DRUG DEVELOPMENT PROCESS: Stages of Drug Development Any drug development process must proceed through several stages

in order to produce a product that is safe, efficacious, and has passed all regulatory requirements. Detailed Stages of Drug Development 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Discovery Product Characterization Formulation, Delivery, Packaging Development Pharmacokinetics And Drug Disposition Preclinical Toxicology Testing And IND Application Bioanalytical Testing Clinical Trials

Discovery Discovery often begins with target identification choosing a biochemical mechanism involved in a disease condition. Drug candidates, discovered in academic and pharmaceutical/biotech research labs, are tested for their interaction with the drug target. Up to 5,000 to 10,000 molecules for each potential drug candidate are subjected to a rigorous screening process which can include functional genomics and/or proteomics as well as other screening methods. Once scientists confirm interaction with the drug target, they typically validate that target by checking for activity versus the disease condition for which the drug is being developed. After careful review, one or more lead compounds are chosen. Product Characterization When the candidate molecule shows promise as a therapeutic, it must be characterizedthe molecules size, shape, strengths and weaknesses, preferred conditions for maintaining function, toxicity, bioactivity, and bioavailability must be determined. Early stage pharmacology studies help to characterize the underlying mechanism of action of the compound. Formulation, Delivery, Packaging Development Drug developers must devise a formulation that ensures the proper drug delivery parameters. It is critical to begin looking ahead to clinical trials at this phase of the drug development process. Drug formulation and delivery may be refined continuously until, and even after, the drugs final approval. Scientists determine the drugs stabilityin the formulation itself, and for all the parameters involved with storage and shipment, such as

heat, light, and time. The formulation must remain potent and sterile; and it must also remain safe (nontoxic). Pharmacokinetics And Drug Disposition Pharmacokinetic (PK) or ADME (Absorption/Distribution/Metabolism/Excretion) studies provide useful feedback for formulation scientists. PK studies yield parameters such as AUC (area under the curve), Cmax (maximum concentration of the drug in blood), and Tmax (time at which Cmax is reached). Later on, this data from animal PK studies is compared to data from early stage clinical trials to check the predictive power of animal models. Preclinical Toxicology Testing And IND Application Preclinical testing analyzes the bioactivity, safety, and efficacy of the formulated drug product. This testing is critical to a drugs eventual success and, as such, is scrutinized by many regulatory entities. During the preclinical stage of the development process, plans for clinical trials and an Investigative New Drug (IND) application are prepared. Studies taking place during the preclinical stage should be designed to support the clinical studies that will follow. The main stages of preclinical toxicology testing are: Acute Studies Acute tox studies look at the effects of one or more doses administered over a period of up to 24 hours. The goal is to determine toxic dose levels and observe clinical indications of toxicity. Usually, at least two mammalian species are tested. Data from acute tox studies helps determine doses for repeated dose studies in animals and Phase I studies in humans. Repeated Dose Studies Depending on the duration of the studies, repeated dose studies may be referred to as subacute, subchronic, or chronic. The specific duration should anticipate the length of the clinical trial that will be conducted on the new drug. Again, two species are typically required. Genertic Toxicity Studies These studies assess the likelihood that the drug compound is mutagenic or carcinogenic. Procedures such as the Ames test (conducted in bacteria) detect genetic changes. DNA damage is assessed in tests using mammalian cells such

as the Mouse Micronucleus Test. The Chromosomal Aberration Test and similar procedures detect damage at the chromosomal level. Reproductive Toxicity Studies Segment I reproductive tox studies look at the effects of the drug on fertility. Segment II and III studies detect effects on embryonic and post-natal development. In general, reproductive tox studies must be completed before a drug can be administered to women of child-bearing age. Carcinogenicity Studies Carcinogenicity studies are usually needed only for drugs intended for chronic or recurring conditions. They are time consuming and expensive, and must be planned for early in the preclinical testing process. Toxicokinetic Studies These are typically similar in design to PK/ADME studies except that they use much higher dose levels. They examine the effects of toxic doses of the drug and help estimate the clinical margin of safety. There are numerous FDA and ICH guidelines that give a wealth of detail on the different types of preclinical toxicology studies and the appropriate timing for them relative to IND and NDA or BLA filings. (See Regulatory/Animal Welfare and at www.fda.gov/cder/guidance/index.htm.) Bioanalytical Testing Bioanalytical laboratory work supports most of the other activities in the drug development process. The bioanalytical work is key to proper characterization of the molecule, assay development, developing optimal methods for cell culture or fermentation, determining process yields, and providing quality assurance and quality control for the entire development process. It is also critical for supporting preclinical toxicology/pharmacology testing and clinical trials. Clinical Trials Clinical studies are grouped according to their objective into three types or phases: Phase I Clinical Development (Human Pharmacology) - Thirty days after a biopharmaceutical company has filed its IND, it may begin a small-scale Phase I clinical trial unless the FDA places a hold on the study. Phase I studies are used to evaluate pharmacokinetic parameters and tolerance, generally in healthy

volunteers. These studies include initial single-dose studies, dose escalation and short-term repeated-dose studies. Phase II Clinical Development (Therapeutic Exploratory) - Phase II clinical studies are small-scale trials to evaluate a drugs preliminary efficacy and sideeffect profile in 100 to 250 patients. Additional safety and clinical pharmacology studies are also included in this category. Phase III Clinical Development (Therapeutic Confirmatory) - Phase III studies are large-scale clinical trials for safety and efficacy in large patient populations. While phase III studies are in progress, preparations are made for submitting the Biologics License Application (BLA) or the New Drug Application (NDA). BLAs are currently reviewed by the FDAs Center for Biologics Evaluation and Research (CBER). NDAs are reviewed by the Center for Drug Evaluation and Research (CDER).

Study in animals or pre-clinical testing The pre-clinical testing evaluates the efficacy and the toxicity of the product before its possible administration to human beings. Assessment of the efficacy Whatever the drug selected, an analgesic, an antibiotic, it is necessary to determine thoroughly its principal property, to specify by a systematic study any other possible parallel effect on the other systems: cardiovascular, respiratory, renal, etc. A systematic exploration of all the possible effects of a drug is always necessary. These studies, which it is not possible to quote here, are carried out in live animals, on isolated organs, isolated cells, isolated cellular fractions, enzymes, receptors. They specify the properties and the mechanisms of action. Generally, pharmacokinetic studies are carried out in parallel to the preceding ones, particularly to find the main metabolites. Assessment of toxicity Acute toxicity Study of mortality after a single administration of the product to an animal species allows the determination of the lethal dose 50, or LD50, which is the dose which

