BIOLOGI LAUT

Artikel Pada Jurnal Internasional

DOSEN PENGAMPU : Dr. Ir. SYAFRUDDIN NASUTION, M.Sc.

DISUSUN OLEH :

SABRINA NUR FITRI

(2004125073)
ILMU KELAUTAN / B

JURUSAN ILMU KELAUTAN

FAKULTAS PERIKANAN DAN KELAUTAN

UNIVERSITAS RIAU
2021
 Jurnal Ilmiah Internasional

1. Reproduksi Bivalvia Laut Tropis

Antonio, I., Sousa, A., Lenz, T., Funo, I., Lopes, R., & Figueiredo, M. (2021).
Reproductive cycle of the mangrove oyster, Crassostrea rhizophorae (Bivalvia:
Ostreidae) cultured in a macrotidal high-salinity zone on the Amazon mangrove coast
of Brazil. Acta Amazonica, 51, 113-121.
ACTA
AMAZONICA http://dx.doi.org/10.1590/1809-4392202003582

ORIGINAL ARTICLE

Reproductive cycle of the mangrove oyster,

Crassostrea rhizophorae (Bivalvia: Ostreidae) cultured
in a macrotidal high-salinity zone on the Amazon
mangrove coast of Brazil
Ícaro ANTONIO1,2* , Ana SOUSA2, Tiago LENZ3, Izabel FUNO4, Rodolf LOPES5, Marina FIGUEIREDO1,2

1
Universidade Estadual do Maranhão, Centro de Ciências Agrárias, CEP 65055-310, São Luís, MA, Brazil
2
Universidade Estadual do Maranhão, Programa de Pós-graduação em Recursos Aquáticos e Pesca, CEP 65055-310, São Luís, MA, Brazil
3
Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de Alagoas, CEP 57200-000, Penedo, AL, Brazil
4
Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Maranhão, CEP 65095-460, São Luís, MA, Brazil
5
Universidade Federal Rural de Pernambuco, Programa de Pós-graduação em Recursos pesqueiros e Aquicultura, CEP 52171-900, Recife, PE, Brazil
* Corresponding author: icaro_gomes@hotmail.com; https://orcid.org/0000-0002-4538-3522

ABSTRACT
This study aimed to establish the reproductive cycle of the mangrove oyster, Crassostrea rhizophorae cultured in the macrotidal
estuary of the Paciência River, Maranhão state, on the northeastern coast of Brazil, and its relationship with environmental
factors. Oysters were collected monthly throughout 2013 for histological analysis of sex ratio, gonadal development and
condition index. The sex ratio was 1:1.39 (M:F) and only 5 specimens presented hermaphroditism. The breeding process was
continuous throughout the year and mature (IIIA stage) and spawning oysters (IIIB stage) were present in practically all months.
Low variation in temperature seemed to be the main factor for the continuity of the reproductive cycle. Besides temperature,
the relationship between rainfall, salinity and primary productivity affected the stimulus and timing of reproductive events.
The rainy season, with low values of salinity and high values of chlorophyll a and particulate organic matter, appeared to be
the main reproductive period, with release of gametes and production and maturation of new gamete cohorts in the short
term. In the tropics, where gamete maturation and release seem to be continuous and concomitant, the condition index does
not appear to be the best method to assess reserve accumulation peaks and gonadal repletion.
KEYWORDS: reproduction; spawning; environmental factors; brackishwater aquaculture

Ciclo reprodutivo da ostra do mangue, Crassostrea rhizophorae (Bivalvia:

Ostreidae) cultivada em uma zona de macromarés de alta salinidade na
costa de manguezais da Amazônia do Brasil
RESUMO
Este estudo teve como objetivo estabelecer o ciclo reprodutivo da ostra do mangue, Crassostrea rhizophorae cultivada no estuário
de macromarés do Rio Paciência, Maranhão, na costa nordeste do Brasil, e suas relações com fatores ambientais. As ostras
foram coletadas mensalmente ao longo de 2013 para análise histológica da proporção sexual, desenvolvimento gonadal e índice
de condição. A proporção sexual foi de 1:1,39 (M:F) e apenas 5 espécimes apresentaram hermafroditismo. A maturação foi
contínua ao longo do ano e ostras maduras (estágio IIIA) e em desova (estágio IIIB) estiveram presentes em praticamente todos
os meses. A baixa variação de temperatura parece ser o principal fator para a continuidade da gametogênese. Entretanto, além
da temperatura, a relação entre precipitação, salinidade e produtividade primária afetou o estímulo e o tempo dos eventos
reprodutivos. A estação chuvosa, com baixos valores de salinidade e altos valores de clorofila a e matéria orgânica particulada,
pareceu ser o principal período reprodutivo, com liberação de gametas e produção e maturação de novas coortes de gametas
em curto prazo. Nos trópicos, onde a maturação e liberação de gametas parecem ser contínuas e concomitantes, o índice de
condição não se apresenta como o melhor método para avaliar os picos de acúmulo de reserva e desenvolvimento gonadal.
PALAVRAS-CHAVE: reprodução; desova; fatores ambientais; aquicultura em água salobra

CITE AS: Antonio, Í.; Sousa, A.; Lenz, T.; Funo, I.; Lopes, R.; Figueiredo, M. 2021. Reproductive cycle of the mangrove oyster, Crassostrea rhizophorae
(Bivalvia: Ostreidae) cultured in a macrotidal high-salinity zone on the Amazon mangrove coast of Brazil. Acta Amazonica 51: 113-121.

113 VOL. 51(2) 2021: 113 - 121

ACTA
AMAZONICA ANTONIO et al. Reproductive cycle of Crassostrea rhizophorae
INTRODUCTION
The mangrove oyster, Crassostrea rhizophorae (Guilding
1828) is found mainly in mangroves, bays, and estuarine
regions, fixed on rocks and consolidated substrates (Rios
2009). In mangroves, it is usually found settled on the red
mangrove, Rhizophora mangle (Linnaeus 1753) roots in the
intertidal region (Bacon 1971). The oysters of the Crassostrea
genus are oviparous and dioecious and may present sequential
hermaphroditism without sexual dimorphism with external
fertilization followed by larval planktotrophic development.
The gamete release in tropical regions occurs continuously
during the year, with evidence of spawning peaks stimulated
by environmental variables (Vélez 1977; Lenz and Boehs 2011;
Paixão et al. 2013).
The Island of Maranhão, located on the northeastern
Brazilian coast, is part of the largest and best-preserved
continuous mangrove area in Brazil, known as the Amazon
Macrotidal Mangrove Coast (AMMC) (Nascimento Jr et al.
2013; Schettini et al. 2020). The AMMC is 480 km long with
7600 km2 of continuous mangrove forests along the coasts
of the states of Pará and Maranhão (Souza Filho 2005). The
coastal environments of this region are influenced by the
macrotide phenomenon, reaching tidal amplitudes of up to
7 m. This phenomenon, associated with the low slope of the
local coastal plains, and two well-defined annual seasons, a
rainy season (February to July) and a dry season (August to
January), results in a yearly variation in coastal salinity from
0.1 to 49.2 (Sampaio et al. 2020).
Among the environmental variables with a wide range
of variation in Amazon coastal waters, salinity and primary
productivity are the most important in the modulation of
oyster reproductive biology (Pantoja et al. 2020). Salinity
appears to exert a strong influence on the maturation and
Figure 1. Location of the culture area of mangrove oysters, Crassostrea rhizophorae in the Paciência River estuary, municipality of Raposa, Maranhão state, Brazil. The
asterisk marks the raft location in the estuary. This figure is color in the electronic version.
114 VOL. 51(2) 2021: 113 - 121
spawning of oysters in the Amazon (Paixão et al. 2013). Studies
indicate that the mangrove oyster, Crassostrea rhizophorae
tolerates salinities from 5 to 35 (Guimarães et al. 2008), but,
in our study area, salinity exceeds 40 during the dry period
(Funo et al. 2019). In addition, primary productivity increases
during the Amazon rainy season, suggesting that rainfall
influences the composition, density, biomass, and diversity
of phytoplankton (Costa et al. 2011). The interaction among
composition and abundance of phytoplankton, salinity, and
local hydrodynamics modulates metabolic activity of the
reproduction of bivalves, through the supply of essential fatty
acids (Silva et al. 2020).
In this context, the present study sought to determine
the periods of more significant reproductive activity, and
the influence of environmental variables on maturation and
spawning of C. rhizophorae cultured in the Paciência River
estuary on Maranhão Island, at the eastern extreme of the
AMMC. This information has not previously been available
for C. rhizophorae in the AMMC and can help to determine
the best periods for oyster recruitment, thus supporting oyster
farming and management actions that seek the sustainable
exploitation of natural oyster beds.
MATERIAL AND METHODS
Study area and environmental characteristics
The oysters used in this study were collected in a culture
area located in the Paciência River estuary, Maranhão state,
northeastern coast of Brazil (2º25’38”S, 44º04’08.5”W)
(Figure 1). The culture was carried out on a raft, and oysters
were kept inside cages, with five circular trays, at an average
density of 50 oysters tray-1. Oyster spats used in the culture
were recruited using artificial PET bottle collectors installed
in the Paciência estuary. Oyster spats were genetically
ACTA
AMAZONICA ANTONIO et al. Reproductive cycle of Crassostrea rhizophorae
characterized by the PCR-Multiplex species-specific technique
and confirmed as C. rhizophorae by the presence of 640 bp
(Lopes et al. 2018).
Environmental variables were measured fortnightly at
low tide by the raft where oysters were collected. Data on
temperature (ºC), salinity (psu), pH and dissolved oxygen
(mg L-1) were obtained with a multiparameter YSI 556MPS;
and transparency (cm) with a Secchi disk. Chlorophyll a and
suspended particulate matter data (organic and inorganic
fractions) (mg L-1) were obtained by filtering two liters of water
and analyzed following the protocol of Jeffrey and Humphrey
(1975) for chlorophyll a and Cubillo et al. (2012) for total
particulate matter (TPM), particulate organic matter (POM)
and particulate inorganic matter (PIM). The rainfall data were
obtained from the Geoenvironmental Nucleus - NUGEO of
Universidade Estadual do Maranhão.
Oyster sampling and biometric measurements
Every month from January to December 2013, 30
Crassostrea rhizophorae oysters were randomly collected from
the culture cages (total n = 360). Twenty individuals were
assigned for histological analysis and ten for condition index
determination. Once collected, oysters were immediately
transported to the Laboratory of Physioecology, Reproduction
and Cultivation of Marine Organisms of Universidade
Estadual do Maranhão for analysis. Each oyster was measured
for shell height (anteroposterior axis) with a 0.1-mm precision
caliper, and weighed (for total weight, fresh shell weight and
fresh soft tissue weight) using a 0.001-g precision balance.
Tissue was left on absorbent paper for 5 min to remove excess
water before weighing to determine the fresh soft tissue weight.
Condition index
The condition index (CI) was calculated monthly based
on the dry weight of 10 oysters. The soft parts and shells of
the oysters were placed in preweighed aluminum cups and
dried at 60 ºC to constant dry weight. The condition index
was calculated as CI = W1 x 1000 / W2, where W1 is the dry
soft-part weight of 10 oysters and W2 is the dry-shell weight
of the same 10 oysters.
Histological analysis
Gonadal development stages were evaluated monthly
through histological analysis of approximately 17 oysters
(total n = 196). The meat section between the labial palps and
pericardial cavity was fixed in Davidson saline solution for 24
h and preserved in 70% ethanol for subsequent dehydration
by successive baths in different ethanol gradations and then
incorporated into paraffin. Thin cross-sections of 5 μm
were obtained with a semiautomatic microtome. The slides
were stained with Harris Hematoxylin and Eosin (Castilho-
Westphal et al. 2015) and mounted on glass slides in mounting
medium (Entellan).
115 VOL. 51(2) 2021: 113 - 121
The slides were examined under light microscopy and
microphotographs were taken of selected material. Males,
females and hermaphrodites were differentiated by the
presence of cells of spermatogenesis or oogenesis. The
gonadal development stages were determined using the scale
described by Antonio and Camacho (2019), as follows: stage
0 - sexual rest; I - gonial multiplication; II – gametogenesis;
IIIA – maturation; IIIB – total or partial emptying; IIIC –
recovery between successive releases and; IIID – end of the
breeding season (spent). The spawning season was evaluated
by determining the monthly distribution of the frequency of
different maturation stages concerning the condition index.
Statistical analysis
Differences in environmental variables between the
rainy and dry seasons were evaluated with Student´s t tests.
The 12 monthly samples of size (shell height) and CI were
compared with one-way ANOVAs after confirming the
normal distribution of the data with Kolmogorov–Smirnov
tests and homogeneity of variance with Cochran tests, and
then compared pairwise with post hoc Student–Newman–
Keuls (SNK) tests.
The sex ratio of male to female oysters was determined
monthly and for the overall and tested for significant
differences with Chi-square non-parametric tests. Statistical
analyses were performed using Statistica 7 and a significance
level of α = 5%.
RESULTS
During the monitoring period, the salinity varied from 31
in April to 42 in December, with significantly higher values
in the dry season (Table 1; Figure 2a). During the dry season,
the dissolved oxygen and water transparency were significantly
higher (Table 1; Supplementary Material, Figure S1). Monthly
rainfall, which varied from 0.4 to 296 mm3, chlorophyll a
and particulate organic matter were significantly higher in
the rainy season (Table 1; Figure 2). There was no significant
difference between seasons for temperature and pH (Table 1;
Supplementary Material, Figure S2).
The condition index varied significantly (F(11, 108) = 7.21, P
< 0.0001) among months (Figure 3). During the rainy season,
the CI increased continuously and peaked in May (53.5 ±
16.5). The CI then decreased significantly between May and
July, increased again in August, followed by a continuous
decrease until November, when the lowest value was observed
(20.0 ± 12.5) (Figure 3).
Mean shell height varied from 59.5 ± 6.6 mm in January
to 68.9 ± 9.1 mm in March (n = 360), with no significant
difference among months (F(11, 347) = 4.29, P = 0.0523).
No sexual dimorphism was observed macroscopically. The
microscopic analyses identified 40.8% of males (n = 80),
56.6% of females (n = 111) and hermaphroditism was
ACTA
AMAZONICA ANTONIO et al. Reproductive cycle of Crassostrea rhizophorae

Figure 3. Monthly variation of the condition index (mean + SD) of mangrove

oysters, Crassostrea rhizophorae cultured in 2013 in the estuary of the Paciência
River, Maranhão, Brazil (monthly n = 10). Dots represent the mean and bars the
standard deviation. Different letters represent significant pairwise differences by
the SNK post hoc test.

observed in 2.6% of the oysters (n = 5). The overall sex ratio

was 1:1.39 (M:F), but the difference was not significant (χ2 =
13.28, df = 23, P = 0.945). The monthly sex ratio significantly
favored females in June (χ2 = 5.4, df = 1, P = 0.020) and July
(χ2 = 4.76, df = 1, P = 0.029).
We detected no male in sexual rest (stage 0), nor in
stage I (spermatogonia multiplication). Spermatogenesis
development (stage II) occurred during the dry season (Figure
4; Table 2), with the prevalence of spermatids filling the
acinus and the appearance of the first spermatozoids (Figure
5a). Mature males (IIIA stage) were observed in almost all
months of the year, with prevalence during the dry season
Figure 2. Mean monthly values of rainfall and salinity (A), and total chlorophyll
(34.1%) (Table 2). At this stage, the gonads contained germ
a and particulate organic matter (POM) (B), at the culture area of mangrove cells and spermatogonium anchored to the tubule walls, and
oysters, Crassostrea rhizophorae in the estuary of the Paciência River, Maranhão, spermatids and spermatozoids filling the lumen (Figure 5b).
Brazil in 2013. Partial or total spawning (IIIB) was observed throughout
the year, with higher values in March (66.7%), June (66.7%)
Table 1. Values of environmental variables during the rainy (February-July) and and October (87.5%) (Figure 4). Spermatozoid release is
dry (August – January) seasons of 2013 at the culture area of mangrove oysters,
Crassostrea rhizophorae in the estuary of the Paciência River, Maranhão, on the Table 2. Relative frequency (%) of gonadal development stages in males and
Amazon Macrotidal Mangrove Coast in Brazil. TPM = total particulate matter; females of mangrove oysters, Crassostrea rhizophorae cultured in the estuary of the
POM = particulate organic matter; PIM = particulate inorganic matter. Values are Paciência River, Maranhão, on the Amazon Macrotidal Mangrove Coast in Brazil,
the mean ± stadard deviation. during the rainy and dry seasons in 2013.
Environmental Rainy t P Stage Rainy season Dry season
Dry season
variables season value value
Males (n = 35) (n = 45)
Temperature (ºC) 28.58 ± 0.86 29.74 ± 0.44 -2.94 0.054
II (Gametogenesis) 0 6.8
pH 7.52 ± 0.15 7.37 ± 0.47 0.75 0.473
IIIA (Maturing) 20.0 34.1
Dissolved oxygen (mg L-1) 4.20 ± 0.58 5.08 ± 0.63 -2.49 0.032
IIIB (Spawning) 45.7 50.0
Salinity (psu) 32.48 ± 1.37 38.75 ± 2.75 -5.00 <0.001
IIIC (Recovery) 34.3 9.1
Rainfall (mm3) 216.13 ± 71.12 28.10 ± 22.67 6.17 <0.001
IIID (Breeding end) 0 0
Water transparency (cm) 42.18 ± 6.82 70.39 ± 5.57 -7.84 <0.001
Females (n = 61) (n = 50)
Total chlorophyll a (mg m-3) 12.42 ± 2.07 7.63 ± 0.60 5.44 <0.001
II (Gametogenesis) 5.0 4.2
TPM (mg L-1) 57.04 ± 3.80 35.71 ± 5.84 7.38 <0.001
IIIA (Maturing) 18.3 31.3
POM (mg L-1) 11.38 ± 1.67 6.11 ± 0.31 7.60 <0.001
IIIB (Spawning) 31.7 47.9
PIM (mg L-1) 45.66 ± 3.41 29.93 ± 5.75 5.76 <0.001
IIIC (Recovery) 38.3 8.3
P values in bold indicate significant seasonal difference (Student´s t test, degrees of
freedom = 10). IIID (Breeding end) 6.7 8.3

116 VOL. 51(2) 2021: 113 - 121

ACTA
AMAZONICA ANTONIO et al. Reproductive cycle of Crassostrea rhizophorae

Figure 4. Variation in monthly relative frequencies (%) of gonadal development

stages in males of mangrove oysters, Crassostrea rhizophorae cultured in 2013 in Figure 6. Variation in monthly relative frequencies (%) of gonadal development
the estuary of the Paciência River, Maranhão, Brazil (monthly n = 7). stages in females of mangrove oysters, Crassostrea rhizophorae cultured in 2013 in
the estuary of the Paciência River, Maranhão, Brazil (monthly n = 10).

Figure 5. Male gonadal development stages of Crassostrea rhizophorae cultured

in 2013 in the estuary of the Paciência River, Maranhão, Brazil. A – Stage II
(gametogenesis); B – Stage IIIA (maturation); C – Stage IIIB (spawning); D – Stage
IIIC (recovery). Scale bars = 50 μm. Sptd = spermatids; Sptz = spermatozoids. This
figure is color in the electronic version.

characterized by the disorganization of the swirling form of

the spermatozoa, leaving empty spaces and increasing the
amount of connective tissue among the tubules (Figure 5c).
The recovery period (IIIC) was more evident in the rainy Figure 7. Female gonadal development stages of mangrove oysters, Crassostrea
rhizophorae cultured in 2013 in the estuary of the Paciência River, Maranhão, Brazil.
season (Table 2), which shows that males continuously
A – Stage II (gametogenesis); B – Stage IIIA (maturation); C – Stage IIIB (spawning);
released spermatozoids and matured new cohorts during this D – Stage IIIC (recovery); E – Stage IIID (end of breeding season); F – Protogynous
season (Figure 4; Figure 5d). Spent males (IIID stage) were hermaphrodite. Scale bars = 50 μm. matO = mature oocyte; vitO = vitellogenic
not observed during the study period. oocyte; Interfol = interfollicular connective tissue; Intrafol = intrafollicular space;
degO = degenerating oocyte; Sptz = spermatozoids. This figure is color in the
We observed no females in stage 0 (rest) and stage I electronic version.
(oogonia multiplication). Females in stage II (oogenesis) were
observed in a few months of the year, mainly in the rainy-dry
transition (Figure 6). This stage was characterized by intense
folliculogenesis and oogenesis, with oocytes in vitellogenesis

