ieviogenioil

igolago.DKA .

Cll ltgofokjc ueyskaniezwysokqwydajnosdwysokoczqsteczkoweg.co DNA odviejczystos.ci oddzielenie od DNA bialek

-

inhibitoro w enzyme w

innychzanieczyszczerisjgoottapogyskiivouni.ae
' '
i
,

hueasoivnmikleinouryck.m.bahtevie.am
kombrkiroslin.m-komorhizwierzqt.me
"

"

komorhi cztowieka
'

vogyskieeromie DNA do boudoir

oliagnostyognych.me
obwodowalimfocyty.am
"

threw
"

cebvlki wtosow
a.
komorkiptynuowodniowegomm.plamy kvwi nasienia ,

komo rkikosmowki fragmenty than eh

'
a. a.

a.
fibroblastow
hodowle a.
szpikkostny
a.
komoivkiepitelialne

egastosouearnieuoyigoloueomeego DNA
mm.tranfekcjakomorek.me
reakcjapcr
a.

analizavestrykcyjna.m.sekwencjonowanie.me
klonowanie a.•
"
"

kvyminalistyha
"

a.
transformacjabaktevii.m.diagnostykachorobmedycy.ua

nnretodyigolagi DNA
izolacja DNA zastosowaniemfenolu i chloroform
celuodbiatceeniapreparatow.ir#'izolacja
a.
z u w

lizatowleomorek.m.io/acjaDNAprzezzwiqzanie przebiegajqcaprzezwysoleniebiate.kz
DNA
vwolnienie DNA
odmycie hi em ,
' '
nos hi i
a
eanieczyszczen

etoysyigolagii DNA
•
Wstgpneprzygotowanie material biologicznego do izolacji DNA
homogenicacja
zawieszeniewodpowiednimbuforze.m-wzaleinos.ci
Oczyszczenie ,

od rodzajv jak pochodzenia steep przygotowanie ,

,

i material ,
w ne moi e obejmowac
oczyszczenia z ro't ne
'
-

go rodzajvzanieczyseczenzewneetrzny.ch poiywki ,
i poeostatos.ci innych komarek przemywanie buforami stab ilizvjqcymi ,

rozdrobnienie i homogenizeacjq , a nastqpnie zawieszaniejednolitejmasykomorkowej w odpowiednimbuforce

Dez integra cja i Liza Komarek ovaz uwolnienia DNA do voztworv, wktovym jest on rozpuszczalny i zabezpieczohy
priced degradacjq

Rozbicie
btonykomorkowej.m.poprzezhomogenizac.gg
sci i
any
miqkhie than ki zwievzece
a.⑨
ifihacjq zawiesiny komarek
'

son

.ir#'rozcieraniekomo'rhiros'linne,bahtevyjne
lice detergent
amikomorkizhodowlikomorkowej.li
a.⑤

zq enzymatycznq komo
ki battery
jne droidi
'
r owe
,

wewnqtrzkomovkowychdoroztworv.am#'destrukcja
Uwolnienie DNA i innychkomponento '

6th zewnqtrznych wotnie nie DNA innych

komponenentowzachowanieodpowiednichwarunkow.ae
> u i

'

do rozpuszczenia DNA i lizy komarek roztwov soli NaCl z Tris Ha

-
i EDTA DNA -
stabitn y z wi
geek jonowy lepiej roepvszczaluy
; ,

W roztvvorze NaCl

niiwodziedestylowanej.ae#Tris-HCLlpHehkozasadowe zmniejsza oddziatywania roztworv , elektrostatya ne

zasadowymibiatkami.ae#'EDTA-wiqiejony dry
mi g DNA a

hamujqdziataniedeoksyrybonvkle.az
"
Mg metal i Cd "
, ,
Mn "
hto've pozwiqzaniv a DNA wymagajq do
,

ahtywnosci Mg "
"
tub Mn

lnahtywacjaenzymownukleolityczny.ch
a.
DNA jest narai one na
dziataniedegradujqcychnukle.az
a.⑤
inaktywacjasilnymienzymamiproteolitycznymi proteinazak
.
Oddzieleniekwasu nukleinowegoodpozostatychkomponentdwkomorkowy.ch

