UJI TOKSISITAS TANAMAN OBAT ANTI Diabetes mellitus (Gynura

procumbens) MENGGUNAKAN METODE BSLT

Juryanika1, Fitmawati2, Nery Sofiyanti2

1
Mahasiswa Program Studi S1 Biologi
2
Dosen Botani Jurusan Biologi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Riau
Kampus Binawidya Pekanbaru, 28293, Indonesia
juryanika_yani@yahoo.com

ABSTRACT
Diabetes mellitus is a disease caused by metabolic problem in which the level of
blood glucose is above the normal level (hyperglycemia) due to insulin
deficiency. The number of diabetes mellitus patient increase every year and the
treatment cost is expensive, especially with clinic complication, therefore many
people try traditional medicine as an alternative treatment. This study aimed to
identify the toxicity level (LC50) of Gynura procumbens served to cure diabetes
mellitus using Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Additionally, we aimed to
determine the LC50 of Gynura procumbens extract treating to Artemia salina
larvae. This study had been conducted from November 2014 to February 2015. In
this research we used four extract concentrations i.e. control, 10 µg/ml, 100 µg/ml
dan 1000 µg/ml. Four concentration of plant extract were applied to Artemia
salina larvae with three replication. Total Artemia salina larvae died 24 hours
after treatment were counted. The toxicity was analyzed using Probit analysis to
determine LC50. The result indicated that the leaf extract of Gynura procumbens
give lethal effect to Artemia salina larvae at concentration 239,88 µg/ml (LC50).

Keywords: Artemia salina, BSLT, Diabetes mellitus, Gynura procumbens, LC50.

ABSTRAK
Diabetes mellitus merupakan penyakit gangguan metabolisme dimana kadar
glukosa darah di atas normal (hiperglikemia) akibat kekurangan insulin.
Peningkatan jumlah penderita diabetes mellitus yang setiap tahunnya meningkat
serta biaya pengobatan diabetes mellitus yang mahal terutama apabila disertai
dengan komplikasi klinis mendorong masyarakat untuk mencoba obat tradisional
yang dapat dipakai sebagai alternatif pengobatan. Penelitian ini memiliki beberapa
tujuan: Mengidentifikasi tingkat toksisitas tumbuhan yang berpotensi sebagai
agen diabetes mellitus menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
dan menentukan nilai LC50 larva Artemia salina setelah pemberian ekstrak
tanaman obat. Waktu penelitian dimulai pada bulan November 2014 hingga
Februari 2015. Dalam penelitian ini terdapat 4 kelompok perlakuan yaitu kontrol,
ekstrak dengan konsentrasi 10 µg/ml, 100 µg/ml dan 1000 µg/ml. Data yang
dikumpulkan adalah data primer yang didapatkan dari jumlah larva Artemia salina
yang mati selama 24 jam setelah perlakuan pada tiap-tiap konsentrasi ekstrak
tumbuhan obat. Data dari uji toksisitas tersebut akan dianalisis dengan
menggunakan Analisis Probit untuk mengetahui nilai LC50. Berdasarkan hasil uji

Repository FMIPA 1
toksisitas menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) ekstrak daun
Gynura procumbens memberikan efek kematian terhadap Artemia salina dengan
nilai LC50 239,88 µg/ml.

Kata kunci: Artemia salina, BSLT, Diabetes mellitus, Gynura procumbens, LC50.