117 VOL. 51(2) 2021: 113 - 121

ACTA
AMAZONICA ANTONIO et al. Reproductive cycle of Crassostrea rhizophorae
and the first mature oocyte appearance (Figure 7a). Mature
females (IIIA stage) were more evident in the dry season (Table
2), with values that reached 50% in September (Figure 6).
At this stage, mature oocytes were juxtaposed and free in the
follicle lumen, filling almost its entirety. The follicles had thin
walls and less connective tissue filling the gonads. At the end
of this phase, mature oocytes were ready to be released to the
external environment (Figure 7b).
Spawning females (IIIB) were observed in all months
(Figure 6), with high frequencies in the dry season (Table
2), especially in November (83.3%) (Figure 6). Once the
maturation of oocytes was reached, the first releases occurred,
which filled the gonoducts, showing intrafollicular spaces. At
the advanced or total emptying stage, mature oocytes appeared
scattered in the lumen, with a gradual increase in empty spaces
in the follicle proportional to the progression of the spawning
process (Figure 7c).
Females in the recovery stage between successive spawning
events were more frequent in the rainy season (Table 2). At
this stage, the follicles size decreased, resulting in a compressed
appearance, a predominance of interfollicular connective
tissue and a thickening of the walls. The number of germ
cells increased while mature oocytes decreased (Figure 7d).
Spent females (stage IIID), represented by individuals that
achieved the full release of their gametes, were observed in low
proportion in March (14.3%), August (12.5%) and November
(16.7%), reaching higher values in December (28.6%) and
June (25%) (Figure 6). After the last spawning, the follicles
were small and practically empty, leaving only a few mature
oocytes with signs of cytolysis. The follicles were invaded
internally and externally by hemocytes, with a probable
degenerative function related to remaining gamete cells, and
a large area of the mantle was composed of connective tissue
(Figure 7e). In hermaphrodites, female gametes outnumbered
male gametes (Figura 7f ).
DISCUSSION
The timing of gamete release in bivalve mollusks appears
to differ at different latitudes (Gomes et al. 2014). In tropical
regions, gamete release is continuous, whereas, in temperate
areas, spawning occurs only in the warmest months of the year,
mainly due to the broader temperature range and variation in
the photoperiod (Rodríguez-Jaramillo et al. 2008). The low
temperature variation in the tropics, associated with favorable
physical conditions, seems to be mainly responsible for a
continuous reproductive cycle (Bacon 1971).
Reproductive activity in male and female Crassostrea
rhizophorae in the Paciência estuary was continuous year-
round, and stages of maturation (IIIA stage) and spawning
(IIIB stage) were present in practically all months. The stages
of sexual rest (stage 0) and germ cell multiplication (stage
I) were not observed in any of the analyzed oysters, which
118 VOL. 51(2) 2021: 113 - 121
agrees with Nascimento and Lunetta (1978), who observed
that these stages are extremely rare in populations of native
oysters in northeastern Brazil. These results reinforce the
hypothesis that C. rhizophorae has accelerated maturation
and continuous reproduction during the year in low latitudes
(Lenz and Boehs 2011).
Besides temperature, the relationship between rainfall
and salinity seems to affect the stimulus and timing of
reproductive events. Rainfall monitoring and its interaction
with salinity during the rainy and dry seasons can provide
crucial information on the abiotic factors that influence the
oyster reproductive process (Paixão et al. 2013). In the study
area, macrotides result in annual variation in salinity. In the
rainy season, salinity tends to decrease during low tide and
equates to coastal salinity during high tide. However, in the
dry season, the salinity tends to increase during low tide due
to the evaporation caused by solar irradiation and surpasses
coastal salinity during high tide. Similarly, in arid coastal
regions of Australia, increased evaporation and low rainfall
cause estuarine salinity to exceed oceanic values (Samarasinghe
and Lennon 1987). The macrotidal phenomenon may be
exposing the oysters to constant osmotic stress, stimulating
spawning throughout the year.
Salinity influences various physiological mechanisms in
Crassostrea, such as clearance rates and oxygen consumption
(Casas et al. 2018), cytogenetic processes (Qin et al. 2018),
and the reproductive cycle (George-Zamora et al. 2003; Paixão
et al. 2013). In the months of more significant rainfall in the
Paciência estuary (February to July), a decrease in salinity
was observed and an increase in the frequency of recovering
oysters (IIIC stage). Due to heavy rainfall, the reduction in
salinity may have stimulated gamete release, since oocytes
submitted to conditions outside the tolerance limits of the
species can undergo cytolysis and removal from the follicles
(Lenz and Boehs 2011). However, a second spawning peak was
observed in the low rainfall period (October to December),
suggesting that increases or decreases in salinity may stimulate
spawning. Nascimento and Lunetta (1978) reported that
gamete release in oysters is not concomitant for all individuals
and the emptying of the gonad is a slow process where some
individuals have partial emptying throughout the year.
Food quality and availability exert a strong influence on the
accumulation of nutritional reserves for later release of gametes
(Chávez-Villalba et al. 2000). For example, phytoplankton
blooms may induce spawning (Dridi et al. 2014; Antonio
and Camacho 2019). Chlorophyll a and particulate organic
matter (POM) were significantly higher in the rainy season
in our study area, indicating higher primary productivity. A
large number of individuals in stage IIIC at this time indicates
intense spawning, with release, production and maturation
of new gamete cohorts over a short period, taking advantage
of greater food availability.
ACTA
AMAZONICA ANTONIO et al. Reproductive cycle of Crassostrea rhizophorae
Females predominated, but not significantly, in the
Paciência estuary, agreeing with other studies on Crassostrea
rhizophorae (Nascimento and Lunetta 1978; Christo and
Absher 2006; Lenz and Boehs 2011) and Crassostrea brasiliana
(= C. gasar) (Castilho-Westphal et al. 2015). The proportion
of hermaphrodites was low (2.6%) in the Paciência estuary,
similar to what was observed in other Crassostrea species
(Paixão et al. 2013; Lenz and Boehs 2011; Nascimento and
Lunetta 1978).
The condition index is typically used to evaluate meat
quality and bivalve mollusk-culture productivity (Rebelo et al.
2005). The condition index is conditioned by environmental
variables (Prieto et al. 1999; Nishida et al. 2006), and high
CI values may indicate full or partially filled gonads, while
low values may be associated with gonad emptying and
reabsorption (Nascimento and Pereira 1980). The condition
index in our study presented higher values in the rainy months,
between March and May, similarly to Lenz and Boehs (2011),
who recorded higher CI values during rainy months, relating
to greater food availability. Higher meat yield is related to
individuals in gametogenesis and mature stages, as in these
phases, reserve accumulation peaks, and follicles and acini
are fully developed (Galvão et al. 2000). However, in our
study, CI peaked in May, corresponding to a period of low
maturation (IIIA) with high spawning (IIIB) and recovery
(IIIC), reinforcing the idea that the mangrove oyster has a
continuous process of gamete production and release year-
round in tropical areas (Lenz and Boehs 2011).
CONCLUSIONS
Mangrove oysters, Crassostrea rhizophorae cultured in the
macrotidal estuary of the Paciência River showed continuous
reproduction throughout the year, making it possible to obtain
oyster seeds year-round, with has the potential to enable
the expansion of small oyster farms in the region. Gonadal
development was influenced by the seasonal variation of
rainfall, but the low variation in temperature seems to be the
main determinant factor of the year-round reproduction,
while salinity and food availability trigger the main spawning
events. As an indicator of animal welfare and reserve-storage
evaluation, the condition index did not correspond with the
reproductive state of the oysters to correspond with maturation
and gametogenesis. Assessment of oyster reproduction and
recruitment is needed along the estuarine salinity gradient
to determine the optimal location for seed collection and
on-growing.
ACKNOWLEDGMENTS
This work was supported by Fundação de Amparo à
Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do
Maranhão - FAPEMA (project Universal-00767/13). The
authors thank the staff of the Laboratory of Physioecology,
119 VOL. 51(2) 2021: 113 - 121
Reproduction and Cultivation of Marine organisms at
Universidade Estadual do Maranhão for assistance with the
histological analysis.
REFERENCES
Antonio, I.G.; Camacho, A.P. 2019. Reproduction of the introduced
oyster Crassostrea gigas (Bivalvia: Ostreidae) cultured on rafts in
Spain. Acta Zoologica, 100: 257–267.
Bacon, P.R. 1971. Studies on the biology and cultivation of the
mangrove oyster in Trinidad with notes on the other shellfish
resource. Tropical Science, 12: 265–278.
Casas, S.M.; Lavaud, R.; La Peyre, M.K.; Comeau, L.A.; Filgueira,
R.; La Peyre, J.F. 2018. Quantifying salinity and season effects on
eastern oyster clearance and oxygen consumption rates. Marine
Biology, 165: 90. doi.org/10.1007/s00227-018-3351-x
Castilho-Westphal, G.G.; Magnani, F.P.; Ostrensky, A. 2015. Gonad
morphology and reproductive cycle of the mangrove oyster
Crassostrea brasiliana (Lamarck, 1819) in the baía de Guaratuba,
Paraná, Brazil. Acta Zoologica, 96: 99–107.
Chávez-Villalba, J.; Mingant, C.; Cochard, J.C.; Pennec, M. Le.
2000. Gamétogenèse chez l’huître Crassostrea gigas de l’Aber
Benoît (Bretagne, France), à la limite nord de son aire de
reproduction. Haliotis, 30: 1-12.
Christo, S.W.; Absher, T.M. 2006. Reproductive period of Crassostrea
rhizophorae (Guilding, 1828) and Crassostrea brasiliana (Lamark,
1819) (Bivalvia: Ostreidae) in Guaratuba Bay, Paraná, Brazil.
Journal of Coastal Research, 39: 1215–1218.
Costa, V.B. da.; Sousa, E.B. de.; Pinheiro, S.C.C.; Pereira,
L.C.C.; Costa, R.M. da. 2011. Effects of a high energy coastal
environment on the structure and dynamics of phytoplankton
communities (Brazilian Amazon littoral). Journal of Coastal
Research, 64: 354–358.
Cubillo, A.M.; Peteiro, L.G.; Fernández-Reiriz, M.J.; Labarta,
U. 2012. Influence of stocking density on growth of mussels
(Mytilus galloprovincialis) in suspended culture. Aquaculture,
342–343: 103–111.
Dridi, S.; Romdhane, M.S.; Elcafsi, M. 2014. Gametogenic cycle
of Crassostrea gigas in contrasting Mediterranean habitats:
marine (Gulf of Tunis) and continental (Bizert lagoon)
culture sites. Journal of Biological Research-Thessaloniki, 21: 13.
doi:10.1186/2241-5793-21-13
Funo, I.C. da S.A.; Antonio, I.G.; Marinho, Y.F.; Monteles, J.S.;
Lopes, R.G.P.S.; Gálvez, A.O. 2019. Recruitment of oyster in
artificial collectors on the Amazon macrotidal mangrove coast.
Ciência Rural, 49: e20180482.
Galvão, M.S.N.; Pereira, O.M.; Machado, I.C.; Henrique, M.B.
2000. Aspectos reprodutivos da ostra Crassostrea brasiliana de
manguezais do estuário de Cananéia, SP (25°S - 48° W). Boletim
do Instituto de Pesca, 26: 147–162.
George-Zamora, A.; Sevilla-Hernandez, M.L.; Aldana-Aranda, D.
2003. Ciclo gonadico del ostión americano Crassostrea virginica
(Lamellibranchia: Ostreidae) en Mecoacán, Tabasco, Mexico.
Revista de Biología Tropical, 51(supl. 4): 109–117.
ACTA
AMAZONICA ANTONIO et al. Reproductive cycle of Crassostrea rhizophorae
Gomes, C.H.A.M.; Silva, F.C.; Lopes, G.R.; Melo, C.M.R. 2014.
Ciclo reprodutivo da ostra Crassostrea gasar. Brazilian Journal of
Biology, 74: 967–976.
Guimarães, I.M.; Antonio, I.G.; Peixoto, S.; Olivera, A. 2008.
Influência da salinidade sobre a sobrevivência da ostra-do-
mangue, Crassostrea rhizophorae. Arquivos de Ciências do Mar,
41: 118–122.
Jeffrey, S.W.; Humphrey, G.F. 1975. New spectrophotometric
equations for determining chlorophylls a, b, c1 and c2 in
higher plants, algae and natural phytoplankton. Biochemie und
Physiologie der Pflanzen, 167: 191–194.
Lenz, T.; Boehs, G. 2011. Ciclo reproductivo del ostión de manglar
Crassostrea rhizophorae (Bivalvia: Ostreidae) en la Bahía de
Camamu, Bahia, Brasil. Revista de Biologia Tropical, 59: 137–149.
Lopes, R.G.P.S.; Antonio, Í.G.; Tchaika, L.; Barros, M.C.; Fraga,
E. 2018. Molecular identification of native oysters on the coast
of Maranhão, Brazil. Boletim do Instituto de Pesca, 44: e377.
Nascimento, I. A.; Lunetta, J.E. 1978. Ciclo sexual da ostra de
mangue e sua importância para o cultivo. Boletim de Fisiologia
Animal da Universidade de São Paulo, 2: 63–93.
Nascimento, I.A.; Pereira, S.A. 1980. Changes in the condition index
for mangrove oysters (Crassostrea rhizophorae) from Todos os
Santos Bay, Salvador, Brazil. Aquaculture, 20: 9–15.
Nascimento Jr, W.R.; Souza-Filho, P.W.; Proisy, C.; Lucas, R.M.;
Rosenqvist, A. 2013. Mapping changes in the largest continuous
Amazonian mangrove belt using object-based classification of
multisensor satellite imagery. Estuarine, Coastal and Shelf Science,
117: 83-93.
Nishida, A.K.; Nordi, N.; Alves, R.R.N. 2006. Molluscs production
associated to lunar-tide cycle: A case study in Paraíba State
under ethnoecology viewpoint. Journal of Ethnobiology and
Ethnomedicine, 2: 28. doi.org/10.1186/1746-4269-2-28
Paixão, L.; Ferreira, M.A.; Nunes, Z.; Fonseca-Sizo, F.; Rocha, R.
2013. Effects of salinity and rainfall on the reproductive biology
of the mangrove oyster (Crassostrea gasar): Implications for the
collection of broodstock oysters. Aquaculture, 380–383: 6–12.
Pantoja, J.C.D.; Oliveira, L.F.S.; Ferreira, M.A.P.; Silva, B.R.M.;
Nunes, Z.M.P.; Mendes, Y.A.; Oliveira, R.S.; Rocha, R.M.
2020. Salinity and rainfall as inducers of cell proliferation and
apoptosis in mangrove oyster Crassostrea gasar spermatogenesis.
Regional Studies in Marine Science 39: 101411.
Prieto, A.S.; Vasquez, M.; Ruiz, L.J. 1999. Dinámica energética
del crecimiento en una población del mejillón Perna perna
This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use,
distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.
120 VOL. 51(2) 2021: 113 - 121
(Filibranchia: Mytilidae) en el noreste del Estado Sucre,Venezuela.
Revista de Biología Tropical, 47: 399–410.
Qin, Y.; Xiao, S.; Ma, H.; Mo, R.; Zhou, Z.; Wu, X.; et al. 2018.
Effects of salinity and temperature on the timing of germinal
vesicle breakdown and polar body release in diploid and triploid
Hong Kong oysters, Crassostrea hongkongensis, in relation to
tetraploid induction. Aquaculture Research, 49: 3647–3657.
Rebelo, M.F.; Amaral, M.C.R.; Pfeiffer, W.C. 2005. Oyster condition
index in Crassostrea rhizophorae (Guilding, 1828) from a heavy-
metal polluted coastal lagoon. Brazilian Journal of Biology, 65:
345–351.
Rios, E.C. 2009. Compendium of Brazilian Sea Shells. Evangraf, Rio
Grande, 668p.
Rodríguez-Jaramillo, C.; Hurtado, M.A.; Romero-Vivas, E.; Ramírez,
J.L.; Manzano, M.; Palacios, E. 2008. Gonadal development and
Histochemistry of the Tropical oyster, Crassostrea corteziensis
(Hertlein, 1951) during an Annual reproductive cycle. Journal
of Shellfish Research, 27: 1129–1141.
Samarasinghe, J.R.S.; Lennon, G.W. 1987. Hypersalinity, flushing
and transient salt-wedges in a tidal gulf - an inverse estuary.
Estuarine, Coastal and Shelf Science 24: 483-498.
Sampaio, D.S.; Santos, M.L.S.; Tagliaro, C.H.; Beasley, C.R. 2020.
Variation in environmental characteristics of waters among
Amazon coast oyster culture units. Acta Amazonica, 50: 295-304.
Schettini, C.A.F.; Asp, N.E.; Ogston, A.S.; Gomes, V.J.C.;
McLachlan, R.L.; Fernandes, M.E.B.; Nittrourer, C.A.; Truccolo,
E.C.; Gardunho, D.C.L. 2020. Circulation and fine-sediment
dynamics in the Amazon Macrotidal Mangrove Coast. Earth
Surface Processes and Landforms, 45: 574-589.
Silva, O.L.L.; Macedo, A.R.G.; Nunes, E.S.C.L.; Campos, K.D.;
Araújo, L.C.C.; Tiburço, X.; et al. 2020. Effect of environmental
factors on the fatty acid profiles and physicochemical
composition of oyster (Crassostrea gasar) in Amazon estuarine
farming. Aquaculture Research 51: 2336-2348.
Souza Filho, P.W.M. 2005. Costa de manguezais de macromaré da
Amazônia: cenários morfológicos, mapeamento e quantificação
de áreas usando dados de sensores remotos. Revista Brasileira de
Geofísica, 23: 427–435.
Vélez, A.R. 1977. Annual reproductive cycle of the oyster Crassostrea
rhizophorae (Guilding) from Bahía de Mochima. Boletin del
Instituto Oceanografico Universidad de Oriente, 16: 87–98.
RECEIVED: 12/08/2020
ACCEPTED: 09/03/2021
ASSOCIATE EDITOR: Bruno Spacek Godoy
ACTA
AMAZONICA ANTONIO et al. Reproductive cycle of Crassostrea rhizophorae

SUPPLEMENTARY MATERIAL (only available in the electronic version)

Antonio et al. Reproductive cycle of the mangrove oyster, Crassostrea rhizophorae (Bivalvia: Ostreidae) cultured in a
macrotidal high-salinity zone on the Amazon mangrove coast of Brazil

Figure S1. Mean monthly values of dissolved oxygen and water transparency Figure S2. Mean monthly values of temperature and pH at the culture area of
at the culture area of mangrove oysters, Crassostrea rhizophorae in the estuary of mangrove oysters, Crassostrea rhizophorae in the estuary of the Paciência River,
the Paciência River, Maranhão, Brazil, in 2013. Maranhão, Brazil, in 2013.

121 VOL. 51(2) 2021: 113 - 121

Diterjemahkan dari bahasa Portugis ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.com

ACTA
AMAZON http://dx.doi.org/10.1590/1809-4392202003582

ARTIKEL ASLI

Siklus reproduksi tiram mangrove,Crassostrea

rhizophorae (Bivalvia: Ostreidae) dibudidayakan di
zona salinitas tinggi makrotidal di pantai bakau
Amazon, Brasil
carus ANTONIO1,2* , Ana SOUSAdua, James LENZ3, Isabel FUNO4, Rodolf LOPES5, Marina FIGUEIREDO1,2

1 Universitas Negeri Maranhão, Pusat Ilmu Pertanian, CEP 65055-310, São Luís, MA, Brasil
dua Universitas Negeri Maranhão, Program Pascasarjana dalam Sumber Daya Perairan dan Perikanan, CEP 65055-310, São Luís, MA, Brasil
3 Institut Federal Pendidikan, Sains dan Teknologi Alagoas, CEP 57200-000, Penedo, AL, Brasil
4 Institut Federal Pendidikan, Sains dan Teknologi Maranhão, CEP 65095-460, São Luís, MA, Brasil
5 Universitas Pedesaan Federal Pernambuco, Program Pascasarjana dalam Sumber Daya Perikanan dan Budidaya, CEP 52171-900, Recife, PE, Brasil
* Penulis yang sesuai: icaro_gomes@hotmail.com ; https://orcid.org/0000-0002-4538-3522

ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui siklus reproduksi tiram mangrove, Crassostrea rhizophorae dibudidayakan di muara
makrotidal Sungai Paciencia, negara bagian Maranhão, di pantai timur laut Brasil, dan hubungannya dengan faktor lingkungan. Tiram
dikumpulkan setiap bulan sepanjang tahun 2013 untuk analisis histologis rasio jenis kelamin, perkembangan gonad dan indeks kondisi.
Rasio jenis kelamin adalah 1:1,39 (L:F) dan hanya 5 spesimen yang menunjukkan hermafroditisme. Proses perkembangbiakan
berlangsung terus menerus sepanjang tahun dan tiram dewasa (stadium IIIA) dan pemijahan (stadium IIIB) terjadi hampir sepanjang
bulan. Variasi suhu yang rendah tampaknya menjadi faktor utama kelangsungan siklus reproduksi. Selain suhu, hubungan antara
curah hujan, salinitas dan produktivitas primer dipengaruhi oleh stimulus dan waktu terjadinya peristiwa reproduksi. Musim hujan,
dengan nilai salinitas yang rendah dan nilai klorofil yang tinggiNS dan bahan organik partikulat, tampaknya merupakan periode
reproduksi utama, dengan pelepasan gamet dan produksi serta pematangan kohort gamet baru dalam jangka pendek. Di daerah
tropis, di mana pematangan dan pelepasan gamet tampaknya terus menerus dan bersamaan, indeks kondisi tampaknya bukan
metode terbaik untuk menilai puncak akumulasi cadangan dan pengisian gonad.

KATA KUNCI: reproduksi; hal ikan bertelur; faktor lingkungan; budidaya perairan arung

Siklus reproduksi tiram mangrove, Crassostrea rhizophorae (

Bivalvia: Ostreidae) dibudidayakan di zona makrotidal salinitas
tinggi di lepas pantai bakau Amazon di Brasil
ABSTRAK

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui siklus reproduksi tiram mangrove, Crassostrea rhizophorae dibudidayakan di
muara makrotidal Rio Paciência, Maranhão, di pantai timur laut Brasil, dan hubungannya dengan faktor lingkungan. Tiram
dikumpulkan setiap bulan sepanjang tahun 2013 untuk analisis histologis rasio jenis kelamin, perkembangan gonad dan
indeks kondisi. Rasio jenis kelamin adalah 1:1,39 (M:F) dan hanya 5 spesimen yang mengalami hermafrodit. Pematangan
berlangsung terus menerus sepanjang tahun dan tiram matang (stadium IIIA) dan pemijahan (stadium IIIB) hadir hampir
setiap bulan. Variasi suhu yang rendah tampaknya menjadi faktor utama kelangsungan gametogenesis. Namun, selain suhu,
hubungan antara curah hujan, salinitas dan produktivitas primer mempengaruhi stimulus dan waktu peristiwa reproduksi.
Musim hujan, dengan nilai salinitas rendah dan nilai klorofil tinggiNS dan bahan organik partikulat tampaknya menjadi periode
reproduksi utama, dengan pelepasan gamet dan produksi serta pematangan kohort gamet baru dalam jangka pendek. Di
daerah tropis, di mana pematangan dan pelepasan gamet tampaknya terus menerus dan bersamaan, indeks kondisi bukanlah
metode terbaik untuk menilai puncak akumulasi cadangan dan perkembangan gonad.

KATA KUNCI: reproduksi; hal ikan bertelur; faktor lingkungan; budidaya air payau

KUTIPAN SEBAGAI: Antonio, F.; Sousa, A.; Lenz, T.; Funo, saya.; Lopes, R.; Figueiredo, M. 2021. Siklus Reproduksi Tiram Mangrove,Crassostrea
rhizophorae(Bivalvia: Ostreidae) dibudidayakan di zona salinitas tinggi makrotidal di pantai bakau Amazon, Brasil. Acta Amazonica 51: 113-121.

113 JOL. 51(2) 2021: 113 - 121

ACTA
AMAZON ANTONIO dkk. Siklus reproduksi Crassostrea rhizophorae

PENGANTAR pemijahan tiram di Amazon (Gairah dkk. 2013). Studi

menunjukkan bahwa tiram bakau,Crassostrea rhizophorae
mangrove tiram, Crassostrea rhizophorae (Guilding 1828)
mentolerir salinitas dari 5 hingga 35 (Guimarães dkk. 2008),
ditemukan terutama di hutan bakau, teluk, dan daerah
tetapi, di daerah penelitian kami, salinitas melebihi 40 selama
muara, tetap pada batuan dan substrat yang terkonsolidasi
periode kering (Fungsi dkk. 2019). Selain itu, produktivitas
(Rios 2009). Di mangrove, biasanya ditemukan menetap di
primer meningkat selama musim hujan Amazon,
mangrove merah,Rhizophora mangle (Linnaeus 1753)
menunjukkan bahwa curah hujan mempengaruhi komposisi,
berakar di daerah intertidal (Bacon 1971). tiram dari
kepadatan, biomassa, dan keanekaragaman fitoplankton
Crassostreagenus ovipar dan dioecious dan dapat
(Costadkk. 2011). Interaksi antara komposisi dan kelimpahan
menyajikan hermafroditisme berurutan tanpa dimorfisme
fitoplankton, salinitas, dan hidrodinamika lokal memodulasi
seksual dengan fertilisasi eksternal diikuti oleh
aktivitas metabolisme reproduksi bivalvia, melalui suplai
perkembangan planktotrofik larva. Pelepasan gamet di
asam lemak esensial (Silvadkk. 2020).
daerah tropis terjadi terus menerus sepanjang tahun, dengan
Dalam konteks ini, penelitian ini berusaha untuk menentukan
bukti puncak pemijahan dirangsang oleh variabel lingkungan
periode aktivitas reproduksi yang lebih signifikan, dan pengaruh
(Vélez 1977; Lenz dan Boehs 2011; Paixãodkk. 2013).
variabel lingkungan pada pematangan dan pemijahan. C.
Pulau Maranhão, yang terletak di pantai timur laut Brasil,
rhizophorae dibudidayakan di muara Sungai Patience di Pulau
merupakan bagian dari kawasan mangrove berkelanjutan terbesar
Maranhão, di ujung timur AMMC. Informasi ini sebelumnya
dan terpelihara dengan baik di Brasil, yang dikenal sebagai Amazon
belum tersedia untukC. rhizophorae di AMMC dan dapat
Macrotidal Mangrove Coast (AMMC) (Nascimento Jr. dkk.2013;
membantu menentukan periode terbaik untuk perekrutan tiram,
Schettinidkk. 2020). AMMC memiliki panjang 480 km dengan 7.600 km
sehingga mendukung tindakan budidaya dan pengelolaan tiram
dua hutan bakau yang berkesinambungan di sepanjang pantai negara
yang mengupayakan eksploitasi berkelanjutan tempat tidur tiram
bagian Pará dan Maranhão (Souza Filho 2005). Lingkungan pesisir di
alami.
wilayah ini dipengaruhi oleh fenomena makrotida, mencapai
amplitudo pasang surut hingga 7 m. Fenomena ini, terkait dengan
kemiringan dataran pantai setempat yang rendah, dan dua musim
BAHAN DAN METODE
tahunan yang terdefinisi dengan baik, musim hujan (Februari hingga Area studi dan karakteristik lingkungan
Juli) dan musim kemarau (Agustus hingga Januari), menghasilkan
Tiram yang digunakan dalam penelitian ini dikumpulkan di area
variasi tahunan salinitas pantai dari 0,1 hingga 49,2 (Sampaiodkk.
budidaya yang terletak di muara Sungai Paciência, negara bagian
2020).
Maranhão, pantai timur laut Brasil (2º25'38"S, 44º04'08.5"W) (Gambar
Di antara variabel lingkungan dengan berbagai variasi di 1). Budidaya dilakukan di atas rakit, dan tiram disimpan di dalam
perairan pesisir Amazon, salinitas dan produktivitas primer kandang, dengan lima nampan melingkar, dengan kepadatan rata-
adalah yang paling penting dalam modulasi biologi rata 50 nampan tiram.-1. Spat tiram yang digunakan dalam kultur
reproduksi tiram (Pantoja dkk. 2020). Salinitas tampaknya direkrut menggunakan pengumpul botol PET buatan yang dipasang di
memberikan pengaruh yang kuat pada pematangan dan Estuary Patience. Spat tiram secara genetik

Gambar 1. Lokasi kawasan budidaya tiram mangrove, Crassostrea rhizophorae di muara Sungai Paciencia, kotamadya Raposa, negara bagian Maranhão, Brasil. Tanda
bintang menandai lokasi rakit di muara. Angka ini adalah warna dalam versi elektronik.

114 JOL. 51(2) 2021: 113 - 121

ACTA
AMAZON ANTONIO dkk. Siklus reproduksi Crassostrea rhizophorae
dicirikan oleh teknik spesifik spesies PCR-Multiplex dan
dikonfirmasi sebagai C. rhizophorae dengan adanya 640 bp
(Lopes dkk. 2018).
Variabel lingkungan diukur setiap dua minggu pada
saat air surut oleh rakit tempat tiram dikumpulkan. Data
suhu (ºC), salinitas (psu), pH dan oksigen terlarut (mg L-1)
diperoleh dengan multiparameter YSI 556MPS; dan
transparansi (cm) dengan disk Secchi. KlorofilNS dan data
partikel tersuspensi (fraksi organik dan anorganik) (mg L-1)
diperoleh dengan menyaring dua liter air dan dianalisis
mengikuti protokol Jeffrey dan Humphrey (1975) untuk
klorofil NS dan Cubillo dkk. (2012) untuk total particulate
matter (TPM), particulate organic matter (POM) dan
particulate anorganik material (PIM). Data curah hujan
diperoleh dari Geoenvironmental Nucleus - NUGEO
Universidade Estadual do Maranhão.
Pengambilan sampel tiram dan pengukuran biometrik
Setiap bulan dari Januari hingga Desember 2013, 30Crassostrea
rhizophorae tiram dikumpulkan secara acak dari kandang budidaya
(total n = 360). Dua puluh orang ditugaskan untuk analisis histologis
dan sepuluh untuk penentuan indeks kondisi. Setelah dikumpulkan,
tiram segera diangkut ke Laboratorium Fisioekologi, Reproduksi dan
Budidaya Organisme Laut Universitas Negeri Maranhão untuk
dianalisis. Setiap tiram diukur tinggi cangkangnya (sumbu
anteroposterior) dengan kaliper presisi 0,1 mm, dan ditimbang (untuk
bobot total, bobot cangkang segar, dan bobot jaringan lunak segar)
menggunakan timbangan presisi 0,001 g. Jaringan dibiarkan di atas
kertas penyerap selama 5 menit untuk menghilangkan kelebihan air
sebelum ditimbang untuk menentukan berat jaringan lunak segar.
indeks kondisi
Indeks kondisi (CI) dihitung setiap bulan berdasarkan berat kering
10 tiram. Bagian lunak dan cangkang tiram ditempatkan dalam
cangkir aluminium yang telah ditimbang sebelumnya dan dikeringkan
pada suhu 60 C hingga berat kering konstan. Indeks kondisi dihitung
sebagai CI = W1 x 1000 / W2, di mana W1 adalah berat bagian lunak
kering dari 10 tiram dan W2 adalah berat cangkang kering dari 10
tiram yang sama.
Analisis histologis
Tahap perkembangan gonad dievaluasi setiap bulan
melalui analisis histologis sekitar 17 tiram (total n = 196).
Bagian daging antara palp labial dan rongga perikardial
difiksasi dalam larutan garam Davidson selama 24 jam dan
diawetkan dalam etanol 70% untuk dehidrasi selanjutnya
dengan mandi berturut-turut dalam gradasi etanol yang
berbeda dan kemudian dimasukkan ke dalam parafin.
Penampang melintang tipis 5 m diperoleh dengan mikrotom
semiotomatis. Slide diwarnai dengan Harris Hematoxylin dan
Eosin (Castilho-Westphaldkk. 2015) dan dipasang pada slide
kaca di media pemasangan (Entellan).
115 JOL. 51(2) 2021: 113 - 121
Slide diperiksa di bawah mikroskop cahaya dan
mikrofotografi diambil dari bahan yang dipilih. Jantan, betina
dan hermaprodit dibedakan dengan adanya sel
spermatogenesis atau oogenesis. Tahap perkembangan
gonad ditentukan dengan menggunakan skala yang
dijelaskan oleh Antonio dan Camacho (2019), sebagai berikut:
tahap 0 - istirahat seksual; I - perkalian gonal; II –
gametogenesis; IIIA – pematangan; IIIB – pengosongan total
atau sebagian; IIIC – pemulihan antara rilis yang berurutan
dan; IIID – akhir musim kawin (dihabiskan). Musim pemijahan
dievaluasi dengan mengevaluasi distribusi bulanan frekuensi
tahap pematangan yang berbeda mengenai indeks kondisi.
Analisis statistik
Perbedaan variabel lingkungan antara musim hujan dan
musim kemarau dievaluasi dengan Student's T tes. 12 sampel
bulanan ukuran (tinggi shell) dan CI dibandingkan dengan
ANOVA satu arah setelah mengkonfirmasi distribusi normal
data dengan tes Kolmogorov-Smirnov dan homogenitas
varians dengan tes Cochran, dan kemudian dibandingkan
berpasangan denganpasca hoc Tes Student–Newman–Keuls
(SNK).
Rasio jenis kelamin tiram jantan dan betina ditentukan setiap
bulan dan untuk keseluruhan dan diuji untuk perbedaan yang
signifikan dengan uji non-parametrik Chi-kuadrat. Analisis
statistik dilakukan dengan menggunakan Statistik 7 dan tingkat
signifikansi = 5%.
HASIL
Selama periode pemantauan, salinitas bervariasi dari 31 pada
bulan April hingga 42 pada bulan Desember, dengan nilai yang
jauh lebih tinggi pada musim kemarau (Tabel 1; Gambar 2a).
Selama musim kemarau, oksigen terlarut dan transparansi air
secara signifikan lebih tinggi (Tabel 1; Bahan Tambahan, Gambar
S1). Curah hujan bulanan, yang bervariasi dari 0,4 hingga 296 mm
3, klorofil NSdan bahan organik partikulat secara signifikan lebih
tinggi di musim hujan (Tabel 1; Gambar 2). Tidak ada perbedaan
yang signifikan antara musim untuk suhu dan pH (Tabel 1; Bahan
Tambahan, Gambar S2).
Indeks kondisi bervariasi secara signifikan (F (11, 108)
= 7,21, UNTUK
< 0,0001) antar bulan (Gambar 3). Pada musim hujan, CI terus
meningkat dan mencapai puncaknya pada bulan Mei (53,5 ± 16,5).
CI kemudian menurun secara signifikan antara Mei dan Juli,
meningkat lagi pada bulan Agustus, diikuti oleh penurunan terus
menerus hingga November, ketika nilai terendah diamati (20,0 ±
12,5) (Gambar 3).
Rata-rata tinggi cangkang bervariasi dari 59,5 ± 6,6 mm pada
bulan Januari hingga 68,9 ± 9,1 mm pada bulan Maret (n = 360),
tanpa perbedaan yang signifikan (11,
antar347)
bulan (F = 4,29, UNTUK =
0,0523). Tidak ada dimorfisme seksual yang diamati secara
makroskopis. Analisis mikroskopis mengidentifikasi 40,8% laki-laki
(n = 80), 56,6% perempuan (n = 111) dan hermafroditisme adalah
ACTA
AMAZON ANTONIO dkk. Siklus reproduksi Crassostrea rhizophorae

Gambar 3. Variasi bulanan indeks kondisi (rata-rata + SD) tiram mangrove,

Crassostrea rhizophorae dibudidayakan pada tahun 2013 di muara Sungai
Paciencia, Maranhão, Brasil (bulanan n = 10). Titik-titik mewakili mean dan bar
standar deviasi. Huruf yang berbeda mewakili perbedaan berpasangan yang
signifikan oleh SNKpasca hoc tes.

diamati pada 2,6% tiram (n = 5). Rasio jenis kelamin secara keseluruhan
adalah 1:1,39 (L:F), tetapi perbedaannya tidak signifikan (χdua = 13,28, df =
23, UNTUK = 0,945). Rasio jenis kelamin bulanan secara signifikan disukai
perempuan di bulan Juni (dua = 5.4, df = 1, UNTUK = 0,020) dan Juli(χdua = 4,76,
df = 1, UNTUK = 0,029).

