The present study develops a
protocol for rapid in vitro
micropropagation of a critically
endangered and floriculturally
most important epiphytic orchid,
Dendrobium primulinum Lindl.
through the culture of small shoot
tip explants (0.3 to 0.5mm)
derived from in vitro grown
seedlings. The shoot tip explants
cultured on solidified c basal
medium and MS medium alone or
supplemented with combination
of various concentrations of
growth regulators; α-naphthalene
acetic acid (NAA) and 6-
benzylaminopurine (BAP),
produced shoots and multiple
shoots. The maximum numbers of
rootless healthy shoots were
observed on MS medium fortified
with BAP 1.5 mgl-1 with an
average value of 4.5 shoots per
culture where shoot
multiplication was initiated after
5 weeks of culture of shoot tip.
Among the different tested
combination, MS medium with
BAP (1.5 mg l-1 ) and NAA (0.5 mg
l-1) were most effective for the
shoot multiplication. MS medium
supplemented with various
concentrations of rooting
Nghiên cứu hiện tại phát triển
một giao thức cho vi nhân giống
in vitro nhanh chóng của một loài
phong lan cực kỳ nguy cấp và cực
kỳ nguy hiểm, Dendrobium
primulinum Lindl. thông qua việc
nuôi cấy các chồi chồi nhỏ (0,3
đến 0,5mm) có nguồn gốc từ cây
con được trồng trong ống
nghiệm. Đầu chồi được nuôi cấy
trên môi trường rắn c và môi
trường MS đơn độc hoặc được bổ
sung với sự kết hợp của các nồng
độ chất điều hòa sinh trưởng
khác nhau; Axit axetic α-
naphthalene (NAA) và 6-
benzylaminopurine (BAP), tạo ra
các chồi và nhiều chồi. Số lượng
chồi khỏe mạnh không có rễ tối
đa đã được quan sát trên môi
trường MS được tăng cường BAP
1,5 mgl-1 với giá trị trung bình 4,5
chồi trên mỗi môi trường trong
đó nhân giống chồi được bắt đầu
sau 5 tuần nuôi cấy chồi. Trong số
các kết hợp thử nghiệm khác
nhau, môi trường MS với BAP (1,5
mg l-1) và NAA (0,5 mg l-1) có
hiệu quả nhất cho phép nhân
chồi. Môi trường MS bổ sung với
nồng độ khác nhau của rễ kích
thích tố viz. NAA, IAA và IBA cho
thấy phản ứng tích cực trong sự
hormones viz. NAA, IAA and IBA
showed positive response in
development of roots, except
NAA 0.5 mgl-1. The rooting was
observed after 3 weeks of culture
of shoot tip. The various
concentrations of IAA and IBA
were found to be effective
hormone for rooting of D.
primulinum in comparison to
NAA. The best rooting response
was observed on MS medium
with exogenous supply of IAA 0.5
mgl-1. The well developed in vitro
rooted plantlets were hardened
successfully in the potting mixture
containing cocopeat and
sphagnum moss in the ratio of
2:1. Nearly 70% of plantlets
survived.
Key words: Dendrobium
primulinum, shoot tip,
micropropagation, growth
regulator, in vitro, shoot
multiplication, acclimatization
INTRODUCTION
The genus Dendrobium is a highly
evolved and diversified sympodial
group of orchids, comprising
more than 1100 plant species and
widely distributed from Southeast
Asia to New Guinea and Australia
(Yin and Hong, 2009). In Nepal,
phát triển của rễ, ngoại trừ NAA
0,5 mgl-1. Sự ra rễ đã được quan
sát sau 3 tuần nuôi cấy chồi. Nồng
độ khác nhau của IAA và IBA đã
được tìm thấy là hormone hiệu
quả cho sự ra rễ của D.
primulinum so với NAA. Phản ứng
ra rễ tốt nhất được quan sát thấy
trên môi trường MS với nguồn
cung cấp IAA 0,5 mgl-1 ngoại sinh.
Các cây con gốc in vitro phát triển
tốt đã được làm cứng thành công
trong hỗn hợp bầu chứa cocopeat
và rêu sphagnum theo tỷ lệ 2: 1.
Gần 70% cây con sống sót.
