.

 Probele trebuie să fie, de asemenea, foarte subțiri (sub 100 nm) pentru ca
electronii să treacă prin ea. Secțiuni transversale ale celulelor colorate cu
osmiu și metale grele dezvăluie membrane organele clare și proteine, cum
ar fi ribozomii.

 Cu un nivel de rezoluție de 0,1 nm, pot fi obținute vederi detaliate ale

virușilor (20 – 300 nm) și a unei catene de ADN (2 nm în lățime). În
schimb, SEM are bobine raster pentru a scana suprafața obiectelor în vrac
cu un fascicul de electroni fin.

 Prin urmare, specimenul nu trebuie neapărat să fie secționat, dar poate fi

necesară acoperirea cu un strat nanometric de metal sau carbon pentru
probele neconductoare. SEM permite imagistica rapidă de suprafață a
probelor, eventual în vapori de apă subțiri pentru a preveni uscarea.
SEM
TEM
 04
MICROSCOAPE
CU SONDA DE
SCANARE
 Din 1981 până în 1983, Gerd Binnig și Heinrich Rohrer au lucrat la IBM din Zurich ,
Elveția , pentru a studia fenomenul de tunel cuantic. Ei au creat un instrument practic,
un microscop cu sondă de scanare din teoria tunelului cuantic, care citește forțele
foarte mici schimbate între o sondă și suprafața unei probe.

 Sonda se apropie de suprafață atât de aproape încât electronii pot curge continuu între
sondă și probă, producând un curent de la suprafață la sondă. Un microscop cu forță
atomică are o sondă fină, de obicei din siliciu sau nitrură de siliciu, atașată la un
cantilever; sonda este scanată pe suprafața probei, iar forțele care provoacă o
interacțiune între sondă și suprafața probei sunt măsurate și mapate.

 În 1986 Gerd Binnig, Quate și Gerber au inventat microscopului cu forță atomică. Noi
tipuri de microscop cu sondă de scanare au continuat să fie dezvoltate pe măsură ce
capacitatea de a prelucra sonde și vârfuri ultrafine a avansat.

 Cele mai comune trei tipuri de microscoape cu sondă de scanare sunt microscoape

• cu forță atomică (AFM)

• optice cu scanare în câmp apropiat (NSOM sau SNOM, microscopie optică cu scanare
în câmp apropiat)
• cu scanare tunel (STM).
 05
ALTE
MICROSCOAPE
 Microscoapele acustice de scanare folosesc unde sonore pentru a
MICROSCOAPE măsura variațiile impedanței acustice. Ele sunt utilizate pentru lucrări
precum detectarea defectelor subsuprafețelor materialelor. Pe 4
ACUSTICE februarie 2013, inginerii australieni au construit un „microscop
cuantic” care oferă o precizie de neegalat.

Suprafața
frunzei văzută
cu un
microscop
electronic cu
scanare
 MICROSCOAPE CU RAZE
X
Microscoapele cu raze X sunt instrumente
care utilizează radiații electromagnetice.
Progresele tehnologice în optica lentilelor
cu raze X la începutul anilor 1970 au făcut
din instrument o alegere viabilă pentru
imagini.

Sunt adesea folosite în tomografie pentru a

produce imagini tridimensionale ale
obiectelor, inclusiv materiale biologice care
nu au fost fixate chimic. În prezent, se fac
cercetări pentru a îmbunătăți optica pentru
razele X dure, care au o putere de penetrare
mai mare.