Kami mendeteksi tidak ada laki-laki dalam istirahat seksual (tahap

Gambar 2. Nilai rata-rata bulanan curah hujan dan salinitas (A), dan klorofil total
NS dan bahan organik partikulat (POM) (B), pada area budidaya tiram mangrove,
Crassostrea rhizophorae di muara Sungai Paciencia, Maranhão, Brasil pada tahun
2013.
0), atau dalam tahap I (perbanyakan spermatogonia). Perkembangan
spermatogenesis (stadium II) terjadi pada musim kemarau (Gambar 4;
Tabel 2), dengan prevalensi spermatid mengisi asinus dan munculnya
spermatozoid pertama (Gambar 5a). Penyakit dewasa (stadium IIIA)
diamati di hampir semua bulan dalam setahun, dengan prevalensi
selama musim kemarau (34,1%) (Tabel 2). Pada tahap ini, gonad
mengandung sel germinal dan spermatogonium yang menempel
pada dinding tubulus, dan spermatid dan spermatozoid mengisi
lumen (Gambar 5b).
Pemijahan parsial atau total (IIIB) diamati sepanjang tahun,
dengan nilai lebih tinggi pada bulan Maret (66,7%), Juni (66,7%)

Tabel 1. Nilai variabel lingkungan pada musim penghujan (Februari-Juli) dan
kemarau (Agustus – Januari) tahun 2013 di kawasan budidaya tiram
mangrove,Crassostrea rhizophorae di muara Sungai Paciencia, Maranhão,
di Pantai Mangrove Makrotidal Amazon di Brasil. TPM = total partikel; POM
= partikulat bahan organik; PIM = partikulat bahan anorganik. Nilai adalah
mean ± standar deviasi.
dan Oktober (87,5%) (Gambar 4). pelepasan sperma adalah
Meja 2. Frekuensi relatif (%) tahap perkembangan gonad pada tiram mangrove
jantan dan betina, Crassostrea rhizophorae dibudidayakan di muara Sungai
Paciencia, Maranhão, di Amazon Macrotidal Mangrove Coast di Brasil, selama
musim hujan dan kemarau pada tahun 2013.

lingkungan hujan T UNTUK

Panggung musim hujan musim kemarau
musim kemarau
variabel musim nilai nilai
kejahatan (n = 35) (n = 45)
Suhu (°C) 28,58 ± 0,86 29,74 ± 0,44 - 2.94 0,054
II (Gametogenesis) 0 6.8
pH 7.52 ± 0.15 7,37 ± 0,47 0,75 0,473
IIIA (Maturasi) 20.0 34.1
Oksigen terlarut (mg L-1) 4.20 ± 0.58 5.08 ± 0.63 - 2.49 0,032
IIIB (Pemijahan) 45.7 50.0
Salinitas (psu) 32,48 ± 1,37 38.75 ± 2.75 - 5.00 <0.001
IIIC (Pemulihan) 34.3 9.1
curah hujan (mm3) 216,13 ± 71,12 28.10 ± 22.67 6.17 <0.001
IIID (Pembiakan akhir) 0 0
Transparansi air (cm) Total 42,18 ± 6,82 70,39 ± 5,57 - 7.84 <0.001
perempuan (n = 61) (n = 50)
klorofil NS (mg m-3) TPM 12,42 ± 2,07 7.63 ± 0.60 5.44 <0.001
II (Gametogenesis) 5.0 4.2
(mg L-1) 57,04 ± 3,80 35,71 ± 5,84 7.38 <0.001
IIIA (Maturasi) 18.3 31.3
POM (mg L-1) 11,38 ± 1,67 6.11 ± 0.31 7.60 <0.001
IIIB (Pemijahan) 31.7 47.9
PIM (mg L-1) 45,66 ± 3,41 29,93 ± 5,75 5.76 <0.001
IIIC (Pemulihan) 38.3 8.3
6.7 8.3
UNTUK nilai yang dicetak tebal menunjukkan perbedaan musim yang signifikan (Student's T tes, derajat
IIID (Pembiakan akhir)
kebebasan = 10).

116 JOL. 51(2) 2021: 113 - 121

ACTA
AMAZON ANTONIO dkk. Siklus reproduksi Crassostrea rhizophorae

Gambar 4. Variasi frekuensi relatif bulanan (%) tahap perkembangan gonad pada
tiram mangrove jantan, Crassostrea rhizophorae dibudidayakan pada tahun 2013 Gambar 6. Variasi frekuensi relatif bulanan (%) tahap perkembangan gonad pada
di muara Sungai Paciencia, Maranhão, Brasil (bulanan n = 7). tiram bakau betina, Crassostrea rhizophorae dibudidayakan pada tahun 2013 di
muara Sungai Paciencia, Maranhão, Brasil (bulanan n = 10).

Gambar 5. Tahapan perkembangan gonad jantan Crassostrea rhizophorae

dibudidayakan pada tahun 2013 di muara Sungai Paciencia, Maranhão, Brasil. A – Tahap
II (gametogenesis); B – Tahap IIIA (maturasi); C – Tahap IIIB (pemijahan); D – Tahap IIIC
(pemulihan). Bilah skala = 50 m. Sptd = spermatid; Sptz = spermatozoa. Angka ini adalah
warna dalam versi elektronik.

ditandai dengan disorganisasi bentuk spermatozoa yang

berputar-putar, meninggalkan ruang kosong dan meningkatkan
jumlah jaringan ikat di antara tubulus (Gambar 5c). Masa
pemulihan (IIIC) lebih terlihat pada musim hujan (Tabel 2), yang Gambar 7. Tahapan perkembangan gonad betina tiram mangrove, Crassostrea
rhizophorae dibudidayakan pada tahun 2013 di muara Sungai Paciencia,
menunjukkan bahwa pejantan terus menerus melepaskan
Maranhão, Brasil. A – Tahap II (gametogenesis); B – Tahap IIIA (maturasi); C –
spermatozoid dan mematangkan kohort baru selama musim ini Tahap IIIB (pemijahan); D – Tahap IIIC (pemulihan); E – Tahap IIID (akhir musim
(Gambar 4; Gambar 5d). Laki-laki yang dihabiskan (tahap IIID) kawin); F – Hermaprodit protogini. Bilah skala = 50 m. matO = oosit matang; vitO =
tidak diamati selama masa penelitian. oosit villogenik; Interfol = jaringan ikat interfolikular; Intrafol = ruang intrafolikular;
degO = oosit yang mengalami degenerasi; Sptz = spermatozoa. Angka ini adalah
Kami mengamati tidak ada betina pada stadium 0 (istirahat) dan
warna dalam versi elektronik.
stadium I (perkalian oogonia). Betina dalam tahap II (oogenesis) diamati
dalam beberapa bulan dalam setahun, terutama dalam transisi hujan-
kering (Gambar 6). Tahap ini ditandai dengan folikulogenesis dan oogenesis
yang intens, dengan oosit dalam vitellogenesis

117 JOL. 51(2) 2021: 113 - 121

ACTA
AMAZON ANTONIO dkk. Siklus reproduksi Crassostrea rhizophorae
dan penampilan oosit matang pertama (Gambar 7a). Betina
dewasa (stadium IIIA) lebih terlihat pada musim kemarau (Tabel
2), dengan nilai yang mencapai 50% pada bulan September
(Gambar 6). Pada tahap ini, oosit matang disandingkan dan bebas
dalam lumen folikel, mengisi hampir seluruhnya. Folikel memiliki
dinding tipis dan lebih sedikit jaringan ikat yang mengisi gonad.
Pada akhir fase ini, oosit matang siap untuk dilepaskan ke
lingkungan eksternal (Gambar 7b).
Pemijahan betina (IIIB) diamati pada semua bulan
(Gambar 6), dengan frekuensi tinggi pada musim kemarau
(Tabel 2), terutama pada bulan November (83,3%) (Gambar 6).
Setelah pematangan oosit tercapai, pelepasan pertama
terjadi, yang mengisi gonoduk, menunjukkan ruang
intrafollicular. Pada tahap pengosongan lanjut atau total,
oosit matang tampak tersebar di lumen, dengan peningkatan
bertahap ruang kosong di folikel sebanding dengan
kemajuan proses pemijahan (Gambar 7c).
Betina dalam tahap pemulihan antara peristiwa pemijahan
berturut-turut lebih sering terjadi di musim hujan (Tabel 2). Pada
tahap ini, ukuran folikel menurun, menghasilkan tampilan yang
terkompresi, dominasi jaringan ikat interfollicular dan penebalan
dinding. Jumlah sel germinal meningkat sementara oosit matang
menurun (Gambar 7d).
Betina yang dihabiskan (tahap IIID), diwakili oleh individu
yang mencapai pelepasan penuh gamet mereka, diamati dalam
proporsi rendah pada bulan Maret (14,3%), Agustus (12,5%) dan
November (16,7%), mencapai nilai yang lebih tinggi pada bulan
Desember (28,6%) dan Juni (25%) (Gambar 6). Setelah pemijahan
terakhir, folikel kecil dan praktis kosong, hanya menyisakan
beberapa oosit matang dengan tanda-tanda sitolisis. Folikel
diinvasi secara internal dan eksternal oleh hemosit, dengan
kemungkinan fungsi degeneratif terkait dengan sel gamet yang
tersisa, dan sebagian besar mantel terdiri dari jaringan ikat
(Gambar 7e). Dalam hermafrodit, gamet betina lebih banyak
daripada gamet jantan (Gambar 7f).
DISKUSI
Waktu pelepasan gamet pada moluska bivalvia tampaknya
berbeda pada garis lintang yang berbeda (Gomes dkk. 2014). Di
daerah tropis, pelepasan gamet berlangsung terus-menerus,
sedangkan di daerah beriklim sedang, pemijahan hanya terjadi pada
bulan-bulan terpanas dalam setahun, terutama karena kisaran suhu
yang lebih luas dan variasi fotoperiode (Rodríguez-Jaramillodkk. 2008).
Variasi suhu rendah di daerah tropis, terkait dengan kondisi fisik yang
menguntungkan, tampaknya terutama bertanggung jawab atas siklus
reproduksi yang berkelanjutan (Bacon 1971).
Aktivitas reproduksi pada pria dan wanita Crassostrea
rhizophorae di Muara Kesabaran berlangsung terus menerus
sepanjang tahun, dan tahap pematangan (tahap IIIA) dan
pemijahan (tahap IIIB) terjadi hampir sepanjang bulan. Tahap
istirahat seksual (tahap 0) dan multiplikasi sel germinal (tahap
I) tidak diamati pada tiram yang dianalisis, yang
118 JOL. 51(2) 2021: 113 - 121
setuju dengan Nascimento dan Lunetta (1978), yang
mengamati bahwa tahap ini sangat jarang terjadi pada
populasi tiram asli di timur laut Brasil. Hasil ini memperkuat
hipotesis bahwaC. rhizophorae telah mempercepat
pematangan dan reproduksi terus menerus sepanjang tahun
di lintang rendah (Lenz dan Boehs 2011).
Selain suhu, hubungan antara curah hujan dan salinitas
tampaknya mempengaruhi stimulus dan waktu peristiwa
reproduksi. Pemantauan curah hujan dan interaksinya dengan
salinitas selama musim hujan dan kemarau dapat memberikan
informasi penting tentang faktor-faktor abiotik yang
mempengaruhi proses reproduksi tiram.dkk. 2013). Di daerah
penelitian, makrotida menghasilkan variasi salinitas tahunan.
Pada musim hujan salinitas cenderung menurun pada saat surut
dan menyamai salinitas pantai pada saat pasang. Namun, pada
musim kemarau, salinitas cenderung meningkat saat air surut
karena penguapan yang disebabkan oleh penyinaran matahari
dan melampaui salinitas pantai saat air pasang. Demikian pula di
daerah pesisir kering Australia, peningkatan penguapan dan
curah hujan yang rendah menyebabkan salinitas muara melebihi
nilai samudera (Samarasinghe dan Lennon 1987). Fenomena
makrotidal mungkin membuat tiram mengalami stres osmotik
konstan, merangsang pemijahan sepanjang tahun.
Salinitas mempengaruhi berbagai mekanisme fisiologis dalam
Crassostrea, seperti tingkat pembersihan dan konsumsi oksigen
(Rumah dkk. 2018), proses sitogenetik (Qin dkk. 2018), dan siklus
reproduksi (George-Zamora dkk. 2003; Gairahdkk. 2013). Pada bulan-
bulan dengan curah hujan yang lebih signifikan di Muara Sabar
(Februari hingga Juli), terjadi penurunan salinitas dan peningkatan
frekuensi pemulihan tiram (tahap IIIC). Karena curah hujan yang
tinggi, penurunan salinitas mungkin telah merangsang pelepasan
gamet, karena oosit yang diserahkan pada kondisi di luar batas
toleransi spesies dapat mengalami sitolisis dan dikeluarkan dari folikel
(Lenz dan Boehs 2011). Namun, puncak pemijahan kedua diamati
pada periode curah hujan rendah (Oktober hingga Desember), yang
menunjukkan bahwa peningkatan atau penurunan salinitas dapat
merangsang pemijahan. Nascimento dan Lunetta (1978) melaporkan
bahwa pelepasan gamet pada tiram tidak terjadi bersamaan untuk
semua individu dan pengosongan gonad adalah proses yang lambat
dimana beberapa individu mengalami pengosongan parsial sepanjang
tahun.
Kualitas dan ketersediaan makanan memberikan pengaruh kuat
pada akumulasi cadangan nutrisi untuk pelepasan gamet selanjutnya
(Chávez-Villalba dkk. 2000). Misalnya, mekar fitoplankton dapat
menginduksi pemijahan (Drididkk. 2014; Antonio dan Camacho 2019).
KlorofilNS dan bahan organik partikulat (POM) secara signifikan lebih
tinggi pada musim hujan di daerah penelitian kami, menunjukkan
produktivitas primer yang lebih tinggi. Sejumlah besar individu dalam
tahap IIIC saat ini menunjukkan pemijahan yang intens, dengan
pelepasan, produksi dan pematangan kohort gamet baru dalam
waktu singkat, mengambil keuntungan dari ketersediaan makanan
yang lebih besar.
ACTA
AMAZON ANTONIO dkk. Siklus reproduksi Crassostrea rhizophorae
Wanita mendominasi, tetapi tidak secara signifikan, di
Muara Kesabaran, setuju dengan penelitian lain tentang
Crassostrea rhizophorae (Nascimento dan Lunetta 1978;
Christo dan Absher 2006; Lenz dan Boehs 2011) dan
Crassostrea brasiliana(= C.gas) (Castilho-Westphal dkk. 2015).
Proporsi hermafrodit rendah (2,6%) di Muara Sabar, mirip
dengan apa yang diamati di daerah lain.Crassostrea spesies
(Gairah dkk. 2013; Lenz dan Boehs 2011; Nascimento dan
Lunetta 1978).
Indeks kondisi biasanya digunakan untuk mengevaluasi kualitas
daging dan produktivitas budidaya moluska kerang (Rebelo dkk.2005).
Indeks kondisi dikondisikan oleh variabel lingkungan (Prietodkk. 1999;
Nishiddkk. 2006), dan nilai CI yang tinggi dapat menunjukkan gonad
terisi penuh atau sebagian, sedangkan nilai yang rendah dapat
dikaitkan dengan pengosongan dan reabsorpsi gonad (Nascimento
dan Pereira 1980). Indeks kondisi dalam penelitian kami menunjukkan
nilai yang lebih tinggi pada bulan-bulan hujan, antara Maret dan Mei,
serupa dengan Lenz dan Boehs (2011), yang mencatat nilai CI lebih
tinggi selama bulan-bulan hujan, terkait dengan ketersediaan pangan
yang lebih besar. Hasil daging yang lebih tinggi terkait dengan
individu dalam gametogenesis dan tahap matang, seperti pada fase
ini, puncak akumulasi cadangan, dan folikel dan asini sepenuhnya
berkembang (Galvão)dkk. 2000). Namun, dalam penelitian kami, CI
mencapai puncaknya pada bulan Mei, sesuai dengan periode
pematangan rendah (IIIA) dengan pemijahan tinggi (IIIB) dan
pemulihan (IIIC), memperkuat gagasan bahwa tiram bakau memiliki
proses produksi dan pelepasan gamet yang berkelanjutan sepanjang
tahun. di daerah tropis (Lenz dan Boehs 2011).
KESIMPULAN
tiram bakau, Crassostrea rhizophorae
dibudidayakan di muara makrotidal Sungai Sabar
menunjukkan reproduksi terus menerus sepanjang
tahun, memungkinkan untuk mendapatkan benih
tiram sepanjang tahun, dengan potensi untuk
memungkinkan perluasan peternakan tiram kecil di
wilayah tersebut. Perkembangan gonad
dipengaruhi oleh variasi musiman curah hujan
tetapi variasi suhu yang rendah tampaknya menjadi
faktor penentu utama reproduksi sepanjang tahun,
sementara salinitas dan ketersediaan makanan
memicu peristiwa pemijahan utama. Sebagai
indikator evaluasi kesejahteraan hewan dan
penyimpanan cadangan, indeks kondisi tidak sesuai
dengan status reproduksi tiram sesuai dengan
pematangan dan gametogenesis.
UCAPAN TERIMA KASIH
Pekerjaan ini didukung oleh Yayasan Dukungan Penelitian
dan Pengembangan Ilmiah dan Teknologi Maranhão -
FAPEMA (proyek Universal-00767/13). Penulis mengucapkan
terima kasih kepada staf Laboratorium Fisioekologi,
119 JOL. 51(2) 2021: 113 - 121
Reproduksi dan Budidaya Organisme Laut di
Universidade Estadual do Maranhão untuk bantuan
dengan analisis histologis.
REFERENSI
Antonio, IG; Camacho, AP 2019. Reproduksi yang diperkenalkan
tiram Crassostrea gigas (Bivalvia: Ostreidae) dibudidayakan di rakit di
Spanyol. Risalah Zoologi, 100: 257-267.
Bacon, PR 1971. Studi tentang biologi dan budidaya tanaman
tiram bakau di Trinidad dengan catatan tentang sumber daya
kerang lainnya. Ilmu Tropis, 12:265-278.
Rumah, SM; Lavaud, R.; La Peyre, MK; Comeau, LA; pohon fie,
R.; La Peyre, JF 2018. Mengukur salinitas dan efek musim pada
pembersihan tiram timur dan tingkat konsumsi oksigen.Biologi
kelautan, 165: 90. doi.org/10.1007/s00227-018-3351-x
Castilho-Westphal, GG; Magnani, FP; Ostrensky, A. 2015. Gonad
morfologi dan siklus reproduksi tiram mangrove
Crassostrea brasiliana (Lamarck, 1819) di teluk Guaratuba,
Paraná, Brasil. Risalah Zoologi, 96: 99–107.
Chavez-Villalba, J.; Mingan, C.; Cochard, JC; Pennec, M.Le.
2000. Gametogenesis chez l'huître Crassostrea gigas de
l'Aber Benoît (Bretagne, Prancis), la nord de son aire de
reproduksi. haliotis, 30: 1-12.
Christo, SW; Absher, TM 2006. Masa ReproduksiCrassostrea
rhizophorae (Guilding, 1828) dan Crassostrea brasiliana (Lamark,
1819) (Bivalvia: Ostreidae) di Teluk Guaratuba, Paraná, Brasil.
Jurnal Penelitian Pesisir, 39:1215–1218.
Costa, VB da.; Sousa, EB de.; Pinus, SCC; Pereira,
LCC; Kosta, RM da. 2011. Pengaruh lingkungan pesisir
berenergi tinggi pada struktur dan dinamika komunitas
fitoplankton (pesisir Amazon Brasil).Jurnal Penelitian
Pesisir, 64: 354-358.
Cubillo, AM; Peteiro, LG; Fernandez-Reiriz, MJ; Labarta,
U. 2012. Pengaruh padat tebar terhadap pertumbuhan kerang (
Mytilus galloprovincialis) dalam kultur tersuspensi. akuakultur,
342–343: 103–111.
Dri, S.; Romdan, MS; Elcafsi, M. 2014. Siklus gametogenik
dari Crassostrea gigas di habitat Mediterania yang
kontras: situs budaya laut (Teluk Tunis) dan benua (laguna
Bizert). Jurnal Penelitian Biologi-Thessaloniki, 21:13.
doi:10.1186/2241-5793-21-13
Funo, IC dari SA; Antonio, IG; Kelautan, YF; Monteles, JS;
Lopes, RPG; Gálvez, AO 2019. Perekrutan tiram di kolektor
buatan di pantai bakau makrotidal Amazon.ilmu
pedesaan, 49: e20180482.
Galvao, MSN; Pereira, OM; Kapak, IC; Henry, MB
2000. Aspek reproduksi tiram Crassostrea brasiliana
mangrove di muara Cananéia, SP (25°LS - 48°W). Buletin
Institut Perikanan, 26: 147-162.
George-Zamora, A.; Sevilla-Hernandez, ML; Aldana-Aranda, D.
2003. Siklus gonad ostion Amerika Crassostrea virginica
(Lamellibranchia: Ostreidae) di Mecoacan, Tabasco, Meksiko.
Jurnal Biologi Tropis, 51 (tambahan 4): 109–117.
ACTA
AMAZON ANTONIO dkk. Siklus reproduksi Crassostrea rhizophorae
Gomes, CHAM; Silva, FC; Lopes, GR; Melo, CMR 2014.
Siklus reproduksi tiram Crassostrea gasar. Jurnal Biologi
Brasil, 74: 967–976.
Guimaraes, IM; Antonio, IG; Peixoto, S.; Olivera, A.2008.
Pengaruh salinitas terhadap kelangsungan hidup tiram
liar, Crassostrea rhizophorae. Arsip Ilmu Kelautan, 41:
118-122.
Jeffrey, SW; Humphrey, GF 1975. Spektrofotometri baru
persamaan untuk menentukan klorofil a, b, c1 dan c2 pada
tumbuhan tingkat tinggi, alga dan fitoplankton alam. Biokimia
und Physiologie der Pflanzen, 167: 191–194.
Lenz, T.; Boehs, G. 2011. Siklus reproduksi ostium manglar
Crassostrea rhizophorae (Bivalvia: Ostreidae) di Bahía de
Camamu, Bahia, Brasil. Jurnal Biologi Tropis, 59: 137–149.
Lopes, RPG; Antonio, I.G.; Tchaika, L.; Barros, MC; Fraga,
E. 2018. Identifikasi molekuler tiram asli di pantai
Maranhão, Brasil. Buletin Institut Perikanan, 44: e377.
Kelahiran, IA; Lunetta, JE 1978. Siklus seks tiram dari
mangrove dan pentingnya untuk budidaya. Buletin Fisiologi
Hewan dari Universitas São Paulo, 2: 63–93.
Kelahiran, IA; Pereira, SA 1980. Perubahan indeks kondisi
untuk tiram mangrove (Crassostrea rhizophorae) dari Teluk Todos
os Santos, Salvador, Brasil. akuakultur, 20:9-15.
Lahir Jr, WR; Souza-Filho, PW; Proisy, C.; Lukas, RM;
Rosenqvist, A. 2013. Pemetaan perubahan di sabuk mangrove
Amazon terus menerus terbesar menggunakan klasifikasi
berbasis objek dari citra satelit multisensor. Ilmu Muara, Pesisir,
dan Shelf, 117: 83-93.
Nishida, AK; Nordi, N.; Alves, RRN 2006. Produksi moluska
terkait dengan siklus pasang surut bulan: Sebuah studi kasus di Negara
Bagian Paraíba di bawah sudut pandang etnoekologi. Jurnal
Etnobiologi dan Etnomedis, 2: 28. doi.org/10.1186/1746-4269-2-28
Gairah, L.; Ferreira, MA; Biarawati, Z.; Fonseca-Sizo, F.; Rocha, R.
2013. Pengaruh salinitas dan curah hujan terhadap biologi
reproduksi tiram mangrove (Crassostrea gasar): Implikasinya
terhadap koleksi induk tiram. Akuakultur, 380–383: 6–12.
Pantoja, JCD; Oliveira, LFS; Ferreira, PETA; Silva, BRM;
Biarawati, ZMP; Mendes, YA; Oliveira, RS; Rocha, RM 2020.
Salinitas dan curah hujan sebagai penginduksi proliferasi dan
apoptosis sel pada tiram mangroveCrassostrea gasar
spermatogenesis.Studi Regional dalam Ilmu Kelautan 39:101411.
Prieto, AS; Vasquez, M.; Ruiz, LJ 1999. Dinamika energi
pertumbuhan populasi mejillón kaki kaki
Ini adalah artikel Akses Terbuka yang didistribusikan di bawah ketentuan Lisensi Atribusi Creative Commons, yang mengizinkan penggunaan, distribusi,
dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun, asalkan karya aslinya dikutip dengan benar.
120 JOL. 51(2) 2021: 113 - 121
(Filibranchia: Mytilidae) di timur laut Negara Bagian Sucre,
Venezuela.Jurnal Biologi Tropis, 47: 399–410.
Qin, Y.; Xiao, S.; Bu, H.; Mo, R.; Zhou, Z.; Wu, X.;dkk. 2018.
Pengaruh salinitas dan suhu pada waktu pemecahan vesikel
germinal dan pelepasan badan kutub pada tiram Hong Kong
diploid dan triploid, Crassostrea hongkongensis, dalam kaitannya
dengan induksi tetraploid. Penelitian Akuakultur, 49: 3647–3657.
Rebelo, MF; Amaral, MCR; Pfeiffer, WC 2005. Kondisi tiram
indeks di Crassostrea rhizophorae (Guilding, 1828) dari laguna
pantai yang tercemar logam berat. Jurnal Biologi Brasil, 65: 345–
351.
Rios, EC 2009. Ringkasan Kerang Laut Brasil. Evangraf, Rio
Besar, 668p.
Rodríguez-Jaramillo, C.; Hurtado, MA; Romero-Vivas, E.; Ramirez,
JL; Manzano, M.; Palacios, E. 2008. Perkembangan Gonad
dan Histokimia Tiram Tropis,Crassostrea corteziensis
(Hertlein, 1951) selama siklus reproduksi tahunan. Jurnal
Penelitian Kerang, 27: 1129–1141.
Samarasinghe, JRS; Lennon, GW 1987. Hipersalinitas, pembilasan
dan irisan garam sementara di teluk pasang surut - muara
terbalik.Ilmu Muara, Pesisir, dan Shelf 24: 483-498.
Sampaio, DS; Santos, MLS; Tagliaro, CH; Beasley, CR 2020.
Variasi karakteristik lingkungan perairan di antara unit
budidaya tiram pantai Amazon. Akta Amazonika, 50: 295-304.
Schettini, CAF; Asp, NE; Ogston, AS; Gomes, VJC;
McLachlan, RL; Fernandes, MEB; Nittrourer, CA; Truccolo,
EC; Gardunho, DCL 2020. Dinamika sirkulasi dan sedimen
halus di Pantai Mangrove Makrotidal Amazon.Proses dan
Bentuk Permukaan Bumi, 45:574-589.
Silva, OL; Makedonia, ARG; Biarawati, ESCL; Campos, KD;
Araújo, LCC; Tiburo, X.;dkk. 2020. Pengaruh faktor
lingkungan terhadap profil asam lemak dan komposisi
fisikokimia tiram (Crassostrea gasar) di pertanian muara
Amazon. Penelitian Akuakultur 51: 2336-2348.
Souza Filho, PWM 2005. Pantai mangrove makrotidal
Amazon: skenario morfologis, pemetaan dan kuantifikasi area
menggunakan data penginderaan jauh. Jurnal Geofisika
Brasil, 23: 427–435.
Vélez, AR 1977. Siklus reproduksi tahunan tiram Crassostrea
rhizophorae (Guilding) dari Bahía de Mochima. Boletin del
Instituto Oceanografico Universidad de Oriente, 16: 87–98.
DITERIMA: 12/08/2020
DITERIMA: 03/09/2021
REDAKSI ASOSIASI: Bruno Spacek Godoy
ACTA
AMAZON ANTONIO dkk. Siklus reproduksi Crassostrea rhizophorae