Dysocjacjakompleksow DNA
biatho.ae#zniesienieoddziaTywan'jonowych
-

detergent :

y,
sole
owycharakter
czynnikdenaturvjqcydeoksyrybonukleazy
sodowasiarczanudodecylu
a.
so 't SDS] :
wigie sig z bi atkami silnie anion ,

i inne bi at ha
a.⑤
sole w wysokich stgieniach cathowitadysocjacjakompleksow DNA
: -
biatko , usuwajqzwiqzane Kat ion owe poliaminy
ddzielenie DNA od innychrozpuszczalnychkomponentowkomorkowy.ch
znymimieszaninafenolv.ch/oroformv,alkoholuizoamylow
a. cathowiteodbiatczenieroztworu ekstra kcjarozpuszczalnikami organic :

ego , odwirowanie
interfazazdenaturowanebiatha , dolna for a organic na RNA , lipid
tray warstwy gornafazawodna
'
a. : DNA , y
a.
fend rookie la
: DNA od ante
growanych z nim bialek odbiatcza

chloroform
powierzchniowadenaturacjabiatek.me
a.⑤ :

alhohdieoamylowy redukvje pie stabilizeje nie nie

faeowq DNA wytrqcanypoprzez dodanie etanolu
granice
"

:
, ,

Zagqszceenie pre paratu DNA

matoczqsteczkowych.am#'poekstrakcjiewykle
i
'

. us unique zanieczyseczen

zanieczyszceonematoczqstecekowymizwiqekami.am DNA
jest w
dviym roxie n' czenivw facie wodnej ,

rozpuszczalnik organiccny DNA tworay ni tho wat sad zebranie

odwirowanie.me
"

yo
: -

w etanolv RNA
drobneeanieczysxeeniemiestrqcasigjahDNA.am#
:
"

ieopropanalv RNA
pozostajewroztworze.me
:
'

powytrqceniv FO 't tandem DNA do wyschnigcia i matej objqtoscibuforvoniskiej site jonowej

preemyciv
→
"

sig e
,
zaniesza w

bu for Te tub w wodzie

igolagio Dna go.pomocozgotowegogestovwukohmnienk.aeego

Zestaw do izolacjigenowego DNA zkrwi Blood Mini , AIA Biotechnology
.am#'zdolno5dwiqzaniaDNAdoeTozkrzemionkowych wysohichstgzeniach soli chaotropowych w

krew lizowana
a.⑤
b force lie ujqcym zawierajqcym sole Chaotropowe i detergenty niejonowe bufor LT dodatko
w u
,
-

Wo
uczestniczy protean protein k] a za

mini kolvmnqzeztoiemkrzemionhowym
DNA
oczyszczone DNA wy my wane nishojonowymi buforami tub wodg
a.⑨
'

nose one na na
,

brah
precypitacji
Footstoneoury speoggtlaboratoryjny
pigsty out not
on
yogare

uriioudri

wortdas
y

plastihi laboratorypre
.
avi genial
'

igolocga RNA
RNA kavas
euylsoruikkinoery.me
-

dnoniciowypolimershtadajqcysigznvkleotydow.me
je
"

ryboza zasadaazotowa adenine guanine cytozyna uracyl , hewas

fosforowy.AM#'RNAwkomo'rce:gTo'wniejqdro
"

, , , ,

i
cytoplazma mybosomy
air
powstanie RNA → transkrypcja
gtowna rola → real izacji informacjigenetycznej
a.

DNA vs RNA

Ce cha DNA RNA

wystgpowanie jqdrokomorkowe cytoplazma , vybosomy,

jqdrokomorkowe
mitochondrion , chloroplast
y
strvhtura priesthenna
zawszepodwojnahelisazwyklepojedyn.ua nic rotinie
'

vtoiona

budowanukleotydu '

reatakwasufosforowego reata kwasufosforowego'

deoksyryboea Vyboza
' '

adenine guan ina cytozyna adenine

guan ina cytozyna
' '

, , , , , ,

tymina ur
acyl
funk cja noshik inform
acjigenetyce-umoiliwiarealizag.ee infor -

macji genetycrnej
'

ng

Rodzaje RNA
.am#matrycowymRNA:posiadainformacje okdejnosciaminokwasowwbiatkach.matry.ca synteey bialek ,
41 RNA
.