Từ khóa: Dendrobium
primulinum, chồi ngọn, vi nhân
giống, chất điều hòa sinh trưởng,
in vitro, nhân chồi, thích nghi
GIỚI THIỆU
Chi Dendrobium là một nhóm hoa
lan đối xứng rất phát triển và đa
dạng, bao gồm hơn 1100 loài
thực vật và phân bố rộng rãi từ
Đông Nam Á đến New Guinea và
Úc (Yin và Hong, 2009). Ở Nepal,
Raskoti (2009) liệt kê khoảng 27
loài Dendrobium. Dendrobium
primulinum Lindl là một trong
những loài phong lan biểu sinh
cực kỳ nguy cấp và cực kỳ nguy
Raskoti (2009) enumerated about
27 species of Dendrobium.
Dendrobium primulinum Lindl is
one of the critically endangered
and floriculturally important
epiphytic orchids of Nepal, found
on tree trunks. It is commonly
known as “primrose yellow
Dendrobium” and is reported in
central part of the country in
deciduous tropical and
subtropical forest at an elevation
of 400 to 1200 m (Raskoti, 2009).
Apart from the floricultural value,
it has some traditional medicinal
properties. The dried stem is
commonly used as immune
system enhancer. Due to its
indiscriminate collection by
orchid traders to meet the
increasing demand for
horticultural purposes, habitat
destruction and natural calamities
the population of D. primulinum
Lindl. have been largely destroyed
in their natural habitat and are
categorized as rare and
endangered species. Orchid
requires a combination of
multiplicity of factor for
continued reproduction in nature.
The propagation of this species
through sexual means is a very
hiểm của Nepal, được tìm thấy
trên thân cây. Nó thường được
gọi là Dendrobium Vàng màu
vàng hoa anh thảo và được báo
cáo ở phần trung tâm của đất
nước trong rừng nhiệt đới và cận
nhiệt đới rụng lá ở độ cao 400
đến 1200 m (Raskoti, 2009).
Ngoài giá trị trồng hoa, nó có một
số tính chất dược liệu truyền
thống. Thân cây khô thường được
sử dụng làm chất tăng cường hệ
miễn dịch. Do bộ sưu tập phong
lan bừa bãi của nó để đáp ứng
nhu cầu ngày càng tăng cho mục
đích làm vườn, phá hủy môi
trường sống và thiên tai, dân số
của D. primulinum Lindl. đã bị phá
hủy phần lớn trong môi trường
sống tự nhiên của chúng và được
phân loại là loài quý hiếm và có
nguy cơ tuyệt chủng. Hoa lan đòi
hỏi sự kết hợp của nhiều yếu tố
để tiếp tục sinh sản trong tự
nhiên. Công tác tuyên truyền của
các loài này qua các phương tiện
tình dục là một quá trình rất chậm
như hạt giống của nó thiếu nội
nhũ và cần chất kích thích nấm
cho nảy mầm trong tự nhiên; loại
nấm này được cho là làm tăng sự
vận chuyển carbohydrate, auxin
và vitamin trong cây lan (Arditti et
slow process as its seeds lack
endosperm and need fungal
stimulant for germination in
nature; the fungus is believed to
augment the carbohydrate, auxin
and vitamin transport in the
orchid (Arditti et al., 1982). In
nature, only 2 to 5% of seeds
germinate (Rao, 1997) even if
they do so, the seeds take a long
time for their germination and
any disturbance in the habitat or
physical environment destroys
the whole population. Orchids are
highly heterozygous and their
vegetative propagation through
division of clumps of rhizomes,
bulbs or by the rooting of off
shoots also takes long time and
difficult to obtain desired number
of orchids. This difficulty in
natural population drives the D.
primulinum to extinction. It is
therefore important to take
initiative for the mass
propagation of
this orchid and establish it in
nature. Thus, tissue culture
technique is a potential
alternative method for mass scale
propagation and conservation of
rare, endangered and threatened
orchid.
al., 1982). Trong tự nhiên, chỉ có 2
đến 5% hạt nảy mầm (Rao, 1997)
ngay cả khi chúng làm như vậy,
hạt giống mất nhiều thời gian cho
sự nảy mầm của chúng và bất kỳ
sự xáo trộn nào trong môi trường
sống hoặc môi trường vật lý phá
hủy toàn bộ dân số. Hoa lan rất dị
hợp tử và sự nhân giống sinh
dưỡng của chúng thông qua việc
phân chia các thân rễ, củ hoặc
bằng cách ra rễ của chồi cũng mất
nhiều thời gian và khó có được số
lượng lan mong muốn. Khó khăn
này trong dân số tự nhiên khiến
loài D. primulinum bị tuyệt chủng.
