EVALUACIJA REAGENSA

Lovorka erek

Po emu se razlikuje
evaluacija reagensa od
evalucije metode?

Uvod
Evaluacija reagensa i metode vrlo su
sline i preklapaju se
Konana svrha evaluacije je osigurati
bolju kvalitetu u smislu ujednaavanja
laboratorijskih rezultata svugdje u
svijetu.

EP15-A2
EP15-A2 - User
Verification of
Performance for
Precision and
Trueness: Approved
Guideline second
edition

Zato EP15-A2?
Direktiva IVD 98/79/EC Directive on in
vitro Diagnostic Medical Devices obvezuje
proizvoae na potpunu validaciju
Racionalnost!

Evaluacija metode-reagensa sigurno

ukljuuje:
Procjena preciznosti

ukupna unutarlaboratorijska preciznost

Procjena istinitosti

a)

Prema deklariranim
vrijednostima kontrolnih materijala
b) Usporedba s odabranom metodom
(referentnom ili postojeom)

Provjera linearnosti/mjernog
podruja

Provjera gornje i donje analitike

granice
a)
Linearni model
b)
Nelinearni model

Provjera referentnih intervala

ocjena biolokih referentnih intervala neovisno

o tome primjenjuju li se harmonizirani
referentni intervali ili preporueni iz
literaturnih izvora

Evaluacija reagensa dodatno

ukljuuje:
Provjeru utjecaja
interferencija:
Hemoliza
Lipemija
Ikterija

Na to jo
trebamo paziti?

stabilnost reagensa (pravilna pohrana i

praenje stabilnosti kontrolnim
pripravcima)

Linearnost
Odrediti najiri raspon mjerenja za odreeni
analit
Dobar pristup je testirati serijska razrjeenja
uzorka

Linearnost
Uzorci za testiranje linearnosti: preporuuje
se koristiti pool serume deklarirana ciljna
vrijednost! (zato ne bismo trebali koristiti
pohranjene uzorke pacijenata)
Izbjegavati liofilizirane uzorke zbog mogue
nepreciznosti runog pipetiranja

Ispitivanje linearnosti
Testirati nakon odravanja instrumenta,
kalibracije i kontrole kvalitete!
minimalno 5 razliitih koncentracija koje
obuhvaaju analitiki raspon
serijsko razrjeivanje je bolje od zasebno
pripremljenih razrjeenja manja pogreka!
uzorke testirati u duplikatu zbog sluajne
pogreke

Linearnost-donja i gornja
analitika granica
Donja granica detekcije-najmanja
koncentracija analita koja se moe
izmjeriti (izuzetno bitno za forenzika
testiranja na droge ali i za tumorske
biljege)
Donja granica detekcije najee je
jednaka analitikoj osjetljivosti

Primjer eksperimenta za utvrivanje

donje analitike granice
- dva uzorka: prvi je slijepa
proba (nema niti traga
ispitivanom analitu) i drugi
(s niskom koncentracijom
analita koja se ispituje
ako se provjerava DAG
deklarirana od strane
proizvoaa onda se
dodaje koncentracija
analita ta koju proizvoa
tvrdi da je DAG)
- mjerenje vie dodanih
koncentracija u duplikatu
- Izraunavanje SD

Linearnost-gornja analitika granica

Najvia koncentracija analita koju
instrument moe pouzdano izmjeriti
esto odgovara koncentraciji najvieg
kalibratora
Nakon vrijednosti gornje analitike
granice uzorak je potrebno razrijediti i
koncentraciju izraunati iz razrjeenja

Linearnost zato u 5
toaka?
za parabolu su dovoljne 3 toke, ali 4 su
potrebne za procjenu prilagodbe
krivulje
5. toka potrebna je za statistiki
izraun
ako je manje toaka moe nam
promaknuti sigmoidalna krivulja

Primjer krivulja

Procjena linearnosti nakon

testiranja!
Vizualna procjena krivulje
Linearna regresija koliko su podaci
slini liniji regresije
Polinominalna metoda statistiki
program procjenjuje red polinominalnih
krivulja pa se propadanje reagensa
moe uoiti ranije

Primjer krivulja linearnosti za CRP i

trigliceride na AU 2700 analizatoru

Zato mi linearnost nije

dobra?
materijali nisu pravilno pripremljeni ili
pohranjeni (reagensi, kontrole)
neispravne pipete
analizator nije ispravan (optika,
zagaene kivete...)
reagensi i kontrole kojima je istekla
stabilnost
nedovoljno dobar reagens ili metoda!

Ispitivanje utjecaja
interferencija
izvodi se kako bi se procijenila sistemska
pogreka uzrokovana ostalim materijalima
koji mogu biti prisutni u uzorku
ukoliko je koncentracija interferirajueg
materijala stalna-veliina pogreke e biti
stalna
ukoliko se koncentracija interferirajueg
materijala mijenja, mijenja se i pogreka

Kako mjerimo utjecaj

interferencije?
Pripremiti dva uzorka (pool, kontrole)
za ispitivanu metodu. U prvi se dodaje
interferent, a u drugi ista koliina
vode.
U oba se uzorka izmjeri koncentracija
traenog analita.
Iz dobivenih rezultata izrauna se
odstupanje.
Klasinim statistikim testovima
izrauna se postoji li statistiki
znaajna razlika izmeu uzoraka sa ili
bez interferirajuim materijalom.

Koje interferencije
ispitujemo?
bilirubin (ikterija) testira se dodatkom
standardne otopine bilirubina
hemoliza testira se dodatkom hemolizata
lipemija najee se testira dodatkom
komercijalne emulzije masnoa (npr. Lyposyn
(Abbott laboratories))

Primjer ispitivanja utjecaja hemolize (preuzeto iz

Tehnical Manual firme Beckman Coulter za analit D-Dimeri)

Primjer ispitivanja utjecaja ikterije (preuzeto iz Tehnical

Manual firme Beckman Coulter

Primjer ispitivanja utjecaja lipemije (preuzeto iz Tehnical

Manual firme Beckman Coulter)