high-performance liquid chromatography

is a technique and analytical chemistry

used to separate identify and quantify

each component in a mixture as well as

other forms of chromatography in HPLC

there is a mobile phase which forced by

a pump to pass through the system and

there is a stationary phase called a

column which located in an oven where

the temperature can be controlled

the sample can be automatically injected

into an HPLC system by the use of HPLC

auto sampler

or can be manually introduced into the

injector using a syringe

there is also a detector attached to the

HPLC system which measures the analytes

after its separation in the column

the pump forces the mobile phase through

the column and then the detector under

high pressures

in the HPLC system a vacuum pump and a

dagger sir are connected to the pump and

used to remove dissolved gases from the

solvents the pump drives each solvent to

the mixing chamber where mixing takes

place under higher pressures HPLC

analysis commonly uses isocratic or

gradient elution an isocratic mode the

mobile phase composition remains

constant throughout the procedure

whereas in gradient mode the mobile

phase composition is changed during the

separation process

sample introduction can be accomplished

in various ways the simplest method is

to use an injection valve in the load

position the high-pressure el Yuting

solvent flows to the column directly the

loop is loaded at the atmospheric

pressure from a syringe via the needle

port excess sample exits the loop via

vent port after loading the sample the

valve is switched to the inject position

the flow delivered by the pump flows

through the loop forcing the sample

ahead of it flowing to the column

then the valve returns to the load

position and the mobile phase moves the

sample through the column

the separation is based on differential

partitioning of the sample components

between the mobile and stationary phases

the component which has more affinity to

the mobile phase consequently less

affinity to the stationary phase travels

faster and eluded out first and the

component which has more affinity to the

stationary phase consequently more

interaction travels slower and diluted

later this separation can be carried out

according to which type of HPLC used

there are two main types of HPLC reverse

phase and normal phase reversed phase

has a non-polar stationary phase and

moderately polar mobile phase one common

stationary phase is a silica which has

been modified by attaching a straight

chain alkyl group to its surface such as

the ITAT as'll group c18 or the octal

group c8

in this case the more hydrophobic the

analytes are the more retained they will

be on the stationary phase the more

polar they are the more they will prefer

the mobile phase

then normal phase chromatography the

stationary phase is polar and the mobile

phase is non-polar this method separates

analytes based on their affinity for a

polar stationary surface such as silica

in this case the more polar the analytes

are the more retained they will be on

the stationary phase the more

hydrophobic they are the more they will

prefer the mobile phase

as compounds ellyiot from the column

they interact with the detector

different types of detectors can be used

such as the UV this detector which

showing an absorption spectrum in the

ultraviolet or visible region for UV

detection a deuterium discharge lamp as

a light source is used and four

components detection and visible region

a tungsten lamp is used then UV this

detector we can also find entrance slit

lens prism or diffraction grating exit

slit flow cell and detector for

absorption measurements

light from the lamp is shown onto the

prism and dispersed according to

wavelength when the measurement is

performed with a specific wavelength the

angle of the prism is adjusted so that

the light of this wave can shine on the

flow cell as the compound zealot from

the column they enter the flow cell

where the bonding and non-bonding

electrons of these compounds can absorb

energy in the form of ultraviolet or

visible light

the manner in which the final data is

displayed is based on the computer in

software

the number of Peaks present can indicate

how many components are in the mixture

usually the x axis of the HPLC

chromatogram shows the amount of time

taken for the analytes to pass through

the column and reach the detector

typically the y-axis or the area of the

