CRISPER 基因

编辑项目
陈家弘，秦绍杰
印瑞麟，朱伊嘉
 • 在微信群里，老师向我们发了两篇文献，
《 CRISPR/Cas9 全基因组筛选在生命科学中的应
用》与《 Programmed genome editing by a
miniature CRISPR-Cas12f nuclease 》
目前与教授的 • 5/2 日，通过腾讯会议，教授向我们教授关于
沟通 CRISPER 编辑的基本原理以及 CRISPER 除去基因
编辑的其他应用
• 同时，教授也说明了我们编辑的目标以及我们
所用的工具（ Cas 12f)
• 教授与我们告知了大概的时间规划（见下文）
• 我们在微信群中向教授提问不懂之处
 • 现在至六月，继续搜素相关文献，询问
教授技术原理
• 6 月底，教授将进一步向我们展示技术

后续计划
细节与实验室操作的内容
• 暑假，将根据疫情情况，安排进实验室
的时间以及人员安排
• 若可以进实验室，将在暑假对成果进行
记录
团队分工与合作

• 去实验室时，小组成员将一同前去学习，若时间安排不一致，将
按假期安排分批前去。
• 实验中具体操作，如设计引物， PCR 扩散，酶切等，尽可能让所
有人都参与其中。
• 秦同学做数据记录，印同学做数据整理，一起做数据分析，并由
陈同学，朱同学主写。 ( 拟定）
CRISPR-CAS 系统的发现及其在细菌中的作用
• 古细菌和细菌针对外来遗传物质的一种获得性免疫系统
• 广泛存在于 46% 的细菌与 90% 的古细菌中
• Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats
• CRISPR-associated nucleases
 适应性阶段

表达阶段

免疫干扰阶段
Crisper-Cas 系统在基因编辑中的应用
• Crisper 系统和靶位点结合并切割
• 重组 -- 同源重组 & 非同源重组
• 应用：基因敲除，基因敲入，抑制激活等
本项目所进行的内容
• 对 crRNA 的 spacer 进行编辑 （约 20 个碱基序列）——定位目标
序列
• 对同源臂进行编辑——以达成同源重组

Cas9 基因组编辑原理示意
双链断裂 图
（ DSB)
 CRISPR/Cas9 介导的
链霉菌基因组编辑技
术示意图

• 图中为 Cas9 系统进行的编辑，我们要做的是 cas12f 系统进行的

编辑，但图示基本类似
• 我们的编辑目标其一就是 crRNA 中的 spacer
• 另外一部分即为上图所示的“ Homology arm” ，即同源臂
 编辑目的
• 我们编辑的目标是帕链霉
菌 , 为基于基因工程的高
产优产奠定基础。
• 雷帕霉素作为免疫抑制剂
• 临床上用于器官移植的抗
排斥反应和自身免疫性疾
病的治疗
• 免疫抑制活性强，具有毒
性低，用量小的优点
• 能够延长雄性（ 9% ）和
雌性小鼠（ 14% ）的寿
命
• 具有抗癌效果