Ciclo Celular

To Divide or not to divide, that is

the question

Biologa Celular 2005-06

The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2001

"for their discoveries of key regulators of the cell cycle

" Leland H. Hartwell
1/3 of the prize USA Fred Hutchinson Cancer Research Center Seattle, WA, USA b. 1939

R. Timothy (Tim) Hunt

1/3 of the prize United Kingdom Imperial Cancer Research Fund London, United Kingdom b. 193

Sir Paul M. Nurse

1/3 of the prize United Kingdom Imperial Cancer Research Fund London, United Kingdom b. 1949

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http://www.nobel.se/medicine
The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2001
The Nobel Assembly at Karolinska Institutet has awarded the Nobel Prize in Physiology or Medicine jointly to Leland Hartwell, Tim Hunt and Paul Nurse for their discoveries of "key regulators of the cell cycle". Using genetic and biochemical methods, they identified the molecules CDK and cyclin that control the cell cycle in eukaryotic organisms. These fundamental discoveries have a profound impact on many aspects of biology and medicine.
CDK and cyclin are key molecules that control and coordinate DNA-synthesis, chromosome separation and cell division. CDK and cyclin together drive the cell from one cell cycle phase to the next.

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The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2002

"

for their discoveries concerning genetic regulation of organ development and programmed cell death"
1/3 of the prize United Kingdom The Molecular Sciences Institute Berkeley, CA, USA b. 1927 (in Union of South Africa)

Sydney Brenner

H. Robert Horvitz

1/3 of the prize USA Massachusetts Institute of Technology (MIT) Cambridge, MA, USA b. 1947

1/3 of the prize United Kingdom The Wellcome Trust Sanger Institute Cambridge, United Kingdom b. 1942

John E. Sulston

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Ciclo Celular
1858 Rudolf Virchow Doctrina celular

Objetivos: -Estudiar los mecanismos que controlan y coordinan la proliferacin celular. -Estudiar el ciclo celular. Ciclo celular: Sucesos celulares que se producen de modo repetido y que dan lugar a la proliferacin celular, es decir a la formacin de dos clulas hijas.
Crecimiento celular / Divisin en clulas hijas Control de la maquinaria necesaria Biologa Celular 2005-06

Clasificacin de las clulas en funcin de su capacidad proliferativa

1- Clulas con especializacin estructural extrema, como las clulas nerviosas, clulas musculares o eritrocitos que han perdido la capacidad de dividirse. Una vez diferenciadas, permanecen en este estado hasta su muerte. 2- Clulas que normalmente no se dividen, pero que pueden iniciar la sntesis de DNA cuando se enfrentan a un estmulo apropiado (hepatocitos y linfocitos) 3- Clulas que normalmente poseen un nivel relativamente alto de actividad mittica, (las clulas madre, (stem cells).

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2.1 Tipos 2.A Tipos celulares celulares // Biologa Biologa del del cultivo cultivo

qu podemos cultivar? Mantener en cultivo : casi todo Cultivar : solo lo que prolifera

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Clulas madre (Stem cells)

Propiedades: - No est totalmente diferenciada - Se puede dividir sin lmites - Cuando se divide, cada clula hija puede permanecer como clula madre o puede iniciar una va que conduce irreversiblemente hacia la diferenciacin terminal.

Obtencin: tejidos adultos embriones

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Sistemas Experimentales
-Cultivos celulares. -Saccharomyces cerevisae. -Shizosaccharomyces pombe. -Xenopus laevis

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Longitud de ciclo : levadura unicelular : 90-120 min fibroblasto en cultivo 24-32 h hepatocito humano in situ : 1 ao

Interfase versus mitosis

1h

Embriogenesis Caenorhabditis, Lodish 5th edit

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Fases del ciclo celular

13.1 The cell cycle is an ordered series of events leading to the replication of cells
M: Comprende la mitosis y la citocinesis

G2: Entre S y M, tiempo adicional para el crecimiento.

G0: Detenimiento del ciclo.

S: Duplicacin del DNA

Copyright (c) by W. H. Freeman and Company

G1: Entre M y S, tiempo adicional para el crecimiento.

Figure 13-1

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G0 Resting phase G1 S DNA Synthesis G2 M Mitosis- cell division

INTERPHASE
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Interfase G1
-Primera fase de crecimiento -Los orgnulos se replican -Se incrementa la sntesis de protenas y RNA (no DNA) -En funcin de factores ambientales y las condiciones de desarrollo la clula entra en fase Go o se empieza a dividir (G1).

G1, la decisin de dividirse.......

