ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG CAO ÁP

(HPLC)

1.MỤC ĐÍCH THỰC HÀNH

Phân tích hàm lượng vitamin C có trong mẫu rau, trái cây, nước giải khát, đồ hộp, sữa và
các sản phẩm từ sữa…

2. NGUYÊN TẮC

Vitamin C có trong thực phẩm được trích bằng hệ lỏng-lỏng với dung môi hữu cơ
(methanol, nước pH 2,1 chuẩn bằng H2SO4). Sau đó được đưa vào máy sắc kí lỏng cao
áp (HPLC 1100 Hawlett Packard, đầu dò VWD, Cột Hypersil BDS, 3um C18), để định
lượng vitamin C có trong mẫu.

3. DỤNG CỤ VÀ THIẾT BỊ

 Hệ thống HPLC 1100 Hawlett Packard, đầu dò VWD, Cột Hypersil BDS, 3um
C18.
 Máy xay sinh tố.
 Giấy lọc, phễu.
 Màng lọc 0,2µm.
 Bình tam giác 250ml.
 Cân phân tích.
 Kim bơm 20µl.

4. HÓA CHẤT

 Chuẩn Vitamin C
 Methanol
 Nước khử ion 2 lần
 H2SO4
 Acetonitrile

5. TIẾN HÀNH THỰC HIỆN

5.1 CHUẨN BỊ CHUẨN

Nhóm đã sử dụng đường chuẩn Vitamin C của Viện công nghệ sinh học và môi trường để
phân tích mẫu.

Chuẩn được chuẩn bị với các nồng độ: 80ppm, 40ppm, 8ppm. Sau đó tiến hành thu nhận
sắc kí đồ và dựng đường chuẩn y = f(x) với y là diện tích của chuẩn, x là nồng độ các
chuẩn (80ppm, 40ppm, 8ppm).

5.2 CHUẨN BỊ MẪU

 Rau được rửa dưới vòi nước chảy, cắt khúc cho vào máy xay sinh tố, xay nhuyễn.
 Cân 5g vào bình tam giác, cho vào 50ml dung môi nước nước pH 2,1 chuẩn bằng
H2SO4.
 Đánh sóng siêu âm trong 10 phút.
 Lọc qua giấy lọc Trung Quốc.
 Định mức lại cho đủ 50ml
 Sử dụng xi lanh và màng lọc 0,2µm, để lọc đúng 1,5ml vào epfendope 1,5 ml.

5.3 ĐIỀU KIỆN CHẠY MÁY SẮC KÍ LỎNG CAO ÁP.

 Cột Hypersil BDS, 3um C18

 Inject = 20 µl.
 Hệ dung môi
 A: pH=2,1 (H2SO4) 70%
 B: ACN 30%
 Tốc độ dòng 0,5 ml/phút.
 Đầu dò VWD, bước sòng 254nm
 Thời gian chạy 10 phút.
 Hàm lượng Vitamin C trong mẫu xà lách xoong được tính theo công thức


 Trong đó: Cm- nồng độ Vitamin C tính theo đường chuẩn,
 V- thể tích định mức
 m- khối lượng mẫu rau ban đầu