PENDAHULUAN relatif kecil bagi tubuh dibandingkan

dengan obat-obatan sintetik (Anief
Diabetes mellitus merupakan
1995).
penyakit gangguan metabolisme
Menurut Chamorro et al.
dimana kadar glukosa darah di atas
(1999) dosis atau takaran yang tepat
normal (hiperglikemia) akibat
dalam penggunaan tanaman obat
kekurangan insulin. Ini merupakan
memang belum banyak didukung
salah satu masalah dalam kesehatan
oleh data hasil penelitian. Peracikan
masyarakat (Katzung et al. 2009).
secara trasisional menggunakan
Penderita penyakit ini dari tahun ke
peracikan sejumput, segenggam atau
tahun cenderung meningkat. Data
seruas sangat sulit ditentukan
global menunjukkan bahwa jumlah
ketepatannya. Penggunaan takaran
penderita diabetes mellitus pada
yang lebih dalam satuan gram dapat
tahun 1987 adalah 37 juta orang dan
mengurangi kemungkinan terjadinya
pada tahun 1993 menjadi 100 juta
efek samping yang tidak diharapkan
orang. Pada tahun 2020 perkiraan
karena batas antara racun dan obat
jumlah penduduk di Indonesia yang
dalam bahan tradisional sangatlah
berusia di atas 20 tahun adalah 178
tipis sekali (Lopez et al. 1993).
juta jiwa, sehingga jika diperkirakan
Melalui pengetahuan etnobotani dari
prevalensi diabetes mellitus (DM)
kearifan lokal suatu daerah, tanaman
adalah 5%, maka penderita diabetes
Gynura procumbens atau yang di
diperkirakan 9 juta orang (Soegondo
kenal dengan tanaman sambung
1995). Peningkatan jumlah penderita
nyawa memiliki khasiat sebagai anti
diabetes mellitus yang setiap
diabetes mellitus (Mujahid 1998).
tahunnya meningkat serta biaya
Sebelum digunakan sebagai tanaman
pengobatan diabetes mellitus yang
obat sebaiknya diuji
mahal terutama apabila disertai
ketoksisitasannya untuk mengetahui
dengan komplikasi klinis mendorong
tingkat keamanan dari tanaman obat.
masyarakat untuk mencoba obat
Salah satu metode awal yang
tradisional yang dapat dipakai
sering dipakai untuk mengamati
sebagai alternatif pengobatan. Hal ini
toksisitas senyawa dalam ekstrak
disebabkan obat tradisional
tanaman adalah metode Brine Shrimp
mempunyai beberapa keuntungan
Lethality Test (BSLT). Brine Shrimp
antara lain harganya yang relatif
Lethallity Test (BSLT) adalah metode
murah, bahan baku yang mudah
yang sangat berguna dalam
didapat yaitu dari tanaman obat yang
melakukan skrining terhadap
bisa ditanam dan diramu,
senyawa aktif ataupun ekstrak aktif
berdasarkan resep nenek moyang
dari bahan alam atau tanaman obat
yang sudah menjadi kearifan lokal
(Meyer et al. 1982 Carballo et al.
daerah tersebut. Penggunaan
2002). Metode BSLT digunakan
tanaman obat herbal lebih aman
untuk mendeteksi keberadaan
dikonsumsi dan efek sampingnya

