Ključni koncepti

• nepopolna oksidacija organskih snovi

• reoksidacija NADH

• potenical za prenos spojin

• ATP in njegove prenešene skupine

• acilni estri in njihove prenešene skupine

• substratna fosforilacija

• piruvat kot ključni intermediat fermentacij

• EMP, ED, FK, PPT metabolne poti

• uravnoteženost fermentacij

• sintrofija
Fermentacija
Temeljna problema pri fermentaciji

1. pridobivanje energije (substratna fosforilacija)

2. odstranjevanje viškov elektronov (reducirani fermentacijski produkti)

oksidirana organska spojina

(donor elektronov)

Pi intermediat
NADH
intermediat-P
NAD+
ATP
intermediat

reducirana organska spojina

(akceptor elektronov)
ATP in potencial za prenos visokoenergijskih skupin

AMP

adenin-riboza-O-P~P~P
α β γ

ADP

prenešena skupina odhajajoča skupina

AMP + P~P (sinteza proteinov)
ADP + P (sinteza polisaharidov)
P + ADP (kinaze)
Substratna fosforilacija

Za substratno fosforilacijo potrebujemo encim kinazo, ADP in donor

fosfatne skupine. Donorji so lahko:

• acetil-fosfat donor fosfata

• 1,3-bifosfoglicerat ADP + P ATP

• fosfoenol piruvat
encim: kinaza
• sukcinil-fosfat
Glikoliza: Embden-Meyerhof-Parnas (EMP)
metabolna pot

glukoza + ATP

glukoza-6-P

fruktoza-6-P + ATP

fruktoza-1,6-P

gliceraldehid-3-P dihidroksiaceton-P

NADH 1,3-difosfoglicerat
ATP
3-fosfoglicerat

2-fosfoglicerat

fosfoenolpiruvat
ATP
piruvat
Pentoza fosfat (PPT) metabolna pot

Oksidativni del
Neoksidativni del fruktoza-6P

gliceralaldehid-3P
pentoza fostat
metabolne poti

sedoheptuloza-7P
riboza-5P
eritroza-4P

ksiluloza-5P

ribuloza-5P

gliceralaldehid-3P
ksiluloza-5P
fruktoza-6P
 Nastanek piruvata: Entner-Doudoroff (ED)
metabolna pot

glukoza-6-P
NADPH
6-P-glukonolakton

6-P-glukonat

2-keto-3-deoksi-6-P-glukonat

piruvat gliceraldehid-3-P
NADH
1,3-difosfoglicerat
ATP
3-fosfoglicerat

2-fosfoglicerat

fosfoenolpiruvat
* to metabolno pot najdemo samo pri
ATP
G- bakterijah piruvat
 Nastanek piruvata: fosfoketolazna (FK)
metabolna pot

glukoza-6-P 6-P-glukonolakton

NADPH 6-P-glukonat

3-keto-6-P-glukonat
NADPH + CO2
ribuloza-5-P
ksiluloza-5-P

gliceraldehid-3-P acetil-fosfat
NADH
1,3-difosfoglicerat acetil-CoA
ATP NAD+
3-fosfoglicerat acetaldehid
NAD+
2-fosfoglicerat etanol
PEP
ATP
piruvat
Povezave med različnimi ogljikohidratnimi potmi

G6P 6-P-glukonat

F6P
PPP FK ED
FDP

DHAP PGALD

DPGA

3-PGA

2-PGA
PPP pentoza fosfatna pot
PEP FK fosfoketolazna pot
piruvat ED Entner-Doudoroff pot
 Piruvat-ključni intermediat pri fermentacijah

NADH NADH
laktat piruvat acetalaldehid etanol

α-acetolaktat
oksalacetat acetil-CoA format
NADH NADH

acetalaldehid acetoin
malat acetil-P NADH NADH
ATP acetoacetil-CoA
etanol 2,3 butandiol diacetil
acetat NADH
fumarat
butiril-CoA
aceton NADH
sukcinat NADH
butiraldehid butiril-P
izopropanol NADH ATP

propionat butanol butirat

Piruvat-ključni intermediat pri fermentacijah
Mlečno kislinska fermentacija - homofermentativna

Laktoza = glukoza + galaktoza

1. Homofermentativna: glukoza glukoza-6-P fruktoza-6-P

fruktoza-1,6-P 3-fosfogliceraldehid 1,3-difosfoglicerat

3-fosfoglicerat 2-fosfoglicerat fosfoenolpiruvat piruvat laktat

(mlečna kislina)
 Mlečno kislinska fermentacija - heterofermentativna

ATP ATP
fruktoza fruktoza-6-P glukoza-6-P glukoza
NADPH sorbitol
NADPH 6-P-glukonolakton fruktoza
manitol 6-fosfoglukonat
3-keto-6-P-glukonat
NADPH ribuloza-5-P
ksiluloza-5-P