kills 50% of the treated animals in a determined time, for example eight days. The study is conducted on different animal species, mouse, rats which receive different doses of the product studied, administered under well defined conditions. One notes mortality but also all other modifications which appear. LD50 of the same product depends on the animal species and the route of administration; it is generally lower (i.e. toxicity is higher) by parenteral route than by oral route. Chronic toxicity Chronic toxicity consists in studying the consequences of repeated administrations of the investigated product. The product is given daily, one or twice a day, for a more or less long length of time, three to six months, in general, according to the duration of administration envisaged in humans. The experimentation is carried out in two or three adult different animal species, mouse, rats, rabbits, receiving each one generally three different doses (low, medium, high) of the product. When the drug is intended for a pediatric use, a complementary experimentation on young animals, a few days old for example, can be useful to detect a possible particular toxicity in children. The signs of toxicity are examined clinically: aspect, weight, intake of food and drink, behaviour and biologically: hematologic, biochemical, pathological parameters. These studies are very expensive and are undertaken only when the product is supposed to become a drug. More and more, in vitro tests supply information on the potential toxicity of compounds, but they are not sufficient to avoid the experimentation on the whole animal before the administration to humans. Toxicity and reproduction Any molecule, studied as a potential drug can be suspected to modify sexual activity, fertility and offspring if it is taken during pregnancy. Sexual activity and fertility The modifications of the sexual activity after administration of the product can be detected by studying couplings and fertility (frequency of gestations). A study of the spermatozoa can also be undertaken.

Effect on the offspring A compound can have toxic effects on the offspring whatever the moment of gestation where it is taken and more particularly during embryogenesis. The terms of teratogen, embryotoxic and foetotoxic are used to characterize the toxicity of a compound. Restricted to the etymological meaning, a compound is teratogenic when taken by the mother during gestation, it elicits visible malformations in the offspring, as those caused by thalidomide. But if, for example, the toxic effect results in deafness, the term teratogen can still be employed in an extended sense: any morphological or functional damage or growth retardation elicited in the offspring by the intake of a drug by the mother during gestation. To indicate the toxic effects elicited during the period of embryogenesis (the first two months of the pregnancy in mankind) the word embryotoxic is used and to indicate the alterations induced during the second phase of the pregnancy (starting from the beginning of the third month) the term foetotoxic is used. In this last case, it can be a question, for example of a growth delay. The teratogenic activity of a product is demonstrated by the advent of morphologic or functional abnormalities in the offspring of females treated during gestation. The experimentation is carried out on three animal species, in repeated administrations and at several doses. It involves the examination of the animals at birth and possibly later on. If important or frequent anomalies are observed, the product is contraindicated in pregnant women. If the anomalies are not more frequent than those occurring spontaneously, the teratogenic risk is low. The absence of teratogenic effect of a product in two animal species, rat and rabbit, is an essential data which however does not guarantee its total safety in pregnant women; often the pharmaceutical laboratory can, in spite of this absence of teratogenic effect in animals, disadvise the use of the drug by pregnant women. Moreover, one can study the possible repercussion of a product administered to the female in gestation on the postnatal development of his offspring of the firstgeneration and possibly to the following ones. Perinatal effect The accidents of perinatality are disorders which occur in the new-born baby in the majority of the cases following the intake of a drug by the mother little before the labor and of its diffusion through the placenta (for example drowsiness of the neonate after the intake of a sedative by the mother). More rarely the new-born baby can show a withdrawal syndrome consecutive to the discontinuation of the supply of a drug by the mother through the placenta.

Mutagen risk The mutagen risk of a drug consists of the damage of the genome, i.e. deoxyribonucleic acid or DNA. A mutation consists of a change in a sequence of nucleotides in the genome. This change can be with or without consequences. If the change affects the genome of the germ cells, it is transmissible to the following generations. The search for mutations, part of genetic toxicology, is performed using in vitro tests on mutant strains, for example Salmonella Typhymurium. Carcinogenic risk To know if a product could increase the risk of cancers, it should be administered daily for a long time, from one to three years, to mice or rats. The experiment must be performed on animals of the two sexes. This research is especially important for the drugs used for long lengths of time. Anticancer drugs, immunosuppressive agents can induce cancers.

Uji preklinik Klasifikasi uji in vitro adalah uji pada mikroba jika antibiotic; pada sel kanker dari hewan utk obat anti kanker; pada plasmodium utk obat anti malaria; pada jamur missal candida pada obat anti keputihan/candidiasis; pada cacing utk obat cacing; pada virus utk obat antivirus; pada bagian organ tertentu dari hewan contoh obat asma bronkodilator diuji pada otot polos trachea marmot; pada jantung hewan dalam chamber utk obat angina dan aritmia; dll. uji in vivo digunakan hewan utuh dan kondisi hidup (baik sadar atau teranestesi). a. Uji Toksisitas Akut o Pengertian Uji toksisitas merupakan uji keamanan pra-klinis untuk penapisan spectrum efek toksik. Penelitian ini dirancang untuk menentukan dosis letal median (LD50) toksikan. Uji

toksisitas ini dengan menggunakan hewan roden dan non roden. Pengujian ini dapat menunjukan organ sasaran yang mungkin dirusak dan efek toksik spesifiknya, serta memberikan petunjuk tentang dosis yang sebaiknya digunakan dalam pengujian yang lebih lama. o Sifat pemberian: dosis tunggal o Tujuan utama : potensi toksisitas akut (kuantitatif) menilai berbagai gejala toksik yang timbul (kualitatif) adanya efek toksik yang khas (kualitatif) mode of death (kualitatif) o Cara melakukan Uji Toksisitas Akut (1) Persiapan Hewan Coba : 1. 2 jenis hewan, saran : >4 (roden+non) 2. Jantan dan betina, satu galur, dewasa , sehat, variasi bobot 10% 4 kelompok + kontrol negatif (@ 5 ekor) 3. Kisaran dosis diperkirakan 10-90% mati 4. 3 jalur (WHO). Setidaknya 1 jalur sesuai rencana pada manusia

o Tata Laksana Uji Toksisitas Akut (2) Pengamatan 24 jam (s.d. 14 hari) Kriteria pengamatan : Secara fisik terhadap gejala toksik Perubahan berat badan Jumlah hewan mati Gros dan histopatologi organ vital

Hasil : spektrum efek toksik, LD 50 /TD 50 , potensi toksisitas b. Uji Toksisitas Kronis o Sifat pemberian: dosis berulang o Tujuan utama: Spektrum efek toksik terkait dengan organ sasaran Relasi dosis dengan spektrum efek toksik Reversibilitas spektrum efek toksik o Cara Uji Toksisitas Kronis 1. 2 jenis hewan 2. Jantan dan betina, satu galur, dewasa, sehat, variasi bobot 10%, 3 kelompok + 1-2 kontrol negatif (@ 10 ekor) 3. Kisaran dosis diperkirakan tertinggi ada yg toksik/mati, terendah tidak ada gejala; meliputi dosis terapi 4. Sesuai rencana yang dilakukan pada manusia pada manusia 5. Sebagian dari setiap kelompok dikorbankan di akhir uji 6. Sisanya (terutama dosis tertinggi &terendah) uji reversibilitas (2-4 minggu)

