Synthesis of aromatic and indole alpha-glucosinolates Quan V.

Vo a, b, * ,
Simone Rochfort c , Pham C. Nam d , Tuan L. Nguyen e , Trung T. Nguyen
e
, Adam Mechler f
a
Institute of Research and Development, Duy Tan University, Da Nang, Viet Nam
b
Department of Natural Sciences, Quang Tri Teachers Training College, Quang Tri
Province, Viet Nam
c
Department of Primary Industries, Victorian AgriBiosciences Centre, La Trobe University
Research and Development Park, 1 Park Drive, Bundoora 3083, Victoria, Australia
d
Department of Chemical Engineering, The University of Da Nang e University of Science
and Technology, Viet Nam
e
Department of Chemistry, Quy Nhon University, Quy Nhon, Binh Dinh Province, Viet
Nam f Department of Chemistry and Physics, La Trobe University, Victoria 3086, Australia

Trừu tượng

Glucosinolate thơm và indole là những thành viên quan trọng của họ

hợp chất glucosinolate duđối với các đặc tính y học tiềm năng của
chúng. Chúng được biết là có tác dụng chống oxy hóa và chống ung thư
bằng chính các sản phẩm tự nhiên hoặc các sản phẩm chuyển hóa của
chúng bao gồm indole-3-carbinol và isothiocyanates. Glucosinolate tự
nhiên là tất cả các b-glucosinolate; tuy nhiên, a-glucosinolate cũng các
hợp chất đầy hứa hẹn cho các ứng dụng y học và do đó phải được sản
xuất tổng hợp cho bất kỳ nghiên cứu hoạt động sinh học. Ở đây chúng
tôi báo cáo về việc tổng hợp thành công một loạt a-glucosinolate: a-
neoglucobrassicin, a-4-methoxyglucobrassicin, 2,3-dichlorophenyl-a-
glucosinolate lần đầu tiên. Thử nghiệm Tuy nhiên, đối với các đặc tính
chống viêm của các GL tổng hợp này, đã không mang lại hoạt động như
mong đợi.
Ban đầu, thiol 1 được tổng hợp bằng con đường của Fujihira
(Sơ đồ 1) [21,24]. Quá trình axetyl hóa D-glucozơ đạt được với
anhydrit axetic trong pyridin và được xúc tác bởi N, N-
dimetylaminopyridin (DMAP) để tạo thành 3 với hiệu suất 90%. Hợp
chất 3 sau đó là được xử lý bằng HBr / HOAc trong DCM để tạo ra a-
bromua 4, là được sử dụng trực tiếp cho các bước tiếp theo. Từ nghiên
cứu trước [21], phản ứng của 4 với N, N-đimetylthioformamit được thực
hiện trong sự có mặt của 0,2% nước ở 100 C trong 5 phút, và sau đó
được làm lạnh đến rt và methanolysed để tạo ra hỗn hợp gồm (1) a / b
(5)-đồng phân (1: 1, bởi NMR).
Tuy nhiên, cố gắng tinh chế đồng phân a khỏi hỗn hợp của a / b-đồng
phân bằng sắc ký cột hoặc như được mô tả trong tài liệu [21] hoặc bằng
HPLC đều không thành công. Kết quả gợi ý rằng thiol 1 nên được tổng
hợp bằng những con đường chọn lọc hơn.
Do đó, 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-a-D-glucopyranosyl thiol (Sơ đồ 2) được
tạo theo con đường của Floyd (Sơ đồ 2) [19,23]. 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-
b-D-glucopyranose 6 dễ dàng được tổng hợp với hiệu suất 98% [26].
Pentaacetate sau đó được sử dụng trực tiếp trong bước tiếp theo liên
quan đến xử lý bằng phốt pho pentachlorua với sự có mặt của
BF3.Et2O trong DCM trong môi trường argon ở nhiệt độ rt để thu được
b-glucopyranosyl clorua 7 với hiệu suất 90%. Nó phát hiện ra rằng
clorua không bền khi có mặt của silica gel, do đó tinh chế bằng cách tái
kết tinh từ dietyl ete / hexan đã được sử dụng để thay thế. Axetyl hóa S
bằng cách xử lý với kali thioacetat trong 1,3-đimetyl-3,4,5,6-tetrahydro-2
(1H) - pyrimidinone (DMPU) trong môi trường argon trong khoảng 3
ngày không dễ dàng vì sản lượng thấp và các sản phẩm phụ [19]. Vì
vậy,
Sơ đồ 1. Tổng hợp các thiols 1 và 5 theo lộ trình của Fujihira. Thuốc thử và điều
kiện: a) Ac2O, Pyridin, DMAP, 6 h; b) HBr / HOAc, DCM, 1 h; c) N, N-
đimetylthioformamit, MeOH.

Sơ đồ 2. Tổng hợp 1. Thuốc thử và điều kiện: a) Ac2O, NaOAc, hồi lưu, 20 phút;
b) PCl5, BF3.Et2O, DCM, 10 phút; c) KSAc, DMPU, 0e5 C, 3 d; d) AcOHgPh, EtOH,
hồi lưu, 2 giờ; e) H2S, EtOH, 50e60 C, 30 phút.
nhiệt độ phản ứng được hạ xuống 0-5 C để giảm bên sản phẩm và cải
thiện năng suất. Sau khi làm việc và thanh lọc bởi Sắc ký cột silica gel
rửa giải bằng hexan / etyl axetat, thu được hợp chất 8 với hiệu suất
63%. Hợp chất 8 cũ là sau đó phản ứng với phenylmercuric (II) axetat
trong EtOH tuyệt đối cho 2 h ở nhiệt độ hồi lưu để thu được dẫn xuất
phenylmercury (II) thio 9 với hiệu suất 51%. Thiol 1 thu được với hiệu
suất 92%, ở bước cuối cùng, bằng cách sủi bọt khí hydro sunfua vào
dung dịch có nồng độ 9 trong EtOH ở 60 C. Kết quả là, hợp chất 1 đã
được hình thành một cách cụ thể trong tổng năng suất 26% qua 5 bước.
Dữ liệu NMR, độ quay quang học và điểm nóng chảy đã xác nhận sự
khác biệt giữa đồng phân β- và α. Dữ liệu 1H-NMR của H1 và tín hiệu
SH trong β-thiol 5 là  4,51 (t, J1,2= J1, SH=9,9 Hz) và 2,29 (d, J1, SH = 9,9
Hz) [27], trong khi của -thiol 1 là  5,82 (t, J1,2 = J1, SH = 5,7 Hz) và 1,90
(d, J1, SH = 5,7 Hz), tương ứng. Hơn nữa,[a ]20 D của -thiol 1 là 169,5 (c=

1,0, CHCl3), trong khi đó của -thiol là +10,5 (c = 1,0, CHCl3). Các điểm
nóng chảy của -thiol là 94-95 C, so với 114-115 C đối với -thiol [27].
2.2. Tổng hợp -thiohydroxymate

2.2.1. Tổng hợp các -thiohydroxyt thơm

Trong một nghiên cứu trước đây [16], 3,4-dimethoxyphenyl

glucosinolate được phát hiện là chất chống viêm tích cực nhất trong số
các glucosinolate được thử nghiệm. Do đó, 3,4-dimethoxyphenyl
glucosinolate và hai các GLs thơm khác được chọn để tổng hợp và làm
chuẩn cho hoạt động chống viêm. Các hydroxymoyl clorua thơm 12a-c
được tổng hợp theo con đường aldoxime với sản lượng tuyệt vời (80-
97% qua hai bước từ andehit 10a-c) [16]. Sự kết hợp của hydroxymoyl
clorua thơm với thiol 1 có thể thực hiện được thông qua một phương
pháp chung (Sơ đồ 3) [10,11,19]. Các hydroxymoyl clorua thơm 12a-c
đã phản ứng với thiol 1 in sự có mặt của chất xúc tác trietylamin trong
DCM: Et2O (1: 2) để tạo ra a-thiohydroxymate 13a-c với hiệu suất 53-
86%.
Sơ đồ 3. Tổng hợp các a-thiohydroxyt thơm 13a-c. Thuốc thử và điều kiện: a)
NH2OH.HCl, MeOH, pyridin, 2,5 h; b) NCS, DMF; c) 1, Et3N, DCM: Et2O (1:2), 2 giờ