-Est determinada por factores de crecimiento (PDGF, FGF) -Puede inhibirse por el contacto clula-clula, la densidad celular, la perdida de adhesin y los niveles de nutrientes. -Funcionalmente est controlado por la activacion de Cdk.
CDK and cyclin are key molecules that control and coordinate DNA-synthesis, chromosome separation and cell division. CDK and cyclin together drive the cell from one cell cycle phase to the next. Biologa Celular 2005-06

Fase S
- Se dobla la cantidad de DNA en la clula. - Todos los cromosomas se replican. Los orgenes de replicacin en los cromosomas eucariotas Nmero elevado Activacin en bloques : tempranos / medios / tardios Relacionado con el grado de compactacin de la cromatina Secuencias cortas de DNA : (A/T)TTTAT(A/G)TTT(A/T) 11 bp repetidas cmo se evita la re-activacin de un origen de replicacin ya replicado? Las secuencias ya replicadas contienen nucleosomas con histonas de nueva sntesis, reconocidas por CAF-I (Chromatin Assembly Factor I). Las histonas de nueva sntesis son acetiladas en dos lisinas, y deacetiladas por accin de CAT al final de G2, antes de la entrada en mitosis.
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Fase G2
-Continua el crecimiento celular, por lo que se requiere de sntesis de protenas y RNA. -Al final de esta fase las clulas poseen: -Ncleo con envoltura nuclear -nucleolos presentes en el ncleo -cromosomas duplicado -dos pares de centriolos (animales) - altos niveles de MPF (factor promotor de la maduracin.

M: Mitosis To divide or not to divide that is the question?

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Root tip of onion has cells in various phases of cell division

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Cules son los mecanismos de control del ciclo celular? Modelos de estudio : Clulas de mamfero en cultivo Levaduras de fusin (Shizosacaromices pombe) Levaduras de gemacin (Sacaromices cerevisiae) Huevos de anfibio (Xenopus laevis)
Experimentos de fusin celular con clulas de mamfero cultivadas -G1, S o G2 + M desintegracin envoltura nuclear y condensacin de cromosomas Complejos ciclina-CDK de fase M

-G1 + S sintentizan DNA tanto G1 como S -G2 + S sintetiza DNa solo S

Complejos ciclina-CDK de fase S Biologa Celular 2005-06

Identificacin de los genes crticos de control de ciclo en levaduras : clonaje por complementacin funcional. IDENTIFICACIN DE cdc28 (homlogo a CDK1)

Los genes humanos complementan en levaduras : gran conservacin evolutiva Biologa Celular 2005-06

Control del ciclo celular

Cdks (quinasas dependientes de ciclinas): Enzimas claves para la progresin del ciclo celular, catalizan la transferencia de un fosfato del ATP al grupo hidroxilo de serinas y treoninas de diferentes protenas. Presentes a lo largo de todo el ciclo celular, se activan temporalmente por accin de las ciclinas. Levaduras: Cdc28 Saccharomyces cerevisae Cdc2 Shizosaccharomyces pombe Mamferos: Cdks1-10

Regulacin del ciclo en levaduras

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Modelo de oocitos de Xenopus y ensayo de actividad MPF (Maturing Promoting Factor)

8 meses 5%

MPF de clulas de mamfero detenidas en metafase (colchicina) actan sobre la maduracin de oocitos de Xenopus MPF es el factor difusible que induce a la entrada en M en las fusiones celulares Biologa Celular 2005-06

Identificacin de la ciclina B en huevos de erizo de mar (divisiones sincrnicas)

Marcaje con S35-metionina de huevos de erizo de mar fecundados sincrnicamente y analizados por autoradiografa cada 10 min y observacin de mitosis.

Mximo entre 66 y 76 min y despus con un mximo a 106 y desaparicin a 126)

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Ciclinas
- Constituyen una familia de protenas que se unen y activan de manera especfica a las diferentes Cdks. - Sus concentraciones se elevan y descienden siguiendo un patrn predecible conforme la fase del ciclo celular. - Cada ciclina tiene un nico patrn de expresin durante el ciclo celular.

Ciclina B1 en HeLa (Lodish 5th edit)

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Variaciones sincrnicas de actividad MPF y ciclina B en las mitosis sincrnicas en un huevo de Xenopus fertilizado Extractos de huevos de Xenopus no fertilizados + ncleos de espermatozoides

La entrada en mitosis precisa la acumulacin de ciclina B, y su salida requiere de la desaparicin de la ciclina B. Por analoga se propone que es necesaria una elevada actividad MPF para entrar en mitosis y que desaparezca MPF para salir de mitosis. Familia de ciclinas B : 2 ciclinas B; ciclina A Biologa Celular 2005-06

Regulacin de los niveles de ciclina mittica en las clulas embrionarias tempranas de Xenopus. APC : complejo promotor de la anafase
Ciechanover and Saadon (2004) N-terminal ubiquitination : more protein substrates join in TCB 14: 103-106

N-ter, ciclin destruction box

Jackson et al. (2000) The lore of the RINGs :substrate recognition ans catalysis by ubiquitin ligases TCB 10: 429-439

Factor de especificidad

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Ciclina B1 en HeLa (Lodish 5th edit)