Uji Teratogenitas Sifat pemberian: dosis berulang Tujuan : o Menentukan apakah suatu obat dapat menyebabkan kelainan /cacat bawaan pada janin yang dikandung oleh hewan bunting o Menentukan apakah cacat tersebut terkait dengan dosis obat yang diberikan Tata Laksana Umum Uji Teratogenitas

o 2spesies, roden &non-roden masih perawan dan daur estrusnya teratur satu galur, dewasa sehat, variasi bobot 10% o 3 kelompok tk dosis + kontrol negatif + kontrol positif (@ 20-30 ekor mencit/tikus, @ 12 ekor kelinci) Pengawinan & Penetapan masa bunting o pagi: betina fase proestrus o sore: + jantan dlm satu kandang (jam 5-6 sore) o Pagi+1: dipisahkan, apus vagina (mikroskopis) o Sperma(+) --> H0 masa bunting Dosis Teratogenik o Umumnya antara LD semua induk/janin dan dosis yg tdk menimbulkan efek teratogenik o Mungkin setara dgn dosis subtoksik pada uji toks.subkronis dgn spesies yg sama 1/4 1/3 LD50 induk o Tentatif, 1x, 2x, 4x, dst dosis tx manusia (setelah dikonversi) Pemberian Dosis o Dosis tertinggi efek negatif induk (-), misal sedasi o Dosis terendah harus meliputi dosis terapi o Setidaknya 1 jalur sesuai rencana pada manusia o 1 dd selama masa organogenesis Pengamatan o Sejak diakhirinya masa bunting, 12-14 jam pra partus normal (bedah Ceisar) o Kriteria pengamatan: Biometrika janin /jabang bayi Gros morfologi Histopatologi Kelainan rangka

Biometrika janin: angka kematian, angka resorpsi, angka cacat, berat plasenta, dan berat janin, perlu data : Jumlah korpora lutea pada kedua ovarium Jumlah seluruh janin dalam uterus Jumlah bayi lahir hidup dan lahir mati Jumlah bayi lahir cacat Gros morfologi, kelengkapan & kelainan : tangan, kaki, ekor, telinga, mata, bibir, celah langit, dan adanya kongesti Histopatologi : kelainan selular Kelainan rangka : sistem skeletal Pewarnaan alizarins Rerata penulangan sternum, vertebra, dan rusuk % janin dengan penulangan pada karpal dan tarsal % kelainan rangka sumbu janin Sinar-X (Ro:) Analisis &Evaluasi Perbedaan antar kelompok perlakuan : 95%) Chi Kuadrat (jumlah kematian &jumlah cacat) Anova searah Mann-Whitney (data histopatologi) Potensi teratogenitas Analisis statistik (taraf kepercayaan

Hubungan teratogenitas-dosis obat Wujud efek teratogenitas (makros&mikros, skeletal)

Uji Toksisitas Sub Kronik Secara normal uji toksisitas subkronik memerlukan studi inhalasi atau penelanan selama 90 hari untuk mengetahui efek-efek spesifik dan nyata dari bahan kimia pada organ dan biokimia dari binatang. Pengujian toksisitas sebaiknya dilakukan secara berulang-ulang dan diarahkan terutama untuk mendeteksi efek toksik yang secara jelas bukan akibat dari pemaparan kulit. Pengujian secara kasar hanya berdasarkan pengamatan abnormalitas secara pengamatan kasar dengan mata telanjang, tetapi untuk pengujian yang lebih mendalam perlu pengambilan irisan suatu jaringan dan diperiksa di bawah mikroskop untuk mengetahui terjadi abnormalitas sel-sel dalam organ. Pada umumnya dalam pengujian perlu pengambilan cuplikan darah atau urin secara teratur dari binatang percobaan untuk pemeriksaan dan analisis. Pengujianpengujian ini merupakan dasar bagi dosis yang digunakan dalam uji hayati kronik Uji hayati kronik (seumur hidup) Maksud dari uji hayati kronik (seumur hidup), untuk menentukan apakah bahan kimia dapat menimbulkan setiap efek kesehatan yang mungkin memerlukan waktu yang lama untuk menimbulkan suatu efek seperti kanker, atau paparan jangka panjang terhadap bahan kimia menimbulkan efek kesehatan pada organ seperti ginjal. Percobaan ini dilakukan dengan memberikan dosis tertentu bahan kimia terhadap hewan percobaan melalui penelanan atau inhalasi terhadap bahan kimia yang sedang diuji selama masa hidupnya. Untuk mencit dapat memakan waktu hingga 2 tahun sedangkan untuk tikus sedikit lebih singkat. Dalam suatu uji

khusus, 50 ekor rnencit atau tikus dari tiap jenis kelamin diberi perlakuan paparan bahan kimia yang sedang diuji dengan dosis tinggi tetapi tidak mematikan. Binatang percobaan ini dibandingkan dengan binatang sebagai kontrol dalam jumlah yang sama dengan jumlah binatang percobaan dalam waktu yang sama. Binatang kontrol ini serupa dalam segala hal dengan binatang percobaan, perbedaannya bahwa binatang kontrol tersebut tidak diberi perlakuan pemaparan bahan kimia. Suatu percobaan yang baik yaitu dengan memberikan perlakuan pemaparan untuk kedua jenis kelamin terhadap bahan kimia dengan dosis yang berbeda. Dalam suatu percobaan efek bahan kimia dapat menggunakan binatang percobaan hingga 500 ekor Uji Mutagenitas jangka pendek Bakteri dan sel binatang yang tumbuh dalam tabung uji dari koloni serangga buah-buahan atau serangga lain cocok untuk penyelidikan yang cepat dan rnurah dalarn usaha mengetahui bahan kirnia yang potensial mempunyai efek karsinogenik dan mutagenik. Uji yang paling baik dan paling banyak digunakan adalah uji mutagenitas Salmonella (umumnya dikenal sebagai uji Ames). Uji ini membutuhkan bakteriyang tumbuh secara khusus di laboratorium dan memaparkannya terhadap bahan kimia yang diuji. Uji tersebut untuk mendeteksi mutasi dalam bakteri yaitu untuk uji efek mutagenik. Terdapat sejumlah uji mutagenik jangka pendek yang lain atau pengujian mutagenitas (mutagenity assay). Uji ini sering kali dirujuk sebagai uji in vitro. Jadi uji ini dibedakan dengan uji in vivo yang menggunakan jaringan hidup seperti binatang dan manusia. Banyak bahan kimia dapat menyebabkan kanker pada binatang dan mungkin menimbulkan kanker pada manusia bersifat mutagenik Uji yang herhubungan dengan reproduksi Uji binatang percobaan untuk memeriksa efek yang merugikan dari suatu bahan kimia pada reproduksi memerlukan perlakuan pemaparan terhadap seekor atau kedua induk terhadap bahan kimia yang sedang diuji sebelum kawin,

kemudian diamati efek-efeknya pada setiap keturunannya. Kadang-kadang perlakuan paparannya diberikan pada seekor binatang yang sedang hamil. Efek reproduksi dapat diklasifikasikan dengan hasil-hasil temuan seperti apakah keturunannya lebih sedikit jumlahnya, bobot tubuh yang lebih ringan atau dalam beberapa hal mengalami kerusakan. Uji rnultigenerasi kadang-kadang diperlukan untuk mendeteksi efek yang dapat diwariskan bagi generasi berikutnya