2.2.2. Tổng hợp indolyl -thiohydroxymate

Nó đã được chỉ ra rằng neo-glucobrassicin (NGB) và 4

methoxyglucobrassicin (MGB) có hoạt tính chống viêm đáng kể ở nồng
độ thấp [17]. Do đó, -NGB và -MGB đã được chọn để tổng hợp và
thử nghiệm hoạt động chống viêm của chúng. Người ta phát hiện ra
rằng con đường nitronat là phương pháp thuận tiện nhất để tổng hợp
indole-thiohydroxymate [17]. Phản ứng Henry thông thường của
anđehit 14 và 15 với nitrometan khi có amoni axetat lúc hồi lưu trong 2
giờ thu được nitroalkenes 16 và 17 trong 78% và 99% sản lượng tương
ứng (Sơ đồ 4). Nhóm nitrovinyl sau đó là bị khử với NaBH4 trong
THF/MeOH để tạo nitroalkanes 18 và 19 trong 77-79% năng suất [28].
Nitroalkanes 18 và 19 sau đó là phản ứng với natri metoxit trong MeOH
để tạo ra các dẫn xuất natri nitronat được xử lý bằng sulfonyl clorua
trong DME ở 40 C để chuyển chúng thành (indol-3-yl) acetohydroxymoyl
clorua. Sự kết hợp của indole hydroximoyl clorua và thiol 1 được thực
hiện bằng một phương pháp chung trong DCM với sự hiện diện của
Et3N để tạo ra indole a-thiohydroxymate 13d và 13e trong 40% và 36%
năng suất, tương ứng từ nitroalkanes. Do đó, các a-thiohydroxymate
13d và 13e được tổng thể là 24% và 28% năng suất, tương ứng (Sơ đồ
4).
Sơ đồ 4. Tổng hợp indole a-thiohydroxymate 13d-e. Thuốc thử và điều kiện: a)
MeNO2, AcONH4, hồi lưu, 2 h; b) NaBH4, THF, MeOH, rt, 6h; c) (i) MeONa, MeOH;
(ii)
Người ta thấy rằng các -thiohydroxymate không ổn định lắm, do đó,
các hợp chất nên được sử dụng trực tiếp trong bước tiếp theo sau khi
tinh chế bằng sắc ký cột với silica gel rửa giải với hexan / EtOAc hoặc
DCM / MeOH. Đây có thể là lý do chính cho sản lượng thấp của
-thiohydroxymate so với sản lượng của -thiohydroxymate. So sánh độ
quay quang học của a-thiohydroxymate và b-thiohydroxymate chỉ ra
rằng các giá trị của các đồng phân a thường cao hơn các đồng phân b,
trong khi giá trị nhiệt độ nóng chảy của a-đồng phân thấp hơn giá trị của
đồng phân đôi. Các giá trị của  (Dữ liệu 1H NMR của H1) của các đồng
phân  là cao hơn của các đồng phân tương ứng (Bảng 1). Các NMR,
quay quang học và kết quả điểm nóng chảy xác nhận rằng các hợp chất
tổng hợp 13a-e là đồng phân a. Nó đã được hiển thị trước đây rằng con
đường ghép nối này là âm thanh nổi cụ thể ở chỗ chỉ có (Z) - các dạng
đồng phân [8]. Phân tích tia X của S- (2,3,4,6-tetra-O-acetyl--
Dglucopyranosyl) -2,3-dichlorophenylacetothiohydroxymate cũng xác
định rằng thiohydroxymate có thể thu được là (Z) -
thiohydroxymate [29].
2.3. Tổng hợp a-glucosinolate

Sự sulfat hóa của a-thiohydroxymate 13a-e bởi các chất điển hình
phương pháp sử dụng phức hợp pyridin-lưu huỳnh trioxit trong DCM
hoặc pyridin làm dung môi và sau đó xử lý bằng dung dịch nước của
kali hydro cacbonat (Sơ đồ 5) [16,17,27]. Các sản phẩmđược tinh chế
bằng sắc ký cột nhanh với silica gel rửa giải bằng DCM / MeOH và thu
được sản lượng tốt (69-87% năng suất).
Quá trình khử-O-axetyl hóa 20a-e được thực hiện trong MeOH với
Chất xúc tác MeOK. Cuối cùng -GLs 21b, 21d và 21e được sắc ký
nhanh trên silica gel rửa giải bằng EtOAc / MeOH / H 2O ở sản lượng
tuyệt vời (năng suất 80-95%) [29]. Ba a-GL, bao gồm
2,3-dichlorophenyl-a-glucosinolate 21b, -NGB 21d và -MGB 21e
được tổng hợp lần đầu tiên trong tổng thể 15%, 7% và 6% năng suất
(hơn 8 bậc so với glucozơ), tương ứng. Hai chiếc -GL khác (21a, 21c)
không thể thu được vì sự phân hủy trong bước cuối cùng. Nó được chỉ
ra rằng năng suất tổng thể của a-GL tổng hợp thấp hơn so với -GL
[16,17]. Những lý do cho điều này có thể là sự không ổn định của các
chất trung gian trong quá trình tổng hợp và của -GL cuối cùng. Các
sản phẩm cuối cùng đã được kết tinh lại để đảm bảo độ tinh khiết của
hợp chất trước khi tiến hành xét nghiệm sinh học [29].

2.4. Nghiên cứu sinh học

Tiếp theo phương pháp luận được sử dụng trong các công trình trước
đây về chất thơm và indole GLs [16,17], các đặc tính chống viêm của
-GL tổng hợp được thử nghiệm bằng phương pháp xét nghiệm sinh
học dựa trên dòng tế bào THP1 [30]. Lipopolysaccharides (LPS) được
sử dụng để kích hoạtphản ứng viêm trong nuôi cấy mô. LPS bắt nguồn
từ Gram vi khuẩn âm tính nơi chúng bao phủ màng ngoài của
Sơ đồ 5. Quá trình sulfat hóa và khử O-axetyl hóa của các thiohydroxyt 13a-e.
Thuốc thử và điều kiện: a) (i) Pyr.SO3, DCM hoặc pyridin, 18 h, (ii) KHCO3 / H2O;
b) MeOK / MeOH, 3 giờ.

tế bào vi khuẩn. Khi các bạch cầu đơn nhân được xử lý bằng vi khuẩn
này sản phẩm một phản ứng miễn dịch bẩm sinh được kích hoạt dẫn
đến giải phóng các cytokine bao gồm yếu tố hoại tử khối u-a (TNF-a)
[31]. Trong thử nghiệm tế bào THP-1, LPS được sử dụng để kích thích
hệ miễn dịch này phản ứng và kết quả TNF-a được đo bằng ELISA.
Hoạt động chống viêm được đo lường như sự ức chế của phát hành
TNF-. Để tính đến bất kỳ sự thay đổi nào trong điều kiện tấm (ví dụ:
mật độ tế bào), các tham chiếu riêng lẻ đã được ghi lại trên mỗi
đĩa.
Các giếng chứa các tế bào THP-1 được xử lý riêng lẻ trong sao chép
với các hợp chất 21b-e ở các nồng độ khác nhau để 4 giờ ở nồng độ
LPS là 50 mg / L. Đối với mỗi tấm điều khiển LPS đã được đo lường.
Kết quả được tóm tắt trong Hình 2. Như một kiểm soát catechin, một
chất chống viêm đã được sử dụng được biết đến với một loạt các tác
dụng bảo vệ tim mạch và hóa học [30,32,33]. Việc kiểm soát catechin có
tác dụng chống viêm mạnh đáp ứng (ức chế 37%) ở nồng độ 0,5 mM
(P <0,05). Tác dụng chống viêm của GLs được so sánh với cả LPS và
kiểm soát catechin.
Nó được chỉ ra rằng với sự hiện diện của a-GL, TNF-a tiết ra hơi bị
ức chế trong khi catechin có tác dụng mạnh hơn nhiều (42% ở nồng độ
15 mM của catechin). Do đó, các kết quả về hoạt động chống viêm của
a-GLs dường như cho thấy rằng các hợp chất không tự nhiên này có
hoạt tính sinh học kém hơn so với tự nhiên đồng phân.
3. Kết luận

2,3,4,6-Tetra-O-acetyl--D-glucopyranosyl thiol được tái tổng hợp ở

năng suất hợp lý. Hợp chất được sử dụng cho tổng hợp các -GL. Một
loạt -GL (2,3-dichlorophenyl--glucosinolate, -MGB, -NGB) và các
chất trung gian (kali 2,3,4,6- lần đầu tiên tổng hợp thành công tetra-O-
acetyl-4-bromophenyl-a-glucosinolate, kali 2,3,4,6- tetra-O-acetyl-3,4-
dimethoxyphenyl-a-glucosinolate. Nghiên cứu phát hiện ra rằng -GL
tổng hợp có tác dụng chống viêm rất yếu trong xét nghiệm sinh học,
ngược lại với sự ức chế cao của -GL tổng hợp [16,17]. Do đó, kết quả
cho thấy những nỗ lực trong tương lai nên tập trung vào GL cũng như
GL tự nhiên.