Do đó, điều quan trọng là phải
chủ động cho việc tuyên truyền
đại chúng
hoa lan này và thiết lập nó trong
tự nhiên. Do đó, kỹ thuật nuôi cấy
mô là một phương pháp thay thế
tiềm năng cho công tác tuyên
truyền quy mô khối lượng và bảo
tồn hiếm, đang bị đe dọa và lan
đe dọa.
Nuôi cấy chồi là một hệ thống
hiệu quả để sản xuất số lượng lớn
cây con trong một khoảng thời
gian ngắn. Việc nhân giống và
trồng lan đã được cách mạng sau
khi phát hiện ra Knudson (1922).
Đầu tiên, ông đã phát triển sự nảy
Shoot tip culture is an efficient
system for the production of large
number of plantlets in a short
period of time. The propagation
and cultivation of orchid was
revolutionized after the discovery
of Knudson (1922). He first
developed the asymbiotic
germination of orchid seeds while
the credit of developing protocol
for in vitro
micropropagation goes to Morel
(1960). Since then, commercial
orchids are predominantly
produced by tissue culture and
this technique is used routinely in
many countries for mass scale
production of orchid seedlings. A
perusual of available literature
reveals that regeneration of
plantlet has been achieved by
only using stem section and in
vitro flowering through immature
embryo in D. primulinum.
However, there is no report on
clonal propagation of D.
primulinum using different
explants sources. Establishment
of a reliable cloning methodology
for this orchid is important in
terms of enabling the rapid
propagation and production of a
large number of high quality
mầm không đối xứng của hạt
giống hoa lan trong khi tín dụng
của việc phát triển giao thức cho
in vitro
vi nhân giống đến Morel (1960).
Kể từ đó, hoa lan thương mại chủ
yếu được sản xuất bằng nuôi cấy
mô và kỹ thuật này được sử dụng
thường xuyên ở nhiều nước để
sản xuất cây giống phong lan quy
mô lớn. Một tài liệu khác thường
cho thấy rằng sự tái sinh của cây
con đã đạt được bằng cách chỉ sử
dụng phần thân và ra hoa trong
ống nghiệm thông qua phôi chưa
trưởng thành ở D. primulinum.
Tuy nhiên, không có báo cáo về
sự lan truyền vô tính của D.
primulinum bằng các nguồn khác
nhau. Việc thiết lập một phương
pháp nhân bản đáng tin cậy cho
loài lan này rất quan trọng trong
việc cho phép nhân giống và sản
xuất nhanh chóng một số lượng
lớn các nhà máy chất lượng cao.
Do đó, cuộc điều tra hiện tại đã
được thực hiện để phát triển một
giao thức hiệu quả cho vi nhân
giống in vitro của D. primulinum
Lindl. thông qua văn hóa mẹo bắn
và để giới thiệu này
loài trong môi trường sống tự
nhiên.
plants. Thus, the present
investigation was undertaken to
develop an efficient protocol for
in vitro micropropagation of D. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
primulinum Lindl. through shoot Các vật liệu được sử dụng cho
tip culture and to introduce this cuộc điều tra hiện tại là các mẹo
species in natural habitat. chụp nhỏ của D. primulinum Lindl.
được lấy từ 20 tuần tuổi cây giống
MATERIALS AND METHODS được trồng trong ống nghiệm. Thí
The materials used for the nghiệm này được đánh giá trên
present investigation were small môi trường tĩnh Murashige và
shoot tips of D. primulinum Lindl. Skoog (MS) (1962) có bổ sung
which were sourced from 20 hoặc không có nồng độ khác nhau
weeks old in vitro grown và sự kết hợp của các chất điều
seedlings. This experiment was hòa sinh trưởng khác nhau để so
assessed on Murashige and Skoog sánh và điều tra ảnh hưởng của
(MS) (1962) static medium nồng độ hoocmon đối với sự
supplemented with or without nhân lên của chồi và rễ của D.