Cara melakukan uji toksisitas Membuat rancangan Rancangan Penelitian Eksperimen Semua rancangan percobaan atau eksperimen mempunyai karakteristik sentral yaitu didasarkan pada adanya manipulasi variabel bebas dan mengukur efek pada variabel terikat. Rancangan eksperimen klasik terdiri dan kelompok eksperimen dan kelompok kontrol. Kelompok eksperimen, variabel bebasnya dimanipulasi. Dalam kelompok kontrol variabel terikatnya yang diukur, maka tidak ada perubahan yang dibuat pada variabel bebasnya. Secara umum ciri rancangan penelitian eksperimen yang baik adalah: 1. Subyek secara acak dipilih ke dalam kelompok-kelompok 2. Peneliti merancang manipulasi yang akan diberikan pada variabel eksperimen dan dilakukan kontrol yang ketat. 3. Terdapat setidak-tidaknya dua kelompok yaitu kelompok eksperimen dan kontrol yang satu sama lain sebagai pembanding. 4. Selalu digunakan analisis varians untuk meminimalkan varians dan error dan memaksimumkan varians dari variable yang diteliti dan berkaitan dengan hipotesis yang ditetapkan.

Oleh karena peneliti harus mampu melakukan kontrol yang ketat terhadap variabel eksperimen, maka ada tiga prinsip dasar dalam pelaksanaan rancangan eksperimen yaitu: 1. Replikasi, pengulangan dari eksperimen dasar. Hal ini berguna untuk memberikan estimasi yang lebih tepat terhadap error eksperimen dan memperoleh estimasi yang lebih baik terhadap rata-rata pengaruh yang ditimbulkan dan perlakuan. 2. Randomisasi, bermanfaat untuk meningkatkan validitas dan mengurangi bias utamanya dalam hal pembagian kelompok dan perlakuan. 3. Kontrol internal, melakukan penimbangan. bloking. dan penge4ompokan dan unit-unit percobaan yang digunakan. Hal ini bermanfaat untuk membuat prosedur yang lebih akurat, efisien, dan sensitif. Error eksperimen dalam sebuah penelitian eksperimen dapat terjadi karena beberapa hal, yaitu: a. Kesalahan dari percobaan yang sedang dilakukan. b. Kesalahan pengamatan. c. Kesalahan pengukuran. d. Variasi dan bahan yang digunakan dalam percobaan. e. Pengaruh kombinasi dari faktor-faktor luar. Semakin banyak replikasi memang membawa konsekuensi penelitian eksperimen itu mahal dan memakan waktu relatif lama. Oleh karena itu, pertimbangan untuk menentukan banyaknya replikasi sangat ditentukan oleh: a. Luas dan banyaknya jenis unit percobaan.

b. Bentuk unit percobaan. c. Variabilitas dan ketersediaan material percobaan. d. Derajat ketelitian yang diinginkan. Derajat kebebasan diharapkan tidak boleh kurang dan 10-15

1. Rancangan Eksperimental-Sungguhan (trueexperimental research) Tujuan penelitian eksperimental sungguhan adalah untuk menyelidiki kemungkinan saling hubungan sebab-akibat dengan cara mengenakan kepada satu atau lebih kelompok eksperimental satu atau lebih kondisi perlakuan dan memperbandingkan hasilnya dengan satu atau lebih kelompok kontrol yang tidak dikenai kondisi perlakuan. Rancangan eksperimental sungguhan yang cukup dikenal adalah: a. Post test-only Control group design Dalam model rancangan ml, kelompok eksperimen dan kelompok kontrol dibentuk dengan prosedur random, sehingga keduanya dapat dianggap setara. Selanjutnya kelompok eksperimen diberikan perlakuan. Setelah perlakuan telah diberikan dalam jangka waktu tertentu, maka setelah itu dilakukan pengukuran variabel terikat pada kedua kelompok tersebut, dan hasilnya dibandingkan perbedaannya. Model rancangan ini cocok untuk kondisi yang tidak dimungkinkan diakukan pre test atau ketika dikhawatirkan akan adanya interaksi antara pre test dengan perlakuan yang diberikan. Rancangan ml mampu mengendalikan faktor histori, maturasi, dan pre tes, tetapi tidak mampu mengukur besarnya efek dan faktor-faktor tersebut. b. Pre test-post tes control group design

Rancangan ini lebih baik dan rancangan eksperimen tanpa pre tes, karena akan lebih akurat dalam memperoleh akibat dan suatu perlakuan dengan perbandingan keadaan dan variabel terikat pada kelompok eksperimen setelah dikenal perlakuan dan variabel kontrol yang tidak dikenai oleh perlakuan. c. Solomon four group design Rancangan solomon ini memang tidak banyak digunakan pada jumlah sampel penelitian yang kecil, namun pada penelitian pertanian dan sosial sering digunakan. Rancangan ini memiliki keunggulan untuk mengurangi pengaruh pre-test terhadap unit percobaan dan mengurangi error interaksi antara pre-test dengan perlakuan. Rancangan ini terdiri dari 4 kelompok, yaitu 2 kelompok yang dilakukan pre test-post tes dan 2 kelompok yang dilakukan pre tesposttes. Secara konkret dapat dijelaskan sebagai berikut: 1. kelompok perlakuan dan kontrol dengan pre test. 2. kelompok perlakuan dan kontrol tanpa pre test. Khusus faktorial, pada dasarnya bukan merupakan rancangan penelitian, tetapi memang sebuah penelitian eksperimen. Oleh karena itu eksperimen faktorial bisa didekati dengan berbagai rancangan, misalnya dengan randomized complete block. Keuntungan dan eksperimen faktorial adalah dimungkinkan untuk mengetahui pengaruh interaksi antar faktor. Oleh karena itu, semua prinsip dasar penelitian eksperimen harus tetap ada, agar error eksperimen dapat diukur. 2. Rancangan Eksperimental Semu (Quasi-Experimental Research)