Repository FMIPA 2
senyawa toksik dan digunakan
sebagai biomonitor dalam isolasi
senyawa dari tumbuhan yang
memiliki kandungan sitotoksik
dengan menentukan nilaia LC50 dari
senyawa aktif (Astuti et al. 2005).
Uji toksisitas sangat penting
karena diperlukan untuk menjamin
keamanan tanaman obat sebagai obat
herbal yang akan dikonsumsi oleh
manusia tidak boleh bersifat toksik.
Diharapkan penelitian ini dapat
mengembangkan manfaat tanaman
obat yang ada yang berasal dari
bahan alam untuk penyembuhan
penyakit diabetes mellitus baik dari
segi khasiat maupun keamanannya
(Marliyana et al 2012). Tujuan
penelitian ini untuk Mengidentifikasi
tumbuhan yang berpotensi sebagai
obat anti diabetes mellitus dengan
metode Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT) dengan menentukan nilai
LC50 Artemia salina setelah
pemberian ekstrak tanaman obat.
METODE PENELITIAN
Waktu dan Tempat
Penelitian dilaksanakan selama
4 bulan mulai November 2014 –
Februari 2015. Pengambilan sampel
tanaman obat dilakukan di beberapa
tempat di daerah Pekanbaru.
Selanjutnya dilakukan di
Laboratorium Botani Jurusan Biologi
Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Universitas Riau.
Proses pembuatan ekstrak tanaman
obat dan pengujian toksisitas
terhadap larva Artemia salina
dilakukan di Laboratorium Botani
Jurusan Biologi Fakultas
kering dalam pelarut alkohol 70%
kemudian disaring menggunakan
kertas saring. Setelah itu, pelarut
Repository FMIPA
Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam Universitas Riau.
Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan
dalam penelitian ini adalah satu unit
rotary evaporator, oven, neraca
analitik, blender, tabung reaksi, rak
tabung reaksi, pipet tetes,
mikropipet, gelas ukur, pisau, vortex,
batang pengaduk kaca, wadah
penetasan Artemia salina Leach. 2
tipe ruang (terang dan gelap),
aerator, lampu pijar 40 watt, lup,
vial atau botol kaca, keranjang
peralatan gelas, sarung tangan,
masker dan kertas saring.
Bahan-bahan yang digunakan
dalam penelitian ini adalah ekstrak
tanaman obat Gynura procumbens,
alkohol 70%, aquadest, larva Artemia
salina Leach, ragi (Saccharomyces
cerevisiae) dan air laut.
Prosesur penelitian
1. Pembuatan Ekstrak
Tanaman Obat
Tanaman obat yang akan
digunakan sebelumnya ditimbang
terlebih dahulu. Setelah ditimbang,
tanaman obat mula-mula
dibersihkan, dicuci dengan air
mengalir, lalu dikering anginkan
dengan cara diletakkan di tempat
terbuka dengan sirkulasi udara yang
baik dan tidak terkena sinar matahari
langsung, kemudian dimasukkan
kedalam oven dengan suhu 50 ºC.
Tanaman obat yang sudah kering
kemudian digerus dan diekstraksi
dengan metode maserasi, dengan
cara merendam serbuk tanaman obat
alkohol diuapkan pada rotary
evaporator sehingga didapatkan
3
ekstrak tanaman obat yang kental
dengan konsentrasi 100%.
2. Pelaksanaan uji toksisitas
Uji toksisitas dilakukan dengan
memasukkan sepuluh ekor Artemia
salina Leach. umur 48 jam yang
sehat dan bergerak aktif dipilih
secara acak, lalu dimasukkan
kedalam tabung reaksi yang berisi
ekstrak tanaman obat yang bebas
pelarut. Kemudian dimasukkan satu
tetes suspensi ragi Saccharomyces
cerevisiae (3 mg/10 ml air laut)
ditambahkan sebagai makanan
Artemia salina Leach. Selanjutnya
tabung reaksi diletakkan di bawah
lampu penerangan selama 24 jam
dan dihitung jumlah larva Artemia
salina yang mati.
Analisis data
Data hasil penelitian akan
diolah dan disajikan dalam bentuk
tabel. Data dari uji toksisitas tersebut
akan dianalisis dengan Analisis
Probit untuk mengetahui harga LC50.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil uji toksisitas tanaman
obat anti diabetes mellitus dengan
menggunakan Artemia salina Leach.
menggunakan Artemia salina Leach.
dengan metode Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT) dalam skala
laboratorium. Sampel yang
digunakan pada penelitian ini terdiri
dari 23 jenis tanaman obat yang
berpotensi sebagai anti diabetes
mellitus. Lokasi pengambilan sampel
dilakukan di Kelurahan Simpang
Baru Kecamatan Tampan Pekanbaru.
Bentuk morfologi secara umum dari
tanaman obat yang memiliki nilai
Repository FMIPA
LC50 <1000 µg/ml dapat disajikan
pada gambar 1 sebagai berikut.
Gambar 1. Tanaman obat Gynura
procumbens yang
bersifat toksik
Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT) merupakan salah satu metode
skrining untuk mengetahui
ketoksikan suatu ekstrak maupun
senyawa bahan alami (Sukardiman
2004). Metode ini dilakukan dengan
menentukan besarnya nilai LC50
selama 24 jam. Data tersebut
dianalisis menggunakan probit
analisis untuk mengetahui nilai LC50.
Suatu senyawa dinyatakan
mempunyai potensi toksisitas akut
jika mempunyai nilai LC50 <1000
µg/ml. (Sunarni et al. 2003 Anderson
et al. 1991 Sukardiman 2004).
Apabila suatu ekstrak tanaman
bersifat toksik menurut nilai LC50
dengan metode BSLT, maka tanaman
tersebut dapat dikembangkan sebagai
anti diabetes mellitus.
Uji toksisitas ini dapat
diketahui dari jumlah kematian larva
Artemia salina karena pengaruh
ekstrak atau senyawa bahan alam
pada konsentrasi yang diberikan
(Mclaughlin et al. 1999 Silva et al.
2007). Nilai LC50 merupakan nilai
yang menunjukkan besarnya
4
konsentrasi suatu bahan uji yang
dapat menyebabkan 50% kematian
jumlah hewan uji setelah perlakuan
24 jam. Melalui metode tersebut,
pelaksanaan skrining awal suatu
senyawa aktif akan berlangsung
relatif cepat dengan biaya yang
relatif murah (Dwiatmaka 2001
Mukhtar 2007).
Hasil pengujian ekstrak
tanaman obat daun Gynura
procumbens memiliki nilai LC50
sebesar 239,88 µg/ml. Pada Gambar
2 menunjukkan pengauh bahwa
semakin tinggi konsentrasi atau dosis
yang diberikan maka persentasi
kematian larva Artemia salina
semakin meningkat.
Gynura procumbens
Kematian larva
mengandung cukup serat juga
berguna untuk menurunkan kadar
kolesterol darah, mengobati diabetes,
tumor, dan sebagai obat anti kanker
(Mujahid 1998). Menurut metode
BSLT karena 3 ekstrak tanaman obat
tersebut memiliki kemampuan
membunuh larva 50% dari dan
memiliki nilai LC50 <1000 µg/ml.
Menurut Meyer et al. (1982) suatu
ekstrak dikatakan bersifat toksik
terhadap Artemia salina apabila
mempunyai nilai LC50 (konsentrasi
yang dapat mematikan 50% (larva
udang) <1000 µg/ml. Daya toksisitas
suatu senyawa dapat diketahui
dengan menghitung jumlah kematian
larva Artemia salina dengan
parameter Lethal Concentration 50
(LC50). Tanaman obat yang memiliki

