Professional Documents
Culture Documents
Potency Of Mung Bean Sprout As Enzyme Source (Α-Amilase) : Potensi Kecambah Kacang Hijau sebagai Sumber Enzim Α-Amilase
Potency Of Mung Bean Sprout As Enzyme Source (Α-Amilase) : Potensi Kecambah Kacang Hijau sebagai Sumber Enzim Α-Amilase
inkubator, termometer, 1
Spektrofotometer, Oven, enzim -amilse. Sampel yang diuji adalah ekstrak
Kjeltech, dan alat bantu analisis lainnya. enzim kecambah kacang hijau varietas Kenari pada
umur hari ketiga. Hasil pengamatan menunjukkan suhu
Prosedur Kerja inkubasi optimum adalah pada 30ºC.
1 hidrasi dari
Sifat kimiawi tersebut berupa proses enzim α-amilase varietas Kenari pada hari pertama
koloida-koloida hidrofil yang berakibat bertambah 1,92 unit/mL turun pada hari kedua menjadi 1,81
besarnya volume dan timbulnya tekanan imbibisi, pada unit/mL, kemudian naik menjadi 2,62 unit/mL pada hari
awal proses absorpsi dari air menyebabkan terjadinya ketiga, turun kembali menjadi 2,46 unit/mL pada hari
pengeluaran panas. Adanya panas menunjukkan keempat, dan pada hari kelima turun menjadi 2,19
terjadinya proses pembentukan susunan-susunan unit/mL (Tabel 2).
kimiawi yang baru atau terjadi suatu pembenahan baru Pada varietas Parkit dari 1,96 unit/mL turun
komponen-komponen di dalam benih/kecambah menjadi 1,66 unit/mL pada hari kedua, kemudian naik
tersebut. Koloida-koloida yang membentuk gel hidrofil menjadi 2,91 unit/mL pada hari ketiga, hari keempat
merupakan dinding semipermiabel dalam proses relatif tetap yaitu 2,93 unit/mLdalam artian tidak
masuknya air dalam biji mengikuti kaidah sistem berbeda nyata, selanjutnya pada hari kelima turun
osmose [1]. menjadi 2,49 unit/mL.
Aktivitas enzim α-amilase varietas Bhakti pada
Kadar protein kecambah kacang hijau hari pertama 3,09 unit/mL, turun menjadi pada 2,99
unit/mL, naik menjadi 4,09 unit/mLpada hari ketiga
Kadar protein kecambah dari ketiga varietas Tabel 4). Hasil penelitian tersebut didukung hasil
kacang hijau semakin menurun dengan bertambahnya penelitian sebelumnya bahwa pada waktu permulaan
umur kecambah. Penurunan kadar protein tiap varietas perkecambahan yaitu setelah 6 jam Giberellic Acid
menunjukkan selisih yang beragam. Umur kecambah (GA) membentuk enzim α-amilase. Kemudian enzim
hari pertama varietas Bhakti tertinggi (15,30 %) diikuti tersebut dalam 12-18 jam perkecambahan (hari
oleh varietas Parkit (14,46 %) dan Kenari (13,52 %) pertama) mencerna amilosa dan amilopektin pada pati
dengan selisih kadar protein yang relatif kecil. Kadar kecambah (Gambar 1,2). Hal tersebut menyebabkan
protein mengalami penurunan mengikuti bertambahnya aktivitas enzim α-amilase lebih besar dibandingkan
hari kecambah. Berturut-turut mulai hari pertama, kedua, pada hari kedua. Aktivitas enzim mulai naik secara
ketiga, keempat dan hari kelima terhadap varietas stabil pada hari ketiga dan turun pada hari keempat
Kenari adalah 13,52 %, 11,72 %, 10,48 %, 8,72 % dan dan kelima [1].