MATERI TAMBAHAN (hanya tersedia dalam versi elektronik)

Antonio dkk. Siklus reproduksi tiram mangrove,Crassostrea rhizophorae (Bivalvia: Ostreidae) dibudidayakan di
zona salinitas tinggi makrotidal di pantai bakau Amazon, Brasil

Gambar S1. Nilai rata-rata bulanan oksigen terlarut dan transparansi air di Gambar S2. Nilai rata-rata bulanan suhu dan pH di area budidaya tiram
area budidaya tiram bakau, Crassostrea rhizophorae di muara Sungai bakau, Crassostrea rhizophorae di muara Sungai Paciencia, Maranhão,
Paciencia, Maranhão, Brasil, pada tahun 2013. Brasil, pada tahun 2013.

121 JOL. 51(2) 2021: 113 - 121

 Jurnal Ilmiah Internasional

2. Kepiting Tropis

Ponomareva, T., Timchenko, M., Filippov, M., Lapaev, S., & Sogorin, E. (2021).
Prospects of Red King Crab Hepatopancreas Processing: Fundamental and Applied
Biochemistry. Recycling, 6(1), 3.
 recycling
Review
Prospects of Red King Crab Hepatopancreas Processing:
Fundamental and Applied Biochemistry
Tatyana Ponomareva, Maria Timchenko






Citation: Ponomareva, T.; Timchenko,
M.; Filippov, M.; Lapaev, S.; Sogorin,
E. Prospects of Red King Crab
Hepatopancreas Processing:
Fundamental and Applied
Biochemistry. Recycling 2021, 6, 3.
https://dx.doi.org/10.3390/
recycling6010003
Academic Editor: Leonel Nunes
Received: 19 October 2020
Accepted: 29 December 2020
Published: 2 January 2021
Publisher’s Note: MDPI stays neu-
tral with regard to jurisdictional clai-
ms in published maps and institutio-
nal affiliations.
Copyright: © 2021 by the authors. Li-
censee MDPI, Basel, Switzerland.
This article is an open access article
distributed under the terms and con-
ditions of the Creative Commons At-
tribution (CC BY) license (https://
creativecommons.org/licenses/by/
4.0/).
Recycling 2021, 6, 3. https://doi.org/10.3390/recycling6010003
, Michael Filippov, Sergey Lapaev and Evgeny Sogorin *
Federal Research Center “Pushchino Scientific Center for Biological Research of the RAS”, 142290 Pushchino,
Russia; tatyanap91875@gmail.com (T.P.); matimchenko@gmail.com (M.T.); filippmv@gmail.com (M.F.);
a3t1v4i1n5@gmail.com (S.L.)
* Correspondence: evgenysogorin@gmail.com; Tel.: +7-915-132-5419
Abstract: Since the early 1980s, a large number of studies on enzymes from the red king crab
hepatopancreas were conducted. They have been relevant both from a fundamental point of view
in terms of studying the enzymes of marine organisms and in terms of rational natural resource
management aimed to obtain new valuable products from the processing of crab fishing waste.
Most of these works were performed by Russian scientists due to the area and amount of waste of
red king crab processing in Russia (or the Soviet Union). However, the close phylogenetic kinship
and the similar ecological niches of commercial crab species and the production scale of the catch
provide the bases for the successful transfer of experience in the processing of the red king crab
hepatopancreas to other commercial crab species caught worldwide. This review describes the value
of recycled commercial crab species, discusses processing problems, and suggests possible solutions
for these issues. The main emphasis is made on hepatopancreatic enzymes as the most salubrious
products of red king crab waste processing.
Keywords: commercial crab species; red king crab; waste processing; hepatopancreas; proteases;
hyaluronidase
1. Introduction
The global growth in consumer demand for food products based on commercial
species of marine organisms (fish, crab, squid, etc.) has stimulated fishers to increase
production. However, the inability to increase the catch volume endlessly and related
waste recycling problems have put forward the consideration of advanced processing
of secondary raw materials to obtain new commercially valuable products. Crabs are a
favorite catch of fishers worldwide due to the high price of their meat. The main northern
commercial species of crab include the following: Red king crab (Paralithodes camtschati-
cus), Blue king crab (Paralithodes platypus), Spiny brown king crab (Paralithodes brevipes),
Golden king crab (Lithodes aequispinu), Opilio snow crab (Chionoecetes opilio), Tanner snow
crab (Chionoecetes bairdi), Triangle tanner crab (Chionoecetes angulatus), Red snow crab (Chio-
noecetes japonicus), Chinese mitten crab (Eriocheir sinensis), Hair crab (Erimacrus isenbeckii) [1].
The first four species belong to the infraorder of half-tailed or false crabs (Anomura) of the
suborder Pleocyemata, order Decapoda. The rest of them belongs to the infraorder of true
crabs (Brachyura) (Figure 1) [2].
All crabs have a massive cephalothorax covered with carapace from above, a flat
abdomen, and are bent under the cephalothorax. Brachyura representatives move with the
help of four pairs of pectoral legs, and the fifth pair of limbs are claws. A specific feature of
the Anomura is the asymmetric structure of the body (the right claw is larger than the left)
and the presence of only three pairs of walking legs (one of the five pairs is hidden under
the carapace and is used for the regular cleaning of gills) [1,3–5].
https://www.mdpi.com/journal/recycling
Recycling 2021, 6, 3 2 of 15

Armadillidium vulgare, Armadillidium nasatum

order
Isopoda

class
Malacos-
traca
order suborder Den- Litopenaeus vannamei
Decapoda drobranchiata

suborder
Pleocyemata

infraorder infraorder family

Brachyura Scylla olivacea
Anomura Portunidae
Paralithodes camtschat-
ica, P. platypus,
P. brevipes,
Lithodes
aequispinu family Majidae

Chionoecetes
opilio

Figure 1. Phylogeny of some members of the class Malacostraca. Species with known primary
structures of hyaluronidases are underlined (see Section 3.4.3).

Red king crab, or Kamchatka crab, is famous around the world. In recent decades,
the catch of this crab by Russian fishers has reached 15,000–20,000 tonnes per year. The orig-
inal habitat of red king crab ranges from Karaginsky Island (Russia) off the east coast of
Kamchatka and Shelikhov Bay (Russia) in the Sea of Okhotsk to Hokkaido Island (Japan)
and the Korea Strait (between Korea and Japan). The crab is also found on the west coast of
North America from Cape Barrow to the Queen Charlotte Archipelago in the south [1,6].
Red king crab was successfully introduced to the Barents Sea in the 1960s and 1970s.
Optimal temperature conditions, the absence of natural predators, and sufficient amount
of food led to the spread of acclimatized red king crab from the coast of the Kola Peninsula
to Norway and north to Svalbard (Figure 2). Individuals of this king crab population are
larger, grow faster, and mature earlier than individuals of the far-eastern population [7].
The rapid growth of the northern king crab population is an environmental problem [7,8].
The growth rate of the resource potential of this population made it possible to open
commercial fishing in Norway in 2002 and in Russia in 2004.
Recycling 2021, 6, 3 3 of 15

Red king crab native and invasive distribution

USA

CANADA

RUSSIAN FEDERATION

Invasion into Norwegian waters

Barents
Sea

Nordcapp

Nesseby
Skjervøy
Red king crab distribution
2001 NORWAY
2000 SWEDEN
NORWAY Native
1999 Murmansk 60
Invasive
1995-97
1992 Exclusive economic zone
border between Norway and Sources: Delivering Alien Invasive Species
1990 Source: redrawn from
1961-69 Russian Federation Jørgensen, L.L., 2006. Inventories for Europe, 2009; Jørgensen,
L.L., NOBANIS, 2006 .

Figure 2. Red king crab native and invasive distribution.

In Russia, the crab catch is often processed immediately on board. One of the methods
for processing the crab on a ship is as follows: the just-caught crab is placed on a hook;
the limbs are additionally cleaned, boiled, and frozen; and the broken carapace with
entrails is dumped immediately into the sea as a waste product. On average, this waste
can account for 50% of the catch mass [9,10]. The mass fraction of carapace from these
wastes is approximately 60%; the rest comprises the entrails (including the digestive organ,
the hepatopancreas) [6]. In terms of protein content, these wastes are identical to crab meat,
and even superior in terms of the content of minerals, lipids, and carbohydrates. Crab flour
used as animal feed can be obtained from crab processing waste. In addition, the crab shell
is an excellent source of raw materials for the production of chitin and chitosan, which can
be used to meet the demands of the food industry and medicine [10]. Chitin, chitosan, and
their derivatives represent promising matrices for the development of novel biomaterials
with antioxidant, bactericidal, hypotensive, antiallergic, antiinflammatory and antitumor
activities [11]. Recently, crab shell has also been used for the production of α-glucosidase
inhibitors and anticancer agent prodigiosin via microbial fermentation [12,13]. Due to their
peculiar properties such as nontoxicity, biocompatibility, and biodegradability, chitin and
chitosan are used as potential excipients and as biological active agents in cosmetology [14].
The main focus of the review is on the research and use of the crab hepatopancreas
enzyme complex due to the strong industry interest in this enzyme source. Russia is the
leader in the catch of this fishing object. This is reflected in the number of studies on the
processing of this waste by Russian scientists. Most of these works were published only in
Russian, which significantly limited the availability of information on that research results
and development for the world community. The goal of this review is to solve this problem.

2. Materials and Methods

The review has been systematically approached based on electronic databases includ-
ing Scopus, Web of Science, Google Scholar. Most of the resources are the articles of highly
specialized journals without translation and abstracts of regional symposia and conferences
specialized in the water resources of Russia (Soviet Union), which are not available in
electronic form.
Recycling 2021, 6, 3 4 of 15

Figure “Red king crab native and invasive distribution” was generously provided
by GRID-Arendal (nonprofit environmental communications centre based in Norway).
This graphic item may be reproduced in any form for educational or nonprofit purposes
without special permission from GRID-Arendal, provided acknowledgement of the source
is made [15,16].
The chapter “Technologies for processing hepatopancreas” presents patented tech-
nologies for processing waste from red king crab and other closely related commercial
crabs. This information corresponds to the study of the technical level of patent research
on this topic.
Experimental data from research articles were used to compile tables. Among other
things, the molecular masses of the proteins under study and the methods used in these
works are indicated. The table shows the scatter of these data from different works in order
to demonstrate the measurement by different researchers. The correct molecular weight
should be estimated by the results of mass spectrometry and interpretation of the results of
calculations for the amino acid sequence of proteins.

3. Results
3.1. Crab Hepatopancreas
The hepatopancreas is an organ of the digestive system that functions as both the
liver and pancreas [17]. In red king crab, the hepatopancreas makes up about 90% of the
intestines of the carapace and 5–10% of the total weight of the animal [18]. The Decapoda
hepatopancreas secretes a wide variety of highly active enzymes.
Under the action of the digestive enzymes of the hepatopancreas, food is broken down
into easily digestible substances. The hepatopancreas of crabs of the family Lithodidae
(infraorder Anomura, for example, red king crab) consists of brown mass of fragile liver
tubules filling the main part of the body cavity. The integrity of these tubules is easily
destroyed, even by a slight mechanical action, and the enzymes enter the body cavity,
where they start the process of autolysis. The hepatopancreas of true crabs (Brachyura,
for example, opilio crab) is shapeless orange-brown mass [1].

3.2. Use of Red King Crab Hepatopancreatic Enzymes

The hepatopancreas of the digestive system of commercial crabs is a valuable source of
a complex of enzymes with various activities: collagenase, protease, hyaluronidase, lipase,
nuclease, etc. The complex of proteolytic enzymes of the red king crab hepatopancreas is of
interest in various industries. For example, the prospect of using hepatopancreas enzyme
preparation in the hydrolysis of soy protein was recently highlighted [19]. A red king
crab hepatopancreas enzyme preparation was successfully used to separate roe from the
connective tissue of ovaries of commercial fish [20], to hydrolyze minced fish meat to obtain
a dietary food ingredient [21], to hydrolyze crustacean processing waste products to obtain
components for microbiological nutrient media [22], and to isolate chondroitin sulfate from
marine wastes, namely from tissues of marine organisms [23]. Based on collagenolytic
proteinases, wound healing and wound cleansing preparations [24–26], including wound
dressings [27,28], have been designed.

3.3. Hepatopancreas Recycling Technologies

Many technologies are used to process the hepatopancreas of commercial crab species
to obtain enzymatic preparations. Most technologies were developed for the hepatopan-
creas of red king crab, but some were transferred to the processing of the hepatopancreas
from other commercial species (for example, snow crab and blue crab) [29,30]. Most of-
ten, the initial raw material is the hepatopancreas (Figure 3), which is homogenized
in salt buffers or by osmotic shock under hypotonic conditions (excess distilled water).
The integrity of the hepatopancreas tissue is easily destroyed during the freezing/thawing
process; therefore, no considerable effort is required for mechanical homogenization. How-
ever, in some cases, a colloid mill can be used [31]. Sometimes, triton X-100 or sodium
Recycling 2021, 6, 3 5 of 15

dodecyl sulfate (SDS) is added to the homogenization buffer [29,32]. The homogenate
is incubated at room temperature for several hours. Under such conditions, cell autoly-
sis occurs, which increases the level of protein extraction; however, this can lead to the
inactivation of target enzymes. A significant problem in further processing is caused by
lipids. Ballast substances and lipids are removed from the homogenate by centrifugation
or flocculation followed by chitosan filtration [30–34] or immediately by filtration through
the hollow fiber [35,36]. The filtrate is concentrated by ultrafiltration through hollow fibers
with a pore size of 15–30 kDa and then dried by freeze-drying or spray-drying. The choice
of hollow fibers with a specific pore size (considering the variation in real pore sizes)
should be based on the known molecular weights of the target enzymes. To obtain more
purified preparations before drying, proteins are precipitated with ammonium sulfate
and/or tert-butanol, and then ion exchange, hydrophobic, or affinity chromatography is
performed [37–40]. In the simplest case, after homogenization, proteins are precipitated
with an excess of cooled acetone (“acetone powder”) [41]. This method is not suitable for
upscaling, since the use of a large volume of acetone is unsafe for both humans and the
environment. Most of the developed technologies have been successfully tested on tens
and hundreds of kilograms of hepatopancreas as raw materials [29–31,33–36]. The yield of
dry final substance in such protocols varies from 0.6 to 1.3% based on the feedstock [33–36],
and the collagenolytic activity is 500–3000 units Mandl/mg (the substrate is collagen type
I, at 37 ◦ C) [35,36], even reaching 11,000 Mandl/mg (the substrate is collagen type III,
at 42 ◦ C) [29], whereas the amount of protein in dry matter is 80–98% [29,33,35,36].
The basic conditions for enzymes obtained with the mentioned technologies include
the maintenance of neutral pH of the enzyme solution; at pH values below 5.5 and above
9.5, the activity of the proteolytic complex and its individual components decreases dra-
matically. At pH values below 3 and above 10.5, parts of the enzymes are irreversibly inacti-
vated [33,42].

Figure 3. Concept of hepatopancreas processing.

Recycling 2021, 6, 3
Table 1. Hepatopancreas proteolytic enzymes. 1 expected molecular weight based on the mRNA nucleotide sequence,
2 mass spectrometry data. PC—Paralithodes camtschaticus.
Proteinase
Collagenolytic serine
proteinase PC [44]
Collagenolytic serine
proteinase PC 2 [47]
Trypsin-like
proteinase A [48]
Chymotrypsin
-like proteinase C [50]
Aminopeptidase PC [51]
6 of 15
3.4. Enzymes of the Red King Crab Hepatopancreas
3.4.1. Proteolytic Enzymes
Currently, 10 proteolytic enzymes of hepatopancreas—collagenolytic serine proteinase
PC (PC—Paralithodes camtschaticus), collagenolytic serine proteinase PC 2, trypsin-like
proteinase A, chymotrypsin-like proteinase C, aminopeptidase PC, carboxypeptidase PC,
trypsin PC, elastase, cathepsin L, and metalloproteinase—were described in the literature
in detail (Table 1). Most of these are small proteins up to 30 kDa (based on the denaturing
gel electrophoresis data) with an isoelectric point (pI) of 2.5–4.4. The optimal operating
conditions for these enzymes include neutral pH and temperature range from 25 to 55 ◦ C.
The collagenolytic serine proteinases are of particular interest due to their ability to degrade
native collagen of types I–III. Most likely, these two enzymes are the basis of the active sub-
stance in existing wound healing and wound cleaning preparations. Collagenolytic activity
has also been assigned to other hepatopancreas proteinases. However, the temperature of
the reaction mixture in these studies was often 42 ◦ C, at which native collagen partially
denatures [43]; therefore, the measured activity may refer not to true collagenase but to
gelatinase activity. Despite the large number of scientific works devoted to hepatopancreas
enzymes, the complete nucleotide sequence of mRNA is known only for collagenolytic
serine proteinase PC, trypsin PC, cathepsin L, and metalloproteinase (Table 1).
kDa (Based on Opt. Opt.
◦C pI Substrate Specificity and Other
Electrophoresis) pH
Preferably hydrolyzes peptide
bonds, the carbonyl formed by Arg,
Lys, and hydrophobic amino acids.
29 Hydrolyzes native collagen type I
even at 4 ◦ C [46]. The mRNA
23.5 1 [45] 7.5 47–55 3
nucleotide sequence was
determined [45], European
Molecular Biology Laboratory
(EMBL) Nucleotide Sequence
Database: AF461035.
Preferably hydrolyzes peptide
bonds, carbonyl formed by
25 8.5 38–40 ? positively charged amino acids.
Hydrolyzes native collagen
types I–III.
Preferably hydrolyzes peptide
bonds, the carbonyl formed by Arg
27 and Lys. Proteolytic activity is not
30 [49] 7.9 55 [49] 2.5 inhibited by
ethylenediaminetetraacetic acid
(EDTA), and partially inhibited by
soybean trypsin inhibitor.
Preferably hydrolyzes peptide
bonds, carbonyl formed by
hydrophobic amino acids (Phe, Val,
24 9 55 [49] 2.9 [49]
and Leu). Not inhibited by
Tos-Phe-CH2 Cl
(chymotrypsin inhibitor).
Effectively cleaves N-terminal
amino acids: Arg, Lys, Leu, Phe,
110 6 36–40 4.1 and Met. Most likely it is a
homodimeric,
Zn-containing enzyme.
Recycling 2021, 6, 3 7 of 15

Table 1. Cont.

kDa (Based on Opt. Opt.

Proteinase ◦C pI Substrate Specificity and Other
Electrophoresis) pH
Effectively cleaves C-terminal
amino acids: Arg, Lys, Phe, Tyr, Leu,
and Ile. The enzyme is inhibited by
Carboxypeptidase PC [52] 34 6.5 55 3.1
0.5 mM Ag+ , Zn2+ , Cd2+ and 1
mM EDTA, whereas it is activated
by Co2+ and Ca2+ .
29 Preferably hydrolyzes peptide
23 [54] bonds, carbonyl formed by Arg and
Trypsin PC [53] 24.8 1 [45] 7.5–8 55 <2.5 Lys. The mRNA nucleotide
24.8 2 [54] sequence was determined [45],
EMBL: AF461036.
Hydrolyzes native elastin (inhibited
by elastinal). NaCl, MnCl2 , CdCl2 at
Elastase [55,56] 28.5 8–8.5 50 [57] 4.5 a concentration of 1–100 mM
stimulate elastase activity, whereas
it is inhibited by HgCl2 (100 mM).
Enzyme has cathepsin activity,
hydrolyzes Z-Phe-Arg-pNA
substrate. Hydrolyzes collagen
29 types X and VI.
HgCl2 , E64, and leupeptin inhibit
Cathepsin L [58] 24 1 8 25 ?
cathepsin activity; soybean trypsin
inhibitor practically does not
suppress activity. The mRNA
nucleotide sequence was
determined, EMBL: HQ437281
Destroys peptide bonds formed by
both acidic and hydrophobic amino
acids. Hydrolyzes azocollagen.
Proteolytic activity is maintained at
Metalloproteinase [59] 22.2 1 8–8.5 45 4.43 1–3 M NaCl and is inhibited by
isopropanol, o-phenanthroline,
and EDTA. Zn-containing enzyme.
The mRNA nucleotide sequence
was determined, EMBL: AF492483

3.4.2. Nucleases and Other Enzymes of Hepatopancreas

The red king crab hepatopancreas is a source of enzymes such as nucleases (Table 2).
Ca2+ - and Mg2+ -dependent DNase, which is characterized by high thermal stability,
has been studied in detail: the enzyme remains absolutely active after 3 h of incubation
at 60 ◦ C, whereas incubation for 30 min at 100 ◦ C resulted in only 7% loss of activity [60].
Based on the circular dichroism (CD) spectrum, the protein appears to be a compact
globule and consists mainly of β-layers (75%) [61]. The pI value is 4 and the optimal
reaction temperature range is 50–60 ◦ C [62].
This DNase has a pronounced specificity for the secondary structure of DNA and pre-
dominantly cleaves double-stranded substrates (DNA and RNA–DNA duplexes, while the
RNA remains intact). The minimum duplex size for cleavage by DNase is 9 bp; the enzyme
does not hydrolyze RNA [62]. The DNase cleaves phosphodiester bonds with the forma-
tion of 50 -phosphate and 30 -OH terminal groups. Ca2+ and Mg2+ together have a positive
synergistic effect on the rate of the hydrolysis reaction. The unique properties of DNase
enable it to be used effectively for the rapid analysis of single nucleotide polymorphisms
Recycling 2021, 6, 3 8 of 15

and the normalization of nucleic acid libraries [63–66]. In the hepatopancreas of red king
crab, other nucleases (RNases) and phosphoesterases were found (Table 2).

