Aminohapposeoksen identifiointi TLC:ll Aloitus: 30.9.13 Lopetus: 30.9.13 Raportointi: 16.11.

13 Sini Huuskonen Tyntarkoitus ja periaate: Erotetaan aminohappoja toisistaan ohutkerroskromatografialla. Vrjysliuoksena kytetn ninhydriiniliuosta, joka reagoi -aminohapon kanssa.

Vlineet ja reagenssit: Kromatografiakammio 10 ml mittapulloja Lmpkaappi Suihkupullo TLC-levy: selluloosa ja/tai silica gel 60, kerrospaksuus 0,2 mm (22x22 cm) kapilaaripipettej 30 ml n-butanoli 10 ml etikkahappo 10 ml ionivaihdettuvesi/ milli-Q-vesi aminohappostandardit 5 mg/ml vedess o kyseteiini o glysiini o tryptofaani o tyrosiini

o valiini Ninhydriiniliuos: 1 g/500 ml n-butanoliin Nyte

Tynsuoritus: Valmistetaan ajoliuos. 30 ml n-butanolia, 10 ml etikkahappoa ja 10 ml vett. Vuorataan ajoaltaitten reunat suodatinpaperilla ja kaadetaan ajoliuos astiaan 1 cm paksuisesti. Valmistetaan aminohappoliuokset 10 ml mittapulloihin (5 g/ml). Applikoidaan aminohappo standardit ja nyte TLC levyille. Asetetaan levy ajoastiaan. Ajon jlkeen sumutetaan kuivuneen levyn pinnalle ninhydriiniliuosta ja jtetn uuniin 110 C 5 min. Tulostenksittely: Kun ninhydriiniliuosta sumutettiin TLC levyn pinnalle, ei sumutus onnistunut tasaisesti. Rf-arvot on laskettu niiden oletetun tpln kohdalta.
Fluori Selluloosa Kysteiini 0,69 0,33 Glysiini 0,50 0,28 Tryptofaani 0,98 0,50 Tyrosiini 0,81 0,42 Valiini 0,86 0,58 Nyte 0,75 0,67

Koska eponnistunut sumutus tekee lhes mahdottomaksi kuvailla tplien muotoa tai vri. Kysteiini: Glysiini: Tryptofaani: Tyrosiini:

Valiini:

Kirialikeskus tai asymertrinen hiilell tarkoitetaan hiilt johon on liittynyt nelj erilaista atomia tai atomiryhm. Kahtaisioni on molekyyli, jossa happoryhm on luovuttanut protonin emsryhmlle. Happoryhmll on siten negatiivinen varaus ja emsryhmll positiivinen. Glysiinin ja ninhydridin reaktio: ( R kuvaa hiiliketjua, jota glysiiniss ei ole. R=vety)

Virhelhteet: Mittausastioiden virheet. Applikointi. Sumutus eponnistui.