different concentration and primulinum Lindl. Môi trường
combination of various growth được bổ sung 3% sucrose dưới
regulators to compare and dạng nguồn carbon và đông cứng
investigate the effect of hormone bằng 0,8% agar. Độ pH của môi
concentration on shoot trường được điều chỉnh thành 5,8
multiplication and rooting of D. trước khi hấp khử trùng. Môi
primulinum Lindl. The medium trường được hấp khử trùng ở áp
was supplemented with 3% suất 15 psi và nhiệt độ 121 ° C
sucrose as carbon source and trong 20 phút.
solidified with 0.8% agar. The pH Bắn chồi văn hóa và tái sinh nhiều
of the medium was adjusted to chồi
5.8 before autoclaving. The media Để nhân chồi, đầu chồi với kích
was autoclaved at pressure of 15 thước 0,3 đến 0,5 mm được cắt
psi and temperature of 121°C for vô trùng với sự trợ giúp của lưỡi
20 min. phẫu thuật và đầu chồi đơn được
Shoot tip culture and
regeneration of multiple shoots
For shoot multiplication, the
shoot tip as explants of size 0.3 to
0.5 mm were cut aseptically with
the help of surgical blade and
single shoot tip was inoculated on
MS basal media and MS media
alone or supplemented with
combination of various
concentration of growth
regulators: 6-Benzylaminopurine,
BAP (0.5 to 2.0 mgl-1 ) and α-
naphthalene acetic acid, NAA (0.5
to 1.0 mgl-1). At every time of
isolation and inoculation of
explants, the blade and forceps
were flamed later and dipped in
spirit. After inoculation, the
cultures were kept in control
room and exposed to artificial
light (fluorescent light) with a
light/dark cycle of 16/8 h at
25±2°C. The observation was
taken at regular intervals of one
week up to the 24 weeks and the
obtained result was recorded. The
rootless multiple shoot were
developed in the entire tested
media except in MS with NAA 1.0
mgl-1
Rooting of regenerated shoots
tiêm trên môi trường cơ sở MS và
phương tiện MS hoặc bổ sung kết
hợp nhiều chất điều hòa tăng
trưởng khác nhau: 6 -
Benzylaminopurine, BAP (0,5 đến
2,0 mgl-1) và axit axetic α-
naphthalene, NAA (0,5 đến 1,0
mgl-1). Tại mỗi thời điểm cô lập
và tiêm chủng các nhà thám hiểm,
lưỡi kiếm và kẹp được đốt cháy
sau đó và nhúng vào tinh thần.
Sau khi cấy, môi trường nuôi cấy
được giữ trong phòng điều khiển
và tiếp xúc với ánh sáng nhân tạo
(ánh sáng huỳnh quang) với chu
kỳ sáng / tối 16/8 h ở 25 ± 2 ° C.
Quan sát được thực hiện trong
khoảng thời gian đều đặn của một
tuần cho đến 24 tuần và kết quả
thu được đã được ghi lại. Nhiều
chồi không gốc được phát triển
trong toàn bộ môi trường được
thử nghiệm ngoại trừ trong MS
với NAA 1.0 mgl-1
Rễ của chồi tái sinh
Để tạo rễ, nhiều chồi tái sinh của
D. primulinum đã được cắt bỏ và
một chồi được nuôi cấy trên môi
trường MS có chứa nồng độ
hoocmon kích thích rễ khác nhau.
IAA, IBA và NAA (0,5 đến 2 mgl-1).
Các ống nuôi cấy được duy trì
For the induction of root, the
regenerated multiple shoots of D.
primulinum were excised and a
single shoot was cultured on MS
media containing various
concentrations of rooting
hormone viz. IAA, IBA and NAA
(0.5 to 2 mgl-1 ). The culture
tubes were maintained in the
culture room under the same
condition as used for shoot
multiplication. The observation
was taken at regular intervals of
one week up to 16 weeks of
culture and the obtained root
number and their length were
recorded.
Acclimatization
After the formation of complete
rooted plantlet, they were
subjected to ex vitro hardening.