Table 2. Nucleases and other enzymes of hepatopancreas. 1 denaturing gel chromatography data, 2 denaturing electrophore-
sis, 3 expected molecular weight based on the mRNA nucleotide sequence.

kDa (Based on
Enzymes Opt. pH Known Properties
Gel-Chromatography)
53 The primary structure was
47 1 7–8 determined. There are two
Ca2+ -
and Mg2+ -dependent
42 2 6.6 [62] sequences in UniProtKB, Q8I9M9
DNase [60]
41.5 3 [62] (2003) and B6ZLK3 (2009), differing
by two amino acids.

Broad specificity. Poorly hydrolyzes

Alkaline RNase (AlkR) [67]
Acid RNase (AcR and
AcR’) [67]
Two acidic
phosphomonoesterases [68]
Alkaline
phosphomonoesterase [68]
Acidic
phosphodiesterase [68]
Alkaline
phosphodiesterase [68]
poly(AUC). MgCl2 at a
concentration of 10–50 mM
19 7.2–7.5
stimulates the activity of enzyme.
0.1 M NaCl inhibits the enzyme
activity by 50%.
Does not hydrolyze poly(C) and
poly(AUC). MgCl2 inhibits its
activity, 0.25 M NaCl inhibits its
33 and 70 5.5
activity by 50%. Most probably,
these are monomeric and dimeric
forms of the same protein.
Do not hydrolyze (30 ,50 )cAMP
(cyclic adenosine monophosphate);
1.5 M NaCl inhibits the enzyme
80 and 82 5.5
activity by 20% (protein 80 kDa);
1.1M NaCl inhibits the enzyme
activity by 50% (protein 82 kDa)
Does not hydrolyze (30 ,50 )cAMP. 0.4
80 7.2–7.5 M NaCl inhibits the enzyme activity
by 50%.
57 4.8–5 50% inhibition at 1.4 M NaCl.
No inhibition up to 1.4 M NaCl
51 7.2–7.5
is observed.

The enzyme preparation from the hepatopancreas contains several other enzymatic
activities, which allows this enzyme complex to be used for the depolymerization of β-
glycosidic bonds in chitosan [69–71]. Lipase activity has also been observed [33]; however,
other activities of hepatopancreas enzymes have not been sufficiently studied in comparison
with proteolytic and nuclease activities.

3.4.3. Hyaluronidase Activity of Hepatopancreas Homogenate

Currently, the structure of hyaluronidases of the Malacostraca class has not been
studied in sufficient detail. In the open database of UniProt protein sequences, there are
only four representatives of this class for which amino acid sequences of hyaluronidases
are available: two representative of Decapods, including Whiteleg shrimp (Litopenaeus
vannamei, UniProt A0A423SH46) and orange mud crab (Scylla olivacea, two UniProt proteins
A0A0P4VVV1 and A0A0N7ZAX3), and two representative of Isopoda, which are pill-bug
Armadillidium vulgare (only one of two proteins is characterized as UniProt A0A444ST78)
and Armadillidium nasatum (UniProt A0A5N5TJL6) (Figure 1). Earlier, hyaluronidase
Recycling 2021, 6, 3 9 of 15

activity was found in the complex of enzymes of the red king crab hepatopancreas ho-
mogenate [72].
In our previous work, the kinetics of the hydrolysis of hyaluronic acid in cosmetic
fillers with the red king crab hepatopancreas homogenate was studied for the first time [73].
Using the methods of turbidimetric analysis, atomic force microscopy, and nuclear mag-
netic resonance spectroscopy, the kinetics of hydrolysis and the structural transformation of
hyaluronic acid under the action of homogenate enzymes were investigated. We found that
the obtained homogenate has activity comparable to commercially available hyaluronidase
preparations. In this work, we demonstrated the possibility of using an enzymatic prepa-
ration based on hepatopancreas homogenate for the treatment of complications after the
injection of fillers based on hyaluronic acid. Further studies of the effectiveness and safety
of hyaluronidase from hepatopancreas on model animals will enable us to develop new
drugs for the treatment of complications of filler injections in the near future.

3.5. Other Valuable Non-Protein Components of the Red King Crab Hepatopancreas
The crab hepatopancreas is a source of enzymes and other valuable products. For ex-
ample, a preparation with the properties of an inhibitor of serine proteinases was obtained
and characterized from the hepatopancreas, and its effect on the process of human blood
plasma coagulation was studied [74]. The tested inhibitor showed an anticoagulant effect
that was more pronounced when combined with heparin. Procedures hwere developed to
obtain an inhibitor both from the raw material [75] and in the recombinant form [76].
The hepatopancreas contains a large amount of fat, which varies from 10 to 26% [18,77,78].
In the study of the fractional composition of crab fat, it was found to contain triglycerides
at a rate of up to 55%, as well as polyunsaturated fatty acids, including ω-3 (14–24% of the
total of all fatty acids). Hepatopancreas fat does not contain toxic substances and can be
used as a food supplement or as an ingredient for cosmetic products.

4. Discussion
4.1. Prospects of Processing Waste from Other Commercial Crab Species
The commercial species of crabs include representatives of the false (Anomura) and
true crabs (Brachyura) of Pleocyemata. Brachyura includes opilio crab (Chionoecetes opilio),
which is also a commercially important catch for marine fisheries. Crabs of this suborder
have similar enzymatic activity in their digestive system. For example, the proteolytic
activities of enzyme preparations from the hepatopancreas of red king crab and opilio crab
are practically the same [21]. The zymogram showed that the hepatopancreas of opilio crab
contains at least 10 proteolytic enzymes.
The activity of the proteolytic complex was comparable to the commercially available
collagenase of the gas bacillus Clostridium histolyticum [79,80]. In these works, proteolytic
enzymes of the hepatopancreas of opilio crab, but not red king crab, were isolated and bio-
chemically characterized, and the N-terminal amino acid sequences of proteolytic enzymes
were obtained. The authors noted their mistake in their next work [42]. Unfortunately,
these incorrect data were published in the UniProt database. For example, the amino
acid sequence UniProtKB-P20734 (COGC_PARCM) actually belongs not to Paralithodes
camtschaticus, but to Chionoecetes opilio. The sequence of UniProtKB-P34153 (COG1_CHIOP)
and UniProtKB-P34156 (COG4_CHIOP) is not derived from the hepatopancreas proteins of
Chionoecetes opilio, but from Paralithodes camtschaticus. The rest of the N-terminal sequences
of proteolytic enzymes of these two crabs in [79,80] completely coincide in the UniProt
database, which once again confirms the biochemical similarity of the digestive systems of
the representative of Pleocyemata.
The close phylogenetic kinship and similar ecological niches of the commercial crab
species, as well as the industrial scale of the catch, provide grounds for the successful trans-
fer of the experience of the processing of the king crab hepatopancreas to other crab species
to obtain new valuable products. For example, the enzymatic complex of hepatopancreas
of opilio crab was successfully used in the production of protein hydrolysates from cod
Recycling 2021, 6, 3 10 of 15

waste processing, as well as to improve the consistency and juiciness of cod fillets at the
stage of the salting of the semi-finished product [21,30,81].
Russia is a leader in terms of the catch level of red king crab, and this catch is increasing
every year (Figure 4a). Most of this catch comes from fishers in the Russian Far East, how-
ever, the total catch of Russia and Norway in the Barents and Norwegian Seas is expected in
the near future to equal and even exceed the catch level in the Russian Far East [82]. In the
United States (Alaska), red king crab is also caught, but to a lesser extent. Fishers in Alaska
have caught 200–400 tonnes per year from 2013 to 2020 [83]. However, at the same time,
the United States catches about 5000–10,000 tonnes of crabs that are collectively known as
king crabs [82]. Other commercial species of crabs are also promising species for advanced
processing. For example, Food and Agriculture Organization (FAO) data indicate that the
global catch of opilio crab is more than 100,000 tonnes [84] (Figure 4b). We confidently state
that high catch levels of large commercially significant crabs, and therefore vast amount of
waste, provide an opportunity to develop waste processing technologies and include them
in the industrial process. The most promising direction of processing should be considered
the processing of the hepatopancreas as a source of new high-margin products.

×104 ×105
1
1.2

1 0.8
Catch (tonnes)

Catch (tonnes)

0.8
0.6
0.6
0.4
0.4
0.2
0.2

0 0
2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017

Russia (Barents Sea) Canada. Greenland. Saint Pierre and Miquelon

Russia (Russian Far East) Latvia
Norway Norway
(a) (b)

Figure 4. Crab catch: (a) red king crab in the Barents Sea (Russia and Norway) and the Russian Far East (Russia) and (b) the
global catch of opilio crab.

4.2. Development Strategy for Waste Processing

Crab is processed using different approaches. If the caught crab is not boiled, complex
waste processing can be used to maximize the yield of new valuable products. After limb
separation, the rest of the body can be completely processed: the carapace can be used for
chitosan production, the hepatopancreas for the production of multicomponent enzymatic
complexes and specific purified enzymes, the fat from the hepatopancreas for dietary nutri-
tion or biofuel production, and the gills and other internal organs as a feed supplement for
birds, fish, and other animals. This approach adopts the principle of non-waste recycling.
The methods of processing the crab hepatopancreas to obtain enzyme preparations
can be divided into two strategies: obtaining complexes of various enzymes or further
purification of specific enzymes (or class of enzymes) from this complex. The enzyme
complex is appropriate for the treatment of multicomponent substrates where the simul-
taneous degradation of proteins, nucleic acids, and other polymers into monomers is
required, for example, in the production of easily digestible food products from animal
and plant tissues. The activity of the enzyme complex in the preparations will differ for
Recycling 2021, 6, 3 11 of 15

the hepatopancreas from sample to sample. In this regard, the technology for using such
enzymatic preparations should allow for fluctuations in the activities in different batches
of the preparation. The second strategy, based on the isolation of one enzyme from the
complex, has advantages, since the final product can be used to produce a high-margin
product (for example, a pharmaceutical product or a reagent for scientific research). For this
purpose, it is important to have a simple and scalable method for the purification of a
specific enzyme. Notably, all the currently existing technologies for processing the crab
hepatopancreas do not meet the specified requirements. The main vector of development
in this field could be an approach including several stages of tangential flow filtration and
affinity chromatography using a cheap carrier.
All these works discussed in this review consider the processing of a specific type
of waste (carapace/hepatopancreas/fat). However, the waste is most often a mixture,
which is difficult to sort. To implement the principle of non-waste recycling, it is necessary
to develop new approaches to recycling this mixture, which will convert the waste into
new valuable products. The relevance of deep processing is provided by the sustainable
continual increase in catches of fisheries. On the one hand, a growth in catch leads to an
increase in waste, which might cause several environmental problems. On the other hand,
insufficient control of the catch will lead to a decrease in the crab population, which will
entail a sharp decline in the economic performance of the industry in the coming years.
Thus, all types of processing could reduce the environmental burden, as well as help satisfy
the financial appetites of the industry by selling new valuable products.
The main problem with the complex processing of wastes from commercial marine
species is the complexity of their collection and storage under sailing conditions on board
a trawler and delivery to coast or further processing. The solution of this problem could
be, for example, the creation of a maximally automated integrated waste processing unit
immediately on a catching vessel, which could eliminate the problem of the time spent
by fishers on the manual removal of an organ, as well as its storage and transportation.
Another method of solving this problem is to establish an adequate cost of the hepatopan-
creas for fishers, allowing a stable supply of raw materials onshore on an industrial scale.
The task could be simplified if the non-waste processing of live crabs is organized onshore.
Further studies of the hepatopancreas of commercial crab species in fundamental scientific
terms considering its potential applications will increase the value of crab processing waste,
possibly leading to a time when this will equal or even exceed the cost of crab meat.

5. Outlook
Despite a long period of scientific research, deep processing of crab has not been
launched yet. The main reason for this is laboratory protocols being not adapted to catch
conditions. Also these technologies should provide deep recycling based on the principle of
waste-free recycling taking into account financial benefits. It also requires financial support
for R&D projects to develop technologies for creating a new high-value products for an
industrial scale. The solution to the problem lies in close collaboration between scientists,
developers, and fishers. In our review, we discuss all these parties and hope that we touch
upon the interests of all the listed stakeholders in order to unite their efforts in the deep
processing of wastes from commercial crab species.

Author Contributions: T.P. and E.S. conceived of the presented idea, supervised the findings of this
work. E.S. designed the figures, and wrote the manuscript with support from T.P., M.T., M.F., and
S.L. S.L. developed the theoretical formalism, performed the analytic calculations and performed the
statistical data. M.T., M.F., and S.L. processed the literature data, performed the analysis. All authors
discussed the results and contributed to the final manuscript. All authors have read and agreed to
the published version of the manuscript.
Funding: This research received no external funding.
Institutional Review Board Statement: At the time of writing this review, no both human or another
living thing were harmed (i.e., did not participate in study).
Recycling 2021, 6, 3 12 of 15

Informed Consent Statement: At the time of writing this review, no both human or another living
thing were harmed (i.e., did not participate in study).
Data Availability Statement: Most of the data is available on internet platforms, some are available
only on paper.
Conflicts of Interest: The authors declare no conflict of interest. The funders had no role in the design
of the study; in the collection, analyses, or interpretation of data; in the writing of the manuscript,
or in the decision to publish the results.

References and Notes

1. Slizkin, A.; Safronov, S. Commercial crabs of Kamchatka waters. Petropavlovsk Kamchatskii Sev. Patsifika 2000, 180, 12.
2. Taxonomy Browser (Root)-NCBI-NIH. Available online: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi?
mode=Undef&id=6681&lvl=3&lin=f&keep=1&srchmode=1&unlock (accessed on 16 December 2020).
3. Tavares, M. True crabs. In FAO Species Identification Sheets for Fishery Purposes: Western Central Atlantic (Fishing Area 31);
FAO: Rome, Italy, 2003; pp. 327–352.
4. Garth, J.S.; Abbott, D.P. Brachyura: The True Crabs. In Intertidal Invertebrates of California; Stanford University Press:
Stanford, CA, USA, 1980; pp. 594–630.
5. Steneck, R.S. Functional Groups. In Encyclopedia of Biodiversity, 2nd ed.; Levin, S.A., Ed.; Academic Press: Waltham, MA, USA,
2001; pp. 609–623. [CrossRef]
6. Maksimova, S.; Poleschuk, D.; Surovtseva, E.; Vereshchagina, K.; Milovanov, A. King crab wastes potential as the technological
valuable raw materials. Food Ind. 2019, 4. [CrossRef]
7. Dvoretsky, A.G.; Dvoretsky, V.G. Red king crab (Paralithodes camtschaticus) fisheries in Russian waters: Historical review and
present status. Rev. Fish Biol. Fish. 2018, 28, 331–353. [CrossRef]
8. Matishov, G. Marine Ecosystems and Communities in the Conditions of Current Climate Changes; MMBI KSC RAS: St. Petersburg,
Russia, 2014.
9. Podkorytova, A.; Strokova, N.; Semikova, N. Complex processing of Kamchatka crab in the production of food products and
biologically active substances. Tr. VNIRO 2018, 172, 198–212. [CrossRef]
10. Nemtsev, S. Comprehensive Technology for Obtaining Chitin and Chitosan from Crustacean Shell; VNIRO: Moscow, Russia, 2006.
11. Šimat, V.; Elabed, N.; Kulawik, P.; Ceylan, Z.; Jamroz, E.; Yazgan, H.; Čagalj, M.; Regenstein, J.M.; Özogul, F. Recent Advances in
Marine-Based Nutraceuticals and Their Health Benefits. Mar. Drugs 2020, 18, 627. [CrossRef] [PubMed]
12. Nguyen, V.B.; Wang, S.L. Reclamation of marine chitinous materials for the production of α-glucosidase inhibitors via microbial
conversion. Mar. Drugs 2017, 15, 350. [CrossRef] [PubMed]
13. Nguyen, V.B.; Nguyen, D.N.; Nguyen, A.D.; Ngo, V.A.; Ton, T.Q.; Doan, C.T.; Pham, T.P.; Tran, T.P.H.; Wang, S.L. Utilization of
Crab Waste for Cost-Effective Bioproduction of Prodigiosin. Mar. Drugs 2020, 18, 523. [CrossRef]
14. Casadidio, C.; Peregrina, D.V.; Gigliobianco, M.R.; Deng, S.; Censi, R.; Di Martino, P. Chitin and chitosans: Characteristics,
eco-friendly processes, and applications in cosmetic science. Mar. Drugs 2019, 17, 369. [CrossRef]
15. Hulme, P.E. DAISIE (Delivering Alien Invasive Species Inventories for Europe). Handbook of Alien Species in Europe; Springer:
Dordrecht, The Netherlands, 2009.
16. Jørgensen, L.L. NOBANIS—Invasive Alien Species Fact Sheet—Paralithodes camtschaticus.—From: Online Database of the
European Network on Invasive Alien Species—NOBANIS www.nobanis.org. 2013. Available online: https://www.nobanis.org/
globalassets/speciesinfo/p/paralithodes-camtschatica/paralithodes_camtschaticus.pdf (accessed on 19 October 2020).
17. Gibson, R. The decapod hepatopancreas. Oceanogr. Mar. Biol. Ann. Rev. 1979, 17, 285–346.
18. Kas’janov, S.; Kuklev, D.; Kucheravenko, K.; Blinov, J.; Akulin, V. Method of Extracting Fat from Crab Liver. RU 2162648 C2, Filed
7 April 1999, and Issued 10 February 2001. Patent Holder Pacific Branch of VNIRO (TINRO).
19. Muranova, T.; Zinchenko, D.; Melanyina, L.; Miroshnikov, A. Hydrolysis of soybean proteins with Red king crab hepatopancreas
enzyme complex. Appl. Biochem. Microbiol. 2018, 54, 74–81. [CrossRef]
20. Sova, V. Method for Preparing Caviar from Salmon Species Fish. RU 2111681 C1, Filed 12 March 2003, and Issued 10 April 2004.
Patent Holder Sova, V.
21. Lyzhov, I.; Rysakova, K.; Mukhin, V.; Novikov, V.; Shironina, A. Applying of snow crab hepatopancreas for obtaining of protein
hydrolysates from cod filleting wastes. In Proceedings of the Biological Resources of the White Sea and Inland Waters of the
European North, Materials of the XXVIII International Conference, 5–8 October 2009, Petrozavodsk, Russia; pp. 337–340.
22. Mukhin, V.; Novikov, V. Enzymatic hydrolysis of proteins from crustaceans of the Barents Sea. Appl. Biochem. Microbiol.
2001, 37, 538–542. [CrossRef]
23. Novikov, V.; Portsel, M. Method of Producing Chondroitin Sulphate From Sea Hydrobiont Tissue. RU 2458134 C1, Filed 27
December 2010, and Issued 10 August 2012. Patent Holder POLAR Branch of VNIRO (PINRO).
24. Glyantsev, S.; Vishnevsky, A.; Adamyan, A.; Vishnevsky, A.; Sakharov, I. Crab collagenase in wound debridement. J. Wound Care
1997, 6, 13–16. [CrossRef] [PubMed]
25. Sakharov, I.; Glyanzev, S.; Litvin, F.; Savvina, T. Potent debriding ability of collagenolytic protease isolated from the hepatopan-
creas of the king crab Paralithodes camtschatica. Arch. Dermatol. Res. 1993, 285, 32–35. [CrossRef] [PubMed]
Recycling 2021, 6, 3 13 of 15

26. Rudenskaya, G. Brachyurins—Serine collagenolytic enzymes from crabs. Bioorg. Khim. 2003, 29, 117–128.
27. Belov, A.; Filatov, V.; Belova, E.; Filatov, N. Medical Bandage Containing Proteolytic Enzyme Complex Including Collagenolytic
Proteases from Crab Hepatopancreas. RU 2268751 C2, Filed 25 April 2003, and Issued 27 January 2006. Patent Holders Belov, A.;
Filatov, V.; Belova, E.; Filatov, N.
28. Belov, A.; Filatov, V.; Belova, E. A Medical Dressing Containing a Complex of Enzymes from the Hepatopancreas of a Crab, and a
Method for Its Production. RU 2323748 C2, Filed 21 February 2006, and Issued 10 May 2008. Patent Holders Belov, A.; Filatov, V.;
Belova, E.
29. Sova, V.; Strongyn, A.; Klimovava, O.; Stadnikov, V. A Collagenolytic Activity Exhibiting Enzyme Complex and the Method for
Isolation and Purification Thereof. EP 0402321 A1, Filed 8 June 1990, and Issued 12 December 1990, Patent Holder SEATEC.
30. Artjukov, A.; Sakharov, I. Method for Production of Collagenase. RU 2039819 C1, Filed 29 March 1990, and Issued 20 July 1995.
Patent holders Artjukov, A.; Sakharov, I.
31. Majorov, A.; Albulov, A.; Samujlenko, A. Method of Collagenase Preparing. RU 2112036 C1, Filed 9 October 1992, and Issued 27
May 1998. Patent Holders Majorov, A.; Albulov, A.; Samujlenko, A.
32. Pivnenko, T.; Zhdanjuk, V.; Ehpshtejn, L. Method of Preparing of Proteolytic Complex. RU 2034028 C1, Filed 7 February 1992,
and Issued 30 April 1995. Patent Holder “Tikhookeanskij nauchno-issledovatel’skij institut rybnogo khozjajstva i okeanografii”.
33. Artjukov, A.; Menzorova, N.; Kozlovskaja, E.; Kofanova, N.; Kozlovskij, A.; Rasskazov, V. Enzyme Preparation from Hep-
atopancreas of Commercial Crab Species and Method for Production of the Same. RU 2280076 C1, Filed 6 December 2004, and
Issued 20 July 2006. Patent Holder “Tikhookeanskij institut bioorganicheskoj khimii Dal’nevostochnogo otdelenija Rossijskoj
Akademii nauk”.
34. Kireev, V.; Titov, O.; Sheveleva, O. Method for Preparing Enzyme Preparation from Crab Hepatopancreas. RU 2285041 C1, Filed
14 April 2005, and Issued 10 October 2006. Patent Holder “FGUP Poljarnyj nauchno-issledovatel’skij institut morskogo rybnogo
khozjajstva i okeanografii im. N.M. Knipovicha (FGUP PINRO)”.
35. Stadnikov, V.; Erkhov, S. Method of Preparing Enzyme Preparation Showing Collagenolytic Activity. RU 2096456 C1, Filed 10
November 1996, and Issued 20 November 1997. Patent Holders Stadnikov, V.; Erkhov, S.
36. Erkhov, S. Biologically Active Substance, Raw Material and Method of Its Preparing. RU 2132876 C1, Filed 13 October 1998, and
Issued 10 July 1999. Patent Holder Erkhov, S.
37. Sakharov, I.; Artyukov, A.; Berezin, V. Method of Purification of Collagenase. SU 1699350 A3, filed 29 March 1990, and issued 15
December 1991.
38. Isaev, V.; Rudenskaja, G.; Kupenko, O.; Stepanov, V.; Popova, I.; Didenko, J. Method of Collagenase Preparation Producing.
RU 2008353 C1, Filed 5 August 1991 and Issued 28 February 1994. Patent Holder “NAUCHNO-PROIZVODSTVENNOE
PREDPRIJATIE “TRINITA””.
39. Sandakhchiev, L.; Danilov, A.; Malygin, E.; Zinov’ev, V.; Ovechkina, L.; Zakabunin, A.; Mistjurin, J. Method of Collase Purification.
RU 2121503 C1, Filed 5 Spetember 1996, and Issued 10 November 1998. Patent Holder “Gosudarstvennyj nauchnyj tsentr
virusologii i biotekhnologii “Vektor””.
40. Isaev, V.; Rudenskaja, G.; Shmojlov, A. Method for Preparing Collagenase Preparation. RU 2225441 C1, Filed 5 March 2003, and
Issued 10 March 2004. Patent Holder “Zakrytoe aktsionernoe obshchestvo Nauchno-proizvodstvennoe predprijatie “Trinita””.
41. Sakharov, I.; Dzhunkovskaya, A.; Artyukov, A.; Sova, V.; Sakandelidze, O.; Kozlovskaya, E. Method of Producing Collagenase.
SU 1343591 A1, Filed 13 December 1985, and Issued 30 April 1992.
42. Klimova, O.; Chebotarev, V. Collagenolytic complex of proteases from the hepatopancreas of the Kamchatka crab: Enzymologic ac-
tivity of the individual components. Biulleten’eksperimental’noi Biologii I Meditsiny 1999, 128, 391–396. [CrossRef]
43. Štancl, J.; Skočilas, J.; Landfeld, A.; Žitnỳ, R.; Houška, M. Electrical and thermodynamic properties of a collagen solution.
Acta Polytech. 2017, 57, 229–234. [CrossRef]
44. Rudenskaia, G.; Isaev, V.; Stepanov, V.; Dunaevskii, I.; Baratova, L.; Kalebina, T.; Nurminskaia, M. Isolation and properties of serine
PC proteinase from the Kamchatka crab, Paralithodes camtschatica—A proteolytic enzyme with broad specificity. Biochem. Mosc.
1996, 61, 1119.
45. Rudenskaya, G.N.; Kislitsin, Y.A.; Rebrikov, D.V. Collagenolytic serine protease PC and trypsin PC from king crab Paralithodes
camtschaticus: CDNA cloning and primary structure of the enzymes. BMC Struct. Biol. 2004, 4, 2. [CrossRef]
46. Papisova, A.; Semenova, S.; Kislitsyn, Y.; Rudenskaya, G. Peculiarities of substrate hydrolysis by endopeptidases from hep-
atopancreas of king crab. Russ. J. Bioorg. Chem. 2008, 34, 428–434. [CrossRef]
47. Semenova, S.; Rudenskaya, G.; Lyutova, L.; Nikitina, O. Isolation and properties of collagenolytic serine proteinase isoenzyme
from king crab Paralithodes camtschatica. Biochem. Mos. 2008, 73, 1125–1133. [CrossRef] [PubMed]
48. Sakharov, I.; Litvin, F.; Artyukov, A.; Kofanova, N. Purification and characterization of collagenolytic protease from the Paralithodes
camtschatica hepatopancreas. Biochem. Mos. 1988, 53, 1844–1849.
49. Sakharov, I.Y.; Litvin, F.E.; Artyukov, A.A. Purification and characterization of two serine collagenolytic proteases from crab
Paralithodes camtschatica. Comp. Biochem. Physiol. Part B Comp. Biochem. 1994, 108, 561–568. [CrossRef]
50. Sakharov, I.Y.; Litvin, F.E.; Artyukov, A.A. Some physico-chemical properties of collagenolytic protease C of the crab (Paralithodes
camtschatica). Biochem. Mosc. 1992, 57, 40––45.
51. Rudenskaya, G.; Shmoilov, A.; Isaev, V.; Ksenofontov, A.; Shvets, S. Aminopeptidase PC from the hepatopancreas of the Kamchatka
crab Paralithodes camtschatica. Biochem. Mos. 2000, 65, 164–170.
Recycling 2021, 6, 3 14 of 15