LC50 >1000 µg/ml berarti tanaman

10
y = 4x - 4,5556 tersebut bersifat toksik tetap masih
5 bisa digunakan sebagai anti diabetes
0 mellitus, tetapi konsentrasi yang
0 2 4 digunakan harus dikurangkan atau
-5
disesuaikan dengan dosis yang telah
Log konsentrasi disepakati (Artemia salina), serta
tanaman obat tersebut dapat
Gambar 2. Pengaruh konsentrasi dikembangkan sebagai obat
ekstrak Gynura antikanker.
procumbens anti Berdasarkan penelitian yang
diabetes mellitus telah dilakukan ekstrak tanaman obat
terhadap kematian memiliki potensi toksisitas akut
larva Artemia salina menurut metode BSLT karena
ekstrak tanaman obat tersebut
Pada tanaman Gynura memiliki kemampuan membunuh
procumbens (sambung nyawa) larva >50 % dan memiliki nilai LC50
mengandung flavonoid, triterpenoid, <1000 µg/ml. Penurunan kadar gula
polifenol, tanin, saponin, steroid, darah ini diduga karena adanya
asam para kumarat, asam para kandungan zat aktif flavonoid yang
hidroksi benzoat, dan minyak atsiri terkandung di dalam ekstrak tanaman
(Sugiyanto et al. 1994). Tanaman obat tersebut. Menurut Viktoria
daun dewa (Gynura procumbens) (2012), Flavonoid berfungsi dalam
merupakan salah satu tanaman obat menghambat enzim glukosidase dan
yang digolongkan sebagai herba. alfa amilase sehingga pemecahan
Tanaman daun dewa adalah tanaman karbohidrat menjadi monosakarida
asli dari Birma dan Cina, di sana menjadi gagal dan glukosa tidak
biasanya dimakan sebagai sayuran dapat diserap oleh usus. Menurut
sehat (Heyne 1987). Selain