a.
rybosomowy rRNA zbiathamibudujery bosomy miejscesyntezy bialek
:

aminokwasownamiejscesyntezybiaiek.am
transportujqcy tRNA transport
a. :

interfere
regulacjaekspresjigenowkodujqcychbiatka.me
siRNA , miRNA
"

ncyjne
:

mate jqdrowe snRNA intro wycinanie now

"

a.
mate jqderkowe snoRNA :

modyfikacje cheminne pre-mRNA

igolourouvieRHA.ir#'celizolacji:otrzymanie wysokiejjakos.ci RNA nieedegvadowane wysohi stopien czystosci

,
'

gasaolypraeypeogyvyolo-ueaniutRHA.m.US
uniqciezasocjowanych rRNA bialek
a.
rybonvkleazy leandro silnezwiqzkidenaturvjqcebiatkachlorowodorekguanidy.my
izotiocjaniangvanidyny.am
:
,

odczynniki preygotowane wodzie dietylopivowqglanem DEPC

lmlllwody.ir#'DEPC:hamvjedziaTanienukleaz,silny
"

na a ,

mutagen pra pod wyciqgiemwrqkawiczkach ca

a.
sterylizacjaprobowekikoncowek do pi pet auto Haw >

sole
dnaotropoue .ch/orowodoreklubizotiocyjanian gvanidynywwysokich steel .

pray izolacji RNA

a.⑨
zwiqkszajqzdolnoscztoikrzemionkowy.ch do wiqzania RNA
'
rozpadbtonkomorkowychidenaturacjqbiatek.me
a.

roztworachwodnych the zaburzeniawsieciwiqeaviwodorowy.ch si

"

W -
:

izolacja planemidOwego DNA

"

izolacja cathow itego DNA

"

izolacja cathowit ego RNA

•

elvcja DNA zieliagarowy.ch/poliakrylamidowych

•

znakowanie.restrykcjaogo-lolgjOLR.UA
oozysure RNA DNA poreahcjachenzymatyczny.ch
PCR
"

nie
, ,

gwjqciomTRIZOL-u.ir#'lizawTRkolvlizakomo'rek
ahtywacjaendogenny.ch RNaz ,
in
a.⑤
chloroform ekstrakcjazanieczyszczenbiathowy.ch rozdziat RNAi DNA
:
,

chloroform
stwy.am#'izopropanol:wytrqcenieikoncentracja fancy
a.⑨
wi rowan ie obecnoshi '
:3 war
'

w u

wodnej.ir#'osvszenieirozpuszczeniewwodzieosadv
RNA a

RNA
a.
bi atha i DNA moil iwe do Odayshania-
a
fancy organiczhej

itgolaejol
R.ua?netoolqkolurnienkoieeqPotrzebneodceynnihi
bufor
:

lizvjqcy
•

bufovy ptuczqce
•

'

2 mevkaptoetanol
-

96 1001 etand
"
-
.

kolumienhihomogenizacyjne
"
mini

kolumienhiwiqiqceigo-lovjaR.UA/DNAuroysooviuo
•

mini

builtin magnet

yogne.ir#'pohomogenizacji lizieiDNAiRNA
powierzchnikuleh.me
rat
wig zane na

kulki od at lie
magnetyczny
"

→
Sepe u

air
"

posey 6k ich przemyciach , oczyszczone RNA ID

NA duowane buforem elvcyjnym

gastronomic ueyigoloieronnego RNA

analizaekspresjigenow.am
a.⑤

"

poznan ich bud ie ow

y lokalizacjaegzonow i intronow

kompletowaniebibliotekcDNA.m.de/-ekcjawiruso'
a.

w RNA
air
.

amplifikacja RNA do an aliz mihromacierzowych

cieriogeniov 3
jakosioiowaipreparator
ilosiciowao-an.ae
DNA i Pina

Jednymz pier wszychetapow piracy a materialem genetycenymjestokresleniestgzehiaiczystos.ci preparator DNA tRNA

Stqzehie DNA i RNA moina okres tic
' '
na 2
sposoby :