Tujuan rancangan eksperimental-semu adalah untuk memperoleh informasi yang merupakan perkiraan bagi informasi yang dapat diperoleh dengan eksperimen yang sebenarnya dalam keadaan yang tidak memungkinkan untuk mengontrol dan/atau memanipulasikan semua variabel yang relevan. Si peneliti harus dengan jelas mengerti kompromi apa yang ada pada validitas internal dan validitas eksternal rancangannya dan berbuat sesuai dengan keterbatasan-keterbatasan tersebut. Ciri-ciri rancangan eksperimen semu adalah: a. Manipulasi eksperimen hanya pada variabel bebas. b. Tidak ada pemilihan secara acak untuk kelompok dan atau c. Tidak ada kelompok kontrol. 3. Rancangan penelitian uji klinik Rancangan penelitian uji klinik sangat khas karena berkaitan dengan pencapaian tujuan untuk mengetahui khasiat obat, efek samping obat, dosis optimal untuk orang Indonesia, dan membandingkan efek obat lain. Dalam hal ini rancangan penelitian uji klinik bersifat eksperimental dan komparatif. Oleh karena itu dalam rancangan uji klinik, dikenal perlakuan dan plasebo. Plasebo adalah bahan inert, tidak berkhasiat, tidak mempunyai efek metabolik yang berarti, tidak toksik, tidak alergenik, dan tidak memiliki efek farmakologik terhadap penyakit yang sedang diobati. Plasebo harus diberikan dalam keadaan yang sama dengan obat yang diteliti dalam arti : bentuk, rasa, dan warna, sehingga penderita tidak dapat membedakannya dengan obat yang diteliti.

Prosedur pengujian dapat dibagi menjadi 4 tahapan kegiatan, yaitu pemilihan hewan uji, pemberian perlakuan, pengamatan dan pelaporan. 1. Pemilihan Hewan Uji. Paling tidak hal yang harus diperhatikan dalam memilih hewan uji, yaitu : a. species dan strain hewan yang akan digunakan, b. usia, c. jenis kelamin dan d. jumlahnya.

Species mamalia yang umum digunakan adalah tikus, mencit dan kelinci. Untuk unggas digunakan embrio ayam (percobaan in ovo). Kemajuan teknik laboratorium yang ada sekarang dan reaksi dari pemerhati hak binatang telah membuka kemungkinan penggunaan hanya organ, jaringan atau sel saja menggantikan hewan uji (kultur organ atau kultur sel melalui percobaan in vitro). Teknik ini sangat penting terutama dalam upaya mengungkap mekanisme teratogenesis suatu agensia. Di Indonesa hewan uji yang populer digunakan adalah mencit dan tikus, karena itu tulisan ini selanjutnya akan membicarakan pengujian dengan menggunakan hewan uji tersebut.

Hewan betina yang digunakan adalah betina dara sedangkan untuk jantan dipilih pejantan yang sudah terbukti baik fertilitasnya. Hewan dikawinkan di malam hari dengan cara mencampur 1 jantan dengan 3 betina dalam satu kandang. Jika keesokan harinya ditemukan adanya sumbat vagina (vaginal plug) atau adanya sperma di vagina yang dideteksi melalui pemeriksaan mikroskopis apusan vagina, maka itu pertanda perkawinan sudah berlangsung dan hari tersebut dtentukan sebagai hari ke nol kebuntingan.

Jumlah hewan uji yang digunakan paling tidak sebanyak 20 ekor betina bunting untuk tiap kelompok perlakuan. Karena kelompok perlakuan

biasanya terdiri atas paling tidak 3 taraf dan 1 kelompok kontrol, maka jumlah hewan bunting yang dibutuhkan adalah 80 ekor. 2. Pemberian Perlakuan.

Untuk agensia berupa senyawa kimia, dosis tertinggi perlakuan sebaiknya tidak > 1000 mg/kg berat badan per hari dengan pemberian per oral atau subkutan, sedangkan untuk agensia lain disesuaikan dengan besaran paparan yang mungkin diterima dari lingkungan.

Dosis tertinggi sebaiknya lebih kecil dari angka LD-50 dan 2 kelompok dosis berikutnya ditata dengan interval sama di bawah dosis tertinggi tadi (misalnya LD-50, 2/3 LD-50, 1/3 LD-50, dan kontrol).

Kelompok kontrol disesuaikan dengan percobaan. Aturan yang umum digunakan adalah apabila agensia dilarutkan dengan suatu pelarut maka kepada kelompok kontrol diberikan pelarut saja dengan cara pemberian yang persis sama dengan cara pemberian pada kelompok perlakuan. Untuk kontrol positif dapat dipilih agensia-agensia yang sudah dikenali memiliki efek teratogenik. Penggunaan kontrol positip adalah untuk menilai kepekaan strain yang digunakan.

Cara pemberian perlakuan yang paling umum adalah pemberian per oral (pencekokan). Cara lain dapat dipilih dengan pertimbangan khusus, seperti inhalasi, subkutan, intraperitoneal atau intramuskuler. Pertimbangan utama dalam pemilihan cara-cara itu adalah kemiripannya dengan cara masuk agensia toksis tadi ke dalam tubuh.

Durasi perlakuan disesuaikan dengan tujuan pengujian. Untuk pengujian toksisitas perkembangan umum perlakuan dapat diberikan selama masa kebuntingan. Dapat juga diberikan perlakuan tunggal 1 kali saja pada titik waktu spesifik jika yang akan diamati adalah efek suatu agensia terhadap perkembangan organ tertentu.

Yang paling umum dilakukan adalah pemberian perlakuan dalam beberapa hari saja, yaitu selama masa organogenesis (hari ke 6 hingga hari ke 15).

3. Pengamatan.

Meskipun pengujian ini disebut uji tokskologi perkembangan ruang lingkup pengamatan tidaklah terbatas pada embrio yang sedang berkembang itu saja melainkan juga mencakup beberapa bagian pengamatan terhadap induk.

Induk hewan coba diamati kondisi kesehatannya setiap hari dan hal-hal khusus seperti adanya gejala keracunan atau kematian dicatat. Berat badan ditimbang paling tidak sekali 3 hari. Data berat badan selain sebagai petunjuk efek toksik terhadap induk juga digunakan untuk menentukan jumlah pemberian perlakuan (mg/kg berat badan). Hewan coba dipelihara dengan baik selama kebuntingan dan selanjutnya dikurbankan 1 hari sebelum melahirkan (tikus hari ke-20/21; mencit hari ke-19). Betina tidak dibiarkan sampai melahirkan karena jika itu terjadi ia akan memakan anak-anaknya yang cacat. Hewan uji dibedah caesar dengan membuat irisan di garis tengah ventral tubuh mulai dari area bukaan genitalia hingga ke leher. Rongga perut dan rongga dada dibuka dan organ dalam tubuh diamati. Uterus diangkat dan ditimbang bersama-sama dengan embrio di dalamnya. Selanjutnya uterus ditempatkan di dalam cairan fisiologis, lalu dibelah dan embrionya dilepas.