Repository FMIPA 5
Abdelmoaty et al, (2010) dalam
mekanisme penyembuhan penyakit
diabetes mellitus, flavonoid diduga
berperan meningkatkan aktivitas
enzim antioksidan dan mampu
meregenerasi sel-sel pankreas yang
rusak sehingga kekurangan insulin
dapat teratasi. Selain itu, flavonoid
yang terkandung di dalam tumbuhan
dapat memperbaiki sensifitas
reseptor insulin. Sehingga adanya
flavonoid, alkoloid dan tanin
memberikan efek yang
menguntungkan pada keadaan
diabetes mellitus. Menurut Marianne
(2011), flavonoid diketahui memiliki
aktivitas anti oksidan yang diyakini
mampu melindungi tubuh terhadap
kerusakan yang yang disebabkan
jenis oksigen reaktif, sehingga
mampu menghambat terjadinya
penyakit degeneratif seperti diabetes
mellitus. kandungan flavonoid
sebagai antioksidan dapat
melindungi kerusakan sel-sel
pangkreas dari radikal bebas (Arinisa
dan Isnawati 2011).
Mekanisme kematian larva
berhubungan dengan fungsi senyawa
flavonoid, alkoloid dan tanin pada ke
3 tanaman obat tersebut, yang dapat
menghambat daya makan larva
(antifedant). Cara kerja senyawa-
senyawa tersebut adalah dengan
bertindak sebagai stomach poisoning
atau racun perut. Oleh karena itu,
bila senyawa-senyawa ini masuk
kedalam tubuh larva, alat
pencernaannya akan terganggu.
Selain itu, senyawa ini menghambat
reseptor perasa pada daerah mulut
larva. Hal ini mengakibatkan larva
gagal mendapatkan stimulus rasa
sehingga tidak mampu mengenali
makanannya sehingga larva mati
kelaparan. Berdasarkan data yang
diperoleh, semakin tinggi dosis yang
diberikan maka semakin besar efek
Repository FMIPA
penurunan kadar gula darah yang
dihasilkan. Hai ini disebabkan karena
semakin tinggi dosis yang diberikan
maka semakin banyak jumlah zat
aktif yang dapat menurunkan kadar
gula darah. Pada kadar atau dosis
tertentu tanaman obat memiliki
potensi toksisitas akut serta dapat
menyebabkan kematian larva
Artemia salina.
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian
dapat disimpulkan bahwa ekstrak
daun Gynura procumbens memiliki
potensi toksik dengan nilai LC50
239,88 µg/ml. tanaman obat yang
dinyatakan bersifat toksik karena
memiliki nilai LC50 <1000 µg/ml.
Tanaman yang memiliki nilai LC50
<1000 µg/ml dapat dilanjutkan
sebagai obat antikanker.
UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima
kasih kepada LPPM Universitas Riau
yang telah membantu membiayai
penelitian ini. Penulis juga
mengucapkan terima kasih kepada
Laboratorium Botani dan
Laboratorium Kimia Bahan Alam
FMIPA Universitas Riau yang telah
memfasilitasi kegiatan penelitian ini.
DAFTAR PUSTAKA
Abdelmoaty, M.A., Ibrahim, M.A.,
Ahmed, N.S., Abdelaziz,
M.A. 2010. Confirmatory
Studies on the Antioxidant
and Antidiabetic Effect of
Quercetin in Rats. Indian :
Clinical Biochemistry
25(2):188
Anderson, J.E., Goetz, C.M.,
McLaughlin, J.L., and
Suffness, M. 1991. A Blind
Comparison of Simple
6
 Bench-top Bioassays and
Human Tumour Cell
Cytotoxicities as Antitumor
Prescreens. Phytochem
Analysis (2): 107-111.
Anief, Moch. 1995. Ilmu Meracik
Obat Teori dan Praktek.
Yogyakarta : Gadjah Mada
University Press.
Arinisa F dan Isnawati M. 2011. The
Effect Of Common Beans
(Phaseolus vulgaris)
Consumption Timing on
Postprandial Blood Blucose
Levels. Artikel Penelitian.