4. Thực nghiệm

4.1. Phương pháp chung

Điểm nóng chảy (mp) được ghi lại trên thiết bị giai đoạn nóng và
không được điều chỉnh. Phép quay quang học được đo ở điểm đã nêu
nhiệt độ trong dung môi đã nêu trên máy đo độ phân cực natri vạch d
(589 nm); [a] Các giá trị D được tính bằng 10-1 degcm2g-1. Hồng ngoại
phổ (vmax) được ghi lại trên máy quang phổ FT-IR. Mẫu được phân tích
dưới dạng trôi KBr (đối với chất rắn) hoặc dưới dạng màng mỏng trên
các tấm NaCl (đối với chất lỏng / dầu). Trừ khi được chỉ định khác,
proton (1H) và carbon (13C) NMR được ghi lại trên máy quang phổ 300
MHz hoạt động ở 300 MHz đối với proton và 75 MHz đối với hạt nhân
cacbon. Sự dịch chuyển hóa học được ghi lại dưới dạng giá trị  tính
bằng phần triệu (ppm). Quang phổ thu được trong cloroform deute hóa
(CDCl3) ở 300 K trừ khi có quy định khác. Cho 1 Phổ 1H NMR được ghi
lại trong CDCl3, đỉnh do CHCl3 dư (H 7.24) được sử dụng làm tham
chiếu bên trong, trong khi đỉnh trung tâm (C 77.0) của CDCl3 bộ ba được
sử dụng làm tham chiếu cho 13C NMR tách proton quang phổ. Khối phổ
có độ phân giải thấp được đo trên một khối lượng quang phổ kế ở
300⁰C và tốc độ quét 5500 m/z /giây sử dụng nước/metanol/ axit axetic
theo tỷ lệ 0/99/1 hoặc 50/50/1 như một pha động. Phép đo khối lượng
chính xác được thực hiện bằng phép đo khối phổ với nguồn ion hóa tia
điện cực nóng (HESI). Các khối phổ kế được vận hành với khả năng
quét toàn bộ (50-1000 amu) trong chế độ FT tích cực hoặc tiêu cực (ở
độ phân giải 100.000).
Hình 2. Ảnh hưởng của GL tổng hợp lên bài tiết TNF- trong các tế bào THP-1
được LPS kích thích

Chất phân tích được hòa tan trong nước / metanol / axit axetic theo tỷ lệ
0/99/1 hoặc 50/50/1 và truyền qua bơm tiêm với tốc độ 5 l / phút.
Ống mao dẫn được làm nóng được duy trì ở 320 ⁰C bằng bộ gia nhiệt
nguồn nhiệt độ 350 ⁰C và vỏ bọc, khí phụ và khí quét lần lượt là 40, 15
và 8 đơn vị. Điện áp nguồn đã được thiết lập đến 4,2 kV. Dung môi
được làm khô trên các chất làm khô tiêu chuẩn và cất mới trước khi sử
dụng. Etyl axetat và hexan được sử dụng cho sắc ký đã được chưng cất
trước khi sử dụng. Tất cả các dung môi đã được tinh chế bằng cách
chưng cất. Các phản ứng được theo dõi bởi TLC trên silica gel
60 tấm F254 với khả năng phát hiện bằng huỳnh quang UV hoặc than hóa
với vết thuốc tím bazơ. Sắc ký cột nhanh được thực hiện trên silica gel
60 kích thước hạt 0,040-0,063 mm (230-400 mắt lưới).

4.2. 2,3,4,6-Tetra-O-acetyl--D-glucopyranosyl thiol (1)

4.2.1. Con đường của Fujihira [21]

Tạo dung dịch D-glucoza 2 (3,00 g, 16,6 mmol) trong pyridin khô
(33 mL) ở 0 C trong môi trường nitơ được thêm vào từ từ anhydrit axetic
(31,5 mL, 333 mmol). Hỗn hợp phản ứng là được khuấy ở 0 ⁰C trong 1
giờ trước khi một lượng DMAP xúc tác (200 mg,1.67 mmol) đã được
thêm vào. Vì hỗn hợp phản ứng được phép đạt rt, nó trở nên tỏa nhiệt
nhẹ. Sau 6 giờ, màu vàng trong hỗn hợp được đổ từ từ vào nước đá
được khuấy nhanh (125 mL), tạo ra một chất rắn dính. Sau khi chiết
EtOAc (3x45 mL), làm bay hơi dung môi và đồng bay hơi với toluen khô
(3x20 mL), glucozơ đã peracetyl hóa thu được là chất rắn màu vàng
(5,84 g, 90%). Dung dịch pentaacetyl-D-glucopyranose 3 (1,12 g, 2,9
mmol) trong DCM (20 mL) được khuấy trong bể nước đá trong khi HBr /
HOAc (6 mL, 45% trọng lượng) đã được thêm vào từng giọt. Sau một
giờ, dung dịch được rửa bằng nước đá và dung dịch NaHCO 3 bão hòa
lạnh, làm khô trên MgSO4 và cô đặc để lại glucosyl bromua 4 dưới dạng
dầu màu vàng nhạt (1,03 g). 4 mới chuẩn bị (1,03 g, 2,5 mmol) và N, N-
dimethylthioformamide (230 mg, 2,6 mmol) với sự có mặt của 0,2%
trọng lượng H2O được khuấy dưới một dòng argon ở 100 C trong 5
phút. MeOH khô (20 mL) đã được thêm vào sau khi làm nguội đến rt, và
hỗn hợp được khuấy trong khoảng 10 phút (cho đến khi chất rắn tan
hết). Dung môi được làm bay hơi dưới giảm áp suất, và sản phẩm kết
tủa được tách ra và tinh chế bằng sắc ký cột nhanh trên silica gel rửa
giải với 66% hexan / EtOAc và sau đó là hexan: DCM: MeOH (25: 24:
1). Các sản phẩm là 2,3,4,6-tetra-O-acetyl- / -D glucopyranosyl thiols
(650 mg, 72%), tỷ lệ  (1):  (5) = 1:1 (theo NMR) dưới dạng xi-rô không
màu.