NADH
gliceraldehid-3-P acetil-P ocetna kislina
1,3-difosfoglicerat acetil-CoA
NAD+
3-fosfoglicerat ATP
acetaldehid
2-fosfoglicerat NAD+
fosfoenolpiruvat etanol
fosfoketolazna pot
piruvat ATP
NAD+
mlečna kislina
Mešana kislinska fermentacija
Uravnoteženost fermentacije

mol Cprodukti
uravnoteženost ogljika:
mol Csubstrat

mol C1
uravnoteženost C1 in C2 spojin:
mol C2
oksidirani produkti
uravnoteženost redoks stanja:
reducirani produkti

uravnoteženost redoks stanja je uravnana s produkcijo vodika,

ferredoksin prenese elektrone na protone, pri tem nastane vodik, če ni

produkcija vodika gredo elektroni v bolj reducirane končne produkte

Primer izračuna uravnoteženosti fermentacije
glukoze z Lactobacillus pentoaceticus

spojina mmol mmolC redoks oksidirani reducirani C1 C2

stanje produkti produkti spojine
glukoza 100 600 0
laktat 96 288 0
glicerol 7 21 -1 7
etanol 86 172 -2 2 x 86 86
acetat 7 14 0 7
CO2 89 89 +2 2 x 89 89

uravnoteženost ogljika 584/600 =0.97

uravnoteženost C1 spojin 89/93 = 0.96
uravoteženost redoks stanja 178/179 = 0.99
Različni fermentacijski produkti iz glukoze z
različnimi organizmi
Vpliv substrata na fermentacijske produkte
Enterobacter cloacae NRRL B-23289a

substrat čas butandiol etanol acetoin

(50 g/L) (h) (g/L) (g/L) (g/L)
glukoza 63 18.6 0 3.1
ksiluloza 63 18.9 0 3.7
arabinoza 39 21.7 2.0 0.6
(Glu:Xyl:Ara, 1:1:1) 48 19.6 1.5 3.5
(Glu:Xyl:Ara, 1:2:1) 48 19.5 1.7 4.1
manoza 72 18.6 0 0
galaktoza 63 18.9 0 3.7
fruktoza 39 21.7 2.0 0.6
saharoza 48 17.7 1.6 2.4
pri pH 5.0, 30o C , 200 rpm
Pregled običajnih fermentacij

vrsta reakcija
alkoholna heksoze 2etanol + 2CO2
homolaktična heksoze 2laktat + 2 H+
heterolaktična heksoze laktat + etanol + CO2 + H+
propionska laktat propionat + acetat + CO2
mešana heksoze etanol + 2,3-butandiol + sukcinat +
laktat + acetat + format +H2 + CO2
maslena heksoze butirat + acetat + H2 + CO2
butanolska heksoze butanol + acetat + aceton + etanol
+ H2 + CO2
homoacetogena heksoze 3 acetat + 3H+
metanogena acetat CH4 + HCO3-
 Običajni fermentacijski metabolni spleti

heksoze, pentoze, nekatere

amino in organske kisline
format
butandiol CO2
fermentacije
butanol H2
butirat laktat sukcinat
etanol
propionat
sintrofije

acetat

metanogeneza

metan
Tristopenjska fermentacija in nastanek metana

POLIMERI

monomeri
primarni
maščobne kisline fermentativci
alkoholi
organske kisline
(sukcinat, laktat)
sekundarni
fermentativci
H2 acetat

hidrogenotrofni acetogeni
metanogenci
CH4 metanogenci

~ 1/3 ~ 2/3 metanogenci

Primer fermentacije v vampu prežvekovalcev

mikrobna biomasa
CO2
VFA
mikrobi v
razgradljiva NH3
vampu
hrana
CH4
toplota
dolgoverižne maščobne
kisline
H2S
 Primer fermentacije v vampu prežvekovalcev

celuloza hemiceluloza pektin škrob

uronske kisline galaktoza

celobioza pentoze pentozna dekstroza

pot
maltoza

glukoza

piruvat
Uravnoteženost fermentacije v vampu prežvekovalcev

močna krma

3 glukoza 2 acetat + butirat + 2 propionat + 3 CO2 + CH4 + 2 H2O

(acetat : propionat = 1 metan : glukoza = 0.33)

voluminozna krma

5 glukoza 6 acetat + butirat + 2 propionat + 5 CO2 + 3 CH4 + 6 H2O

(acetat : propionat = 3 metan : glukoza = 0.60)

Vpliv mikrobne
združbe v vampu
prežvekovalca na
metabolizem
gostitelja
Pregled neobičajnih fermentacij
vrsta reakcija
acetilenska 2C2H2 + 3H2O etanol + acetat + H+
glicerolna 4glicerol + 2HCO3- acetat + 5H+ + 4H2O
cinamatna 2C9H7O2- + 2H2O C9H9O2 + benzoat + acetat + H+
putrescinska 10C4H12N2 + 26H2O 6 acetat + 7 butirat
citratna citrat + 2H2O format + 2 acetata + H+
akonitatna akonitat + H+ + 2H2O 2 acetata + 2CO2 + H+
glioksilatna 4 glioksilat + 3H+ + 3H2O glikolat + 6CO2 + 5H2
sukcinatna sukcinat + H2O propionat + HCO3-
oksalatna oksalat + H2O format + HCO3-
malonatna malonat + H2O acetat + HCO3-
kaproatna etanol + acetat kaproat + butirat + H2