Pada saat ini juga status implantasi dipastikan: fetus yang berkembang penuh dan merespon sentuhan dikategorikan fetus hidup; fetus yang berkembang penuh dan tidak ada tanda-tanda autolisis tetapi tidak merespon sentuhan dikategorikan fetus mati; implantasi yang menunjukkan adanya ciri-ciri fetus tetapi mengalami autolisis digolongkan sebagai fetus yang diresorpsi pada tingkat lanjut (late

resorption); implantasi yang tidak menunjukkan adanya karakteristik fetus digolongkan pada fetus yang mengalami resorpsi dini (early resorption). Selanjutnya ovarium diamati dan jumlah corpora lutea dihitung. Jumlah corpora lutea umumnya bersesuaian dengan jumlah implantasi karena corpora lutea adalah petunjuk folikel yang berovulasi dan berubah menjadi badan hormonal yang berperan dalam mempertahankan kebuntingan. Kehilangan sebelum implantasi dapat dihitung berdasarkan selisih antara jumlah corpora lutea dengan jumlah implantasi.

Tanda-tanda keracunan induk diamati pada organ-organ visceral. Kelenjar timus diamati ukuran, warna dan adanya tanda-tanda hemoragi. Pulmo diamati ukuran, warna dan jumlah lobusnya, demikian juga hepar diamati ukuran, warna, tekstur dan jumlah lobusnya. Lambung dibuka dengan sayatan sepanjang curvatura besar dan permukaan mukosalnya diamati. Ginjal diamati bentuk, ukuran, warna dan kelainan yang mungkin terlihat dari luar, dan selanjutnya dibelah untuk mengamati struktur internalnya. Tiap-tiap kelainan dicatat dan sedapat mungkin didokumentasikan dengan fotografi dan jaringan yang mengalami kelainan tersebut difiksasi dengan formalin atau larutan Bouin dan diproses melalui metode parafin untuk pembuatan sediaan bagi pengamatan histologis.

Pengamatan fetus dimulai dengan penimbangan berat badan. Penimbangan hendaknya dilakukan ketika fetus masih segar (segera setelah uterus dibuka, sebelum fetus difiksasi). Pengamatan malformasi dimulai dari daerah kepala. Pertama-tama diperhatikan bentuk dan ukuran kepala serta adanya tanda-tanda gangguan penutupan (closure defect). Di kepala harus terdapat 2 tonjolan mata (masih tertutup), 2 nares, 5 papila fascialis,dan 2 pinnae. Mulut dan bibir diamati ukuran, betuk dan adanya gangguan perkembangan. Mulut dibuka untuk

mengamati dan memastikan ada tidaknya celah di langit-langit mulut (cleft palate). Kemudian aspek ventral dan dorsal tubuh diamati apakah ada closure defect, dan dilanjutkan dengan pengamatan tungkai. Pada tungkai diamati ukuran, kelengkapan ruas dan arah rotasi / fleksi bahu, siku, telapak dan jemari. Jumlah jemari (masing-masing 5 depan dan 5 belakang) dihitung dan adanya kelainan pada jumlah ukuran, fusi atau adanya selaput dicatat. Ekor juga diamati keberadaan, ukuran dan pembengkokannya. Ekor selanjutnya diangkat dan jarak antara bukaan anus dengan genitalia diperkirakan untuk penentuan jenis kelamin (jarak tersebut sangat dekat pada betina dan jauh pada jantan). Selanjutnya kira-kira setengah bagian dari jumlah fetus yang diperoleh difiksasi dengan alkohol 95 % dan setelah beberapa hari dieviserasi dan dikuliti. Fiksasi dipertahankan hingga 2 mnggu, kemudian fetus diwarnai dengan Alcian blue dan Alizarin Red S dan selanjutnya dibuat transparan dalam gliserin. Dengan teknik ini dapat diamati secara langsung komponen tulang (merah) dan kartilago (biru) fetus dan kelainannya. Pengamatan rangka meliputi adanya hambatan atau percepatan penulangan, kelainan bentuk dan jumlah komponen rangka. Rangka diamati mulai dari cranium, sternum, columna vertebralis, os pectoralis, os pelvis, tulangtulang tungkai dan terutama jemari. Jumlah komponen tulang telapak dan jemari yang telah mengalami penulangan dihitung. Kelainan struktur komponen rangka yang sering teramati adalah hambatan osifikasi, penambahan atau pengurangan jumlah costae, centrum vertebra berbentuk kupu-kupu, costae menggelombang, fusi rusuk, fusi vertebra, tungkai pekuk dan lain-lain Pelaporan PENGENALAN HEWAN COBA

Hewan coba atau sering disebut hewan laboratorium adalah hewan yang khusus diternakkan untuk keperluan penelitian biologik. Hewan labboratorium tersebut digunakan sebagai model untuk peneltian pengaruh bahan kimia atau obat pada manusia. Beberapa jenis hewn dari yang ukurannya terkecil dan sederhana ke ukuran yang besar dan lebih komplek digunakan untuk keperluan penelitian ini, yaitu: Mencit, tikus, kelinci, dan kera. 1. Mencit a. Data biologik normal - Konsumsi pakan per hari - Konsumsi air minum per hari - Diet protein - Ekskresi urine per hari - lama hidup - Bobot badan dewasa Jantan Betina - Bobot lahir - Dewasa kelamin (jantan=betina) - Siklus estrus (menstruasi) - Umur sapih Mulai makan pakan kering - Rasio kawin - Jumlah kromosom - Suhu rektal Laju respirasi 25-40 g 20-40 g 1-1,5 g 28-49 hari 4-5 hari (polyestrus) 21 hari 10 hari 1 jantan 3 betina 40 37,5oC 163 x/mn 5 g (umur 8 minggu) 6,7 ml (umur 8 minggu) 20-25% 0,5-1 ml 1,5 tahun

- Denyut jantung - Pengambilan darah maksimum

310 840 x/mn 7,7 ml/Kg

- Jumlah sel darah merah (Erytrocyt) 8,7 10,5 X 106 / l - Kadar haemoglobin(Hb) - Pack Cell Volume (PCV) 13,4 g/dl 44%