4.2.2. Con đường của Floyd [23

]
NaOAc (1,58 g, 19,27 mmol) bị lơ lửng trong Ac2O (21 mL, 222 mol)
và hỗn hợp thu được được đun nóng đến hồi lưu trong 20 phút. Bể gia
nhiệt đã được loại bỏ và D-glucose 2 (3,17 g, 17,55 mmol) đã được
thêm vào từng phần nhỏ, giữ cho hỗn hợp phản ứng vừa nhiệt độ hồi
lưu. Sau đó, hỗn hợp được khuấy để thêm 15 phút trong điều kiện sưởi
ấm và sau khi làm mát đến rt, nó là đổ lên đá nghiền (80 mL). Sau khi
giữ hỗn hợp trongtủ lạnh ở 4 ⁰C trong 3h, kết tủa thu được được lọc và
rửa bằng nước đá (125 mL) và EtOH lạnh (10 mL). Sau làm khô dưới áp
suất giảm, sản phẩm thô được kết tinh lại từ EtOH (20 mL) để thu được
1,2,3,4,6-penta-O-acetyl--Dglucopyranoside 6 (6,71 g, 98%). Đến
pentaacetyl--D-glucopyranose 6 (6,71 g, 17,2 mmol) và photpho
pentachlorua (3,89 g, 18,92 mmol) trong DCM (50 mL) trong môi trường
argon được thêm vào BF3.Et2O (25 ml). Phản ứng được khuấy trong 30
phút ở tốc độ rt trong một bầu không khí của argon (theo dõi bởi TLC),
và sau đó được phân vùng giữa DCM (50 mL) và H2O (100 mL). Pha
nước là được chiết lại bằng DCM (2 x 40 mL). Các chất hữu cơ kết hợp
là rửa bằng natri hydro cacbonat (100 mL), nước muối (100 mL), làm
khô qua MgSO4, được lọc và cô đặc trong chân không. Kết quả chất rắn
được đồng bay hơi với toluen, được nghiền nhỏ trong xyclohexan và kết
tinh từ ete dietyl / xăng để tạo ra 2,3,4,6- tetra-O-acetyl--D
glucopyranosyl clorua 7 (5,67 g, 90%) dưới dạng chất rắn kết tinh màu
trắng. Thành dung dịch 2,3,4,6-tetra-O-acetyl--Dglucopyranosyl clorua
7 (5,67 g, 15,48 mmol) trong DMPU (15 mL) ở 0⁰C trong môi trường
argon được bổ sung kali thioacetat (2,32 g, 17,05 mmol). Hỗn hợp phản
ứng được khuấy trong 3 những ngày dưới bầu không khí argon ở 0 C
(theo dõi bởi TLC) và sau đó được phân vùng giữa etyl axetat (50 mL)
và H2O (50 mL). Sau khi chiết bằng EtOAc (3 x 50 mL), các lớp hữu cơ
được rửa bằng nước muối, làm khô qua MgSO 4, được lọc và cô đặc
trong chân không. Phần cặn thu được đã được tinh chế bằng silica gel
sắc ký rửa giải với 70% hexan / EtOAc để thu được 1-Sacetyl-2,3,4,6-
tetra-O-acetyl-1-thio--D-glucopyranoside 8 (3,96 g, 63%) ở dạng chất
rắn màu hồng đào. Một hỗn hợp gồm 8 (3,96 g, 9,76 mmol) và
phenylmercuric axetat (3,48 g, 10,24 mmol) tuyệt đối etanol (40 mL)
được đun sôi hồi lưu trong 2 giờ. Kết quả là màu đen kết tủa đã được
lọc bỏ (Celite). Dịch lọc được làm bay hơi đến làm khô trên thiết bị bay
hơi quay và xi-rô thu được đã được tinh chế bằng sắc ký cột rửa giải với
60% hexan / EtOAc để thu được 9 (3,19 g, 51%) ở dạng bọt đặc. Hydro
sunfua được tạo bọt cho 20 phút thành dung dịch 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-
1-phenylmercury (II) -thio--D-glucopyranose 9 (3,19 g, 4,98 mmol)
trong EtOH ở 55⁰ C. Kết tủa thu được được loại bỏ bằng cách lọc và
dịch lọc được tinh chế bằng sắc ký cột rửa giải với 60% hexan / EtOAc.
Hợp chất 1 thu được có màu trắng rắn (1,67 g, 92% (26% tổng năng
suất)). Rf = 0,45 trong 60% hexan / EtOAc; mp = 94-95 C (92-93 C) [20];
= [a]20D = +169,5 (c = 1,0, CHCl3), (Lít +168 [20], +166.3 [34]); 1H NMR
(300 MHz, CDCl3) (300 K)  5,82 (t, J1,2 = J1, SH = 5,7 Hz, 1H, H1), 5,27 (t,
J3,4 = J2,3 = 9,9 Hz, 1H, H3), 4,97 (dd, J3,4 = 9,9 Hz, J4,5 = 10,2 Hz, 1H,
H4), 4,92 (dd, J=J1,2 = 5,7 Hz, J2,3 = 9,9 Hz, 1H, H2), 4,35-4,29 (m, 1H,
H5), 4,22 (dd, J5,6b = 4,2 Hz, J6a, 6b = 12,3 Hz, 1H, H6b), 4,01 (dd,
J5,6a = 2,1 Hz, J6a, 6b = 12,3 Hz, 1H, H6a), 1,97-1,93 (4 br s, 12H,
4 CH3COO), 1,90 (d, J1, SH = 5,7 Hz, 1H, SH); 13C NMR (75 MHz,
CDCl3) (300 K)  170,2, 169,8, 169,2, 168,9 (4 CH3COO), 76,7 (C-1),
69,8 (C-5), 69,4 (C-2), 67,9 (C-3, C-4), 61,6 (C-6), 20,4, 20,2 (2), 20,1
(4 CH3COO); HRMS (ESI) m / z cho C14H20NaO9S [M+Na] +, calcd
387.0726, tìm thấy 387.0721.

4.3. Quy trình chung để điều chế chất thơm thiohydroximates (13a-c)

Để khuấy dung dịch hydroximoyl clorua 12a-c (các hợp chất 12a-c
được tổng hợp theo cách viết [16]) (1,5 phương trình) trong Et2O khô:
DCM (2: 1, 45 mL) được thêm vào dung dịch 2,3,4,6-tetraO-acetyl--D-
glucopyranosylthiol 1 (1 eq.) trong DCM khô (6 mL). Các hỗn hợp thu
được được xử lý bằng Et3N (6 eq.) trong Et2O (12 mL). Các Hỗn hợp
phản ứng được khuấy trong 2 giờ ở nhiệt độ cao dưới N 2 sau đó được
axit hóa với H2SO4 1 M (7 m /mmol đường). Hỗn hợp được để để yên
trong 10 phút và sau đó tách ra. Pha nước là được chiết bằng DCM (3 X
30 mL). Các lớp hữu cơ kết hợp là làm khô trên MgSO4, được lọc và
dịch lọc được cô trong áp lực giảm. Thiohydroxymate 13a-c thu được
bằng cách sắc ký nhanh rửa giải với 0-3% MeOH / DCM.

4.3.1. S- (2,3,4,6-Tetra-O-acetyl--D-glucopyranosyl) -3,4-

dimethoxyphenyl thiohydroximat (13a)

13a nguyên chất thu được là chất rắn màu trắng (340 mg, 57%).
Rf=0,28 trong 40% hexan / EtOAc; mp = 45-46 ⁰C; [a]20D = +132,8
(c =2,55,ĐCM); IR (NaCl) vmax 3420 (OH), 2959 (CH3OPh), 1750 (C=O),
1601(C=N), 1226, 1041 cm-1 ; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) (300 K) 
7.14(d, J=5’, 6’ = 8,4 Hz, 1H, H6’-Ph-H), 7,05 (s, 1H, H20-Ph-H), 6,86
(d,J5’, 6’ = 8,4 Hz, 1H, H5’-Ph-H), 5,95 (d, J1,2 = 6,0 Hz, 1H, H1), 5,44
(t,J2,3 = J3,4 =9,6 Hz, 1H, H3), 5,00-4,96 (m, 2H, H2 và H4),
4,41-4,35 (m, 1H, H5), 4,19 (dd, J5,6b = 4,5 Hz, J6a, 6b = 12,3 Hz, 1H,
H6b), 4,01 (dd, J5,6b = 2,3 Hz, J6a, 6b = 12,3 Hz, 1H, H6a), 3,87, 3,85
(2 s, 6H, CH3OPh), 2,05, 2,00, 1,99, 1,98 (4 s, 12H, CH3COO); 13C
NMR (75 MHz, CDCl3) (300 K)  170,3, 169,5, 169,4, 169,2
(4 CH3COO), 150,4 (C=N và C-4 của Ph), 148,6 (C-3 của Ph), 124,9
(C-1 của Ph), 121,1 (C-2 của Ph), 110,5 (C-5 và C-6 của Ph), 80,4 (C-1),
70,2 (C-5), 70,1 (C-3), 68,6 (C-2), 67,8 (C-4), 61,3 (C-6), 55,5
(2 CH3OPh), 20,2 (2) 20,1 (2) (4 CH3COO); HRMS (ESI) m / z cho
C23H28O12NS [M-H] -, calcd 542.1332, tìm thấy 542.1329.

4.3.2. S- (2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-a-D-glucopyranosyl) -2,3-dichlorophenyl

thiohydroximate (13b)
13b nguyên chất thu được là chất rắn màu trắng (284 mg, 86%). R f= 0,45 trong
40% hexan / EtOAc; mp =72-74 C;[a]20 D  +144,5 (c = 2,18,CHCl3); IR (NaCl) vmax

3320 (OH), 1750 (C=O), 1600 (C=N) cm-1; 1HNMR (300 MHz, CDCl3) (300 K)  7,55
(dd, J = 1,8 Hz, J4’,5’ ‘= 7,8 Hz,H, H4’-Ph-H), 7.25 (t, J5’, 6’ = 7,8 Hz, 1H, H6’-Ph-
H), 7,20 (dd J = 1,8 Hz, J4’, 5’ = 7,8 Hz, 1H, H5’-Ph-H), 5,46 (d, J1,2 = 5,7 Hz, 1H,
H1),5,34 (t, j2,3 = j3,4 = 9,6 Hz, 1H, H3), 4,98 (t, j3,4 = j4,5 = 9,6 Hz, 1H,H4), 4,88 (dd, J
= 5,7 Hz, 1H, H2), 4,36-4,29 (m, 1H, H5), 4,25 (dd,J5,6b =3,6 Hz, J6a, 6b = 12,3 Hz, 1H,
H6b), 4,01 (dd, J5,6b = 2,1 Hz,J6a, 6b = 12,3 Hz, 1H, H6a), 2,06, 2,04, 1,99, 1,98 (4
giây, 12H,CH3COO 4); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) (300 K) d 170,2, 169,5,169,4,
169,1 (4 CH3COO), 149,3 (C=N), 133,5 (C-3 của Ph), 132,2,132,1 (C-2 và C-1 của
Ph), 131,6 (C-4 của Ph), 129,2 (C-6 của Ph), 127,1(C-5 của Ph); 79,9 (C-1), 69,9
(C-5), 69,6 (C-3), 68,4 (C-2), 67,5 (C-4),61,1 (C-6), 20,3 (2), 20,2 (2) (4 CH3COO);
HRMS (ESI) m / z cho C21H23NaO10Cl2NS [M+Na] +, calcd 574.0317, tìm thấy
574.0211.

