Toxi Temas 14-18

TEMA 14.
- ENSAYOS ESPECÍFICOS: CARCINOGÉNESIS, MUTAGÉNESIS, TERATOGÉNESIS O
No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
TOXICIDAD SOBRE EL DESARROLLO, REPRODUCTIVA O MODULACIÓN ENDOCRINA
*Sólo el titulo ya ocupa 20 páginas
CARCINOGÉNESIS
La carcinogénesis es un proceso de inducción de neoplasias malignas por agentes físicos,

químicos o biológicos.
Reservados todos los derechos.

Neoplasia: crecimiento por proliferación celular más rápida de lo normal,
relativamente autónoma, puede aparecer daño en el ADN y que continúe
después de haber cesado el estímulo inicial que va desencadenarlo, y puede
ser acumulable en el transcurso del tiempo.
Sinónimo: tumor: el cual puede ser benigno, pero cuando comienza a

aparecer metástasis puede pasar a convertirse en un cáncer maligno
Carcinógeno: sustancia que induce tumores
CLASIFICACIÓN CARCINÓGENOS
Carcinógenos genotóxicos: producen cáncer actuando directamente sobre el DNA

(replicación, mutación puntual, aberración cromosómica)
As, Cr, Ni, agentes alquilantes
Procarcinógenos (carcinógenos indirectos): sustancias que por si mismas no
son carcinógenos si no que precisan activación metabólica para serlo:
HAP: estructura en forma de epóxido muy reactiva, que se hidroliza
mediante epoxidasas en segundos, pero el citocromo es capaz de
continuar produciendo la oxidación de la molécula generando otro
epóxido entre los C8 y C9 (otra posición).
Esta posición del epóxido da lugar a una configuración estructural
del hidrocarburo aromático policíclico que favorece que esta
molécula se una a las bases nitrogenadas de DNA (adenina y
guanina)
Aminas aromáticas
Micotoxinas.
Carcinógenos epigenéticos: no son carcinógenos "per se no actúan directamente sobre
el ADN (no mutágenos) pero potencian los efectos de los carcinógenos (promotores);
alteran la expresión de los genes (sin alterar al ADN). Se podría decir que actúan
´´colaborando .
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Algunos mecanismos que producen:
! Metilación.
! Modificación de histonas
! Estimulación de la proliferación de células tumorales (por citotoxicidad crónica o
aumentando secreción hormonal)
! Inflamación
! Modificación de funciones hormonales.
! Aumento de las ROS.
! Modulan el crecimiento y la muerte celular
Determinadas hormonas (DES), asbesto, dioxinas
CLASIFICACIÓN CARCINÓGENOS SEGÚN LA IARC
Agencia Internacional de Investigación sobre el Cáncer (IARC) de la OMS (05/10/2020)
Clasifica las sustancias toxicas en grupos:
1. Grupo 1: Sustancias con suficiente evidencia de ser carcinogénica para el hombre (120),
siempre que exista dicha sustancia hay cáncer
Terapia de estrógeno post-menopausia, tamoxifeno, dietilestilbestrol, melfalan,
Aflatoxina, Cd, Compuestos de Cr (VI), compuestos de Ni, Humo de tabaco
2. Grupo 2: Sustancias para las que la evidencia de carcinogenicidad es limitada

2.1 Probables carcinógeno para humanos (88)
Cloramfenicol, cisplatíno, radiaciones UVA, UVB y UVC, virus herpes del
Sarcoma de Kaposi
2.2 Posible carcinógeno para humanos (313)
Ácido cafeico, cloroformo, clorotalonil, griseofulvina, virus de
inmunodeficiencia humana tipo 2, papilovirus humano tipo 6 y 11,
mitomicina C, oxazepam, fenobarbital, zidovudina, progesterona sola
anticonceptiva.
3. Grupo 3: Sustancias no clasificables como carcinógenos para el hombre (499). Las
evidencias entre el cáncer y la sustancia no están demostradas bien por falta de datos,
situaciones contradictorias
Aciclovir, actinomicina D, cafeína, cloroquina, dapsona, diazepam, temazepan,
eugenol, fenvalerato, furosemida, virus de Hepatitis D, peróxido de hidrógeno,
teofilina, teobromina
4. Grupo 4: Sustancias probablemente no carcinógenas para el hombre (1). Todos los ensayos
han dado como resultado q
5. ue no son carcinogénicas
Caprolactona, se emplea como sutura en quirófanos en las operaciones
Hay 3 criterios
1) Calidad científica de los estudios individuales de peligro; estadística adecuada, factores

de confusión y sesgos controlados, presentación y claridad.
2) Evidencia del cáncer en humanos, experimentación animal, evidencia mecanística y
otros
3) Rango considerando la clasificación de la IARC desde 1 a 4
Estudiar sin publi es posible. Compra Coins.