7,40 % (Tabel 1). Penyerapan air pada proses perkecambahan biji
Kecambah varietas Bhakti dari 15,30 %, 13,35 %, mempunyai aktivitas utama untuk mengaktifkan
12,93 %, 9,25 % dan 8,20 %. Sedangkan varietas Parkit makromolekul dan organel sel di dalam biji. Selama
dari 14,46 %, 12,50 %, 11,21 %, 8,31 % dan 7,20 %. proses perkecambahan sebagian besar enzim dalam
Kisaran kadar protein ketiga kecambah kacang hijau biji menjadi aktif diantaranya enzim α-amilase. Kadar
adalah hari pertama 13,52 – 15,30 %, hari kedua 11,72
– 13,35 %, hari ketiga 10,48 – 12,93 %, hari keempat Tabel 2. Aktivitas enzim α-amilase, pH, protein terlarut
8,31 – 9,25 %, da hari kelima 7,20 – 7,40%. Data ekstrak enzim, dan aktivitas spesifik ekstrak kecambah
tersebut menunjukkan bahwa kadar protein varietas Pro- Akti-
Bhakti kelima umur kecambah mengandung protein Umur Aktivitas tein vitas
tertinggi dibanding varietas Kenari dan Parkit. Vari kecam- enzim α- Ter- spesi-
pH
Penurunan kadar protein kecambah kacang hijau tas bah amilase larut fik
diperjelas beberapa pendapat. Perlakuan (Hari) (Unit/mL) (mg/ (Unit/
perkecambahan turut mempengaruhi kadar protein, mL) mg)
c a
selama perkecambahan. Selanjutnya terjadi penurunan 1 1,92 5,69 3,30 0,58
c ab
berat kering pada kotiledon yang disebabkan lepasnya 2 1,81 5,14 3,56 0,50
gula selama perendaman dan perkecambahan. Protein Ke- a a
3 2,62 5,43 1,66 1,57
dalam kecambah digunakan untuk pembentukan protein nari a a
4 2,46 5,24 1,86 1,32
b b
baru, cytoplasma, membran, ribosom, mitochondria dan 5 2,19 5,03 3,49 0,62
terpenting pembentukan α-amilase [10]. 1 3,09
b
5,61
a
3,66 0,84
b a
2 2,99 5,23 3,49 0,85
Aktivitas enzim α-amilase ekstrak enzim Bha a a
3 4,09 5,45 2,37 1,73
kti b a
4 2,87 5,22 3,08 0,93
c a
Pada penelitian pendahuluan menunjukkan bahwa 5 2,66 4,90 3,90 0,42
suhu optimum aktivitas enzim α-amilase tertinggi pada 1 1,96
c
5,79
a
2,73 0,71
suhu 30 ºC. d a
2 1,66 5,42 3,65 0,45
Uji statistik menunjukkan umur dan varietas Par a a
3 2,91 5,51 1,86 1,56
kecambah kacang hijau berpengaruh nyata terhadap kit a a
4 2,93 5,22 1,74 1,68
aktivitas α-amilase. Hari pertama dan kedua 5 2,49
b
4,89
a
2,40 1,08
perkecambahan, aktivitas enzim α-amilase belum stabil, Keterangan : Angka yang diikuti oleh huruf yang sama dalam kolom
hal ini diperlihatkan ketiga varietas. Misalnya aktivitas (a, b,...) tidak berbeda nyata pada taraf 0,05 uji Duncan
Ikatan glikosida
alfa 1,4 Unit glukosa
CH2OH
1 CH2OH
Nilai pH
CH2OH CH2OH
H
H
O H H
H
O H H
H
O H H
H
O H Tujuan mengukur pH untuk mengetahui pH
OH H OH H
O
OH H
O
OH H
O O
O ekstrak enzim kecambah apakah masih sesuai dengan
H OH H OH H OH H OH
pH lingkungan α-amilase. Kisaran pH ekstrak enzim
Amilosa
alfa amilase
kecambah ketiga varietas hari pertama 5,61 – 5,79,
hari kedua 5,14 – 5,42, hari ketiga 5,43 – 5,51, hari
H
CH2OH
O H H
CH2OH
O H H
CH2OH
O H
keempat 5,22 – 5,24. Perubahan pH ekstrak kecambah
H H
OH H
OH2 OH
H
OH H OH H varietas Kenari mulai dari hari pertama 5,69 turun
OH OH
H OH H OH
O
H OH menjadi 5,14 pada hari kedua, naik lagi pada hari
D-Glukosa Maltosa ketiga yaitu 5,43, pada hari keempat 5,24 dan pada
Gambar 1. Deskripsi skematik aktivitas -amilase kecambah hari kelima menjadi 5,03. Demikian juga
terhadap amilosa varietas Bhakti dan Parkit mengalami pola perubahan
nilai pH yang sama dengan varietas Kenari hanya nilai
H
CH2OH
O H H
CH2OH
O H H
CH2OH
O H
pH yang berbeda dan perbedaan yang tidak berarti
H
HO
H
OH H
O
OH H
O
H
OH H Ikatan pada titik (Tabel 1).
percabanganalfa 1,6
H OH H OH H OH
O
Kondisi pH ekstrak kecambah masih diantara pH
H
CH2OH
O H H
CH2
O H H
CH2OH
O H
aktivitas optimal yaitu 4,89-5,79. Hal ini sesuai dengan
O
H
OH H
O
H
OH H
O
H
OH H
O
hasil penelitian sebelumnya kisaran aktivitas enzim α-
H
Amilopektin
OH H OH H OH amilase 4,8-8,5 [5,13]. Perbedaan kisaran pH tersebut
alfa amilase
CH2OH
tergantung sumber enzimnya. Data perkecambahan
Cabang
H
H
O H
OH H
hari ketiga menunjukkan bahwa varietas Bhakti
H
CH2OH
O H H
CH2OH
O H H
CH2OH
O H
O
H OH
mengandung protein tertinggi yaitu 12,93% dan
aktivitas enzim α-amilase tertinggi yaitu 4,09 unit/mL.