4.3.3. S-(2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-a-D-glucopyranosyl)-4- bromophenylacetothiohydroximate

(13c)

13c tinh khiết thu được là chất rắn màu trắng d (246 mg, 53%). Rf ¼
0.32 in 60% hexane/EtOAc; mp = 56-57 ⁰C; [a]20D =+147.9 (c = 3.3,
DCM); IR (NaCl) vmax 3359 (OH), 1750 (C=O), 1599 (C=N); 1 H NMR
(300 MHz, CDCl3) (300 K)  7.54 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H20 and H6’ -PhH),
7.44 (dd, J = 8.4 Hz, 2H, H3’ and H5’ -Ph-H), 5.90 (d, J 1,2 = 5.7 Hz, 1H,
H1), 5.45 (t, J2,3 = J3,4 = 9.9 Hz, 1H, H3), 5.01-4.95 (m, 2H, H2 and H4),
4.41-4.38 (m, 1H, H5), 4.19 (dd, J5,6b = 4.8 Hz, J6a,6b = 12.3 Hz, 1H, H6b),
4.01 (dd, J5,6b = 2.4 Hz, J6a,6b =12.3 Hz, 1H, H6a), 2.08, 2.02, 2.01, 2.00
(4 x s, 12H, CH3COO); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) (300 K)  170.3,
169.5, 169.4, 169.2 (4 x CH3COO), 151.2 (C=N), 131.7 (C-3, C-5 of Ph),
131.5 (C-4 of Ph), 129.3 (C-2, C-6 of Ph), 124.3 (C-1 of Ph), 81.7 (C-1),
70.1 (C-5), 69.9 (C-3), 68.7 (C-2), 67.8 (C-4), 61.2 (C-6), 20.3(2), 20.2,
20.1 (4 CH3COO); HRMS (ESI) m/z for C21H25O10BrNS [M+H]+, calcd
562.0377,tìm thấy 562.0376.
4.4. Quy trình chung để chuẩn bị indole thiohydroximates (13d, e)

4.4.1. 2,3,4,6-Tetra-O-acetyl--D-glucopyranosyl - ((1-metoxyindole-3-yl)

metyl) thiohydroximat (13d)

Cho dung dịch indole nitroalkan 18 được khuấy (hợp chất 18 được
điều chế theo tài liệu [17]) (264 mg, 1,2 mmol) trong MeOH khô (15 mL)
trong môi trường nitơ đã được thêm natri methoxide (130 mg, 2,4
mmol). Sau 20 phút phản ứng là cô đặc ở áp suất giảm tạo ra nitronat
có màu trắng chất rắn được làm khô trong chân không cao trong 15
phút. Các nitronat được làm lạnh đến 40 C trong môi trường nitơ. Sau
đó nó được xử lý bằng DME khô (20 mL) ở 40 ⁰C. Một giải pháp của
thionyl clorua (0,23 mL, 3,12 mmol) trong DME khô (5 mL) ở 40 ⁰C là
thêm từng giọt nitronat vào để tạo dung dịch có màu đỏ tía. Sau 30 phút
ở 40⁰ C, nước (30 mL) được thêm vào và dung dịch được chiết bằng
DCM (3 50 mL). Các chiết xuất hữu cơ được làm khô (MgSO4) và cô
đặc dưới áp suất giảm đến cho (1-metoxyindol-3-yl) axetydroximoyl
clorua là để dưới chân không cao trong 15 phút và sau đó nó được phản
ứng trực tiếp trong bước tiếp theo. Indole hydroximoyl clorua trong Et2O
khô: DCM (2: 1, 15 mL) được xử lý bằng dung dịch 2,3,4,6-tetra-O-
acetyl-lthio-D-glucopyranose 1 (440 mg, 1,2 mmol) và trietylamin khô
(1,0 mL, 7,2 mmol ) trong DCM khô (10 mL). Phản ứng là khuấy trong 2
h thu được dung dịch màu da cam. Hỗn hợp phản ứng là axit hóa bằng
H2SO4 1 M (7 mL / mmol đường) và sau đó nó được được chiết bằng
H4), 4,22-4,19 (m, 1H, H5), 4,12-4,03 (m, 4H, CH3O và H6b),
3,98-3,74 (m, 3H, CH2C=N và H6a), 2,01, 1,98, 1,94, 1,78 (4 giây,
12H, 4 CH3COO); 13C NMR (75 MHz, MeOD) (300 K)  170,4, 169,7,
169,4, 169,0 (4 CH3COO), 147,5 (C=N), 132,2 (C-8i), 122,9 (C-2i),
121,8 (C-6i), 121,2 (C-9i) 119,0, 118,7 (C-4i và C-5i), 107,5 (C-7i),
106,0 (C-3i), 77,9 (C-1), 69,6 (C-5), 69,5 (C-3), 68,3 (C-2), 67,9 (C-4),
64,6 (CH3O), 61,0 (C-6), 29,0 (CH2C=N), 18,8, 18,7 (2), 20,4
(4 CH3COO); HRMS (ESI) m / z cho C25H30NaO11N2S [M+Na] +, calcd
589.1468, tìm thấy 589.1472.

4.4.2. 2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-a-D-glucopyranosyl - ((4 metoxyindol-3-yl)

metyl) thiohydroximat (13e)

Hợp chất 13e được tổng hợp từ indole nitroalkane 19 (hợp chất 19
được điều chế theo tài liệu [17]) bởi quy trình tương tự như được mô tả
đối với hợp chất 13d và thu được chất rắn màu kem (343 mg, 36%). Rf
=0,22 trong 40% hexan / EtOAc; mp = 69-71 C; [ a]20D
D = +122,2 (c = 2,7, DCM); IR (Độ lệch KBr) vmax 3336, 2942, 2839,
1750, 1600 cm-1; 1H NMR (300 MHz, MeOD) (300 K)  6,94 (t, J6i, 7i =
J5i, 6i = 7,5 Hz, 1H, H6i), 6,91 (d, J6i, 7i = 7,5 Hz, 1H, H7i), 6,84 (s, 1H,
H2i), 6,46 (d, J5i, 6i = 7,5 Hz, 1H, H5i), 6,12 (d, j1,2 = 6,0 Hz, 1H, H1),
5,28 (t, J2,3 = J3,4 =10,2 Hz, 1H, H3), 4,97-4,83 (m, 2H, H2 và H4), 4,35
(d, Jgem = 16,8 Hz, CHHC=N), 4,29-4,09 (m, 1H, H5), 4,16 (đ,
J5,6b =4,8 Hz, J6a, 6b = 12,3 Hz, 1H, H6b), 4,03 (d, Jgem = 16,8 Hz,
CHHC=N), 3,87 (s, 3H, CH3O), 3,84 (dd, J5,6b =2,1 Hz, J6a, 6b = 12,3
Hz, 1H, H6a), 2,01, 1,99, 1,98, 1,93 (4 s, 12H, CH 3COO); 13C NMR (75
MHz, MeOD) (300 K)  170,5, 169,7, 169,5, 169,0 (4 CH3COO), 154,2
(C-4i), 149,6 (C¼N), 137,8 (C-8i), 121,7 (C-6i), 120,7 (C-2i), 116,2 (C-9i)
109,8 (C-3i), 104,1 (C-7i), 98,5 (C-5i), 78,3 (C-1), 69,7 (C-5), 69,5 (C-3),
68,2 (C-2), 68,0 (C-4), 61,1 (C-6), 53,8 (CH3O), 29,9 (CH2C=N), 18,8,
18,7 (2), 18,5 (4 CH3COO); HRMS (ESI) m / z cho C25H30NaO11N2S
[M+Na]+, calcd 589.1468, được tìm thấy 589,1448.

