34

Lampir
Simplisia Daun Kluwih

n-heksan 70%
an 1. Alur Metode Penelitian
Filtrat
Residu

Ekstrak etil asetat

Filtrat

Ekstrak etanol
70%

Residu

Dikentalkan

Filtrat

Residu

Dikentalkan
Uji Fitokimia

Penetapan Kadar Flavonoid

(Ekstrak Kental)

Uji Inhibisi
-glukosidase

Uji Ftiokimia

Penetapan Kadar Flavonoid

(Ekstrak Kental)

Uji Inhibisi
-glukosidase

35

Lampiran 2. Pembuatan Ekstrak Daun Kluwih

500 g Serbuk simplisia Daun Kluwih

n-heksan 70% selama 3 hari

Residu

Filtrat

Dimaserasi dengan 5 liter Etil asetat

Filtrat

Dipekatkan dengan
Rotavapor

Ekstrak kental

Residu
Dimaserasi dengan 5 liter
Etanol 70 %

Filtrat

Dipekatkan dengan
Rotavapor

Ekstrak kental

Residu

36

Lampiran 3. Alur Uji Inhibisi -Glukosidase

50 L DMSO
(blanko)

50 L larutan
sampel 1% b/v
dalam DMSO
(S )
0

50 L DMSO
kontrol

25 L buffer fosfat
(pH 7.0)
+
25L PNG 20 mM

(+)

50 L larutan
sampel 1% b/v
dalam DMSO
(S )
1

(+)

Prainkubasi pada 37C

selama 5 menit
Hasil
prainkubasi
50 L DMSO
(blanko)

(+)

50 L larutan
sampel 1% b/v
dalam DMSO
(S )
0

(+)
25 L bufer
fosfat 10 mM
(pH 7.0)

50 L DMSO
kontrol (+)

(+)

(+)

50 L larutan
sampel 1% b/v
dalam DMSO
(S )
1
25 L
-glukosidase
(pH 7.0)

Inkubasi pada 37C

selama15 menit
(+) 100 L larutan 200 mM Na2CO3
p-nitrofenol

Microplate reader
400 nm
Keterangan: perlakuan Acarbose (S ) dan (S ) sebagai kontrol + sama dengan
1
0
sampel

37

Lampiran 4. Pembuatan Larutan

1. Buffer Fosfat pH 7 100 mM

4. Larutan enzim -glukosidase

1.7418 g
K2HPO4 Air

1.3609 g
KH2PO4

1 mg
-glukosidase

deionisasi

100 ml

Bufer fosfat pH 7
(mengandung
200mg SBA)

Encerkan 25 kali dengan

buferfosfat pH
5. Na2CO3 200 mM

2. Acarbose 1000 ppm

50
50 ml
mg
HCl2N :akuades
Acarbose
(1 : 1)

1.0599 g
Na2CO3
Bufer fosfat
pH 7

sentrifuse
(supernatan)
50 ml

3. pNG 20 mM

50 ml

6. Larutan sampel 1000 ppm

0.1507 g
pNG
Bufer fosfat
pH 7

a mg
Ekstrak

1000 l
dimetilsulfoksida
(DMSO)