The plantlets were removed from
the culture tubes and were
washed thoroughly with sterile
double distilled water to remove
any trace of the medium. They
were then treated with 0.1%
(w/v) Bavistin (fungicide) and
again washed with sterilized
double distilled water. The rooted
plantlets were planted in the
potting mixture containing
cocopeat and Sphagnum moss in
trong phòng nuôi cấy trong cùng
điều kiện như được sử dụng để
nhân chồi. Việc quan sát được
thực hiện trong khoảng thời gian
đều đặn của một tuần cho đến 16
tuần nuôi cấy và số gốc thu được
và chiều dài của chúng được ghi
lại.
Làm quen với khí hậu
Sau khi hình thành cây hoàn toàn
bén rễ, chúng đã bị cứng ex vitro.
Các cây con được lấy ra khỏi các
ống nuôi cấy và được rửa kỹ bằng
nước cất hai lần vô trùng để loại
bỏ bất kỳ dấu vết nào của môi
trường. Sau đó, họ được xử lý
bằng 0,1% (w / v) Bavistin (thuốc
diệt nấm) và rửa lại bằng nước
cất hai lần khử trùng. Các cây con
có rễ được trồng trong hỗn hợp
bầu có chứa cocopeat và rêu
Sphagnum theo tỷ lệ 2: 1. Các nhà
máy được bao phủ bằng túi nhựa
trong 30 ngày và duy trì dưới độ
ẩm. Thực vật trở nên thích nghi
với độ ẩm tương đối giảm bằng
cách mở dần nắp nhựa và sau 50
ngày, chúng hoàn toàn được phát
hiện và làm cứng trong điều kiện
nhà kính.
Phân tích thống kê
Tầm quan trọng của hiệu quả điều
trị đối với nhân chồi và tạo rễ của
the ratio of 2:1. The plants were chồi được phân tích bằng cách sử
covered with plastic bags for 30 dụng phân tích phương sai một
days and maintained under chiều (ANOVA, p≤ 0,05) và so
humidity. Plants became sánh giữa các giá trị trung bình
acclimatized to a reduced relative của phương pháp điều trị được
humidity by gradually opening the thực hiện bằng thử nghiệm Tukey
plastic cover and after 50 days, HSD. Tất cả các phân tích thống
they were completely uncovered kê đã được thực hiện bằng cách
and hardened to greenhouse sử dụng nhóm cốt lõi phát triển R.
conditions.
Statistical analysis
Significance of treatment effects
on shoot multiplication and
rooting of shoot tip were KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
analyzed using one way analysis Trong cuộc điều tra hiện tại,
of variance (ANOVA, p≤0.05) and nhiều chồi và chồi đã được quan
comparison between mean values sát mà không có sự hình thành
of treatments were made by mô sẹo và cơ thể giống như
Tukey HSD test. All statistical protocorm (PLB) trên tất cả các
analysis was performed using R phương tiện cơ bản MS và
development core team. phương tiện MS được thử nghiệm
hoặc bổ sung với nồng độ và sự
RESULT AND DISCUSSION In the kết hợp khác nhau của BAP và
present investigation, multiple NAA nhưng đã có khá khác biệt
shoots and shoots were observed giữa và trong giới truyền thông về
without any intervening callus số lần chụp và độ dài của chúng.
and protocorm-like-body (PLB) Số lượng chồi nhiều gốc cao nhất
formation on all the tested MS (giá trị trung bình 4,5 chồi trên
basal media and MS media alone mỗi cây) đã thu được trong môi
or supplemented with various trường MS được bổ sung 1,5 mgl-
concentrations and combination 1 BAP trong đó các chồi dài nhất
of BAP and NAA but there were cũng được quan sát thấy. Phép
quite differences between and nhân chồi được bắt đầu sau 5
within media in terms of number
of shoot and their length. The
highest number of rootless
multiple shoots (an average value
of 4.5 shoots per explants) were
obtained in MS medium
supplemented with 1.5 mgl-1 BAP
in which the longest shoots were
also observed. The shoot
multiplication was initiated after
5 weeks of culture. As the
concentration of BAP from 0.5 to
1.5 mgl-1 considerably increased,
the multiple shoot production,
not the shoot formation was
retarded on BAP 2 mgl-1 . The
least number of shoot was
observed in MS media fortified
with 0.5 mgl1 BAP (Table 1).