- Jumlah sel darah putih (Leucocyte) 8,4 X 103 /l

b. Cara handling Untuk memegang mencit yang akan diperlakukan (baik pemberian obat maupun pengambilan darah) maka diperlukan cara-cara yang khusus sehingga mempermudah cara perlakuannya. Secara alamiah mencit denderung menggigit bila mendapat sedikit perlakuan kasar. Pengambilan mencit dari kandang dilakukan dengan mengambil ekornya kemudian mencit ditaruh pada kawat kasa dan ekornya sedikit ditarik. Cubit kulit bagian belakang kepala dan jepit ekornya. Disamping itu secara komersial telah diproduksi sebuah alat untuk menghandel hewan laboratoium (mencit/tikus) dengan berbagai ukuran, sehingga memudahkan peneliti untuk mengambil darah atau perlakuan lainnya

c. Penandaan (identifikasi) hewan laboratorium. Beberapa cara penandaan hewan lab. Dilakukan untuk mengetahui kelompok hewan yang diperlakukan berbeda dengan kelompok lain. Penandaan ini dapat dilakukan secara permanen untuk penelitian jangka panjang (kronis), sehingga tanda tersebut tidak mudah hilang. Yaitu : dengan ear tag (anting bernomor), tatoo pada ekor, melubangi daun telinga dan elektronik transponder. d. Pengambilan darah Pada umumnya pengambilan darah terlalu banyak pada hewan kecil dapat menyebabkan shok hipovolemik, stress dan bahkan dapat menyebabkan kematian. Tetapi bila dilakukan pengambilan sedikit darah tetapi sering, juga dapat menyebabkan anemia. Pada umumnya pengambilan darah dilakukan sekitar 10% dari total volume darah dalam tubuh dan dalam selang waktu 2-4 minggu. Atau sekitar 1% dengan interval 24 jam. Total darah yang diambil sekitar 7,5% dari bobot badan. Diperkirakan pemberian darah tambahan (exsanguination) sekitar setengah dari total volume darah. Contohnya: Bobot 25g, total volume darah 1,875 ml, maksimum pengambilan darah 0,1875 ml, maka emberian exsanguination 0,9375 ml. Pengambilan darah dapat dilakukan pada lokasi tertentu dari tubuh, yaitu: - vena lateral dari ekor o sinus orbitalis mata o vena saphena (kaki) o langsung dari jantung. Sedangan tempat atau lokasi untuk injeksi, volume sediaan dan ukuran jarum adalah sebagai berikut: IV IP IM SC Oral

Lokasi

Lateral ekor 2-3 ml 0,2 ml

Tidak

Belakang

direkomendasi leher 2-3 ml 5-10 ml/Kg

Volume

Ukuran jarum <25 guage

<21guage

<20 guage

Jarum tumpul 2224 guage

e. Euthanasia: Dengan beberapa cara yaitu euthanasia dengan CO2, injeksi barbiturat over dosis (200mg/Kg) IP atau dengan dislokasi maupun dekapitasi. Yang terakhir perlu keahlian khusus dan bergantung pada tujuan dilakukan euthanasia. 2. Tikus. a. Data biologik

- Konsumsi pakan per hari - Konsumsi air minum per hari - Diet protein - Ekskresi urine per hari - lama hidup - Bobot badan dewasa Jantan Betina - Bobot lahir - Dewasa kelamin (jantan=betina) - Siklus estrus (menstruasi) - Umur sapih - Mulai makan pakan kering - Rasio kawin - Jumlah kromosom - Suhu rektal - Laju respirasi - Denyut jantung - Pengambilan darah maksimum

5 g/100 g bb 8-11 ml/100 g bb 12% 5,5 ml/100 g bb 2,5- 3 tahun

300-400 g 250-300 g 5-6 g 50+10 hari 5 hari (polyestrus) 21 hari, 40-50 g 12 hari 1 jantan 3 atau 4 betina 42 37,5oC 85 x/mn 300 500 x/mn 5,5 ml/Kg

- Jumlah sel darah merah (Erytrocyt) 7,2-9,6 X 106 / l - Kadar haemoglobin(Hb) - Pack Cell Volume (PCV) 15,6 g/dl 46%

- Jumlah sel darah putih (Leucocyte) 14 X 103 /l b. Cara handling

Pertama ekor dipegang sampai pangkal ekor. Kemudian telapak tangan menggenggam melalui bagian belakang tubuh dengan jari telunjuk dan jempol secara perlahan diletakkan disamping kiri dan kanan leher. Tangan yang lainnya membantu dengan menyangga dibawahnya, atau tangan lainnya dapat digunakan untuk menyuntik. c. Penandaan (identifikasi) hewan laboratorium. Beberapa cara penandaan hewan lab. Dilakukan untuk mengetahui kelompok hewan yang diperlakukan berbeda dengan kelompok lain. Penandaan ini dapat dilakukan secara permanen untuk penelitian jangka panjang (kronis), sehingga tanda tersebut tidak mudah hilang. Yaitu : dengan ear tag (anting bernomor), tatoo pada ekor, melubangi daun telinga dan elektronik transponder. d. Pengambilan darah Pada umumnya pengambilan darah terlalu banyak pada hewan kecil dapat menyebabkan shok hipovolemik, stress dan bahkan dapat menyebabkan kematian. Tetapi bila dilakukan pengambilan sedikit darah tetapi sering, juga dapat menyebabkan anemia. Pada umumnya pengambilan darah dilakukan sekitar 10% dari total volume darah dalam tubuh dan dalam selang waktu 2-4 minggu. Atau sekitar 1% dengan interval 24 jam. Total darah yang diambil sekitar 7,5% dari bobot badan. Diperkirakan pemberian darah tambahan (exsanguination) sekitar setengah dari total volume darah. Contohnya: Bobot 300g, total volume darah 22,5 ml, maksimum pengambilan darah 2,25 ml, maka pemberian exsanguination 11,25 ml. Pengambilan darah harus menggunakan alat seaseptik mungkin. Untuk meningkatkan vasodilatasi, perlu diberi kehangatan pada hewan tersebut, misalnya taruh dalam ruangan dengan suhu 40oC selama 10-15 menit, dengan mememasang lampu pemanas dalam ruangan tersebut.

Pengambilan darah dapat dilakukan pada lokasi tertentu dari tubuh, yaitu: vena lateral dari ekor sinus orbitalis mata anterior vena cava bagian ventral arteri ekor vena saphena (kaki) langsung dari jantung.

Sedangan tempat atau lokasi untuk injeksi, volume sediaan dan ukuran jarum adalah sebagai berikut: IV Lokasi Lateral ekor & vena saphena 0,5 ml 5-10 ml IP IM Otot quadricep, bag. Belakang paha 0,1 ml Ukuran jarum <23 guage <21guage <21gauge <20 guage Jarum tumpul 1820 guage e. Euthanasia: Euthanasia dengan CO2, injeksi pentobarbital over dosis (40-60mg/Kg) IP atau dengan ketamin/medetomidin, 60-75 mg/Kg ip. Atau dengan obat anasthetika lainnya. 3. Kelinci a. Data biologik: 5-10 ml 5-10 ml/Kg SC Belakang leher Oral

Volume

- Konsumsi pakan per hari - Konsumsi air minum per hari - Diet protein - Ekskresi urine per hari - lama hidup - Bobot badan dewasa Jantan Betina - Bobot lahir - Dewasa kelamin: Jantan Betina - Siklus estrus (menstruasi) - Umur sapih - Mulai makan pakan kering