.AM#'pomiarabsorpcj
Ivoryi5witrynna
atTaUV..metodaf-
me

pointat adssogscjisiviattaurgakresieuv
pochtanianie energi i fali elektro magnetycznej substance skutekprzejs.ci a stain podstawowego
-

a.
preez na e ze do

wzbvdzonego.am
spektrofotometr.me
"

prawo amber
"

ta Beer -
a

Prawo Lamberta Beena -

A- hot -
-

gdy c math , wtedyk-emolowywspotczynnihabsorpcjiidmom.cm

A etc
-
-

fncyjnych.me
tuouyn etryogn.am#'zastosowaniewzbudzanych
nmetoola

UV bavwnikow fluoresce
pvzez
"

bar w niki Tayag sie e dwuniciowym DNA jednoniciowym DNA ,

oraz RNA
a.⑤
Wy barwienie bvomkiemetydyny elektroforeza w , zeluagarowympoliakrymiladowym
'

porow na nie fluoresce ncji pro by

'

badawceej a
pro'6q kontrolnq

Qubit 4 Fluorometer

Barwnihi
a.⑤
Hoechst
aim
Bvomeketydyny
"

air
Pico Green
"

230hm > EDTA , polisa chary dy , etand

260hm > DNA
,
RNA
270mm >
fend
280hm → biatka
320hm →
drobinykomorkowe

obligernie Stefania DHA ima

.am#'absorbancjaX=260nmro'wnal!dladwunici
Owego DNA ostqz 50M£
.
CET) Hoo-

CHIT) Hao
-

Ano ) x 50 xvozcienicaenie lab CET) Azad 50 xvozcieniczenie

-

dlajednoniciowego DNA ostqz 33M£ A 3201×33

vozcieniczenielubc.tt#--Aaox33xvozcieniczenie
- -

×
.
 •
d la DNA o stqz 40M£ CET) Hoo Ano ) box vozcieniczenie but CET) Az, ox 40

xvozcieniczenieognaogerrieogystos.ci
-
-

x -
.

preparator Dharana

a.⑨
zanieczyszczenie DNA tRNA bi atkami Stosunk u A260 do A280
'

.am#'Aa7s:miqdzyh8-2-7Wystarczajqcooczyszceone
Aa::: 1,5 -7501 bi at ka
pre paracie DNA tRNA
-
arm
.

.
w

a.③
'

Max .
absorban oji 2x wiqksze nii absorbancjatta
a.
krytycznedlareahcjienzymatycznychf.is: i II:< 1,4

wynihi amplifihacji stab e znakowaniesond do

mikromacierzy.m.cl
air
nizsze : stab e
.

et 6yd problem
:
naw RT-PCR moi e em

a.⑤ nisha czystos'd powtonzyc ehstrakcjq

→
'
al ko hole in

erodgajegarnieogysggein
Fend
a.B
"

Wzrost w 200 230hm i rozszerzehie

-
w 250 -280hm

je sie do zastosowan
enzymatyczny.ch/zotiocyjanian/chlovekguanidyny
a.
nie nada '

wydatny pile 230hm przesunigcie absorbancji

charahtevystycrnetejkontaminacji.me
a.⑤ A-
tRNA ,
DNA 270 nm

nada do zastosowan
nie
'
enzymatycenych
"

je sie
BiaTha
air#
'

Wzrost 200 230 nm , rozszerzenie 250 280hm

- -

pray nie Wielki in zanieczyszceeniu salt

a.⑨
Wielki spadek IIs:
'

. nie

Etanol l ko propanol
brah zhaczqcychzmian absorban cji
air
"

DNA przez RNA tRNA preez DNA

Oba
wystqpvjqrazempoizolacji.me
a.

zbliionapochtanialnosdiemisjaswiatta.B.tv
barde
"

bek DNAzq , DNA zq

'
a wienie
pro
 4
ieviogeniol
elektroforego
DNA i RHA

elektro
forego
a.⇐
zjawisko elektro kinetyczne ktorym pod wptywem przetoionego pola elektrycznego preemieszczajq sing makroczqsteczkiobdarzo
"

,
w -

hiezvownowaionymtadunkiemelektvycznym.am
prqdkos
"
he

lez y 'd za
'

od :

parametry czqsteczhi wi ethos'd ksztatt Tadunek , ,

specyfiha nos nika pH , sita jonowabufora

" '

zastosowany uktad parametry elehtryczne i zwiqzane

generowanieciepta
"

z him
Elektroforeza DNA i RNA

posiadajqniezrowhowazonytadunekelektryczny
vjemny-grupyfosfovanowe.am
air
"

elektrycznym
migvvjqwkierunkueleletvodytanody.m.g.to
polo pH lekhozasadowe
"

idehtyfikacji
'
w na me analityczne
toda ,
rozdzielania i oczyszczania DNA tRNA Ce le i pveparatywne
Elektrofore za
analityczna.ae#'vstaleniewielkos'cifragmentu
czqsteczkowych.m.us/-alenieilos'cipreparatu tempo migvacjibadanychprqikow DNA tRNA do weorca mas

fluoresce prqika do preparator

intens yw nos'd ncji badan ego DNA weorcow ego

identyfihacjadegradacjipreparatusmugawielu.me
a.