Rootless multiple shoots were
obtained on all the tested media
except on MS medium
supplemented with NAA 1.0 mgl-
1 . It may be due to the difference
in genetic constituent of explants,
culture condition and the
presence of different endogenous
growth substance in explants.
During the present investigation,
it was found that MS medium
alone was not so effective for
induction of multiple shoots.
Similar result was obtained in
tuần nuôi cấy. Khi nồng độ BAP từ
0,5 đến 1,5 mgl-1 tăng đáng kể,
việc sản xuất nhiều chồi, chứ
không phải sự hình thành chồi bị
chậm lại trên BAP 2 mgl-1. Số
lượng bắn ít nhất được quan sát
thấy trong môi trường MS được
củng cố bằng 0,5 mgl1 BAP (Bảng
1).
Nhiều chồi không có rễ đã thu
được trên tất cả các môi trường
được thử nghiệm ngoại trừ trên
môi trường MS được bổ sung
NAA 1.0 mgl-1. Nó có thể là do sự
khác biệt về thành phần di truyền
của các nhà thám hiểm, điều kiện
nuôi cấy và sự hiện diện của chất
tăng trưởng nội sinh khác nhau
trong các nhà thám hiểm. Trong
quá trình điều tra hiện tại, người
ta thấy rằng môi trường MS một
mình không hiệu quả cho việc tạo
ra nhiều chồi. Kết quả tương tự
cũng thu được ở các loài
Dendrobium (Yasugi et al., 1994).
Điều này tiết lộ rằng việc bổ sung
các chất điều hòa sinh trưởng
thực vật trong môi trường dinh
dưỡng có thể là điều cần thiết cho
sự tăng trưởng, phát triển và tăng
sinh của các nhà thám hiểm chồi
ngọn. Trong thí nghiệm này, trong
số tất cả các môi trường được thử
Dendrobium species (Yasugi et al.,
1994). This revealed that the
addition of plant growth
regulators in nutrient medium
might be essential for further
growth, development and
proliferation of shoot tip explants.
In this experiment, among all the
media tested alone or with BAP
and NAA, MS medium with 1.5
mgl-1 BAP was found to be most
effective for shoot multiplication
which indicates that MS medium
alone or with BAP might be
suitable for shoot proliferation.
This result was also supported by
previous work of several
researchers on Dendrobium
densiflorum (Luo et al., 2006),
Geodorum densiflorum (Bhadra
and Hossain, 2003), Cymbidium
and Cattleya (Nagarju et al.,
2003). Among the different
combinations tested in this study,
BAP (1.5 mg l-1 ) and NAA (0.5 mg
l-1 ) were found to be effective
for the shoot multiplication. The
obtained result showed that
combination of BAP and NAA is
also suitable for shoot
multiplication. The previous work
of several researchers also
showed that the high
nghiệm một mình hoặc với BAP và
NAA, môi trường MS với 1,5 mgl-
1 BAP được tìm thấy là hiệu quả
nhất cho phép nhân chồi cho thấy
môi trường MS đơn độc hoặc với
BAP có thể phù hợp để tăng sinh
chồi. Kết quả này cũng được hỗ
trợ bởi công trình trước đây của
một số nhà nghiên cứu về
Dendrobium densiflorum (Luo et
al., 2006), Geodorum densiflorum
(Bhadra và Hossain, 2003),
Cymbidium và Cattleya (Nagarju
et al., 2003). Trong số các kết hợp
khác nhau được thử nghiệm
trong nghiên cứu này, BAP (1,5
mg l-1) và NAA (0,5 mg1) đã được
tìm thấy có hiệu quả cho phép
nhân chồi. Kết quả thu được cho
thấy sự kết hợp giữa BAP và NAA
cũng phù hợp cho phép nhân
chồi. Công trình trước đây của
một số nhà nghiên cứu cũng chỉ
ra rằng nồng độ BAP cao và nồng
độ NAA thấp là thuận lợi cho việc
tạo ra nhiều chồi. Kết quả tương
tự đã đạt được bởi Talukdar et al.
. 2003 fimbriatum (Rajkarnikar và
Niraula, 1994). Shiau et al. (2005)
đã nuôi cấy các phân đoạn sợi
trục của cây giống in vitro của
Dendrobium candum trên môi
trường MS với 2 mgl-1 BA và 0,1
concentration of BAP and low
concentration of NAA was
favorable for the induction of
multiple shoots. Similar results
were obtained by Talukdar et al.