peak is a reflection of the amount of a

specific analyte that's present

kromatografi cair kinerja tinggi

adalah teknik dan kimia analitik

digunakan untuk memisahkan identifikasi dan kuantifikasi

setiap komponen dalam campuran juga

bentuk kromatografi lain dalam HPLC

ada fase seluler yang dipaksakan oleh

pompa untuk melewati sistem dan

ada fase diam yang disebut a

kolom yang terletak di oven mana

suhunya bisa dikontrol

sampel dapat secara otomatis disuntikkan

ke dalam sistem HPLC dengan menggunakan HPLC

sampler otomatis

atau dapat secara manual dimasukkan ke dalam

injektor menggunakan jarum suntik

ada juga detektor yang terpasang pada

Sistem HPLC yang mengukur analit

setelah pemisahannya di kolom

pompa memaksa fase gerak melalui

kolom dan kemudian detektor di bawah

tekanan tinggi

dalam sistem HPLC pompa vakum dan a

belati pak terhubung ke pompa dan

digunakan untuk menghilangkan gas terlarut dari

pelarut yang digunakan pompa untuk setiap pelarut

ruang pencampuran tempat pencampuran berlangsung

ditempatkan di bawah tekanan yang lebih tinggi HPLC

Analisis umumnya menggunakan isokratik atau

gradien elusi dan mode isokratik

komposisi fase seluler tetap ada

konstan sepanjang prosedur

sedangkan dalam mode gradien ponsel

komposisi fase diubah selama

proses pemisahan
Pengenalan sampel dapat dilakukan

dalam berbagai cara metode yang paling sederhana adalah

untuk menggunakan katup injeksi dalam beban

posisikan el Yuting bertekanan tinggi

aliran pelarut ke kolom secara langsung

loop dimuat di atmosfer

tekanan dari jarum suntik melalui jarum

sampel kelebihan port keluar dari loop melalui

curhat port setelah memuat sampel tersebut

katup dialihkan ke posisi menyuntikkan

aliran yang dialirkan oleh pompa

melalui loop memaksa sampel

di depannya mengalir ke kolom

kemudian katup kembali ke beban

posisi dan fase seluler bergerak

sampel melalui kolom

pemisahan didasarkan pada diferensial

partisi komponen sampel

antara fase mobile dan stasioner

komponen yang memiliki lebih banyak kedekatan dengan

fase seluler akibatnya kurang

afinitas dengan perjalanan fase stasioner

lebih cepat dan menghindari dulu dan

komponen yang memiliki lebih banyak kedekatan dengan

fase stasioner akibatnya lebih

interaksi berjalan lebih lambat dan encer

nanti pemisahan ini bisa dilakukan

sesuai dengan jenis HPLC yang digunakan

ada dua jenis utama HPLC terbalik

fase dan fase normal fase terbalik

memiliki fase diam non-polar dan

fase seluler satu kutub sedang yang umum

fase diam adalah silika yang memiliki

telah dimodifikasi dengan melampirkan lurus

rantai gugus alkil ke permukaannya seperti

ITAT as'll mengelompokkan c18 atau oktal

grup c8

dalam hal ini semakin hidrofobik

analit semakin dipertahankan

berada di fase stasioner lebih

kutub mereka semakin banyak yang mereka inginkan

fase seluler

kemudian kromatografi fase normal

fase stasioner adalah kutub dan mobile

fase non-polar memisahkan metode ini

analit berdasarkan afinitas mereka untuk a

permukaan stasioner kutub seperti silika

dalam hal ini semakin kutub analit

semakin mereka dipertahankan

fase diam lebih banyak

hidrofobik mereka semakin mereka akan

lebih suka fase seluler

sebagai senyawa ellyiot dari kolom

mereka berinteraksi dengan detektor
berbagai jenis detektor dapat digunakan

seperti UV detektor ini yang

menunjukkan spektrum serapan di

wilayah ultraviolet atau terlihat untuk UV

mendeteksi lampu debit deuterium sebagai

sumber cahaya digunakan dan empat

deteksi komponen dan wilayah yang terlihat

lampu tungsten digunakan kemudian UV ini

detektor kami juga dapat menemukan celah masuk

prisma lensa atau keluar kisi difraksi

celah aliran sel dan detektor untuk

pengukuran penyerapan

cahaya dari lampu ditampilkan ke

prisma dan tersebar menurut

panjang gelombang saat pengukuran

dilakukan dengan panjang gelombang tertentu

sudut prisma disesuaikan sehingga

cahaya dari gelombang ini dapat bersinar pada

sel mengalir sebagai senyawa zealot dari

kolom mereka memasuki sel aliran

dimana bonding dan non-bonding

elektron dari senyawa ini dapat menyerap

energi dalam bentuk ultraviolet atau

cahaya tampak

cara di mana data akhir

ditampilkan berdasarkan komputer pada

perangkat lunak

jumlah puncak yang ada dapat menunjukkan

berapa banyak komponen dalam campuran

biasanya sumbu x HPLC

kromatogram menunjukkan jumlah waktu

diambil untuk melewati analit

kolom dan mencapai detektor

biasanya sumbu y atau area

puncak adalah cerminan dari jumlah a

analit khusus yang ada