4.5. Quy trình chung để điều chế kali sunfat muối của thiohydroximat
(20a-e)
Đến dung dịch được khuấy của thiohydroxymate 13a-e (1 eq.) Ở
dạng khô DCM hoặc pyridin (40 mL) được thêm vào phức pyridin trioxit
lưu huỳnh (2,5 eq.). Sau khi khuấy dưới Ar trong 18 giờ ở nhiệt độ cao,
bổ sung một phần của phức (0,3 eq.) đã được thêm vào và khuấy là
tiếp tục trong 2 giờ. Sau đó, dung dịch KHCO 3 (4 đvC) trong nước
(40 mL) được thêm vào và hỗn hợp được khuấy trong 30 phút và sau đó
nó được cô đặc dưới áp suất giảm. Phần cặn được hòa tan trong nước
và chiết bằng cloroform (2 x 30 mL) và sau đó với 80% CHCl3 / MeOH (3
x 30 mL). Các lớp hữu cơ đã làm khô (MgSO4), lọc và cô đặc dưới áp
suất giảm. Đến loại bỏ pyridin dư thừa, hỗn hợp được đồng chưng cất
vài lần với toluen. Các hợp chất 20a-e thu được bằng cách rửa giải sắc
ký nhanh với DCM / MeOH.

4.5.1. Kali 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-3,4-đimetoxyphenyl-aglucosinolat (20a)

20a nguyên chất thu được là chất rắn màu trắng (320 mg, 87%). R f =
0,17 trong 15% MeOH / DCM; mp ¼ 110e112 C (tháng mười hai); [ a]20D
=+ 110 (c = 3.0,MeOH); IR (độ lệch KBr) vmax 2945, 1750 (C=O), 1600
(C=N) cm-1; 1H NMR (300 MHz, CD3OD) (300 K) d 7.20=7.19 (m, 2H,
H20 và H6’-Ph-H), 7,02 (d, J50, 6 = 8,7 Hz, 1H, H50-Ph-H), 5,75 (d, J1,2 =
5,7 Hz, 1H H1), 5,40 (t, J2,3 ¼ J3,4 ¼ 9,9 Hz, 1H, H3), 5,02-4,89 (m,
2H, H2 và H4), 4,23-4,36 (m, 1H, H5), 4,19 (dd, J5,6b = 4,5 Hz, j6a, 6b =
12,6 Hz, 1H, H6b), 4,09 (dd,J5,6b = 2,1 Hz, J6a, 6b =12,6 Hz, 1H, H6a),
3,86, 3,85 (2 giây, 6H, 2 CH3OPh), 2,07, 2,01, 2,00, 1,98 (4 giây, 12H,
4 CH3COO); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) (300 K) d 170,5, 169,7, 169,6,
169,5 (4 CH3COO), 155,2 (C=N), 150,8 (C-4 của Ph), 148,6 (C-3 6 của
Ph), 81,4 (C-1), 70,1 (C-5), 69,9 (C-3), 68,9 (C-2), 67,6 (C-4), 61,1 (C-6),
54,8, 54,7 (2 CH3OPh), 18,9 (2), 18,7 (2) (4 CH3COO); HRMS (ESI) m /
z cho C23H28O15NS2 [M-K] -, calcd 622.0906, tìm thấy 622.0998.

4.5.2. Kali 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-2,3-dichlorophenyl-aglucosinolate (20b)

20b nguyên chất thu được là chất rắn hơi vàng (250 mg, 79%).
Rf = 0,25 trong 15% MeOH / DCM; mp = 146-148 C (tháng mười hai);
D = +146,12 (c = 4,1, MeOH); IR (độ lệch KBr) vmax 2940, 2885, 1750
[ a]20
(C=O), 1650 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CD3OD) (300 K)  7,67e7,64
(m, 1H, H40-Ph-H), 7.40e7.38 (m, 2H, H5’ và H6’-Ph-H), 5,47 (d,
J1,2 = 5,7 Hz, 1H, H1), 5,28 (t, J2,3 = J3,4 = 9,6 Hz, 1H, H3), 4,98 (t,
J3,4 = J4,5 = 9,6 Hz, 1H, H4), 4,91 (dd, J = 5,7 Hz, 1H, H2), 4,35-4,29
(m, 1H, H5), 4,24 (dd, J5,6b = 4,2 Hz, J6a, 6b = 12,6 Hz, 1H, H6b), 4,06
(dd, J5,6b = 2,4 Hz, J6a, 6b = 12,6 Hz, 1H, H6a), 2,05, 2,01, 1,99, 1,97
(4 s, 12H, CH3COO); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) (300 K) d 170,4,169,6,
169,4, 169,1 (4 CH3COO), 154,0 (C=N), 132,8 (C-3 của Ph), 31,8 (C-4
của Ph), 131,6 (C-1 của Ph), 131,3 (C-2 của Ph), 129,9 (C-6 của Ph),
127,4 (C-5 của Ph), 80,3 (C-1), 69,6 (C-5), 69,4 (C-3), 68,7 (C-2), 67,4
(C-4), 60,9 (C-6), 18,8 (2), 18,7 (2) (4 CH 3COO); HRMS (ESI) m / z đối
với C21H22O13Cl2NS2 [M-K] - , calcd 629.9915 tìm thấy 629.9896.
4.5.3. Kali 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-4-bromophenyl-aglucosinolat (20c)

20c tinh khiết thu được chất rắn màu trắng (144 mg, 71%). R f = 0,42
trong 15% MeOH / DCM; mp = 142e144 C (tháng mười hai); [ a]20D =+
152,3(c = 2,0, MeOH); IR (độ lệch KBr) nmax 2936, 2875, 1750 (C=O),
1600 (C=N) cm-1; 1H NMR (300 MHz, CD3OD) (300 K) d 7,61-7,51 (m,
5H, H2’, H3’, H4’, H5’ và H6’-Ph-H), 5,68 (d, J1,2 = 5,7 Hz, 1H, H1),
5,45 (t, J2,3 = J3,4 = 10,2 Hz, 1H, H3), 5,09-4,99 (m, 2H, H2 và H4),
4,41-4,36 (m, 1H, H5), 4,22 (dd, J5,6b = 4,5 Hz, J6a, 6b = 12,6 Hz, 1H,
H6b), 4,09 (dd, J5,6b = 2,4 Hz, , J6a, 6b = 12,6 Hz, 1H, H6a), 2,07, 2,01,
2,00, 1,96 (4 s, 12H, CH3COO); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) (300 K)
d 170,5, 169,6, 169,4 (2) (4 CH3COO), 153,7 (C=N), 131,1 (C-3, C-5
trong tổng số Ph), 130,9 (C-4 của Ph), 130,0 (C-2, C-6 của Ph), 124,1
(C-1 của Ph), 81,1 (C-1), 69,9, 69,9 (C-5) và (C-3), 68,9 (C-2), 67,5 (C-
4), 61,0 (C-6), 18,9 (2), 18,7 (2) (4 CH3COO); HRMS (ESI) m / z cho
-
13 BrNS2 [M-K]
C 21 H 23 O81 calcd 641.9800 tìm thấy 641.9830.

4.5.4. Kali 2,3,4,6-tetra-O-acetylneo-a-glucobrassicin (20d)

20e nguyên chất thu được là chất rắn hơi vàng (226 mg, 79%).
Rf = 0,28 trong 15% MeOH / DCM; mp = 121-123 C (tháng mười hai); );
D =+ 54,6 (c = 2,47, MeOH); IR (độ lệch KBr) vmax 2940, 1750, 1599,
[ a]20
1442, 1370, 1233, 1059 cm-1; 1H NMR (300 MHz, MeOD) (300 K)  7,67
(d, J = 8,1 Hz, 1H, H4i), 7,38-7,35 (m, 2H, H2i và H7i), 7,18 (t, J = 8.1
Hz, 1H, H6i), 7.07 (t, J = 8.1 Hz, 1H, H5i), 6.14 (d, J = 6.0 Hz, 1H, H1),
5,26 (t, J2,3 J3,4 = 10,2 Hz, 1H, H3), 4,98 (t, J = 10,2 Hz, 1H, H4), 4,89
(dd, J = 6,0 Hz, 1H, H2), 4,32-4,26 (m, 1H, H5), 4,21-4,16 (m, 3H, H6b
và CH2C=N), 4,07 (s, 3H, CH3O), 3,97 (dd,J5,6a = 2,1 Hz, J6a, 6b = 12,6
Hz, H6a), 2,03, 1,98, 1,92, 1,74 (4 s, 12H, 4 CH3COO); 13C NMR (75
MHz, MeOD) (300 K) d 170,5, 169,5, 169,4, 168,8 (4 CH3COO), 155,7
(C¼N), 132,1 (C-8i), 122,7 (C-9i), 121,9 (C-6i), 121,4 (C-2i), 119,2,
118,7 (C-4i và C-5i), 107,4 (C-7i), 104,8 (C-3i), 78,2 (C-1), 69,3, 69,3 (C-
5 và C-3), 68,7 (C-2), 67,7 (C-4), 64,6 (CH3O), 60,9 (C-6), 28,6
(CH2C=N), 18,8, 18,7, 18,6, 18,2 (4 CH3COO); HRMS (ESI) m / z cho
C25H29O14N2S2 [M-K] - , calcd 645.1066, tìm thấy 645.1069.