(2003) in Denrobium orchid,
Sunitibala and Kishor (2009) in
Dendrobium transparens, Aerides
odorata (Pant and Gurung, 2005),
Cymbidium aloifolium
(Rajkarnikar, 2011), Cymbidium
forestii and Cymbidium kanran
(Chung et al., 1998), Dendrobium
fimbriatum (Rajkarnikar and
Niraula, 1994). Shiau et al. (2005)
cultured the axenic nodal
segments of in vitro seedling of
Dendrobium candidum on MS
medium with 2 mgl-1 BA and 0.1
mgl-1 NAA and they obtained
73.2% shoots within 75 days.
Hence, the regeneration potential
of explants is markedly influenced
by their physiological status and
chemical stimulus present in the
nutrient pool. The quality,
quantity and nature of growth
regulators have foremost effect
on the regeneration capacity of
the shoot tip. For the rooting of
shoots, MS medium fortified with
different concentrations of
rooting hormone viz. IAA, IBA and
mgl-1 NAA và họ đã thu được
73,2% chồi trong vòng 75 ngày.
Do đó, tiềm năng tái sinh của các
nhà thám hiểm bị ảnh hưởng rõ
rệt bởi tình trạng sinh lý và kích
thích hóa học của chúng trong bể
dinh dưỡng. Chất lượng, số lượng
và tính chất của các chất điều hòa
tăng trưởng có ảnh hưởng quan
trọng nhất đến khả năng tái sinh
của đầu chồi. Đối với sự ra rễ của
chồi, môi trường MS được tăng
cường với các nồng độ khác nhau
của hormone rễ. IAA, IBA và NAA
đã được sử dụng. Tất cả các
phương tiện được thử nghiệm
phản ứng tích cực với sự phát
triển của rễ, ngoại trừ môi trường
MS có NAA 0,5 mgl-1. Theo thống
kê, cả số gốc và chiều dài rễ của
D. primulinum Lindl. đã được tìm
thấy có ý nghĩa cao ở mức ý nghĩa
5%. Trong số đó, số lượng lớn rễ
được quan sát thấy trên môi
trường MS được bổ sung IAA 0,5
mgl-1 với giá trị trung bình 3,5 rễ
trên mỗi cây. Trong điều kiện này,
quá trình ra rễ bắt đầu sau 3 tuần
nuôi cấy. Chiều dài rễ dao động từ
0,3 đến 1,1 cm sau 15 tuần nuôi
cấy. Rễ thu được có màu xanh hơi
trắng và bình thường và hầu hết
trong số chúng có không khí
NAA were used. All tested media
positively responded to
development of roots, except MS
media with NAA 0.5 mgl-1 .
Statistically, both root number
and root length of D. primulinum
Lindl. were found to be highly
significant at 5% level of
significance. Among them, the
large numbers of roots were
observed on MS medium
supplemented with IAA 0.5 mgl-1
with an average value of 3.5 roots
per explants. In this condition, the
rooting started after 3 weeks of
culture. The root length ranged
from 0.3 to 1.1 cm after 15 weeks
of culture. The obtained roots
were slightly whitish green and
normal and most of them were
aerial in nature but are highest in
number in comparison to other
concentrations. Thus, thi medium
was found to be most effective
for the rooting of shoots of D.
primulinum. It may be due to the
presence of enhanced level of
auxin (IAA) and related
compounds in the medium which
has strong absorption of
inhibitory compounds. This result
was similar to the previous
findings of rooting of Aerides
nhưng có số lượng cao nhất so
với các nồng độ khác. Do đó, môi
trường thi đã được tìm thấy là có
hiệu quả nhất đối với sự ra rễ của
chồi D. primulinum. Nó có thể là
do sự hiện diện của mức độ tăng
cường của chất phụ gia (IAA) và
các hợp chất liên quan trong môi
trường có sự hấp thụ mạnh các
hợp chất ức chế. Kết quả này
tương tự với những phát hiện
trước đây về sự ra rễ của
Aeridesodorata (Pant và Gurung,
2005) và Micropera pallida
(Bhadra và Hossain, 2004).