52. Rudenskaia, G.; Kupenko, O.; Isaev, V.; Stepanov, V.; Dunaevskii, I. Isolation and properties of carboxypeptidase from the
Kamchatka crab Paralithodes camtshatica. Russ. J. Bioorg. Chem. 1995, 21, 249–255.
53. Rudenskaia, G.; Isaev, V.; Kalebina, T.; Stepanov, V.; Maltsev, K.; Shvets, S.; Lukianova, N.; Kislitsin, I.; Miroshnikov, A. Isolation
of trypsin PC from the Kamchatka crab Paralithodes camtschatica and its properties. Russ. J. Bioorg. Chem. 1998, 24, 112–118.
54. Kislitsyn, I.; Rebrikov, D.; Dunaevskii, I.; Rudenskaia, G. Isolation and primary structure of trypsin from the red king crab
Paralithodes camtschaticus. Russ. J. Bioorg. Chem. 2003, 29, 269–276. [CrossRef]
55. Dzhunkovskaia, A.; Zakharova, N. Pancreatic elastase is a new serine protease isolated from the hepatopancreas of the king crab.
In Proceedings of the Abstracts of the All-Union Meeting Biologically Active Substances of Aquatic Organisms—New Medicinal,
Therapeutic and Prophylactic and Technical Preparations, Vladivostok, Russia, 23–27 September 1991; p. 8.
56. Sakharov, I.; Dzhunkovkaia, A. Elastase from the hepatopancreas of the king crab. Biochem. Mos. 1993, 58, 1445–1453.
57. Sakharov, I.Y.; Dzunkovskaya, A.V.; Artyukov, A.A.; Zakharova, N.N. Purification and some properties of elastase from
hepatopancreas of king crab Paralithodes camtschatica. Comp. Biochem. Physiol. Part B Comp. Biochem. 1993, 106, 681–684. [CrossRef]
58. Isaev, V.; Balashova MV, S.D.; Shagin, D.; Shagina, I.; Eremeev, N.; Rudenskaya, G. New psychrophilic cathepsin L from the
hepatopancreas of the red king crab (Paralithodes camtschaticus). Sci. Rev. Biol. Sci. 2016, 6, 81–89.
59. Semenova, S.A.; Rudenskaya, G.N.; Rebrikov, D.V.; Isaev, V.A. cDNA cloning, purification and properties of Paralithodes
camtschatica metalloprotease. Protein Pept. Lett. 2006, 13, 571–575. [CrossRef] [PubMed]
60. Menzorova, N.; Markova, A.; Rasskazov, V. Highly stable Ca2+ , Mg2+ -dependent DNAase from crab hepatopancreas.
Biochem. Mos. 1994, 59, 449–456.
61. Vakorina, T.; Menzorova, N.; Rasskazov, V. Study of conformational stability of DNAse from hepatopancreas of the crab
Paralithodes camtschatica. Biochem. Mos. 1997, 62, 1642–1647.
62. Anisimova, V.E.; Rebrikov, D.V.; Shagin, D.A.; Kozhemyako, V.B.; Menzorova, N.I.; Staroverov, D.B.; Ziganshin, R.; Vagner, L.L.;
Rasskazov, V.A.; Lukyanov, S.A.; et al. Isolation, characterization and molecular cloning of duplex-specific nuclease from the
hepatopancreas of the Kamchatka crab. BMC Biochem. 2008, 9, 14. [CrossRef]
63. Shagin, D.A.; Rebrikov, D.V.; Kozhemyako, V.B.; Altshuler, I.M.; Shcheglov, A.S.; Zhulidov, P.A.; Bogdanova, E.A.; Staroverov, D.B.;
Rasskazov, V.A.; Lukyanov, S. A novel method for SNP detection using a new duplex-specific nuclease from crab hepatopancreas.
Genome Res. 2002, 12, 1935–1942. [CrossRef]
64. Zhulidov, P.A.; Bogdanova, E.A.; Shcheglov, A.S.; Vagner, L.L.; Khaspekov, G.L.; Kozhemyako, V.B.; Matz, M.V.; Meleshkevitch,
E.; Moroz, L.L.; Lukyanov, S.A. Simple cDNA normalization using kamchatka crab duplex-specific nuclease. Nucleic Acids Res.
2004, 32, e37. [CrossRef]
65. Lukyanov, S.A.; Rebrikov, D.V.; Shagin, D.A. Methods and Compositions for Selectively Cleaving Dna Containing Duplex
Nucleic Acids in a Complex Nucleic Acid Mixture, and Nuclease Compositions for Use in Practicing the Same. US 7435794 B2,
Filed 5 December 2004, and Issued 14 October 2008.
66. Shagina, I.; Bogdanova, E.; Al’tshuler, I.; Luk’ianov, S.; Shagin, D. Application of the duplex-specific nuclease for fast analysis of
single nucleotide polymorphisms and detection of target DNA in complex PCR products. Bioorg. Khim. 2011, 37, 522–529.
67. Menzorova, N.I.; Sibirtsev, J.T.; Rasskazov, V.A. Ribonuclease from the Hepatopancreas of the Red King Crab Paralithodes
camtschatica. Appl. Biochem. Microbiol. 2009, 45, 369–373. [CrossRef]
68. Menzorova, N.; Ivleva, A.; Sibirtsev, Y.T.; Rasskazov, V. Phosphatases and phosphodiesterases isolated from the red king crab
(Paralithodes camtschatica) hepatopancreas. Appl. Biochem. Microbiol. 2008, 44, 93–97. [CrossRef]
69. Novikov, V.; Mukhin, V. Chitosan Depolymerization by Enzymes from the Hepatopancreas of the Crab Paralithodes camtschaticus.
Appl. Biochem. Microbiol. 2003, 39, 464–468. [CrossRef]
70. Novikov, V.; Mukhin, V.; Rysakova, K. Properties of chitinolytic enzymes from the hepatopancreas of the red king crab (Paralithodes
camtschaticus). Appl. Biochem. Microbiol. 2007, 43, 159–163. [CrossRef]
71. Rysakova, K.; Novikov, V.; Mukhin, V.; Serafimchik, E. Glycolytic activity of enzyme preparation from the red king crab
(Paralithodes camtschaticus) hepatopancreas. Appl. Biochem. Microbiol. 2008, 44, 281–286. [CrossRef]
72. Turkovski, I.; Paramonov, B.; Antonov, S.; Kozlov, D.; Klimova, O.; Pomorski, K. Comparative evaluation of the depth of collagen
and hyaluronic acid hydrolysis in vitro by collagenase and hyaluronidase preparations. Bull. Exp. Biol. Med. 2008, 146, 89–90.
[CrossRef]
73. Ponomareva, T.; Sliadovskii, D.; Timchenko, M.; Molchanov, M.; Timchenko, A.; Sogorin, E. The effect of hepatopancreas
homogenate of the Red king crab on HA-based filler. PeerJ 2020, 8, e8579. [CrossRef]
74. Balashova, M.; Liutova, L.; Rudenskaia, I.; Isaev, V.; Andina, S.; Kozlov, L.; Rudenskaia, G. Anticoagulative and anticomple-
mentary activity of endogenous inhibitor preparation from hepatopancreas of red king crab (Paralithosed camtschaticus) towards
human blood. Biomed. Khim. 2012, 58, 176–188. [CrossRef]
75. Isaev, V.; Rudenskaya, G.; Rudenskaya, Y.; Lyutova, L.; Balashova, M. Method for Producing a Collagenase Inhibitor with
Anticoagulative Action from the King Crab Hepatopancreas. RU 2403284 C1, Filed 25 January 2009, and Issued 10 November
2010. Patent Holder “Zakrytoe Aktsionernoe Obshchestvo Nauchno-proizvodstvennoe predprijatie “TRINITA””.
76. Isaev, V.; Rudenskaja, G.; Kostin, N.; Sergeeva, E.; Statsenko, I.; Kolesnikova, T. Method of Production of Recombinant Serine
Protease Inhibitor of King Crab. RU 2560264 C1, Filed 17 April 2014, and Issued 20 August 2015. Patent Holder “Obshchestvo s
ogranichennoj otvetstvennost’ju Nauchno-proizvodstvennoe predprijatie “TRINITA” (OOO NPP “TRINITA”)”.
77. Zikeeva, B. Processing of Water Non-Fish Raw Materials; Pishchepromizda: Moscow, Russia, 1950; p. 277.
Recycling 2021, 6, 3 15 of 15

78. Boeva, N.; Petrova, M.; Makarova, A. Production Method of Crab Fat. RU 2390274 C1, Filed 18 December 2008, and Issued 27
May 2010. Patent Holder “FGUP “Vserossijskij nauchno-issledovatel’skij institut rybnogo khozjajstva i okeanografii” (VNIRO)”.
79. Klimova, O.; Borukhov, S.; Solovyeva, N.; Balaevskaya, T.; Strongin, A. The isolation and properties of collagenolytic proteases
from crab hepatopancreas. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990, 166, 1411–1420. [CrossRef]
80. Klimova, O.; Vedishcheva, I.; Strongin, A. Isolation and characteristics of collagenolytic enzymes from the hepatopancreas of the
crab Chionoecetes opilio. Dokl. Akad. Nauk SSSR 1991, 317, 482.
81. Shkuratova, E.; Shokina, Y.; Mukhin, V. Development of technology for gourmet smoked products from cod species using
enzyme preparation from hepatopancreas of snow crab Chionoecetes opilio. Proc. Voronezh State Univ. Eng. Technol. 2017, 79,
126–137. [CrossRef]
82. The Food and Agriculture Organization (FAO). Fishery and Aquaculture Statistics: B-44. Available online: http://www.fao.org/
fishery/static/Yearbook/YB2017_USBcard/root/capture/b44.pdf (accessed on 5 May 2020).
83. National Oceanic and Atmospheric Administration (NOAA). Fisheries Catch and Landings Reports: BSAI Crab. Available online:
https://www.fisheries.noaa.gov/alaska/commercial-fishing/fisheries-catch-and-landings-reports (accessed on 5 May 2020).
84. The Food and Agriculture Organization (FAO). Fishery and Aquaculture Statistics: B-42. Available online: http://www.fao.org/
fishery/static/Yearbook/YB2017_USBcard/root/capture/b42.pdf (accessed on 5 May 2020).
Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.com
mendaur ulang
Tinjauan
Prospek Pengolahan Hepatopankreas Kepiting Raja
Merah: Biokimia Dasar dan Terapan
Tatyana Ponomareva, Maria Timchenko , Michael Filippov, Sergey Lapaev dan Evgeny Sogorin *
----
---
Kutipan: Ponomareva, T.; Timchenko,
M.; Filippov, M.; Lapaev, S.; Sogorin,
E. Prospek Pengolahan
Hepatopankreas Kepiting Raja
Merah: Biokimia Dasar dan
Terapan. Mendaur ulang 2021, 6,
3. https://dx.doi.org/10.3390/
recycling6010003
Editor Akademik: Leonel Nunes
Diterima: 19 Oktober 2020
Diterima: 29 Desember 2020
Diterbitkan: 2 Januari 2021
Catatan Penerbit: MDPI tetap netral
sehubungan dengan klaim yurisdiksi
dalam peta yang diterbitkan dan afiliasi
institusional.
Hak cipta: © 2021 oleh penulis.
Penerima Lisensi MDPI, Basel, Swiss.
Artikel ini adalah artikel akses
terbuka yang didistribusikan di
bawah syarat dan ketentuan lisensi
Creative Commons Attribution (CC
BY) (https:// creativecommons.org/
licenses/by/ 4.0/).
Mendaur ulang 2021, 6, 3. https://doi.org/10.3390/recycling6010003
Pusat Penelitian Federal "Pushchino Scientific Center for Biological Research of RAS", 142290 Pushchino,
Rusia; tatyanap91875@gmail.com (TP); matimchenko@gmail.com (MT); filippmv@gmail.com (MF);
a3t1v4i1n5@gmail.com (SL)
* Korespondensi: evgenysogorin@gmail.com ; Tel.: +7-915-132-5419
Abstrak: Sejak awal 1980-an, sejumlah besar penelitian tentang enzim dari hepatopankreas kepiting raja merah
telah dilakukan. Mereka relevan baik dari sudut pandang fundamental dalam hal mempelajari enzim organisme
laut dan dalam hal pengelolaan sumber daya alam yang rasional yang bertujuan untuk mendapatkan produk
baru yang berharga dari pengolahan limbah penangkapan kepiting. Sebagian besar karya ini dilakukan oleh
ilmuwan Rusia karena luas dan jumlah limbah pengolahan kepiting raja merah di Rusia (atau Uni Soviet).
Namun, kekerabatan filogenetik yang dekat dan relung ekologi yang serupa dari spesies kepiting komersial dan
skala produksi tangkapan memberikan dasar bagi keberhasilan transfer pengalaman dalam pemrosesan
hepatopankreas kepiting raja merah ke spesies kepiting komersial lainnya yang ditangkap di seluruh dunia.
Tinjauan ini menjelaskan nilai spesies kepiting komersial daur ulang, membahas masalah pemrosesan, dan
menyarankan solusi yang mungkin untuk masalah ini. Penekanan utama dibuat pada enzim hepatopankreas
sebagai produk paling menyehatkan dari pengolahan limbah kepiting raja merah.
Kata kunci: spesies kepiting komersial; kepiting raja merah; pengolahan limbah; hepatopankreas; protease;
hyaluronidase
1. Perkenalan
Pertumbuhan global dalam permintaan konsumen untuk produk makanan berbasis spesies
komersial organisme laut (ikan, kepiting, cumi-cumi, dll) telah mendorong nelayan untuk meningkatkan
produksi. Namun, ketidakmampuan untuk meningkatkan volume tangkapan tanpa henti dan masalah
daur ulang limbah terkait telah mengedepankan pertimbangan pemrosesan lanjutan bahan baku
sekunder untuk mendapatkan produk baru yang bernilai komersial. Kepiting adalah tangkapan favorit
para nelayan di seluruh dunia karena harga dagingnya yang mahal. Spesies komersial utama kepiting
utara meliputi: Kepiting raja merah (Paralithodes camtschaticus), kepiting raja biru (Platipus Paralithodes
), Kepiting raja coklat berduri (Singkatan Paralithodes), Kepiting raja emas (Lithodes aequispinu), kepiting
salju Opilio (Chionoecetes opilio), Kepiting salju penyamak (Chionoecetes bairdi), kepiting penyamak
segitiga (Chionoecetes angulatus), kepiting salju merah (Chionoecetes japonicus), kepiting sarung tangan
Cina (Eriocheir sinensis), Kepiting rambut (Erimacrus isenbeckii) [1]. Empat spesies pertama termasuk
dalam infraordo kepiting setengah ekor atau kepiting palsu (Anomura) dari subordo Pleocyemata, ordo
Decapoda. Sisanya milik infraorder kepiting sejati (Brachyura) (Gambar1) [2].
Semua kepiting memiliki cephalothorax besar yang ditutupi dengan karapas dari atas, perut
rata, dan membungkuk di bawah cephalothorax. Perwakilan Brachyura bergerak dengan bantuan
empat pasang kaki dada, dan pasangan kelima adalah cakar. Fitur khusus dari Anomura adalah
struktur tubuh yang asimetris (cakar kanan lebih besar dari kiri) dan hanya ada tiga pasang kaki
berjalan (salah satu dari lima pasang tersembunyi di bawah karapas dan digunakan untuk berjalan
biasa). pembersihan insang) [1,3-5].
https://www.mdpi.com/journal/recycling
Mendaur ulang 2021, 6, 3 2 dari 15

Armadillidium vulgare, Armadillidium nasatum

memesan

isopoda

kelas
Malako-
jejak
memesan subordo Den- Litopenaeus vannamei
Dekapoda drobranchiata

subordo
Pleocyemata

infraorder infraorder keluarga

Scylla olivacea
Anomura Brachyura Portunidae

Paralithodes camtschat-
ica, P. platipus,
P. brevipes,
Litoda
aequispinu keluarga Majidae

Chionoecetes
opilio

Gambar 1. Filogeni dari beberapa anggota kelas Malacostraca. Spesies dengan struktur utama
hyaluronidases yang diketahui digarisbawahi (lihat Bagian3.4.3).

Kepiting raja merah, atau kepiting Kamchatka, terkenal di seluruh dunia. Dalam beberapa
dekade terakhir, tangkapan kepiting ini oleh nelayan Rusia telah mencapai 15.000–20.000 ton per
tahun. Habitat asli kepiting raja merah berkisar dari Pulau Karaginsky (Rusia) di lepas pantai timur
Kamchatka dan Teluk Shelikhov (Rusia) di Laut Okhotsk hingga Pulau Hokkaido (Jepang) dan Selat
Korea (antara Korea dan Jepang). Kepiting juga ditemukan di pantai barat Amerika Utara dari Cape
Barrow hingga Kepulauan Ratu Charlotte di selatan [1,6].
Kepiting raja merah berhasil diperkenalkan ke Laut Barents pada tahun 1960-an dan 1970-an.
Kondisi suhu yang optimal, tidak adanya predator alami, dan jumlah makanan yang cukup menyebabkan
penyebaran kepiting raja merah yang diaklimatisasi dari pantai Semenanjung Kola ke Norwegia dan
utara ke Svalbard (Gambar2). Individu dari populasi kepiting raja ini lebih besar, tumbuh lebih cepat, dan
matang lebih awal daripada individu dari populasi timur jauh [7]. Pesatnya pertumbuhan populasi
kepiting raja utara merupakan masalah lingkungan [7,8]. Tingkat pertumbuhan potensi sumber daya
populasi ini memungkinkan untuk membuka penangkapan ikan komersial di Norwegia pada tahun 2002
dan di Rusia pada tahun 2004.
Mendaur ulang 2021, 6, 3 3 dari 15

Kepiting raja merah asli dan distribusi invasif

Amerika Serikat

KANADA

FEDERASI RUSIA

Invasi ke perairan Norwegia

Barents
Laut

Nordcapp

Nesseby

Skjervøy
Distribusi kepiting raja merah

2001 NORWAY
2000
NORWAY Warga asli
SWEDIA
1999 Murmansk Invasif
1995-97
1992 Perbatasan zona ekonomi
Sumber: Mengirimkan Inventori Spesies
1990 eksklusif antara Norwegia dan Sumber: digambar ulang dari

Federasi Rusia Jørgensen, LL, 2006. Invasif Alien untuk Eropa, 2009; Jørgensen,
1961-69
LL, NOBANIS, 2006 .

Gambar 2. Kepiting raja merah asli dan distribusi invasif.

Di Rusia, tangkapan kepiting sering langsung diproses di atas kapal. Salah satu cara
pengolahan rajungan di atas kapal adalah sebagai berikut: rajungan yang baru ditangkap
digantungkan pada mata kail; anggota badan juga dibersihkan, direbus, dan dibekukan; dan
karapas yang pecah beserta isi perutnya langsung dibuang ke laut sebagai produk limbah. Rata-
rata, limbah ini dapat mencapai 50% dari massa tangkapan [9,10]. Fraksi massa karapas dari
limbah ini sekitar 60%; sisanya terdiri dari isi perut (termasuk organ pencernaan, hepatopankreas)
[6]. Dari segi kandungan protein, limbah ini identik dengan daging kepiting, bahkan lebih unggul
dari segi kandungan mineral, lipid, dan karbohidrat. Tepung kepiting yang digunakan sebagai
pakan ternak dapat diperoleh dari limbah pengolahan kepiting. Selain itu, cangkang kepiting
merupakan sumber bahan baku yang sangat baik untuk produksi kitin dan kitosan, yang dapat
digunakan untuk memenuhi kebutuhan industri makanan dan obat-obatan [10]. Kitin, kitosan, dan
turunannya merupakan matriks yang menjanjikan untuk pengembangan biomaterial baru dengan
aktivitas antioksidan, bakterisida, hipotensi, antialergi, antiinflamasi, dan antitumor.11]. Baru-baru
ini, cangkang kepiting juga telah digunakan untuk produksiα-glucosidase inhibitor dan prodigiosin
agen antikanker melalui fermentasi mikroba [12,13]. Karena sifat khasnya seperti nontoksisitas,
biokompatibilitas, dan biodegradabilitas, kitin dan kitosan digunakan sebagai eksipien potensial
dan sebagai agen aktif biologis dalam tata rias.14].
Fokus utama dari tinjauan ini adalah pada penelitian dan penggunaan kompleks enzim hepatopankreas
kepiting karena minat industri yang kuat pada sumber enzim ini. Rusia adalah pemimpin dalam penangkapan
objek memancing ini. Hal ini tercermin dari banyaknya penelitian tentang pengolahan limbah ini oleh para
ilmuwan Rusia. Sebagian besar karya-karya ini hanya diterbitkan dalam bahasa Rusia, yang secara signifikan
membatasi ketersediaan informasi tentang hasil penelitian dan pengembangan tersebut bagi masyarakat
dunia. Tujuan dari tinjauan ini adalah untuk memecahkan masalah ini.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

Tinjauan telah didekati secara sistematis berdasarkan database elektronik termasuk Scopus,
Web of Science, Google Scholar. Sebagian besar sumber adalah artikel dari jurnal yang sangat
terspesialisasi tanpa terjemahan dan abstrak simposium regional dan konferensi yang
berspesialisasi dalam sumber daya air Rusia (Uni Soviet), yang tidak tersedia dalam bentuk
elektronik.
Mendaur ulang 2021, 6, 3 4 dari 15

Gambar “Distribusi asli dan invasif kepiting raja merah” disediakan dengan murah
hati oleh GRID-Arendal (pusat komunikasi lingkungan nirlaba yang berbasis di
Norwegia). Item grafis ini dapat direproduksi dalam bentuk apa pun untuk tujuan
pendidikan atau nirlaba tanpa izin khusus dari GRID-Arendal, asalkan menyebutkan
sumbernya [15,16].
Bab “Teknologi untuk pengolahan hepatopankreas” menyajikan teknologi yang
dipatenkan untuk pengolahan limbah dari kepiting raja merah dan kepiting komersial lain
yang terkait erat. Informasi ini sesuai dengan studi tingkat teknis penelitian paten tentang
topik ini.
Data eksperimen dari artikel penelitian digunakan untuk menyusun tabel. Antara
lain, massa molekul protein yang diteliti dan metode yang digunakan dalam karya ini
ditunjukkan. Tabel menunjukkan penyebaran data ini dari karya yang berbeda untuk
menunjukkan pengukuran oleh peneliti yang berbeda. Berat molekul yang benar harus
diperkirakan dengan hasil spektrometri massa dan interpretasi hasil perhitungan untuk
urutan asam amino protein.

3. Hasil
3.1. Hepatopankreas kepiting

Hepatopankreas merupakan organ sistem pencernaan yang berfungsi baik sebagai hati
maupun pankreas.17]. Pada kepiting raja merah, hepatopankreas membentuk sekitar 90%
dari usus karapas dan 5-10% dari total berat hewan.18]. Hepatopankreas Decapoda
mengeluarkan berbagai macam enzim yang sangat aktif.
Di bawah aksi enzim pencernaan hepatopankreas, makanan dipecah menjadi zat yang
mudah dicerna. Hepatopankreas kepiting dari keluarga Lithodidae (infraorder Anomura,
misalnya, kepiting raja merah) terdiri dari massa coklat dari tubulus hati rapuh yang mengisi
bagian utama rongga tubuh. Integritas tubulus ini mudah dihancurkan, bahkan dengan
sedikit tindakan mekanis, dan enzim memasuki rongga tubuh, di mana mereka memulai
proses autolisis. Hepatopankreas kepiting sejati (Brachyura, misalnya, kepiting opilio) adalah
massa oranye-coklat tak berbentuk [1].

3.2. Penggunaan Enzim Hepatopankreatik Kepiting Raja Merah

Hepatopankreas dari sistem pencernaan kepiting komersial merupakan sumber

berharga dari kompleks enzim dengan berbagai aktivitas: kolagenase, protease,
hyaluronidase, lipase, nuklease, dll. Kompleks enzim proteolitik hepatopankreas kepiting raja
merah menarik di berbagai industri. Misalnya, prospek menggunakan persiapan enzim
hepatopankreas dalam hidrolisis protein kedelai baru-baru ini disorot.19]. Persiapan enzim
hepatopankreas kepiting raja merah berhasil digunakan untuk memisahkan telur dari
jaringan ikat ovarium ikan komersial [20], untuk menghidrolisis daging ikan cincang untuk
mendapatkan bahan makanan diet [21], untuk menghidrolisis produk limbah pengolahan
krustasea untuk mendapatkan komponen media nutrisi mikrobiologis [22], dan untuk
mengisolasi kondroitin sulfat dari limbah laut, yaitu dari jaringan organisme laut [23].
Berdasarkan proteinase kolagenolitik, penyembuhan luka dan persiapan pembersihan luka [
24-26], termasuk pembalut luka [27,28], telah dirancang.