100-200 g 200-500ml 14% 30- 35 ml 5-7 tahun

4-5,5 Kg 4,5-6,5 Kg (NZ) 30-100 g

5-6 bulan (4,5Kg) 6-7 bulan 4Kg polyestrus (diinduce) 8 minggu. 1,8 Kg 16-18 hari

- waktu untuk kawin kembali setelah 35-42 hari - Rasio kawin - Jumlah kromosom - Suhu rektal - Laju respirasi - Denyut jantung - volume darah - Pengambilan darah maksimum 1 jantan 6-10 betina 44 39,5oC 51 x/mn 200 300 x/mn 55-65 ml/Kg 7,7 ml/Kg

- Jumlah sel darah merah (Erytrocyt) 4-7 X 106 / l

- Kadar haemoglobin(Hb) - Pack Cell Volume (PCV)

10-15 g/dl 33-48 %

- Jumlah sel darah putih (Leucocyte) 5-12 X 103 /l

b. Cara handling Kadang kelinci mepunyai kebiasaan untuk mencakar atau menggigit. Bila penanganan kurang baik, kelinci sering berontak dan mencakarkan kuku dari kaki belakang dengan sangat kuat yang kadang dapat menyakiti dirinya sendiri. Kadang kondisi tersebut dapat menyebabkan patahnya tulang belakang kelinci yang bersangkutan. Cara menghandel adalah dengan menggenggam bagian belakang kelinci sedikit kedepan dari bagian tubuh, dimana bagian tersebut kulitnya agak longgar. Kemudian angkat kelinci dan bagian bawahnya disangga. Sedangkan cara menangani kelinci perlakuan baik untuk diijeksi ataupun untuk pengambilan darah diperlukan peralatan khusus dimana kelinci tidak dapat benyak bergerak.

c. Penandaan Penandaan kelinci dapat dilakukan secara individu hewan ataupun kelompok. Penandaan banyak dilakukan pada daerah telinga yang berupa ear tag (anting telinga yang dapat diberi nomor). Dapat juga dengan tatoo pada telinga. d. Pengambilan darah Terlalu banyak mengambil darah dalam waktu satu kali akan dapat menyebabkan shock hypovolemik, stress fisiologik dan kematian. Sedangkan pengambilan darah yang sedikit dan dalam frekwensi waktu yang sering dapat menyebabkan anemia. Pada umumnya pengambilan darah 10% dari total volume darah dalam selang waktu 2-4 minggu cukup baik dilakukan, atau 1% dalam interval 24 jam. Total volume darah dapat dihitung sekitar 7,5% dari bobot tubuh. Perkiraan volume exsanguinasion (pemberian volume cairan/darah) sekitar setengah dari total volume darah.. mIsalnya bobot kelinci 3 Kg, maka total volume darah 225 ml, sampel pengambilan darah meksimum 22,5 ml dalam interval 2-4 minggu, jadi volume exsanguinasion 112,5 ml. Pengambilan darah dilakukan dari beberapa lokasi tubuh taitu: Arteri sentral di telinga Vena jugularis Jantung Sedangan tempat atau lokasi untuk injeksi, volume sediaan dan ukuran jarum adalah sebagai berikut: IV IP IM SC Oral Bagian lateral vena saphena Vena cava anterior

Lokasi

Vena marginal telinga

Otot quadricep, bag. Belakang paha,otot lumbal

Belakang leher

Volume 1-5 ml Ukuran jarum

50-100 ml <2gauge 0,5-1 ml

50-100 ml

5-10 ml/Kg

<21 guage <20gauge

<20 guage

Jarum tumpul 1820 guage

e. Anasthesia Anasthesia dapat dilakukan secara inhalant maupun injeksi. Anasthesia inhalant dilakukan dengan inhalan isofluran, sedangkan untuk injeksi dapat diberikan pentobarbital 20-60 mg/Kg iv dan terjadi efek setelah 1-3 jam. Beberapa obat anasthesia umum dpat juga diberikan sesuai dengan anjuran. Sedangkan euthanasia (pembunuhan) pada hewan kelinci jarang dilakukan.

4. Kera Kera adalah termasuk non-human primata, dimana hewan ini sangat berguna untuk penelitian yang erat hubungannya dengan manusia. Banyak sekali jenis primata, tetapi yang sering digunakan untuk keperluan penelitian adalah kera ekor panjang. a. data biologik

- Konsumsi pakan per hari - Konsumsi air minum per hari - Diet protein - Ekskresi urine per hari - lama hidup - Bobot badan dewasa Jantan Betina - Bobot lahir - Dewasa kelamin: Jantan Betina - Siklus estrus (menstruasi) - Umur sapih - Mulai makan pakan kering - waktu untuk kawin kembali - Rasio kawin - Jumlah kromosom - Suhu tubuh - Laju respirasi - Denyut jantung - volume darah - Pengambilan darah maksimum

2-4% dari bobot badan 2-4% dari bobot badan 12-15 tahun

12 Kg 10 Kg 500-700 g

6 tahun 5 tahun 28 hari 3-6 bulan 20-30 hari 1 jantan 10 betina 38,8oC 40 x/menit 192 x/mn 75 ml/Kg -

- Jumlah sel darah merah (Erytrocyt) 4,6-6,5 X 106 / mm3

- Kadar haemoglobin(Hb) - Pack Cell Volume (PCV)

12,5 g/100ml 42%

- Jumlah sel darah putih (Leucocyte) 15 X 103 /mm3

b. Cara handling Cara menghandel primata ini memerlukan alat yang khusus sehingga hewan tidak dapat bergerak. Uji FARMAKOKINETIK Sesuai dg nama yg diberikan pada uji ini, obat diberikan pada dosis terapi utk dilihat kinetika obat (jumlah dan kecepatan obat) dalam saluran sistemik/peredaran darah umum. Dilakukan sampling darah kemungkinan juga urin dan beberapa obat butuh sample saliva utk menentukan profil obat baik terjadinya absorpsi, distribusi, metabolisme dan ekskresi = ADME obat = nasib obat dalam tubuh. Sampling dilakukan sesering mungkin sejak obat diberikan, lamanya sekitar 510x T1/2 obat, atau jika belum tahu t1/2 maka harus dilakukan selama mungkin bisa sampai 12 jam, dilakukan sampling awal tiap 5 menit, diikuti sampling tiap jam. Muncul hasil berupa Cmaks (kadar obat maksimal dalam badan), waktu terjadinya Cmaks disebut Tmaks, jumlah obat dalam badan AUC dan waktu paro ekskresi=T1/2 obat yang menunjukkan berapa lama obat berada dalam tubuh dan kapan akan diekskresikan hampir 100% dr dosis awal. T1/2 menjadi dasar penentuan regimen dosis obat (berapa kali dalam sehari obat bisa diberikan dan aman).