4.5.5. Kali 2,3,4,6-tetra-O-axetyl-4-metoxy-aglucobrassicin (20e)

 20e nguyên chất thu được là chất rắn màu trắng (221 mg, 69%). R f =
0,20 trong 15% MeOH / DCM; mp = 124-126 C (tháng mười hai);[ a]20D = +
151,2 (c = 1,2, MeOH); IR (độ lệch KBr) vmax 3326, 2941, 2840, 1750,
1599 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CD3OD) (300 K) d 6,98-6,89 (m, 3H,
H2i, H6i và H7i), 6,46 (d, j5i, 6i = 7,5 Hz, 1H, H5i), 6,06 (d, j1,2 = 5,4 Hz,
1H, H1) 5,28 (t, J2,3 = J3,4 = 9,6 Hz, 1H, H3), 5,09-4,90 (m, 2H, H2 và
H4), 4,55 (d, Jgem = 16,8 Hz, CHHC=N), 4,30-4,23 (m, 1H, H5), 4,17-
3,50 (m, 3H, H6b, H6a và CHHC=N), 3,88 (s, 3H, CH3O), 2,02, 1,98,
1,92, 1,83 (4 s, 12H, 4 CH3COO); 13C NMR (75 MHz, MeOD) (300 K) 
170.4169,6, 169,2, 169,0 (4 CH3COO), 158,2 (C=N), 153,7 (C-4i), 137,6
(C-8i), 122,0 (C-6i), 121,9 (C-2i), 115,6 (C-9i), 108,3 (C-3i), 104,6 (C-7i),
98,7 (C-5i), 79,4 (C-1), 74,8 (C-5), 73,3 (C-3), 69,2 (C-2), 67,1 (C-4),
60,7 (C-6), 53,9 (CH3O), 29,6 (CH2C=N), 18,7 (2), 18,6 (2) (4 CH3COO);
HRMS (ESI) m / z cho C25H29O14N2S2 [M-K] -, calcd 645.1066, tìm thấy
645.1069.
4.6. Quy trình chung để điều chế glucosinolate (21a-e)

Thành dung dịch O-axetylglucosinolat 20a-e trong MeOH khan (20

mL) trong môi trường N2 được thêm MeOK khô (0,4 eq.) Cho đến khi pH
= 8-9 đã đạt được. Sau khi khuấy trong 3 giờ ở nhiệt độ cao, dung dịch
là được làm trung tính bằng cách bổ sung axit axetic băng và sau đó
dung dịch được cô đặc dưới áp suất giảm. GLs 20a-e thu được bằng
phương pháp sắc ký nhanh rửa giải với EtOAc: - MeOH: H2O (16: 4: 1).

4.6.1. 2,3-Dichlorophenyl-a-glucosinolate (21b)

26b nguyên chất thu được chất rắn màu trắng (51,0 mg, 85%). Rf ¼
0,1 in EtOAc / MeOH / H2O (16: 4: 1); mp ¼ 125e127 C (tháng mười
hai); [ a]20D =+ 121,4
(c = 1,9, H2O); IR (độ lệch KBr) vmax 3355 (OH), 1566 (C=N), 1413, 1275,
1262, 1064 cm 1 ; 1H NMR (300 MHz, D2O) (300 K) d 7,67-7,63 (m,1H,
H40 -Ph-H), 7,42e7,34 (m, 2H, H5'và H6’ -Ph-H), 5,14 (d,
J1,2 = 5,4 Hz, 1H, H1), 3,84-3,79 (m, 1H, H5), 3,71-3,57 (m, 3H, H6b,
H6a và H2), 3,49 (t, J =9,6 Hz, 1H, H3), 3,34 (dd, J = 9,6 Hz, 1H,
H4); 13C NMR (75 MHz, D2O) (300 K)  160,2 (C=N), 132,7 (C-3 trong
tổng số Ph), 132,3 (C-4 của Ph), 131,0 (C-1 của Ph), 130,6 (C-2 của
Ph), 129,4 (C-6 của Ph), 127,8 (C-5 của Ph), 84,4 (C-1), 73,2 (C-5), 72,9
(C-3), 70,1 (C-2), 68,4 (C-4), 59,4 (C-6); HRMS (ESI) m / z cho
C13H14O9Cl2NS2 [M-K] - , calcd 461.9493 tìm thấy 461.9560.

4.6.2. a-Neoglucobrassicin (21d)

 21d tinh khiết thu được chất rắn màu nâu đỏ (74,0 mg, 80%).
Rf 0,11 trong EtOAc / MeOH / H2O (16: 4: 1); mp = 115-117 C (tháng
mười hai); ); [ a]20D =+ 47,8 (c = 1,6, H2O); IR (độ lệch KBr) vmax 3125,
2936, 1714,1575, 1453, 1242, 1060 cm -1 ; 1H NMR (300 MHz, D2O)
(300 K)  7,66 (d, J ¼ 7,5 Hz, 1H, H4i), 7,45e7,40 (m, 2H, H7i và H2i),
7,24 (t, J = 7,5 Hz, 1H, H6i), 7,09 (t, J = 7,5 Hz, 1H, H5i), 5,81 (d, J = 5,1
Hz, H1), 4,12 (d, Jgem = 16,8 Hz, 1H, CHHCN), 3,99-3,97 (m, 4H,
CHHC=N và CH3O), 3,69e3,60 (m, 2H, H2 và H5), 3,56e3,41 (m,
2H, H3 và H6b), 3,34e3,25 (m, 2H, H6a và H4); 13C NMR (75 MHz, D2O)
(300 K) d 161,6 (C=N), 131,9 (C-8i), 122,7 (C-9i), 122,6 (C-6i), 122,5 (C-
2i), 120,0 (C-5i), 118,9 (C-4i), 108,3 (C-7i), 105,3 (C3i), 82,5 (C-1), 72,9
(C- 5), 72,8 (C-3), 70,2 (C-2), 68,7 (C-4), 65,6 (CH3O), 59,4 (C-6), 28,8
(CH2C=N); HRMS (ESI) m / z cho
C17H21O10N2S2 [M-K] -, calcd 477.0643, tìm thấy 477.0667.

4.6.3. a-4-Methoxyglucobrassicin (21e)

21e nguyên chất thu được là chất rắn màu nâu đỏ (14,0 mg, 95%).
Rf = 0,08 trong EtOAc / MeOH / H2O (16: 4: 1); mp = 106-109 C (tháng
mười hai); [a]20D =+ 138,4 (c = 1,0, H2OIR) (độ trôi KBr); vmax 3454, 3267,
2908, 2842, 1260, 1060 cm-1 ; 1H NMR (300 MHz, D2O) (300 K) d 7.10-
7.01 (m, 3H, H2i, H6i và H7i), 6,57 (d, J5i, 6i = 6,9 Hz, 1H, H5i), 5,80 (d,
J1,2 = 5,4 Hz, 1H, H1), 4,41 (d, Jgem = 16,8 Hz, 1H, CHHC=N), 4,17 (d,
Jgem = 16,8 Hz, 1H, CHHC=N), 3,83 (s, 3H, CH3O), 3,75-3,72 (m, 1H,
H5), 3,66-3,39 (m, 4H, H2, H3, H6b và H6a), 3,33 (t, J - 9,6 Hz, 1H, H4);
13C NMR (75 MHz, D2O) (300 K) d 163,1 (C¼N), 153,7 (C-4i), 137,5
(C-8i), 122,6 (C-6i và C-2i), 115,9 (C-9i) 108,3 (C-3i), 105,1 (C7i), 100,0
(C-5i), 82,7 (C-1), 72,9 (C-5 và C-3), 70,3 (C-2), 68,7 (C-4), 59,6 (C-6),
55,2 (CH3O), 29,9 (CH2C=N); HRMS (ESI) m / z cho C17H21O10N2S2 [M-
K] - , calcd 477.0643, tìm thấy 477.0686.

