What are Immunoassays?

What are Immunoassays?
By Dr. Sanchari Sinha Dutta, Ph.D.
Reviewed by Dr. Surat P, Ph.D.

Immunoassays are bioanalytical methods that use the specificity of
an antigen­antibody reaction to detect and quantify target molecules
in biological samples. These methods are frequently used in clinical
diagnostics, drug discovery, drug monitoring, and food testing.

Khamkhlai Thanet | Shutterstock

Types of immunoassays
The principle of an immune assay is based on competitions between a fixed
amount of labeled analyte and a variable amount of unlabeled sample analyte
for binding a limited number of binding sites of an antibody specifically raised
against the analyte. These methods can be used to detect a target molecule
quantitatively, semiquantitatively, or qualitatively.

Radioimmunoassay (RIA)
P
Saved from URL: https://www.news-medical.net/life-sciences/What-are-Immunoassays.aspx
1
/4
What are Immunoassays?

Radioimmunoassays use a radioisotope as a label to quantify hormones,
drugs, and viral antigens. A known concentration of radiolabeled antigen is
incubated with a fixed concentration of antibody specific for that antigen. This
radiolabeled antigen­antibody complex is then mixed with a biological sample
containing an unknown concentration of the same antigen.

In principle, if the concentration of sample antigen is higher than the
radiolabeled antigen, the sample antigen will bind the limited number of
antibody binding sites by replacing the radiolabeled antigen. Next, the
radioactivity of these free (not bound to an antibody) radiolabeled antigens is
measured; which is directly proportional to the concentration of unlabeled
antigen present in the biological sample.

However, the short half­life of radioisotopes, as well as health hazards
associated with their use, considerably limits the application of this method in
many laboratories.

Enzyme­linked Immunosorbent Assay (ELISA)
In an ELISA, an enzyme is linked to an antibody that has been specifically
raised against an antigen of interest.

Biological samples containing the target antigen are allowed to bind the
enzyme­labeled antibody and the reaction is visualized using an enzyme­
specific substrate which is added to the reaction mixture. The enzyme­specific
substrate binds to the enzyme attached to the antibody, generating a colored
product which can be detected using chromogenic or chemiluminescent
imaging techniques.

ELISA has a high specificity and sensitivity, thus it is frequently used for high­
throughput screening of antibodies or drugs.

Fluoroimmunoassays
Fluorescent probes are used to label antibodies. Biological samples containing
an antigen of interest is incubated with a fluorescent­labeled antibody. The
fluorescence intensity of the resulted antigen­antibody complex is measured
to quantify the target antigen.

Chemiluminescence immunoassays

P
Saved from URL: https://www.news-medical.net/life-sciences/What-are-Immunoassays.aspx
2
/4
What are Immunoassays?

Luminescent molecules when return from an excited state to a ground state,
emit visible or near­visible light (luminescence), which can be detected by
luminescent signal measuring devices.

In chemiluminescence immunoassays, luminophore markers, such as
acridinium esters, can be used directly; or enzymatic markers including
alkaline phosphatase and horse radish peroxidase can be used indirectly with
adamantyl 1, 2­dioxetane aryl phosphate (AMPPD) and luminol substrates,
respectively.

The major advantage of this method is that the readout can be increased by
using enhancers, which allow the reaction to continue for a longer time
without reducing the signal intensity.

Counting immunoassays
Counting immunoassays use particle counting technology. Polystyrene beads
(Latex particles) are coated with antibodies specific for an antigen of interest.
When incubated with a biological sample containing the target antigen, these
beads form immune complexes, which form visible clumps (agglutination).

Depending on the concentration of target antigen, some beads remain
unbound and can be counted using a cell counter. The number of unbound
beads inversely denotes the concentration of target antigen.

Trends in immunoassays
Advanced immunoassays are being developed that are ultra­sensitive and less
time consuming. The surface plasmon resonance (SPR)­based label­free
immunoassay is one such example that comes with many special features,
such as superfast analysis (within minutes), minimal requirement of sample
and reagents, label­free microfluidic immunoassay protocol, and fully
automated system with a high­throughput.

In addition, smartphone­based immunoassay formats, multiplex bead­based
assays, lateral flow immunoassay formats are among the latest developments
that have facilitated monitoring and management of health­related
complications in real­time.

P
Saved from URL: https://www.news-medical.net/life-sciences/What-are-Immunoassays.aspx
3
/4
What are Immunoassays?

Sources
https://www.sepmag.eu/blog/different­types­of­immunoassays
https://www.sciencedirect.com/topics/neuroscience/immunoassay
microbenotes.com/radioimmunoassay­principle­uses­and­limitations/
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC516346/
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5483212/

Last Updated: Dec 20, 2018

Written by

Dr. Sanchari Sinha Dutta
Dr. Sanchari Sinha Dutta is a science communicator who believes in spreading the
power of science in every corner of the world. She has a Bachelor of Science (B.Sc.)
degree and a Master's of Science (M.Sc.) in biology and human physiology.
Following her Master's degree, Sanchari went on to study a Ph.D. in human
physiology. She has authored more than 10 original research articles, all of which
have been published in world renowned international journals.

P
Saved from URL: https://www.news-medical.net/life-sciences/What-are-Immunoassays.aspx
4
/4