TALLER MEMBRANA CELULAR

Julian David Capera, Mariajosé Cardona Restrepo, Erika Dayana Morales Pinto y Laura Rozo Velandia

10-7. A classic paper studied the behavior of lipids in the two monolayers of a membrane by labeling individual molecules
with nitroxide groups, which are stable free radicals (Figure Q10-2). These spin-labeled lipids can be detected by electron
spin-resonance (ESR) spectroscopy, technique that does not harm living cells. Spin-labeled lipids are introduced into small
lipid vesicles which are then fused with cells, thereby transferring the labeled lipids into the plasma membrane. The two
spin labeled phospholipids shown in Figure Q10-2 were incorporated into intact human red cell membranes in this way. To
determine whether they were introduced equally into the two monolayers of the bilayer, ascorbic acid (vitamin C), which is
a water-soluble reducing agent that does not cross membranes, was added to the medium to destroy any nitroxide radicals
exposed on the outside of the cell. The ESR signal was followed as a function of time in the presence and absence of
ascorbic acid as indicated in Figure Q10-3A and B.

Figure Q10-2. Structure of two nitroxide labeled lipidsfunction of time in intact red cells and red cell ghosts
(Problem 10-7) Then nitroxide radical is shown at thein the presence and absence of ascorbate (Problem 10-
top, and its position of attachment to the 7). (A and B) Phospholipid 1 and phospholipid 2 in
phospholipids is shown below. intact red cells (C and D) Phospholipid 1 and
Figure Q10-3. Decrease in ESR signal intensity as a phospholipid 2 in red cell ghosts.

A. Ignoring for the moment the difference in extent of loss of ESR signal, offer an explanation for why phospholipid 1
(Figure Q10-3A) reacts faster with ascorbate than does phospholipid 2 (Figure Q10-3B). Note that phospholipid 1
reaches a plateau in about 15 minutes, whereas phospholipid 2 takes almost an hour.

RTA.Se debe a la localización del nitróxido en ambos fosfolípidos. El nitróxido en el fosfolípido 1 está en el conjunto de
cabeza y por lo que está en contacto directo con el medio externo, lo que significa que puede reaccionar velozmente con
el ácido ascórbico. El nitróxido del fosfolípido 2 está unida a una cadena de ácido graso y, lo que significa que está
parcialmente enterrado en el centro de la membrana, lo que se traduce a que es menos accesible al ácido y se disminuye
más muy lento.
B. To investigate the difference in extent of loss of ESR signal with the two phospholipids, the experiments were repeated
using red cell ghosts that had been resealed to make them impermeable to ascorbate (Figure Q10-3C and D). Resealed red
cell ghosts are missing all of their cytoplasm but have an intact plasma membrane. In these experiments the loss of ESR
signal for both phospholipids were negligible in the absence of ascorbate and reached a plateau at 50% in the presence of
ascorbate. What do you suppose might account for the difference in extent of loss of ESR signal in experiments with red
cell ghosts (Figure Q10-3C and D) versus those with normal red cells (Figure Q10-3A and B)?

RTA. Comparando las Figuras Q10-3A y C, está la presencia del mismo fosfolípido con la única diferencia de que en la
Figura C hay un glóbulo rojo fantasma sin citoplasma; mientras que en la Figura A hay glóbulos rojos sin cambios. Sin
embargo, si se analizan las señales de ESR, hay una disminución del 100% de los eritrocitos normales en presencia de
ascorbato y una disminución del 50% en su ausencia. A partir de esto, es posible preguntar por qué, incluso sin la adición de
ascorbato, el agente reductor, se reduce en la señal de ERS. En comparación con las células sin citoplasma, no hubo
disminución de la señal cuando no se añadió ascorbato. Esto nos permitió inferir que el citoplasma contiene uno o más
agentes reductores que disminuyen la señalización del ESR en eritrocitos normales en ausencia de ascorbato.
Ahora considerando las gráficas del fosfolípido 2 (Figuras Q10-3B y D), se puede observar que no mostró reducción de
señal en ninguno de los casos: con y sin ascorbato. Esto nos permite inferir que el radical nitróxido en la cola de los
fosfolípidos, no pueden ser reducidos por agentes reductores citoplasmáticos. Por lo tanto, la presencia o ausencia de
citoplasma no hace ninguna diferencia cuando se trata de la reducción radical antes mencionada en este tipo de fosfolípidos.
El único agente que pudo hacer esto en este experimento fue el ascorbato.

C. Were the spin-labeled phospholipids introduced equally into the two monolayers of the red cell membrane?

RTA. Los fosfolípidos se distribuyeron de manera equitativa en dos monocapas de la membrana plasmática de eritrocitos,
para el fosfolípido 1, no se añadió ácido ascórbico por lo que se logra observar una reducción del 50 % de la señal, debido a
que los agentes reductores citoplasmáticos no son capaces de reducir el radical presente en la monocapa externa, solamente
pueden reducir la interna. Mientras que el fosfolípido 2, no hubo un cambio en la señal debido a que no se añade ácido
ascórbico, por lo que no se logra generar una reducción en el radical en la monocapa externa, mientras que los agentes
citoplasmáticos sólo pueden reducir el radical presente en la monocapa interna.Por lo tanto, el 50% del fosfolípido 2 fue
sensible al ascorbato, el cual ejerce su efecto en la monocapa externa. Mientras que el otro 50%, no se alteró por los agentes
citoplasmáticos. Indicando que la otra mitad estaba presente en la monocapa interna.