3.3. Teknologi Daur Ulang Hepatopankreas

Banyak teknologi yang digunakan untuk memproses hepatopankreas spesies kepiting
komersial untuk mendapatkan sediaan enzimatik. Sebagian besar teknologi dikembangkan untuk
hepatopankreas kepiting raja merah, tetapi beberapa ditransfer ke pengolahan hepatopankreas
dari spesies komersial lainnya (misalnya, kepiting salju dan kepiting biru) [29,30]. Paling sering,
bahan baku awal adalah hepatopankreas (Gambar3), yang dihomogenisasi dalam buffer garam
atau dengan kejutan osmotik di bawah kondisi hipotonik (kelebihan air suling). Integritas jaringan
hepatopankreas mudah rusak selama proses pembekuan/pencairan; oleh karena itu, tidak ada
upaya yang cukup besar yang diperlukan untuk homogenisasi mekanis. Namun, dalam beberapa
kasus, pabrik koloid dapat digunakan [31]. Terkadang, triton X-100 atau sodium
Mendaur ulang 2021, 6, 3 5 dari 15

dodesil sulfat (SDS) ditambahkan ke buffer homogenisasi [29,32]. Homogenat diinkubasi pada
suhu kamar selama beberapa jam. Dalam kondisi seperti itu, autolisis sel terjadi, yang
meningkatkan tingkat ekstraksi protein; Namun, ini dapat menyebabkan inaktivasi enzim target.
Masalah yang signifikan dalam pengolahan lebih lanjut disebabkan oleh lipid. Zat pemberat dan
lipid dikeluarkan dari homogenat dengan sentrifugasi atau flokulasi diikuti dengan filtrasi kitosan.
30-34] atau segera dengan penyaringan melalui serat berongga [35,36]. Filtrat dipekatkan dengan
ultrafiltrasi melalui serat berlubang dengan ukuran pori 15–30 kDa kemudian dikeringkan dengan
metode freeze-drying atau spray-drying. Pemilihan serat berongga dengan ukuran pori tertentu
(dengan mempertimbangkan variasi ukuran pori sebenarnya) harus didasarkan pada berat
molekul yang diketahui dari enzim target. Untuk mendapatkan preparat yang lebih murni sebelum
pengeringan, protein diendapkan dengan amonium sulfat dan/atau tert-butanol, dan kemudian
dilakukan pertukaran ion, hidrofobik, atau kromatografi afinitas.37-40]. Dalam kasus yang paling
sederhana, setelah homogenisasi, protein diendapkan dengan kelebihan aseton yang didinginkan
(“bubuk aseton”) [41]. Metode ini tidak cocok untuk upscaling, karena penggunaan aseton dalam
jumlah besar tidak aman bagi manusia dan lingkungan. Sebagian besar teknologi yang
dikembangkan telah berhasil diuji pada puluhan dan ratusan kilogram hepatopankreas sebagai
bahan baku.29-31,33-36]. Hasil bahan akhir kering dalam protokol tersebut bervariasi dari 0,6
hingga 1,3% berdasarkan bahan baku [33-36], dan aktivitas kolagenolitik adalah 500–3000 unit
Mandl/mg (substratnya adalah kolagen tipe I, pada suhu 37 ◦C) [35,36], bahkan mencapai 11.000
Mandl/mg (substratnya adalah kolagen tipe III, pada 42 ◦C) [29], sedangkan jumlah protein dalam
bahan kering adalah 80-98% [29,33,35,36].
Kondisi dasar untuk enzim yang diperoleh dengan teknologi tersebut meliputi
pemeliharaan pH netral dari larutan enzim; pada nilai pH di bawah 5,5 dan di atas 9,5,
aktivitas kompleks proteolitik dan komponen individualnya menurun drastis. Pada nilai
pH di bawah 3 dan di atas 10,5, bagian-bagian enzim menjadi tidak aktif secara
ireversibel.33,42].

Gambar 3. Konsep pemrosesan hepatopankreas.

Mendaur ulang 2021, 6, 3 6 dari 15

3.4. Enzim Hepatopankreas Kepiting Raja Merah

3.4.1. Enzim Proteolitik
Saat ini, 10 enzim proteolitik hepatopankreas—kolagenolitik serin proteinase PC (PC—
Paralithodes camtschaticus), collagenolytic serin proteinase PC 2, trypsin-like proteinase A,
chymotrypsin-like proteinase C, aminopeptidase PC, carboxypeptidase PC, trypsin PC,
elastase, cathepsin L, dan metalloproteinase—dijelaskan dalam literatur secara rinci (Tabel 1).
Sebagian besar adalah protein kecil hingga 30 kDa (berdasarkan data elektroforesis gel
denaturasi) dengan titik isoelektrik (pI) 2,5-4,4. Kondisi operasi optimal untuk enzim ini
termasuk pH netral dan kisaran suhu dari 25 hingga 55◦C. Proteinase serin kolagenolitik
sangat menarik karena kemampuannya untuk mendegradasi kolagen asli tipe I-III.
Kemungkinan besar, kedua enzim ini merupakan dasar dari zat aktif dalam penyembuhan
luka dan persiapan pembersihan luka yang ada. Aktivitas kolagenolitik juga telah ditetapkan
untuk proteinase hepatopankreas lainnya. Namun, suhu campuran reaksi dalam penelitian
ini sering kali 42◦C, di mana kolagen asli terdenaturasi sebagian [43]; oleh karena itu, aktivitas
yang diukur mungkin tidak merujuk pada kolagenase sejati tetapi aktivitas gelatinase.
Meskipun sejumlah besar karya ilmiah dikhususkan untuk enzim hepatopankreas, urutan
nukleotida lengkap mRNA hanya diketahui untuk kolagenolitik serin proteinase PC, tripsin PC,
cathepsin L, dan metalloproteinase (Tabel1).

Tabel 1. Enzim proteolitik hepatopankreas. 1 berat molekul yang diharapkan berdasarkan urutan nukleotida mRNA,
2 data spektrometri massa. komputer—Paralithodes camtschaticus.

kDa (Berdasarkan Memilih. Memilih.

Proteinase ◦C pI Spesifisitas Substrat dan Lainnya
Elektroforesis) pH
Lebih disukai menghidrolisis ikatan
peptida, karbonil yang dibentuk oleh
Arg, Lys, dan asam amino hidrofobik.
Menghidrolisis kolagen asli tipe I
29
Kolagenolitik serin bahkan pada suhu 4◦C [46]. Urutan
23.5 1 [45] 7.5 47–55 3
proteinase PC [44] nukleotida mRNA ditentukan [45],
Basis Data Urutan Nukleotida
Laboratorium Biologi Molekuler
Eropa (EMBL): AF461035.

Lebih disukai menghidrolisis ikatan

peptida, karbonil yang dibentuk oleh
Kolagenolitik serin
25 8.5 38–40 ? asam amino bermuatan positif.
proteinase PC2 [47]
Menghidrolisis kolagen asli tipe I-III.

Lebih disukai menghidrolisis ikatan

peptida, karbonil yang dibentuk oleh Arg
27 dan Lys. Aktivitas proteolitik tidak
Seperti tripsin
30 [49] 7.9 55 [49] 2.5 dihambat oleh
proteinase A [48]
ethylenediaminetetraacetic acid
(EDTA), dan sebagian dihambat oleh
inhibitor tripsin kedelai.
Lebih disukai menghidrolisis ikatan
peptida, karbonil yang dibentuk oleh asam
kemotripsin amino hidrofobik (Phe, Val, dan Leu). Tidak
24 9 55 [49] 2.9 [49]
- seperti proteinase C [50] dihambat oleh
Tos-Phe-CH2Cl
(penghambat kimotripsin).

Secara efektif memotong asam amino

terminal-N: Arg, Lys, Leu, Phe, dan Met.
Aminopeptidase PC [51] 110 6 36–40 4.1 Kemungkinan besar itu adalah
homodimerik,
enzim yang mengandung Zn.
Mendaur ulang 2021, 6, 3 7 dari 15

Tabel 1. Lanjutan

kDa (Berdasarkan Memilih. Memilih.

Proteinase ◦C pI Spesifisitas Substrat dan Lainnya
Elektroforesis) pH
Secara efektif memotong asam amino
terminal-C: Arg, Lys, Phe, Tyr, Leu, dan
Ile. Enzim dihambat oleh 0,5 mM Ag+,
Karboksipeptidase PC [52] 34 6.5 55 3.1
Zn2+, Cd2+ dan 1 mM EDTA,
sedangkan diaktifkan oleh Co2+ dan
Ca2+.
29 Lebih disukai menghidrolisis ikatan
23 [54] peptida, karbonil yang dibentuk oleh Arg
Tripsin PC [53] 24.8 1 [45] 7,5–8 55 <2.5 dan Lys. Nukleotida mRNA
24.8 2 [54] urutan ditentukan [45], EMBL:
AF461036.

Menghidrolisis elastin asli (dihambat

oleh elastinal). NaCl, MnCl2, CdCl2 pada
Elastase [55,56] 28.5 8–8.5 50 [57] 4,5 konsentrasi 1-100 mM merangsang
aktivitas elastase, sedangkan dihambat
oleh HgCl2 (100 mM).

Enzim memiliki aktivitas cathepsin,

menghidrolisis substrat Z-Phe-Arg-
pNA. Menghidrolisis kolagen tipe X
dan VI.
29
HgCl ,2E64, dan leupeptin
Katepsin L [58] 24 1 8 25 ?
menghambat aktivitas cathepsin;
penghambat tripsin kedelai praktis
tidak menekan aktivitas. Urutan
nukleotida mRNA adalah
ditentukan, EMBL: HQ437281
Menghancurkan ikatan peptida yang
dibentuk oleh asam amino asam dan
hidrofobik. Menghidrolisis azokolagen.
Aktivitas proteolitik dipertahankan pada
Metalloproteinase [59] 22.2 1 8–8.5 45 4.43 1-3 M NaCl dan dihambat oleh
isopropanol, o-phenanthroline, dan
EDTA. enzim yang mengandung Zn.
Urutan nukleotida mRNA ditentukan,
EMBL: AF492483

3.4.2. Nuklease dan Enzim Hepatopankreas Lainnya

Kepiting raja merah hepatopankreas merupakan sumber enzim seperti nuklease (Tabel
2). Ca2+- dan Mg2+-dependent DNase, yang dicirikan oleh stabilitas termal yang tinggi, telah
dipelajari secara rinci: enzim tetap benar-benar aktif setelah 3 jam inkubasi pada 60 ◦C,
sedangkan inkubasi selama 30 menit pada suhu 100 ◦C mengakibatkan hanya 7% hilangnya
aktivitas [60]. Berdasarkan spektrum dikroisme sirkular (CD), protein tampak sebagai globul
kompak dan terutama terdiri dariβ-lapisan (75%) [61]. Nilai pI adalah 4 dan kisaran suhu
reaksi optimal adalah 50–60◦C [62].
DNase ini memiliki spesifisitas yang jelas untuk struktur sekunder DNA dan sebagian
besar membelah substrat beruntai ganda (DNA dan RNA-DNA dupleks, sedangkan RNA tetap
utuh). Ukuran dupleks minimum untuk pembelahan oleh DNase adalah 9 bp; enzim tidak
menghidrolisis RNA [62]. DNase memutuskan ikatan fosfodiester dengan pembentukan 5kan
-fosfat dan 3kanGugus terminal -OH. Ca2+ dan Mg2+ bersama-sama memiliki efek sinergis
positif pada laju reaksi hidrolisis. Sifat unik DNase memungkinkannya digunakan secara
efektif untuk analisis cepat polimorfisme nukleotida tunggal
Mendaur ulang 2021, 6, 3
Meja 2. Nuklease dan enzim hepatopankreas lainnya. 1 data kromatografi gel denaturasi, 2 elektroforesis denaturasi, 3
berat molekul yang diharapkan berdasarkan urutan nukleotida mRNA.
Enzim
Ca2+- dan Mg2+DNase yang
bergantung [60]
Alkaline RNase (AlkR) [67]
Asam RNase (AcR dan
AcR') [67]
Dua asam
fosfomonoesterase [68]
alkali
fosfomonoesterase [68]
asam
fosfodiesterase [68]
alkali
fosfodiesterase [68]
8 dari 15
dan normalisasi perpustakaan asam nukleat [63-66]. Dalam hepatopankreas kepiting raja
merah, nuklease lain (RNase) dan fosfoesterase ditemukan (Tabel2).
kDa (Berdasarkan
Memilih. pH Properti yang Diketahui
Kromatografi Gel)
53 Struktur utama ditentukan. Ada
47 1 7-8 dua urutan di UniProtKB, Q8I9M9
42 2 6.6 [62] (2003) dan B6ZLK3 (2009), berbeda
41.5 3 [62] dengan dua asam amino.
Spesifisitas yang luas. Menghidrolisis
poli (AUC) dengan buruk. MgCl2 pada
konsentrasi 10-50 mM merangsang
19 7.2–7.5
aktivitas enzim. 0,1 M NaCl
menghambat aktivitas enzim sebesar
50%.
Tidak menghidrolisis poli(C) dan
poli(AUC). MgCl2 menghambat
aktivitasnya, 0,25 M NaCl menghambat
33 dan 70 5.5
aktivitasnya sebesar 50%. Kemungkinan
besar, ini adalah bentuk monomer dan
dimer dari protein yang sama.
Jangan terhidrolisis (3kan,5kan)cAMP
(siklik adenosin monofosfat); 1,5 M NaCl
menghambat aktivitas enzim sebesar
80 dan 82 5.5
20% (protein 80 kDa); 1.1M NaCl
menghambat aktivitas enzim sebesar
50% (protein 82 kDa)
Tidak terhidrolisis (3kan,5kan)kamp. 0,4 M
80 7.2–7.5 NaCl menghambat aktivitas enzim sebesar
50%.
57 4,8–5 50% penghambatan pada 1,4 M NaCl.
Tidak ada penghambatan hingga 1,4 M NaCl
51 7.2–7.5
yang diamati.
Sediaan enzim dari hepatopankreas mengandung beberapa aktivitas enzimatik
lainnya, yang memungkinkan kompleks enzim ini digunakan untuk depolimerisasi β-
ikatan glikosidik pada kitosan [69-71]. Aktivitas lipase juga telah diamati [33]; namun,
aktivitas lain dari enzim hepatopankreas belum cukup dipelajari dibandingkan dengan
aktivitas proteolitik dan nuklease.
3.4.3. Aktivitas Hyaluronidase dari Hepatopankreas Homogenat
Saat ini, struktur hyaluronidases dari kelas Malacostraca belum dipelajari secara cukup
rinci. Dalam database terbuka sekuens protein UniProt, hanya ada empat perwakilan dari
kelas ini yang tersedia sekuens asam amino hyaluronidase: dua perwakilan Decapoda,
termasuk udang Whiteleg (Litopenaeus vannamei, UniProt A0A423SH46) dan kepiting lumpur
oranye (Scylla olivacea, dua protein UniProt A0A0P4VVV1 dan A0A0N7ZAX3), dan dua
perwakilan Isopoda, yang merupakan pill-bugArmadillidium vulgare (hanya satu dari dua
protein yang dicirikan sebagai UniProt A0A444ST78) dan Armadillidium nasatum (UniProt
A0A5N5TJL6) (Gambar 1). Sebelumnya, hyaluronidase
Mendaur ulang 2021, 6, 3 9 dari 15

aktivitasnya ditemukan pada kompleks enzim hepatopankreas homogenat kepiting raja

merah.72].
Dalam pekerjaan kami sebelumnya, kinetika hidrolisis asam hialuronat dalam pengisi
kosmetik dengan homogenat hepatopankreas kepiting raja merah dipelajari untuk pertama
kalinya [73]. Menggunakan metode analisis turbidimetri, mikroskop gaya atom, dan spektroskopi
resonansi magnetik nuklir, kinetika hidrolisis dan transformasi struktural asam hialuronat di
bawah aksi enzim homogenat diselidiki. Kami menemukan bahwa homogenat yang diperoleh
memiliki aktivitas yang sebanding dengan preparat hyaluronidase yang tersedia secara komersial.
Dalam karya ini, kami menunjukkan kemungkinan menggunakan persiapan enzimatik
berdasarkan homogenat hepatopankreas untuk pengobatan komplikasi setelah injeksi pengisi
berdasarkan asam hialuronat. Studi lebih lanjut tentang efektivitas dan keamanan hyaluronidase
dari hepatopankreas pada hewan model akan memungkinkan kami untuk mengembangkan obat
baru untuk pengobatan komplikasi suntikan pengisi dalam waktu dekat.

3.5. Komponen Non-Protein Berharga Lainnya dari Hepatopankreas Kepiting Raja Merah
Kepiting hepatopankreas adalah sumber enzim dan produk berharga lainnya.
Misalnya, persiapan dengan sifat penghambat proteinase serin diperoleh dan dicirikan
dari hepatopankreas, dan efeknya pada proses koagulasi plasma darah manusia
dipelajari [74]. Inhibitor yang diuji menunjukkan efek antikoagulan yang lebih nyata bila
dikombinasikan dengan heparin. Prosedur dikembangkan untuk mendapatkan inhibitor
baik dari bahan baku [75] dan dalam bentuk rekombinan [76].
Hepatopankreas mengandung sejumlah besar lemak, yang bervariasi dari 10 hingga 26%.18,
77,78]. Dalam studi komposisi fraksional lemak kepiting, ditemukan mengandung trigliserida
hingga 55%, serta asam lemak tak jenuh ganda, termasukω-3 (14-24% dari total semua asam
lemak). Lemak hepatopankreas tidak mengandung zat beracun dan dapat digunakan sebagai
suplemen makanan atau sebagai bahan untuk produk kosmetik.

4. Diskusi
4.1. Prospek Pengolahan Limbah dari Spesies Kepiting Komersial Lainnya
Spesies kepiting komersial termasuk perwakilan dari kepiting palsu (Anomura) dan kepiting
sejati (Brachyura) dari Pleocyemata. Brachyura termasuk kepiting opilio (Chionoecetes opilio), yang
juga merupakan tangkapan komersial penting untuk perikanan laut. Kepiting dari subordo ini
memiliki aktivitas enzimatik yang serupa dalam sistem pencernaannya. Sebagai contoh, aktivitas
proteolitik dari preparat enzim dari hepatopankreas kepiting raja merah dan kepiting opilio praktis
sama.21]. Zymogram menunjukkan bahwa hepatopankreas kepiting opilio mengandung
setidaknya 10 enzim proteolitik.
Aktivitas kompleks proteolitik sebanding dengan kolagenase yang tersedia secara
komersial dari basil gas Clostridium histolyticum [79,80]. Dalam karya ini, enzim proteolitik
dari hepatopankreas kepiting opilio, tetapi bukan kepiting raja merah, diisolasi dan
dikarakterisasi secara biokimia, dan urutan asam amino terminal-N dari enzim proteolitik
diperoleh. Para penulis mencatat kesalahan mereka dalam karya mereka berikutnya [42].
Sayangnya, data yang salah ini dipublikasikan di database UniProt. Misalnya, urutan asam
amino UniProtKB-P20734 (COGC_PARCM) sebenarnya bukan milikParalithodes camtschaticus,
tapi untuk Chionoecetes opilio. Urutan UniProtKB-P34153 (COG1_CHIOP) dan UniProtKB-
P34156 (COG4_CHIOP) tidak berasal dari protein hepatopankreasChionoecetes opilio, tapi
dari Paralithodes camtschaticus. Sisa dari urutan N-terminal enzim proteolitik dari kedua
kepiting ini di [79,80] sepenuhnya bertepatan dalam basis data UniProt, yang sekali lagi
menegaskan kesamaan biokimia dari sistem pencernaan perwakilan Pleocyemata.

Kekerabatan filogenetik yang dekat dan relung ekologi yang serupa dari spesies kepiting
komersial, serta skala industri tangkapan, memberikan dasar bagi keberhasilan transfer
pengalaman pemrosesan hepatopankreas kepiting raja ke spesies kepiting lain untuk
mendapatkan produk baru yang berharga. . Misalnya, kompleks enzim hepatopankreas kepiting
opilio berhasil digunakan dalam produksi hidrolisat protein dari ikan kod.
Mendaur ulang 2021, 6, 3 10 dari 15

pengolahan limbah, serta untuk meningkatkan konsistensi dan juiciness fillet ikan kod pada
tahap pengasinan produk setengah jadi [21,30,81].
Rusia adalah pemimpin dalam hal tingkat tangkapan kepiting raja merah, dan tangkapan ini meningkat
setiap tahun (Gambar 4A). Sebagian besar tangkapan ini berasal dari nelayan di Timur Jauh Rusia, namun, total
tangkapan Rusia dan Norwegia di Laut Barents dan Norwegia diperkirakan dalam waktu dekat akan menyamai
dan bahkan melebihi tingkat tangkapan di Timur Jauh Rusia [82]. Di Amerika Serikat (Alaska), kepiting raja
merah juga ditangkap, tetapi pada tingkat yang lebih rendah. Nelayan di Alaska telah menangkap 200–400 ton
per tahun dari 2013 hingga 2020 [83]. Namun, pada saat yang sama, Amerika Serikat menangkap sekitar
5.000-10.000 ton kepiting yang secara kolektif dikenal sebagai kepiting raja [82]. Spesies kepiting komersial
lainnya juga merupakan spesies yang menjanjikan untuk diproses lebih lanjut. Misalnya, data Organisasi
Pangan dan Pertanian (FAO) menunjukkan bahwa tangkapan global kepiting opilio lebih dari 100.000 ton [84]
(Angka 4B). Kami dengan yakin menyatakan bahwa tingkat tangkapan yang tinggi dari kepiting besar yang
signifikan secara komersial, dan oleh karena itu sejumlah besar limbah, memberikan peluang untuk
mengembangkan teknologi pemrosesan limbah dan memasukkannya ke dalam proses industri. Arah
pemrosesan yang paling menjanjikan harus mempertimbangkan pemrosesan hepatopankreas sebagai sumber
produk margin tinggi baru.

×104 ×105
1
1.2

1 0.8
Tangkapan (ton)

Tangkapan (ton)

0.8
0.6
0.6
0.4
0.4
0.2
0.2

0 0
2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017

Rusia (Laut Barents) Kanada. Tanah penggembalaan. Saint Pierre dan Miquelon
Rusia (Timur Jauh Rusia) Latvia
Norwegia Norway
(A) (B)

Gambar 4. Tangkap kepiting: (A) kepiting raja merah di Laut Barents (Rusia dan Norwegia) dan Timur Jauh Rusia (Rusia) dan (B)
tangkapan global kepiting opilio.

4.2. Strategi Pengembangan Pengolahan Sampah

Kepiting diproses menggunakan pendekatan yang berbeda. Jika kepiting yang ditangkap tidak
direbus, pengolahan limbah yang kompleks dapat digunakan untuk memaksimalkan hasil produk baru
yang berharga. Setelah pemisahan anggota badan, bagian tubuh lainnya dapat sepenuhnya diproses:
karapas dapat digunakan untuk produksi kitosan, hepatopankreas untuk produksi kompleks enzim
multikomponen dan enzim murni spesifik, lemak dari hepatopankreas untuk nutrisi makanan atau
produksi biofuel, dan insang dan organ dalam lainnya sebagai suplemen pakan untuk burung, ikan, dan
hewan lainnya. Pendekatan ini mengadopsi prinsip daur ulang non-limbah.
Metode pengolahan hepatopankreas kepiting untuk mendapatkan preparat enzim
dapat dibagi menjadi dua strategi: memperoleh kompleks berbagai enzim atau
pemurnian lebih lanjut dari enzim tertentu (atau kelas enzim) dari kompleks ini.
Kompleks enzim sesuai untuk pengolahan substrat multikomponen di mana degradasi
simultan protein, asam nukleat, dan polimer lain menjadi monomer diperlukan,
misalnya, dalam produksi produk makanan yang mudah dicerna dari jaringan hewan
dan tumbuhan. Aktivitas kompleks enzim dalam preparat akan berbeda untuk
Mendaur ulang 2021, 6, 3 11 dari 15

hepatopankreas dari sampel ke sampel. Dalam hal ini, teknologi untuk menggunakan sediaan
enzimatik tersebut harus memungkinkan terjadinya fluktuasi aktivitas dalam kelompok sediaan
yang berbeda. Strategi kedua, berdasarkan isolasi satu enzim dari kompleks, memiliki
keuntungan, karena produk akhir dapat digunakan untuk menghasilkan produk dengan margin
tinggi (misalnya, produk farmasi atau reagen untuk penelitian ilmiah). Untuk tujuan ini, penting
untuk memiliki metode sederhana dan terukur untuk pemurnian enzim tertentu. Khususnya,
semua teknologi yang ada saat ini untuk memproses hepatopankreas kepiting tidak memenuhi
persyaratan yang ditentukan. Vektor utama pengembangan di bidang ini dapat berupa
pendekatan termasuk beberapa tahap filtrasi aliran tangensial dan kromatografi afinitas
menggunakan pembawa murah.
Semua pekerjaan yang dibahas dalam tinjauan ini mempertimbangkan pengolahan
jenis limbah tertentu (karapas/hepatopankreas/lemak). Namun, sampah yang paling
sering berupa campuran, yang sulit untuk dipilah. Untuk menerapkan prinsip daur ulang
non-limbah, perlu dikembangkan pendekatan baru untuk mendaur ulang campuran ini,
yang akan mengubah sampah menjadi produk baru yang bernilai. Relevansi pengolahan
dalam disediakan oleh peningkatan berkelanjutan dalam tangkapan perikanan. Di satu
sisi, peningkatan hasil tangkapan menyebabkan peningkatan limbah, yang dapat
menyebabkan beberapa masalah lingkungan. Di sisi lain, kontrol penangkapan yang
tidak memadai akan menyebabkan penurunan populasi kepiting, yang akan
menyebabkan penurunan tajam dalam kinerja ekonomi industri di tahun-tahun
mendatang. Dengan demikian,
Masalah utama dengan kompleksnya pemrosesan limbah dari spesies laut
komersial adalah kompleksitas pengumpulan dan penyimpanannya dalam kondisi
berlayar di atas kapal pukat dan pengiriman ke pantai atau pemrosesan lebih lanjut.
Solusi dari masalah ini dapat berupa, misalnya, pembuatan unit pengolah sampah
terpadu yang otomatis secara maksimal segera di kapal penangkap, yang dapat
menghilangkan masalah waktu yang dihabiskan oleh nelayan untuk pengambilan organ
secara manual, serta penyimpanan dan transportasi. Metode lain untuk memecahkan
masalah ini adalah dengan menetapkan biaya hepatopankreas yang memadai untuk
para nelayan, yang memungkinkan pasokan bahan baku yang stabil di darat pada skala
industri. Tugas tersebut dapat disederhanakan jika pengolahan non-limbah kepiting
hidup diselenggarakan di darat.

5. Pandangan

Meskipun penelitian ilmiah dalam jangka waktu lama, pengolahan kepiting secara mendalam belum
diluncurkan. Alasan utama untuk ini adalah protokol laboratorium yang tidak disesuaikan dengan kondisi
penangkapan. Juga teknologi ini harus menyediakan daur ulang mendalam berdasarkan prinsip daur ulang
bebas limbah dengan mempertimbangkan manfaat finansial. Ini juga membutuhkan dukungan keuangan
untuk proyek R&D untuk mengembangkan teknologi untuk menciptakan produk bernilai tinggi baru untuk
skala industri. Solusi untuk masalah ini terletak pada kolaborasi erat antara ilmuwan, pengembang, dan
nelayan. Dalam tinjauan kami, kami membahas semua pihak ini dan berharap kami menyentuh kepentingan
semua pemangku kepentingan yang terdaftar untuk menyatukan upaya mereka dalam pemrosesan mendalam
limbah dari spesies kepiting komersial.

Kontribusi Penulis: TP dan ES menyusun ide yang disajikan, mengawasi temuan pekerjaan ini. ES
merancang angka-angka, dan menulis naskah dengan dukungan dari TP, MT, MF, dan SLSL
mengembangkan formalisme teoretis, melakukan perhitungan analitik dan melakukan data
statistik. MT, MF, dan SL mengolah data literatur, melakukan analisis. Semua penulis
mendiskusikan hasil dan berkontribusi pada naskah akhir. Semua penulis telah membaca dan
menyetujui versi naskah yang diterbitkan.

Pendanaan: Penelitian ini tidak menerima dana dari luar.