Hal 5. Program Studi Ilmu
Gizi. Fakultas Kedokteran.
Universitas Diponegoro.
Semarang.
Carballo, J.L.I., Inda , Z.LH., and
Perez. 2002. A Comparison
between Two Brine Shrimp
Assay to Detect in Vitro
Cytotoxicity in Marine
Natural Product. BMC
Biotechnology 2 (17):1-5.
Chamorro G, Salazar M, Tamariz J,
Diaz F, Labarrios F., 1999.
Dominant lethal study of
alphaasarone in male and
female mice after sub-chronic
treatment. Phytother Res
13(4): 308-11.
Dwiatmaka, Y. 2001. Identifikasi
Simplek dan Toksisitas Akut
Secara BST Ekstrak Kulit
Batang Pule (Alstonia
scholaris). Program Pasca
Sarjana Universitas Gadjah
Mada, Yogyakarta.
Heyne K. 1987. Tumbuhan Berguna
Indonesia Jilid III. Badan
Litbang Kehutanan Jakarta.
Hal 1884.
Repository FMIPA
Katzung, BG, Masters S, Trevor AJ.
2009. Basic and Clinical
Pharmacology. 11th ed. New
York: McGraw-Hill Medical.
Lopez M. J., Hernandez A.,
Chamorro G., MendozaF. T.
1993. Alpha-Asarone toxicity
in longterm cultures of adult
rat hepatocytes. Planta Med
Journal 59(2):115-20.
Marianne, Yuandani, Rosnani. 2011.
Antidiabetic Activity From
Ethanol Exstract Of Kluwih’s
Leaf (Artocarpus
camansi).Jurnal Natural Vol.
11, No. 2. Fakultas Farmasi.
Universitas Sumatra Utara.
Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam
(MIPA). Universitas Syiah
Kuala. Darussalam. Banda
Aceh.
Marliayana. Soerya D., Fajar
Rakhman W., Nestri H., Rita
Rakhmawati., 2012. Uji
Toksisitas Secara Brine
Shrimp Lethality Test
Ekstrak Buah Merah
(Pandanus Conoideus
Lamk.). ALCHEMY jurnal
penelitian kimia 1(8): 24-33.
McLaughlin, J.L. 1991. Crown Gall
Tumours on Potato Disc and
Brine Shrimp Lethality: Two
Simple Bioassay for Higher
Plant Screening and
Fractination. Methods in
Plants Biochemistry 6 (1): 1-
30.
Meyer, B.N., and Ferrigni, N.R.,
1982. Brine Shrimp: A
Convenient General Bioassay
7
 for Active Plant Constituent.
Planta Medica 45: 31-34.
Mujahid A. 1998. Pengaruh daun
Dewa terhadap perubahan
morfologi sel serta struktur
morfologi lesi jaringan hepar
tikus. Skripsi. Surakarta:
Fakultas Kedokteran UNS.
Mukhtar, M.H., A.Z, Adnan dan
M.W, Pitra. 2007. Uji
Toksisitas Minyak Atsiri
Daun Kemangi (Ocimum
basilicum L.) dengan Metode
Uji Brine Shrimp Lethality
Bioassay. Jurnal Sains
Teknologi Farmasi. 12(1): 1-
4.
Silva, T.M., Nascimento, R.J.,
Batista, M.B., Agra, M.F.,
dan Camara, C.A. 2007.
Brine shrimp bioassay of
some species of solanum
from northeastern brazil.
Revista Brasileira de
Farmacognosia (17): 35-38.
Soegondo S. 1995. Penatalaksanaan
Diabetes Melitus Terpadu.
Jakarta: FKUI.
Sugiyanto, Soegihardjo, C. J., dan
Meiyanto, E. 1994. “Uji Ant
Karsinogenik Rutin.
Repository FMIPA
Suarni. 2005. Tanaman Obat tak
Selamanya Aman, http://
pikiranrakyat.com, 11
September 2005. Akses
Pekanbaru Mei 2014.
Sukardiman., R. Abdul dan P.N.
Fatma. 2004. Uji Praskrining
Aktivitas Antikanker Ekstrak
Eter dan Ekstrak Metanol
Marchantia planiloba Steph.
Dengan Metode Uji
Kematian Larva Udang dan
Profil Densitometri Ekstrak
Aktif. Majalah Farmasi
Airlangga 4 (3): 97 –100.
Viktoria Cyntia Yogya Astuti. 2012.
Jurnal Pengaruh Pemberian
Ekstrak Daun Kumis Kucing
(Orthosiphon aristatus)
Terhadap Penurunan Kadar
Glukosa Darah Tikus Wistar
yang Diinduksi Aloksan.
Universitas Ponegoro.
Semarang.
8