4.7. Thử nghiệm chống viêm

Các thử nghiệm chống viêm được tiến hành sau văn học [17,30]. Tế
bào THP-1 bệnh bạch cầu đơn nhân ở người là lấy từ Bộ sưu tập Văn
hóa Kiểu Mỹ. Các tế bào được nuôi trong 10% huyết thanh bò thai đã
khử hoạt tính được đun nóng và Invitrogen RPMI-1640 chứa 2 mM L-
glutamine. Các cytokine (TNF-a) Bộ dụng cụ Elisa bao gồm thuốc thử
thu được từ BD Khoa học sinh học (hệ thống R & D).
Tất cả các hợp chất được hòa tan trong nước cất vô trùng sau đó
được pha loãng thêm trong Invitrogen DMEM (Đại bàng sửa đổi của
Dulbecco Trung bình). Các tế bào được nuôi trong một bình 75 mL và
được duy trì ở 37⁰C trong môi trường ẩm 5% CO2. Các thí nghiệm đã
được thực hiện khi các tế bào đã đạt 1x105 tế bào / ml. PMA được hòa
tan trong DMSO đến nồng độ 1 mg / mL sau đó thêm pha loãng trước
khi sử dụng. Các tế bào được mạ với mật độ tế bào là 10x104 tế bào /
ml, ở 100 ml / giếng trong đĩa 96 giếng sau đó được xử lý bằng PMA
đến nồng độ cuối cùng là 50 nM trong 24 giờ ở 37% trong điều kiện làm
ẩm Khí quyển 5% CO2.
LPS (LPS từ Escherichia coli O111: B4) được hòa tan trong
nước vô trùng đến nồng độ 5 mg / mL sau đó pha loãng thêm để
dự trữ làm việc 10 mg / mL. Các ô THP-1 đã được thử thách với
các hợp chất khác nhau từ 0,1 mM đến 15 mM. Họ đã được kích thích
bằng LPS ở nồng độ cuối cùng là 50 ng / mL. Chất nổi nổi được thu
thập sau 4 giờ ủ và bảo quản ở 20 ⁰C cho đến khi phân tích ELISA.
Một ELISA sandwich được sử dụng để sàng lọc các chất nổi trên bề
mặt cho giải phóng cytokine TNF-a. Các tấm ELISA được phủ một lớp
kháng thể bắt giữ (1: 250) được pha loãng trong dung dịch đệm và
để ở 4 C qua đêm. Các đĩa ELISA được hút và rửa 3 lần với 1 x PBST
(0,05% Tween-20) trước khi thêm 200 ml / giếng dịch pha loãng khảo
nghiệm được ủ ở nhiệt độ phòng trong 1 h. Tiêu chuẩn được chuẩn bị
bằng 2 lần pha loãng nối tiếp để nằm trong khoảng từ 500 pg /
mL 7,8 pg / mL trong dung dịch pha loãng đệm xét nghiệm. Tiêu chuẩn
và mẫu là được thêm bốn phần vào các giếng thích hợp và ủ ở
nhiệt độ phòng trong 2 giờ. Sau khi ủ 2 giờ, các đĩa này đã hút và rửa
với tổng cộng 5 lần rửa. Sự phát hiện kháng thể và thuốc thử HRP được
thêm vào (100 ml / giếng) và ủ ở nhiệt độ phòng trong 1 giờ. Các tấm
được hút và rửa một lần nữa, lần này với tổng cộng 7 lần giặt và được
ngâm trong 30 giây giữa mỗi lần rửa. Các dung dịch chất nền đã được
thêm vào (100 ml / tốt) và ủ ở nhiệt độ phòng trong 30 phút trong bóng
tối. Phản ứng được dừng lại bằng cách thêm 50 ml / giếng dung dịch
dừng kit sau đó đọc ở bước sóng 450 nm trong máy đọc đĩa trong vòng
30 phút với l hiệu chỉnh ở bước sóng 570 nm. Tất cả các kết quả là
trung bình (SD) của 3 khác nhau các thí nghiệm chạy trùng lặp (P 0,09).

Sự nhìn nhận
Nghiên cứu này được hỗ trợ bởi Quỹ Quốc gia Việt Nam
cho Phát triển Khoa học và Công nghệ (NAFOSTED) [tài trợ
số 104.06-2016.03 (3/2017/104 / HÐTN)].
Phụ lục A. Dữ liệu bổ sung
Dữ liệu bổ sung liên quan đến bài viết này có thể được tìm thấy tại
https://doi.org/10.1016/j.carres.2017.11.004.

[1] D.T.H. Verhoeven, H. Verhagen, R.A. Goldbohm, P.A. van den

Brandt, G. van
Poppel, Chemico-Biological Interact. 103 (1997) 79e129.
[2] C. Bonnesen, I.M. Eggleston, J.D. Hayes, Cancer Res. 61 (2001)
6120e6130.
[3] Z. Bialy, W. Oleszek, J. Lewis, G. Fenwick, Plant Soil 129 (1990)
277e281.
[4] E. Bloem, S. Haneklaus, E. Schnug, J. plant Nutr. 28 (2005)
763e784.
[5] A.L. Gimsing, J. Kirkegaard, Soil Biol. biochem. 38 (2006)
2255e2264.
[6] A.L. Gimsing, J.A. Kirkegaard, Phytochem. Rev. 8 (2009) 299e310.
[7] S. Cassel, B. Cansenave, G. De'le'ris, L. Latxague, P. Rollin,
Tetrahedron 54
(1998) 8515e8524.
[8] M. Viaud, P. Rollin, Tetrahedron Lett. 31 (1990) 1417e1418.
[9] J.R. Mays, R.W. Roska, S. Sarfaraz, H. Mukhtar, S.R. Rajski,
ChemBioChem 9
(2008) 729e747.
[10] M.H. Benn, J. Chem. Soc. (1964) 4072e4074.
[11] M.H. Benn, Can. J. Chem. 41 (1963) 2836e2838.
[12] M.H. Benn, Can. J. Chem. 43 (1965) 1e5.
[13] M.H. Benn, M.G. Ettlinger, Chem. Commun. Lond. (1965) 445e447.
[14] P. Rollin, A. Tatibouet, C. R. Chim. 14 (2011) 194 € e210.
[15] J.W. Fahey, A.T. Zalcmann, P. Talalay, Phytochemistry 56 (2001)
5e51.
[16] Q.V. Vo, C. Trenerry, S. Rochfort, J. Wadeson, C. Leyton, A.B.
Hughes, Bioorg.
Med. Chem. 21 (2013) 5945e5954.
[17] Q.V. Vo, C. Trenerry, S. Rochfort, J. Wadeson, C. Leyton, A.B.
Hughes, Bioorg.
Med. Chem. 22 (2014) 856e864.
[18] M.G. Ettlinger, A.J. Lundeen, J. Am. Chem. Soc. 79 (1957)
1764e1765.
[19] M. Blanc-Muesser, H. Driguez, M. Viaud, P. Rollin, Tetrahedron
Lett. 31 (1990)
3867e3868.
[20] J. Defaye, H. Driguez, S. Poncet Regis, Carbohydr. Res. 130 (1984)
299 e315.
[21] T. Fujihira, G. Arakawa, H. Kamijo, T. Takio, M. Seno, J. Carbohydr.
Chem. 22
(2003) 73e78.
[22] R.T. Dere, A. Kumar, V. Kumar, X.-M. Zhu, R.R. Schmidt, J. Org.
Chem. 76 (2011)
7539e7545.
[23] N. Floyd, B. Vijayakrishnan, J.R. Koeppe, B.G. Davis, Angew.
Chem. Int. Ed. 48
(2009) 7798e7802.
[24] T. Fujihira, S. Saito, T. Miki, T. Takido, H. Kamijo, M. Seno, J.
Carbohydr. Chem.
22 (2001) 73e78.
[25] T. Fujihira, M. Chida, H. Kamijo, T. Takido, M. Seno, J. Carbohydr.
Chem. 21
(2002) 287e292.
[26] H. Grugel, T. Minuth, M.M.K. Boysen, Synthesis 19 (2010)
3248e3258.
[27] Q.V. Vo, C. Trenerry, S. Rochfort, A.B. Hughes, Tetrahedron 69
(2013)
8731e8737.
[28] M.S.C. Pedras, E.E. Yaya, S. Hossain, Org. Biomol. Chem. 8 (2010)
5150e5158.
[29] Q.V. Vo, C. Trenerry, S. Rochfort, J. White, A.B. Hughes, Acta.
Crystallogr. C.
Struct. Chem. 70 (2014) 588e594.
[30] U. Singh, J. Tabibian, S.K. Venugopal, S. Devaraj, I. Jialal, Clin.
Chem. 51 (2005)
2252e2256.
[31] C. Alexander, E.T. Rietschel, J. Endotoxin Res. 7 (2001) 167e202.
[32] S. Rosenkranz, D. Knirel, H. Dietrich, M. Flesch, E. Erdmann, M.
Bohm, FASEB J. €
16 (2002) 1958e1960.
[33] C.S. Hofmann, G.E. Sonenshein, FASEB J. 17 (2003) 702e704.
[34] H. Wang, X. Zhu, Org. Biomol. Chem. 12 (2014) 7119e7126.