Sunitibala và Kishor (2009) đã đạt
được mức độ đáp ứng ra rễ cao
nhất của Dendrobium
transparens trên môi trường MS
nửa sức mạnh với nguồn cung cấp
IAA 1 mgl-1 ngoại sinh. Rễ dài
nhất quan sát được là khoảng 0,4
đến 1,5cm trong môi trường MS
bổ sung IBA 1,5 mgl-1. Trong này
điều kiện, số gốc cũng được quan
sát là cao thứ hai trong số tất cả
các môi trường được thử nghiệm
với giá trị trung bình là 3.0 gốc
trên mỗi nền văn hóa. Kết quả
tương tự đã đạt được bởi
Pradhan (2007). Trong nghiên cứu
này, số lượng và chiều dài rễ tối
đa đã được quan sát trên môi
odorata (Pant and Gurung, 2005)
and Micropera pallida (Bhadra
and Hossain, 2004). Sunitibala
and Kishor (2009) obtained
highest level of rooting response
of Dendrobium transparens on
half strength MS medium with
exogenous supply of IAA 1 mgl-1 .
The longest root observed was
about 0.4 to 1.5cm in MS medium
supplemented with IBA 1.5 mgl-1
. In this
condition, the root number was
also observed to be the second
highest among all the tested
medium with an average value of
3.0 roots per culture. Similar
result was obtained by the
Pradhan (2007). In this
investigation, maximum number
and length of roots were
observed on MS medium with the
addition of IBA 1.5 mgl-1 in D.
densiflorum. The various
concentrations of IAA and IBA
were observed better for the
rooting of D. primulinum in
comparison to the NAA (Table 2).
Asghar et al. (2011) also obtained
maximum number of roots on
modified MS medium fortified
with various concentration of IBA
trường MS với việc bổ sung IBA
1,5 mgl-1 trong D. densiflorum.
Nồng độ khác nhau của IAA và IBA
đã được quan sát tốt hơn đối với
sự ra rễ của D. primulinum so với
NAA (Bảng 2). Asghar et al. (2011)
cũng thu được số lượng rễ tối đa
trên môi trường MS biến đổi
được tăng cường với nồng độ IBA
khác nhau so với NAA trong
Dendrobium nobile.
Các cây con gốc D. vitulinum phát
triển tốt trong ống nghiệm đã
được làm cứng thành công trên
hỗn hợp bầu chứa cocopeat và
rêu Sphagnum theo tỷ lệ 2: 1. Gần
70% tỷ lệ sống của cây con được
ghi nhận. Công trình này cho thấy
rằng hỗn hợp cocopeat và rêu sẽ
thuận lợi cho việc làm quen với
hoa lan biểu sinh như trong D.
primulinm Lindl. (Hình 1 và 2) Do
đó, khả năng chồi ngọn trong hoa
lan tái sinh nhiều chồi chồi và sự
phát triển tiếp theo của chúng
thành cây con có rễ hoàn toàn
cho thấy rằng nuôi cấy chồi ngọn
có thể được sử dụng thành công
để nhân lên nhanh chóng bằng
cách điều chỉnh phù hợp môi
trường dinh dưỡng. Do đó, giao
thức được phát triển sẽ góp phần
đáng kể vào việc nhân giống đại
than in NAA in Dendrobium trà, bảo tồn cũng như đáp ứng
nobile. nhu cầu thương mại của loài lan
The in vitro well developed có nguy cơ tuyệt chủng này, D.
rooted plantlets of D. primulinum primulinum Lindl
were successfully hardened on
potting mixture containing
cocopeat and Sphagnum moss in
the ratio of 2:1. Nearly 70% of
plantlets survival was recorded.
This work suggests that the
mixture of cocopeat and moss will
be favorable for the
acclimatization of epiphytic
orchids as in D. primulinm Lindl.
(Figures 1 and 2) Hence, the
ability of shoot tip in orchids to
regenerate multiple shoot buds
and their further development
into complete rooted plantlets
suggest that shoot tip culture can
be successfully employed for
rapid multiplication by suitably
adjusting the nutrient
environment. Thus, the
developed protocol will
significantly contribute to the
mass propagation, conservation
as well meet the commercial
demand of this wild endangered
orchid, D. primulinum Lindl