identyfikacjazanieczyszczen
"

plebs
'
bi atha -
hour DNA 16
iatkozalegajqcywstvdzienkach; RNA -

smuga
Elektroforeza

paratywna-elucjawielusjekek brofoetyogne.me
pre

z ele
poliakvylamidowe
"

⑨
rozdziat DNAIRNA 5 2000
-

pz
zdohtadnosciq do
jednegonuhleotydu.m.ie/eagarozowe.vozdziaT
•

DNA tRNA 50 -
30000 pz
brah

wysohiejvozdzielczoscijel poliokrylomn iol w-e.am

•

przygotowy
substancjisiecivjqcych.me watery roztworu monomer o' Lami du
"

sq wane z i

powstajqwwyniku polimeryzacji N metylenobisakvylamidu

'

akrylamiduwobecnos.ci wolnych rodnihowprzez

N
"

monomerami
-
a
,

had siarczan amour APs i stabilize wanych preez TE MED

APS
icjatovpolimevyzacji.IE
a. -
in

katalizatorreakcji polimeryeacji
MED -
sjeleagaro-gouee.am
"

agarOga
"

frakcja again oczyszczoha z Krasnovostow

polisachavyd ok 800 liniowo
potqczonych reset heksozy
.

bialy prose ele, Tatwo rozpuszczalny we wrzqtku , ptynny do temp 40°C ,

poniiej 40°C porowaty Eel
"

buf-oryekkteoforetygne.m.tvis -
octan -
EDTA TAE

.am#'tris-fosforanTPE.m-
this borah EDTA - -

TB E
a.
'

alkali any

nratkerywiebkofoiDUA.ae#'W20rceoznanej wielhosciczqsteczhowych stuiqce do olivestenia wi ethoscianalizowanych fragment

mas
' ' '

ow DNA tRNA
a.
fragment y DNA hydroliey DNA faga Lambda tub planmidowenzymami vestryhcyjnymi EcoRl i Hind 111
'

syhtetycene ooh reston

yah wielkosciach fragment
'
a.⑨
DNA
'

ow

lsufogolseiaigajauoy
lepszaobserwacja buf obciqiajqcy barwhile letdry pozWala ledzenie migracji fragment DNA
podczaselektrofovezy.am
'
a.⑨ '
'

→ or na s ow
,
"

niebieshi :
xylene cyanol cyjanol kryten
-

f-ioletowy :
bromophenol blue -

bighit bromo fenolowy

pomaraniczowy :
Orange G
b uforce
czynnikobciqiajaecyglicerollsacharozazwiqkszajqcyg.gs/-os'd probhi
'
a.⑨
'

Bar wienie ie ti -

melody wizvalizacji :

bro meh

edyny.am#isrebvo.m. STBR
a.

Green
air
.

radioaktywnymi izotopami siavhilfosforv

lshcjiponaddwudziestokrotnie.BE
romeketyolyny.m.int
evkalvjepomiqdzysqsiednieparyzasaddwvni.ci owego DNA zwiqksza intens
yw nosc' fluoresce
'

wiqkszepowinowactwobvomhu do dwvniciowego DNA

niijednoniciowegoDNA.m.la
"

two vwidoczniony w UV
a.
stqieniebromkuetydyny 0,5 Mme

jocko
'scioueol Oceana

Rozdziatelektrofovetyczny DNA Eelv

agavozowym.AM#''zelagarozowy
w

0,8 -
tt .

.AM#'Wielko5dponad5Okpz,6ezsmvg-wysokoczqsteczkowe
Rozdziatelektrofovetyczny RNA Eelv
agavozowym.at#'zelagavowy
w

1/1,51
warunhidenatuvujqce.am
.

porozdziale frakcje 285,185

2
"

.am#'frahcja28S2xintensywniejszaniil8S brah
degradacji.AM#'mogqbyiwidoczne:mRNA-smvga
pierwszafrahcja tRNA ,
orare high oczqsteczkowe RNA
a.⑤
niepowinien wystqpowaiprqiek DNA