FLAVONOIDE Extractia si identificarea derivafilor flavonici Prodi Sesh cent Vegetal pulverizat (1 g) se extrage cu metanol (10-15 ml), prin refluxare, in 3 aaa ‘© 10 minute fiecare repriza. in extractele metanolice reunite, objinute dupa racire si min vata), se executii reactii de identificare pentru derivafii flavonici. * Reactia Shibata (cianidineiy pusind pulbere ah i 4 mi extract metanolie se trateazi cu 0,5 ml acid clothidric cone. si cu pusi a = fragmente de span de magneziu. Aparifia in timp a unei colorajii rosii indic& prezenta 'vonolilor. Coloratia portocalie este caracteristic’ flavonelor, iar cea rosie-violacee flavanonelor, © Reactia cu hidroxizi alcalini 3 - 4 ml extract metanolic se dilueazi cu apa distilat4, in cazul unei colorajii intense initiale a acestuia. Se imparte volumul rezultat in par{i egale in 2 eprubete. intr-una din eprubete se aduc cAtiva ml de hidroxid de sodiu 10% si se compara coloratia objinutd cu cea a solutiei din eprubeta martor. Intensificarea coloratiei galbene in solutia metanolica alcalinizaté evidentiaza prezenja compusilor flavonici. > Reactia cu sdrurile unor metale plurivalente (Al**, Sb, Zn”) . 2-3 ml extract metanolic se trateaz cu 2-3 ml solutie apoasa de AICI, 2,5%. Reactia este pozitiva, daca coloratia galbena se intensifica si apare si o fluorescenta galben-verzuié sau albastre in UV.ite 4 Stationara (suport): hartie cromatograficd Whatman nr. 1 87a mobila: metanol-acid acetic glacial-apa (4:0,25:6) Revelare: a) expunere la amoniac. Examinare in VIS. b) pulverizare cu solujie metanolicd de clorur& de aluminiu 5%. Examinare in UV. Proba: extract metanolic de Sophorae flos; extract metanolic hidrolizat de Sophorae flos Etaloane: cvercetol, rutozid (solutii metanolice 1%) lui de analizat i): 0,5 g produs vegetal pulverizat se extrage cu 10 ml de metanol la reflux, timp de 30 minute. Solutia se filtreazi dupa ricire (flavonozide). S ml solutie extractiva preparati ca mai sus se supune hidrolizei cu 1 ml de solutie HCI 5%, Prin refluxare, 30 de minute. Dupa racire, solutia rezultat& se extrage cu 5 ml eter etilic (diclormetan sau cloroform) intr-o palnie de separare. Se separa faza organic& nepolara gi se usucd pe sulfat de sodiu anh. (agliconi flavonici).. Mod de lucru: ~ camera cromatografica = cutie Petri se taie hartia cromatografica in bucati de forma patratd cu latura mai mare cu aproximativ 4- 5 cm fata de diametrul cutici Petri, se traseaz cu creionul diagonalele, pe o mica portiune din centrul hartiei cromatografice. Se marcheazi 4 puncte de start la 1,5 cm fata de centru, - se aduc in doua din punctele de start solutiile proba cu ajutorul unui tub capilar, iar in celelalte doua puncte de start se pipeteaza solutiile etalon, - in centrul hartiei cromatografice se practicA un orificiu de 0,2-0,3 cm cu ajutorul unui ac spatulat. Prin acest orificiu se introduce o mes de vata tdiaté de o lungime convenabila si rasucitd, = bartia cromatograficé pregatita astfel se aseaza pe cutia Petri astfel incét mesa de vat s& p&trunda in cristalizorul cu faz mobild plasat pe fundul cutiei Petri, - se aduce capacul cutiei deasupra cutiei Petri pentru etanseizarea sistemului cromatografic, = cromatografierea este consideratd ca fiind incheiata, atunci cnd frontul de solventi ajunge la marginea cutiei Petri = se ridic4 capacul cutiei, se scoate mesa de vata si: Prin expunere la amoniac se constata intensificarea flavonoidici de pe cromatograma. Prin pulverizarea cu solufie metanolic’ se evidentiaza derivatii flavonici priG Al NALIZA CROMATOGRAFICA PE STRAT SUBTIRE (CS S.) PENTRU DERIVATII FLAVONOIDICI Su; A oo Kieselgel 60 Fertigplatten (Merck) (10 x 20) = ¥ acetat de etil-acid formic-acid acetic glac.-apa (100¢1 1:11:27) ¢velare: a) examinare in lumina U.V. b) Pulverizare cu solutie metanolica 1% de RSN si examinare in VIS —— Tutozid, evercetol, acid clorogenic, acid cafeic P, aeehd Pentru substante naturale) = difenilboriloxietilamina = f-etilaminoesterul acidului difenilboric Toba: extract metanolic din Sophorae flos Pregitirea probei: 1 g de produs vegetal Pulverizat se refluxeazi cu 10 ml metanol, timp de 5 minute, Ia 60°C. s : e filtreaz’, iar dupa concentrarea Ja sec a filtratului, reziduul obtinut se reia cu pufin metanol pentru spotare pe placa cromatografic’. DETERMINAREA CANTITATIVA A FLAVONOIDELOR Principiul_metodei: flavonoidele extrase cu alcool de 50° (etanol sau metanol) din produsul vegetal, prin tratare cu cloruri de aluminiu 25 /\ (solutie apoas4), formeaz4 compusi colorati in galben, colorimetrabili la A = 430 nm. Mod de lucru: | g de produs vegetal pulverizat se extrage cu 100 ml alcool de 50° intr-un balon cu dop rodat, prin refluxare, timp de 30 de minute. Solutia fierbinte se filtreazA prin vat intr-un balon cotat (100 ml) si dupa ricire se completeaza la semn, spaland reziduul vegetal cu acelasi solvent. 10 ml din solutia alcoolica obtinuti anterior se dilueazd cu metanol la 25 ml intr-un balon cotat. Se agiti 2-3 minute gi se las4 in repaos 10 minute. Se filtreaz4 prin hartie de filtru, indepartand primele portiuni de filtrat. La 5 ml de filtrat se adauga S ml de solutie de acetat de sodiu 100 g/l si 3 ml solutie de cloruri de aluminiu 25 g/l, se agiti si apoi se completeaz4 cu metanol la 25 ml. Se las in repaos 15 minute, dupa care, dacd este cazul se completeaz cu metanol la semn. Se determina absorbanga solutiei la 4 = 430 nm, folosind ca lichid de compensare 0 solutie objinuti in aceleasi conditii din 5 ml filtrat, 8 ml ap si metanol la 25 de a Construirea curbei etalon: in aceleasi in lucru: 1,0 ; 2,0 ; 3,00 si 4,0 ml solufie-et 100 g/l, 3 ml clorura de aluminiu 25 g/l ca lichid de compensare 0 solutie