H H H Titik cabang
O
OH H OH H OH H
OH OH2 OH OH CH2
O
H OH H OH H OH H O H
H
D-Glukosa Maltosa Rantai utama OH H
O
O
H OH
Protein terlarut ekstrak enzim
Limit dekstrin Konsentrasi protein terlarut dalam ekstrak enzim
Gambar 2. Deskripsi skematik aktivitas -amilase menunjukkan perbedaan baik antar ketiga varietas
terhadap amilopektin maupun umur kecambah. Pada grafik terlihat pada
hari pertama kecambah protein terlarut varietas Kenari
air bahan sangat mempengaruhi laju reaksi enzimatik. 3,30 mg/mL, Bhakti 3,66 mg/mL dan Parkit 2,73
Pada kadar air bebas yang rendah terjadi halangan dan mg/mL, selanjutnya pada hari kedua umur kecambah
rintangan sehingga baik difusi enzim atau substrat konsentrasi ketiga varietas hampir ketemu disuatu titik
terhambat. Kegiatan enzim terjadi bila terdapat molekul dengan kisaran 3,49-3,65 mg/mL. Selanjutnya pada
air lebih banyak dari absorpsi monomolekuler. hari ketiga umur kecambah protein terlarut turun
Peningkatan kadar air bebas digunakan untuk drastis pada varietas Kenari dan Parkit, sedangkan
melancarkan reaksi enzim [1,11]. varietas Bhakti relatif rendah turunnya dengan
Demikian juga halnya protein mengalami konsentrasi 2,87 mg/mL.
perombakan, protein yang dirombak dalam biji adalah Pada hari keempat umur kecambah konsentrasi
tipe protein yang tidak aktif dalam proses metabolisme, protein terlarut naik kembali, hingga hari kelima umur
sedangkan yang lain adalah aktif yang disebut kecambah menghasilkan protein terlarut tertinggi pada
enzimprotein dan nukleoprotein dalam jumlah yang varietas Bhakti yaitu 3,91 mg/mL diikuti oleh varietas
sedikit. Kenari dan Parkit masing-masing 3,49 mg/mL dan
Umumnya aktivitas enzim α-amilase terjadi pada 2,40 mg/mL.
suhu 30-40 ºC dan aktivitasnya akan mengalami Perbedaan konsentrasi protein terlarut ekstrak
penurunan pada kisaran suhu 45-50 ºC, hal ini enzim diduga berasal dari kadar protein awal
disebabkan karena enzim mangalami denaturasi kecambah tiap varietas. Demikian juga terlihat ada
akibatnya molekul-molekul enzim rusak sehingga korelasi antara naiknya aktivitas enzim α-amilase dan
kehilangan spesifitasnya [5,8]. turunnya konsentrasi protein terlarut tiap perlakuan.
Sebelumnya, informasi suatu hasil penelitian Misalnya ekstrak enzim varietas Bhakti aktivitas α-
terhadap kecambah gandum bahwa mulai hari pertama amilase tertinggi pada hari ketiga yaitu
sampai hari keempat terjadi kenaikan aktivitas enzim α- 4,09Unit/mLdan sebaliknya konsentrasi protein terlarut
amilase. Selanjutnya pada hari kelima mengalami terendah dibanding umur kecambah lainnya yaitu 2,89
penurunan, hal ini menunjukkan hasil penelitian aktivitas mg/mL.
enzim sumber kecambah kacang hijau relatif sama Kadar protein ekstraseluler diukur untuk menilai
dengan kecambah gandum [12]. seberapa jauh peningkatan aktivitas enzim dipengaruhi
protein-protein lain yang ikut larut dalam ekstrak enzim.
Keragaman besarnya kelarutan protein dalam ekstrak
1
enzim, selain dipengaruhi oleh kadar protein dalam 2. Cahyono, D., 2004, Pengaruh Proses Pengeringan
bahan, proses ekstraksi juga akan berpengaruh Terhadap Sifat Fisikokima dan Fungsional Tepung
terutama pada tahap penyaringan dan sentrifugasi. Kecambah Kacang Hijau Hasil Germinasi dengan
Perlakuan Natrium Alginat Sebagai Elisitor Penolik
Aktivitas spesifik enzim α-amilase Antioksidan. Skripsi IPB. Tidak Dipublikasi. 72 hal.