Pernyataan Dewan Peninjau Kelembagaan: Pada saat penulisan tinjauan ini, tidak ada manusia atau makhluk hidup
lain yang dirugikan (yaitu, tidak berpartisipasi dalam penelitian).
Mendaur ulang 2021, 6, 3 12 dari 15

Pernyataan Persetujuan yang Diinformasikan: Pada saat penulisan tinjauan ini, tidak ada manusia atau makhluk hidup lain
yang dirugikan (yaitu, tidak berpartisipasi dalam penelitian).

Pernyataan Ketersediaan Data: Sebagian besar data tersedia di platform internet, beberapa hanya tersedia di
atas kertas.

Konflik kepentingan: Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan. Para penyandang dana tidak memiliki peran
dalam desain penelitian; dalam pengumpulan, analisis, atau interpretasi data; dalam penulisan naskah, atau dalam keputusan
untuk mempublikasikan hasilnya.

Referensi dan Catatan

1. Slizkin, A.; Safronov, S. Kepiting komersial dari perairan Kamchatka.Petropavlovsk Kamchatskii Sev. patifika2000, 180, 12.
2. Browser Taksonomi (Root)-NCBI-NIH. Tersedia secara online:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi?
mode=Undef&id=6681&lvl=3&lin=f&keep=1&srchmode=1&buka kunci(diakses pada 16 Desember 2020).
3. Tavares, M. Kepiting sejati. Di dalamLembar Identifikasi Spesies FAO untuk Keperluan Perikanan: Atlantik Tengah Barat (Area Penangkapan Ikan 31); FAO:
Roma, Italia, 2003; hlm. 327–352.
4. Garth, JS; Abbott, DP Brachyura: Kepiting Sejati. Di dalamInvertebrata Intertidal California; Stanford University Press: Stanford,
CA, AS, 1980; hal. 594–630.
5. Steneck, Grup Fungsional RS. Di dalamEnsiklopedia Keanekaragaman Hayati, edisi ke-2.; Levin, SA, Ed.; Pers Akademik: Waltham, MA, AS, 2001;
hal.609–623. [CrossRef]
6. Maksimova, S.; Poleschuk, D.; Surovtseva, E.; Vereshchagina, K.; Milovanov, A.Raja Kepiting potensi limbah sebagai bahan baku yang
bernilai teknologi. makanan ind. 2019, 4. [CrossRef]
7. Dvoretsky, AG; Dvoretsky, VG Kepiting raja merah (Paralithodes camtschaticus) perikanan di perairan Rusia: Tinjauan sejarah dan status
saat ini. Pdt. Fish Biol. Ikan.2018, 28, 331–353. [CrossRef]
8. Matishov, G. Ekosistem Laut dan Komunitas dalam Kondisi Perubahan Iklim Saat Ini; MMBI KSC RAS: St. Petersburg, Rusia, 2014.

9. Podkorytova, A.; Strokova, N.; Semikova, N. Pemrosesan kompleks dariKepiting Kamchatka dalam produksi produk makanan dan
zat aktif biologis. Tr. VNIRO2018, 172, 198–212. [CrossRef]
10. Nemtsev, S. Teknologi Komprehensif untuk Memperoleh Kitin dan Kitosan dari Cangkang Crustacea; VNIRO: Moskow, Rusia, 2006.
11. imat, V.; Ditulis, N.; Kulawik, P.; Ceylan, Z.; Jamroz, E.; Yazgan, H.; agalj, M.; Regenstein, JM; zogul, F. Kemajuan Terbaru dalam
Nutraceuticals Berbasis Laut dan Manfaat Kesehatannya.Mar. Narkoba 2020, 18, 627. [CrossRef] [PubMed]
12. Nguyen, VB; Wang, SL Reklamasi bahan chitinous laut untuk produksiα-glucosidase inhibitor melalui konversi mikroba. Mar.
Narkoba 2017, 15, 350. [CrossRef] [PubMed]
13. Nguyen, VB; Nguyen, DN; Nguyen, AD; Ngo, WA; Ton, TQ; Doan, CT; Pham, TP; Trans, TPH; Wang, SL Pemanfaatan Limbah Kepiting
untuk Bioproduksi Prodigiosin yang Hemat Biaya.Mar. Narkoba 2020, 18, 523. [CrossRef]
14. Casadidio, C.; Peregrina, DV; Gigliobianco, MR; Deng, S.; Censi, R.; Di Martino, P. Kitin dan kitosan: Karakteristik, proses ramah
lingkungan, dan aplikasi dalam ilmu kosmetik.Mar. Narkoba 2019, 17, 369. [CrossRef]
15. Hulme, PE DAISIE (Memberikan Inventori Spesies Invasif Alien untuk Eropa). Buku Pegangan Spesies Alien di Eropa; Pegas:
Dordrecht, Belanda, 2009.
16. Jørgensen, LL NOBANIS—Lembar Fakta Spesies Asing Invasif—Paralithodes camtschaticus.—Dari: Database Online Jaringan
Eropa tentang Spesies Asing Invasif—NOBANIS www.nobanis.org. 2013. Tersedia online:https://www.nobanis.org/
globalassets/speciesinfo/p/paralithodes-camtschatica/paralithodes_camtschaticus.pdf (diakses pada 19 Oktober 2020).
17. Gibson, R. Hepatopankreas berkaki sepuluh. Kelautan Maret Biol. Ann. Putaran.1979, 17, 285–346.
18. Kas'janov, S.; Kuklev, D.; Kucheravenko, K.; Blinov, J.; Akulin, V. Metode Ekstraksi Lemak dari Hati Kepiting. RU 2162648 C2, Diarsipkan 7
April 1999, dan Diterbitkan 10 Februari 2001. Pemegang Paten Pacific Branch VNIRO (TINRO).
19. Muranova, T.; Senghenko, D.; Melanyina, L.; Miroshnikov, A. Hidrolisis protein kedelai dengan kompleks enzim hepatopankreas kepiting
raja merah.aplikasi Biokimia. Mikrobiol.2018, 54, 74–81. [CrossRef]
20. Sova, V. Metode Pembuatan Kaviar dari Ikan Spesies Salmon. RU 2111681 C1, Diarsipkan 12 Maret 2003, dan Dikeluarkan 10 April 2004.
Pemegang Paten Sova, V.
21. Lyzhov, I.; Rysakova, K.; Mukhin, V.; Novikov, V.; Shironina, A. Penerapan hepatopankreas kepiting salju untuk memperoleh hidrolisat
protein dari limbah fillet ikan kod. In Proceedings of the Biological Resources of the White Sea and Inland Waters of the European
North, Materials of the XXVIII International Conference, 5–8 October 2009, Petrozavodsk, Russia; hal.337–340.
22. Mukhin, V.; Novikov, V. hidrolisis enzimatik protein dari krustasea Laut Barents.aplikasi Biokimia. Mikrobiol.2001, 37, 538–542. [
CrossRef]
23. Novikov, V.; Portsel, M. Metode Pembuatan Kondroitin Sulfat Dari Jaringan Hidrobion Laut. RU 2458134 C1, Diarsipkan 27 Desember
2010, dan Dikeluarkan 10 Agustus 2012. Pemegang Paten POLAR Cabang VNIRO (PINRO).
24. Glyantsev, S.; Vishnevsky, A.; Adamyan, A.; Vishnevsky, A.; Sakharov, I. kolagenase kepiting di debridement luka.J. Perawatan Luka1997,
6, 13–16. [CrossRef] [PubMed]
25. Sakharov, I.; Glyanzev, S.; Litvin, F.; Savvina, T. Kemampuan debriding ampuh protease kolagenolitik diisolasi dari hepatopankreas
kepiting rajaParalithodes camtschatica. Lengkungan. Dermatologi. Res.1993, 285, 32–35. [CrossRef] [PubMed]
Mendaur ulang 2021, 6, 3 13 dari 15

26. Rudenskaya, G. Brachyurins—enzim kolagenolitik serin dari kepiting. Bioorg. Khim.2003, 29, 117-128.
27. Belov, A.; Filatov, V.; Belova, E.; Filatov, N. Perban Medis Mengandung Kompleks Enzim Proteolitik Termasuk Protease Kolagenolitik dari
Hepatopankreas Kepiting. RU 2268751 C2, Diarsipkan 25 April 2003, dan Diterbitkan 27 Januari 2006. Pemegang Paten Belov, A.;
Filatov, V.; Belova, E.; Filatov, N.
28. Belov, A.; Filatov, V.; Belova, E. Pembalut Medis yang Mengandung Kompleks Enzim dari Hepatopankreas Kepiting, dan Metode
Produksinya. RU 2323748 C2, Diarsipkan 21 Februari 2006, dan Diterbitkan 10 Mei 2008. Pemegang Paten Belov, A.; Filatov, V.; Belova,
E.
29. Sova, V.; Strongyn, A.; Klimovava, O.; Stadnikov, V. Aktivitas Kolagenolitik yang Memamerkan Kompleks Enzim dan Metode untuk Isolasi
dan Pemurniannya. EP 0402321 A1, Diarsipkan 8 Juni 1990, dan Diterbitkan 12 Desember 1990, Pemegang Paten SEATEC.
30. Artjukov, A.; Sakharov, I. Metode Produksi Kolagenase. RU 2039819 C1, Diarsipkan 29 Maret 1990, dan Diterbitkan 20 Juli 1995.
Pemegang Paten Artjukov, A.; Sakharov, I.
31. Majorov, A.; Albulov, A.; Samujlenko, A. Metode Pembuatan Kolagenase. RU 2112036 C1, Diarsipkan 9 Oktober 1992, dan Dikeluarkan 27 Mei
1998. Pemegang Paten Majorov, A.; Albulov, A.; Samujlenko, A.
32. Pivnenko, T.; Zhdanjuk, V.; Ehpshtejn, L. Metode Penyusunan Kompleks Proteolitik. RU 2034028 C1, Diarsipkan 7 Februari 1992, dan
Dikeluarkan 30 April 1995. Pemegang Paten “Tikhookeanskij nauchno-issledovatel'skij institut rybnogo khozjajstva i okeanografii”.
33. Artjukov, A.; Menzorova, N.; Kozlovskaja, E.; Kofanova, N.; Kozlovskij, A.; Rasskazov, V. Persiapan Enzim dari Hepatopankreas
Spesies Kepiting Komersial dan Metode Produksi yang Sama. RU 2280076 C1, Diarsipkan 6 Desember 2004, dan Dikeluarkan
20 Juli 2006. Pemegang Paten “Tikhookeanskij institut bioorganicheskoj khimii Dal'nevostochnogo otdelenija Rossijskoj
Akademii nauk”.
34. Kireev, V.; Titov, O.; Sheveleva, O. Metode Persiapan Persiapan Enzim dari Hepatopankreas Kepiting. RU 2285041 C1, Diarsipkan 14 April
2005, dan Dikeluarkan 10 Oktober 2006. Pemegang Paten “FGUP Poljarnyj nauchno-issledovatel'skij institut morskogo rybnogo
khozjajstva i okeanografii im. NM Knipovicha (FGUP PINRO)”.
35. Stadnikov, V.; Erkhov, S. Metode Pembuatan Sediaan Enzim yang Menunjukkan Aktivitas Kolagenolitik. RU 2096456 C1, Diarsipkan 10 November
1996, dan Dikeluarkan 20 November 1997. Pemegang Paten Stadnikov, V.; Erkhov, S.
36. Erkhov, S. Zat Aktif Secara Biologis, Bahan Baku dan Cara Pembuatannya. RU 2132876 C1, Diarsipkan 13 Oktober 1998, dan Dikeluarkan
10 Juli 1999. Pemegang Paten Erkhov, S.
37. Sakharov, I.; Artyukov, A.; Berezin, V. Metode Pemurnian Kolagenase. SU 1699350 A3, diajukan 29 Maret 1990, dan diterbitkan 15
Desember 1991.
38. Isaev, V.; Rudenskaja, G.; Kupenko, O.; Stepanov, V.; Popova, saya.; Didenko, J. Metode Pembuatan Persiapan Kolagenase. RU 2008353
C1, Diarsipkan 5 Agustus 1991 dan Dikeluarkan 28 Februari 1994. Pemegang Paten “NAUCHNO-PROIZVODSTVENNOE PREDPRIJATIE
“TRINITA””.
39. Sandakhchiev, L.; Danilov, A.; Maligin, E.; Zinov'ev, V.; Ovechkina, L.; Zakabunin, A.; Mistjurin, J. Metode Pemurnian Collase. RU 2121503
C1, Diarsipkan 5 Spetember 1996, dan Dikeluarkan 10 November 1998. Pemegang Paten “Gosudarstvennyj nauchnyj tsentr virusologii
i biotekhnologii “Vektor””.
40. Isaev, V.; Rudenskaja, G.; Shmojlov, A. Metode untuk Mempersiapkan Persiapan Kolagenase. RU 2225441 C1, Diarsipkan 5 Maret 2003, dan
Dikeluarkan 10 Maret 2004. Pemegang Paten “Zakrytoe aktsionernoe obshchestvo Nauchno-proizvodstvennoe predprijatie “Trinita””.
41. Sakharov, I.; Dzhunkovskaya, A.; Artyukov, A.; Sova, V.; Sakandelidze, O.; Kozlovskaya, E. Metode Memproduksi Kolagenase. SU 1343591
A1, Diarsipkan 13 Desember 1985, dan Diterbitkan 30 April 1992.
42. Klimova, O.; Chebotarev, V. Kolagenolitik kompleks protease dari hepatopankreas dariKepiting Kamchatka: Aktivitas enzimologis dari
masing-masing komponen. Biulleten'eksperimental'noi Biologii I Meditsiny 1999, 128, 391–396. [CrossRef]
43. tancl, J.; Skočilas, J.; Landfeld, A.; itn, R.; Houška, M. Sifat listrik dan termodinamika larutan kolagen.Politeknik Akta. 2017, 57,
229–234. [CrossRef]
44. Rudenskaia, G.; Isaev, V.; Stepanov, V.; Dunaevskii, saya.; Baratova, L.; Kalebina, T.; Nurminskaia, M. Isolasi dan sifat proteinase PC serin
dariKepiting Kamchatka, Paralithodes camtschatica—Enzim proteolitik dengan spesifisitas luas. Biokimia. Mosk.1996, 61, 1119.

45. Rudenskaya, GN; Kislitsin, YA; Rebrikov, PC protease serin DV Kolagenolitik dan PC tripsin dari kepiting rajaParalithodes
camtschaticus: kloning CDNA dan struktur primer enzim. Struktur BMC. Biol.2004, 4, 2. [CrossRef]
46. Papisova, A.; Semenova, S.; Kislitsyn, Y.; Rudenskaya, G. Kekhasan hidrolisis substrat oleh endopeptidases dari hepatopankreas
kepiting raja.Rusia. J. Bioorg. Kimia2008, 34, 428–434. [CrossRef]
47. Semenova, S.; Rudenskaya, G.; Lyutova, L.; Nikitina, O. Isolasi dan sifat isoenzim kolagenolitik serin proteinase dari kepiting raja
Paralithodes camtschatica. Biokimia. mos.2008, 73, 1125-1133. [CrossRef] [PubMed]
48. Sakharov, I.; Litvin, F.; Artyukov, A.; Kofanova, N. Pemurnian dan karakterisasi protease kolagenolitik dariParalithodes
camtschatica hepatopankreas. Biokimia. mos.1988, 53, 1844–1849.
49. Sakharov, IY; Litvin, FE; Artyukov, AA Pemurnian dan karakterisasi dua protease kolagenolitik serin dari kepitingParalithodes
camtschatica. Komp. Biokimia. Fisiol. Bagian B Komp. Biokimia.1994, 108, 561–568. [CrossRef]
50. Sakharov, IY; Litvin, FE; Artyukov, AA Beberapa sifat fisiko-kimia kolagenolitik protease C kepiting (Paralithodes camtschatica).
Biokimia. Mosk.1992, 57, 40––45.
51. Rudenskaya, G.; Shmoilov, A.; Isaev, V.; Ksenofontov, A.; Shvets, S. Aminopeptidase PC dari hepatopankreasKepiting Kamchatka
Paralithodes camtschatica. Biokimia. mos.2000, 65, 164-170.
Mendaur ulang 2021, 6, 3 14 dari 15

52. Rudenskaia, G.; Kupenko, O.; Isaev, V.; Stepanov, V.; Dunaevskii, I. Isolasi dan sifat-sifat karboksipeptidase dariKepiting
Kamchatka Paralithodes camtshatica. Rusia. J. Bioorg. Kimia1995, 21, 249–255.
53. Rudenskaia, G.; Isaev, V.; Kalebina, T.; Stepanov, V.; Maltsev, K.; Shvet, S.; Lukianova, N.; Kislitsin, saya.; Miroshnikov, A. Isolasi PC tripsin
dariKepiting Kamchatka Paralithodes camtschatica dan sifat-sifatnya. Rusia. J. Bioorg. Kimia1998, 24, 112–118.
54. Kislitsyn, saya.; Rebrikov, D.; Dunaevskii, saya.; Rudenskaia, G. Isolasi dan struktur utama tripsin dari kepiting raja merahParalithodes
camtschaticus. Rusia. J. Bioorg. Kimia2003, 29, 269–276. [CrossRef]
55. Dzhunkovskaia, A.; Zakharova, N. Pankreas elastase adalah protease serin baru yang diisolasi dari hepatopankreas kepiting raja.
Dalam Prosiding Abstrak Pertemuan All-Union Zat Aktif Secara Biologis Organisme Akuatik — Obat Baru, Terapi dan Profilaksis
dan Persiapan Teknis, Vladivostok, Rusia, 23-27 September 1991; P. 8.
56. Sakharov, I.; Dzhunkovkaia, A. Elastase dari hepatopankreas kepiting raja.Biokimia. mos.1993, 58, 1445-1453.
57. Sakharov, IY; Dzunkovskaya, AV; Artyukov, AA; Zakharova, NN Pemurnian dan beberapa sifat elastase dari hepatopankreas
kepiting rajaParalithodes camtschatica. Komp. Biokimia. Fisiol. Bagian B Komp. Biokimia.1993, 106, 681–684. [CrossRef]
58. Isaev, V.; Balashova MV, SD; Shagin, D.; Shagina, saya.; Eremeev, N.; Rudenskaya, G. Cathepsin L psychrophilic baru dari
hepatopankreas kepiting raja merah (Paralithodes camtschaticus). Sci. Pdt. Biol. Sci.2016, 6, 81–89.
59. Semenova, SA; Rudenskaya, GN; Rebrikov, DV; Isaev, kloning cDNA VA, pemurnian dan sifat-sifatParalithodes camtschatica
metaloprotease. Protein Pept. Lett.2006, 13, 571–575. [CrossRef] [PubMed]
60. Menzorova, N.; Markova, A.; Rasskazov, V. Ca yang sangat stabil2+, Mg2+-dependent DNAase dari hepatopankreas kepiting.Biokimia.
mos.1994, 59, 449–456.
61. Vakorina, T.; Menzorova, N.; Rasskazov, V. Studi stabilitas konformasi DNAse dari hepatopankreas kepitingParalithodes
camtschatica. Biokimia. mos.1997, 62, 1642–1647.
62. Anisimova, VE; Rebrikov, DV; Shagin, DA; Kozhemyako, VB; Menzorova, NI; Staroverov, DB; Ziganshin, R.; Vagner, LL; Rasskazov,
VA; Lukyanov, SA; dkk. Isolasi, karakterisasi dan kloning molekul nuklease spesifik dupleks dari hepatopankreasKepiting
Kamchatka. Biokimia BMC. 2008, 9, 14. [CrossRef]
63. Shagin, DA; Rebrikov, DV; Kozhemyako, VB; Altshuler, IM; Shcheglov, AS; Zhulidov, PA; Bogdanova, EA; Staroverov, DB; Rasskazov, VA;
Lukyanov, S. Metode baru untuk deteksi SNP menggunakan nuklease spesifik dupleks baru dari hepatopankreas kepiting.Res. Genom
2002, 12, 1935–1942. [CrossRef]
64. Zhulidov, PA; Bogdanova, EA; Shcheglov, AS; Vagner, LL; Khaspekov, GL; Kozhemyako, VB; Matz, MV; Meleshkevitch,
E.; Moroz, LL; Lukyanov, SA Normalisasi cDNA sederhana menggunakan nuklease spesifik dupleks kepiting kamchatka.Asam Nukleat Res.2004,
32, e37. [CrossRef]
65. Lukyanov, SA; Rebrikov, DV; Shagin, Metode dan Komposisi DA untuk Pembelahan Selektif Dna yang Mengandung Asam Nukleat Dupleks dalam
Campuran Asam Nukleat Kompleks, dan Komposisi Nuklease untuk Digunakan dalam Latihan yang Sama. US 7435794 B2, Diajukan 5
Desember 2004, dan Diterbitkan 14 Oktober 2008.
66. Shagina, aku.; Bogdanova, E.; Al'tshuler, saya.; Luk'ianov, S.; Shagin, D. Penerapan nuklease spesifik dupleks untuk analisis cepat
polimorfisme nukleotida tunggal dan deteksi DNA target dalam produk PCR kompleks.Bioorg. Khim.2011, 37, 522–529.
67. Menzorova, NI; Sibirtsev, JT; Rasskazov, VA Ribonuclease dari Hepatopankreas Kepiting Raja MerahParalithodes camtschatica.
aplikasi Biokimia. Mikrobiol.2009, 45, 369–373. [CrossRef]
68. Menzorova, N.; Ivleva, A.; Sibirtsev, YT; Rasskazov, V. Fosfatase dan fosfodiesterase diisolasi dari kepiting raja merah (Paralithodes
camtschatica) hepatopankreas. aplikasi Biokimia. Mikrobiol.2008, 44, 93–97. [CrossRef]
69. Novikov, V.; Mukhin, V. Kitosan Depolimerisasi oleh Enzim dari Hepatopankreas KepitingParalithodes camtschaticus.aplikasi
Biokimia. Mikrobiol.2003, 39, 464–468. [CrossRef]
70. Novikov, V.; Mukhin, V.; Rysakova, K. Sifat enzim kitinolitik dari hepatopankreas kepiting raja merah (Paralithodes camtschaticus
). aplikasi Biokimia. Mikrobiol.2007, 43, 159-163. [CrossRef]
71. Rysakova, K.; Novikov, V.; Mukhin, V.; Serafimchik, E. Aktivitas glikolitik preparasi enzim dari kepiting raja merah (Paralithodes
camtschaticus) hepatopankreas. aplikasi Biokimia. Mikrobiol.2008, 44, 281–286. [CrossRef]
72. Turkovski, I.; Paramonov, B.; Antonov, S.; Kozlov, D.; Klimova, O.; Pomorski, K. Evaluasi perbandingan kedalaman kolagen dan
hidrolisis asam hialuronat in vitro oleh kolagenase dan persiapan hyaluronidase.Banteng. Eks. Biol. Med.2008, 146, 89–90. [
CrossRef]
73. Ponomareva, T.; Sliadovski, D.; Timchenko, M.; Molchanov, M.; Timchenko, A.; Sogorin, E. Pengaruh homogenat hepatopankreas
kepiting raja merah pada filler berbasis HA.RekanJ 2020, 8, e8579. [CrossRef]
74. Balashova, M.; Liutova, L.; Rudenskaia, saya.; Isaev, V.; Andina, S.; Kozlov, L.; Rudenskaia, G. Aktivitas antikoagulasi dan
antikomplementer persiapan inhibitor endogen dari hepatopankreas kepiting raja merah (Camtschaticus paralithosed) terhadap
darah manusia. Bioma. Khim.2012, 58, 176–188. [CrossRef]
75. Isaev, V.; Rudenskaya, G.; Rudenskaya, Y.; Lyutova, L.; Balashova, M. Metode Pembuatan Inhibitor Kolagenase dengan Aksi
Antikoagulasi Hepatopankreas Kepiting Raja. RU 2403284 C1, Diarsipkan 25 Januari 2009, dan Dikeluarkan 10 November 2010.
Pemegang Paten “Zakrytoe Aktsionernoe Obshchestvo Nauchno-proizvodstvennoe predprijatie “TRINITA””.
76. Isaev, V.; Rudenskaja, G.; Kostin, N.; Sergeeva, E.; Statsenko, saya.; Kolesnikova, T. Metode Produksi Inhibitor Protease Serin
Rekombinan Kepiting Raja. RU 2560264 C1, Diarsipkan 17 April 2014, dan Dikeluarkan 20 Agustus 2015. Pemegang Paten
“Obshchestvo s ogranichennoj otvetstvennost'ju Nauchno-proizvodstvennoe predprijatie “TRINITA” (OOO PLTN “TRINITA”)”.
77. Zikeeva, B. Pengolahan Bahan Baku Air Bukan Ikan; Pishchepromizda: Moskow, Rusia, 1950; P. 277.
Mendaur ulang 2021, 6, 3 15 dari 15

78. Boeva, N.; Petrova, M.; Makarova, A. Metode Produksi Lemak Kepiting. RU 2390274 C1, Diarsipkan 18 Desember 2008, dan Dikeluarkan
27 Mei 2010. Pemegang Paten “FGUP “Vserossijskij nauchno-issledovatel'skij institut rybnogo khozjajstva i okeanografii” (VNIRO)”.
79. Klimova, O.; Borukhov, S.; Solovyeva, N.; Balaevskaya, T.; Strongin, A. Isolasi dan sifat protease kolagenolitik dari
hepatopankreas kepiting.Biokimia. Biofis. Res. komuni.1990, 166, 1411-1420. [CrossRef]
80. Klimova, O.; Vedishcheva, saya.; Strongin, A. Isolasi dan karakteristik enzim kolagenolitik dari hepatopankreas kepiting
Chionoecetes opilio. dok. akad. Nauk SSSR1991, 317, 482.
81. Shkuratova, E.; Shokina, Y.; Mukhin, V. Pengembangan teknologi produk asap gourmet dari spesies ikan cod menggunakan persiapan
enzim dari hepatopankreas kepiting saljuChionoecetes opilio. Prok. Universitas Negeri Voronezh Ind. teknologi.2017, 79, 126–137. [
CrossRef]
82. Organisasi Pangan dan Pertanian (FAO). Statistik Perikanan dan Budidaya: B-44. Tersedia secara online:http://www.fao.org/
fishery/static/Yearbook/YB2017_USBcard/root/capture/b44.pdf (diakses pada 5 Mei 2020).
83. Administrasi Kelautan dan Atmosfer Nasional (NOAA). Laporan Hasil Tangkapan dan Pendaratan Perikanan: BSAI Crab. Tersedia secara online:
https://www.fisheries.noaa.gov/alaska/commercial-fishing/fisheries-catch-and-landings-reports (diakses pada 5 Mei 2020).
84. Organisasi Pangan dan Pertanian (FAO). Statistik Perikanan dan Budidaya: B-42. Tersedia secara online:http://www.fao.org/
fishery/static/Yearbook/YB2017_USBcard/root/capture/b42.pdf (diakses pada 5 Mei 2020).