Beberapa ahli memasukkan kadar protein terlarut 3. Sumarno dan I. Manwan. 1990. Grain Legumes.
sebagai faktor dalam mengukur aktivitas enzim dalam National Coordinated Research Program. Central
unit aktivitas spesifik. Aktivitas spesifik adalah jumlah Res. Inst for Agric. (CRIFC). Bogor.
mikromol produk aktivitas enzim permiligram protein. 4. Rahayu, K., 1988, Isolasi dan Pengujian Aktivitas
Aktivitas spesifik enzim α-amilase tertinggi dihasilkan Enzym. Pusat antar Aniversitas. UGM. Yogyakarta.
adalah 1,73 Unit/mg varietas Bhakti pada umur hari hal. 1-7.
ketiga. 5. Richana, N., Setyawan, A., Hartoto, L., dan
Damardjati, D.S., 1999, Kinetik Kultivasi
Pemanfaatan kecambah kacang hijau sebagai Produksi -Amilase oleh Isolat Bakteri Mesofilik
sumber enzim α-amilase MII-10. Jurnal Bioteknologi Pertanian. 4 (2): 41-48.
6. AOAC, 1995, Official Methods of Analysis of the
Ekstrak enzim α-amilase yang terkandung dalam Association of Official Analytical Chemists.
kecambah kacang hijau tersebut dapat dimanfaatkan Washington. D.C.
pada modifikasi pati atau tepung-tepungan. Sebaiknya 7. Sutopo, J., 1993, Aktivitas Enzym Hidrolitik Kapang
pemanfaatan enzim tersebut dengan bahan sumbernya. Rhizopus spp pada Tempe. Program Pascasarjana
Berdasarkan pertimbangan lebih ekonomis, karena tidak KPK. IPB. Bogor. hal. 22-27.
perlu mengekstrak enzimnya. Selain itu, kecambah 8. Poehlman, P., and Milton, J., 1991, The Mungbean
kacang hijau pada hari ketiga mengandung nutrisi tinggi Quality and Utilization. Third edition. Oxford.p. 315-
terutama senyawaan antioksidan seperti tokoferol (pro 337.
vitamin E) 936,4 ppm, fenolik 11,3 ppm. Senyawa fenolik 9. Setiasih, T., 1993, Pengaruh Cara Pembuatan
dengan antioksidan lainnya pada konsentrasi rendah Tepung Kecambah Kacang Hijau (Vigna Radiata)
dapat melindungi bahan pangan tersebut dari kerusakan terhadap Kandungan Gizi dan Antinutrisi. Fateta.
oksidatif [2]. IPB. Bogor.
Menggunakan enzim α-amilase dalam pengolahan 10. Winarno, F.G., 1983, Enzym Pangan. Ed. III. PT.
bahan pangan sangat menguntungkan, karena lebih Gramedia. Jakarta. hal. 18-59.
aman dan adanya tambahan nutrisi dari bahan tersebut 11. Marie, A., 1993, Introduction and Secretion of α-
[13,14]. Misalnya pada bahan sumber karbohidrat yang Amylase . Treated half Seeds and Aleurones of
mengandung pati beramilosa tinggi dalam serealia Wheat. Journal Cereal Chemistry. 70 (2):127-130.
[15,16]. 12. Fogarty, W.M., 1983, Microbial Amylases. In
Fogarty (ed). Mycrobial Enzymes and Technology.
KESIMPULAN Applied Science Publisher Ltd., London. Appl. Sci.
Publ.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kecambah 13. BIOTEC, 2003, Physically Modified Cassava
varietas Bhakti pada umur hari ketiga mengandung Starch and its Potential Application in Food and
kadar protein dan aktivitas enzim α-amilase tertinggi Non-food Industry. (www.me.BIOTEC.him .diakses
dibanding perlakuan lainnya. Kecambah berkadar air 12 Maret 2004).
65,23%, protein 12,93%, sedangkan ekstrak enzim 14. Marchal, L., and Beeftink, R., 2002, Enzymatic
mengandung protein terlarut 28874,3 mg/mL, pH 5,45, Starch Hydrolysis. (www.ftns.wau.nl. diakses 12
aktivitas enzim 4,09 U/mL, dan aktivitas spesifik 1,73 Oktober 2005).
U/mg. Pemanfaatan kecambah kacang hijau sebagai 15. Chibbar, R., 2000, Carbohydrate Modification. An
sumber enzim α-amilase, sebaiknya dengan bahan Intregrated Approach to Cereal Improvement.
kecambahnya. (http://www.pbi.nrc.ca/en/research/carb.htm
diakses 5 September 2002).
DAFTAR PUSTAKA 16. Wang, N.S., 2002. Starch Hydrolysis by Amylase.
(www.Glue.umd.edu. diakses 10 April 2004).
1. Setyono, A. 1982, Aspek Penambahan Asam Fitat
dalam Kacang Hijau Selama Perkecambahan. Tesis.
Pascasarjana UGM. Yogyakarta. hal. 54-59.