Mediante la presencia de cáncer en hombre, cáncer animal de experimentación y mecanismos
y otras evidencias Evaluación general
EVIDENCIAS
Evidencia suficiente carcinogenicidad: pruebas sólidas de relación causal entre el agente

y el cáncer en los seres humanos y en animales de experimentación (causa-efecto)
Evidencia limitada: la evidencia sugiere relación entre causa y cáncer, pero no es
suficientemente fuerte y no puede considerarse causa (puede ser debido a casualidad,
dispersión, distorsión de datos, confusión )

Evidencia inadecuada: insuficiente para establecer la relación causa-efecto porque en
los estudios disponibles:
! Hay pocos datos pertinentes o de insuficiente calidad, consistencia, estadística
o no hay datos de cáncer en humanos
! No excluye el azar, sesgos o variables desorientadoras
Evidencia que sugiere pérdida de cáncer: hay estudios de calidad disponibles que no
muestran datos de carcinogenicidad.
Evidencia mecanística: hay pruebas sólidas de que el mecanismo de carcinogenicidad
en animales NO funciona en humanos y NO hay pruebas suficientes en animales ni de
estudios mecanicistas (mecanismos de carcinogenicidad)
Grupo 2A. Carcinógenos probables a humanos.
Se realizan al menos 2 evaluaciones y por lo menos una de ellas en humanos o en células o

tejidos humanos:
Pruebas limitadas en humanos evidencia sólida en animal de experimentación de que la

sustancia es carcinógena y de que la sustancia tiene características de carcinógeno
Pruebas inadecuadas en humanos pero evidencia sólida en células o tejidos humanos
de que la sustancia es carcinógena y de que la sustancia tiene características de
carcinógeno
Grupo 2B. Carcinógenos posibles a humanos.
Se realiza sólo 1 evaluación. No se requiere ninguna prueba en humanos o en células o tejidos

humanos, pueden ser únicamente en animal de experimentación y sobre las características
carcinógenas de la sustancia en cuestión.
Se aplican consideraciones adicionales cuando hay pruebas sólidas de que el mecanismo de

carcinogenicidad en animales de experimentación no funciona en los seres humanos para uno

o más sitios tumorales, las restantes localizaciones de tumores deben seguir apoyando una
evaluación de pruebas suficientes en animales de experimentación
Grupo 3. No clasificable por su carcinogenicidad a humanos.
Los agentes que no pertenecen a ningún otro grupo suelen incluirse en esta categoría.
No indica no carcinogenicidad ni seguridad general
A menudo significa que el agente tiene un potencial cancerígeno desconocido y que hay
importantes lagunas en la investigación.
*No entra para el examen la explicación del grupo 2A, 2B y C (yuju)
MECANISMOS DE ACCIÓN
Genotóxicos: No dosis mínima. No niveles seguros de exposición.

Epigenéticos: dosis mínima Nivel basal o umbral ( )
Cuando una sustancia se une al DNA:
Apoptosis si las malformaciones y alteraciones en la

replicación del DNA son muy grandes y hay muchas

Replicación DNA alterado carcinógeno genotóxico, el
efecto de alteración del DNA es genotóxico, quiere decir que
cada vez que se produce la replicación celular se va a llevar
a cabo esa mutación.
Cuando se conoce esta característica no hay una dosis
mínima segura, ni hay niveles seguros de exposición, lo que
la ley establece es que debe haber una exposición mínima siendo la óptima el 0 y
cuando no sea posible se establecerá un valor por medio de los estudios de valoración
de toxicidad
Reparación del DNA
En el caso de que sea una sustancia epigenética, no altera directamente el DNA pero puede
producir una proliferación celular anormal sin la necesidad de unirse físicamente al DNA.
En este caso, sí que se puede establecer una dosis mínima muy pequeña para que la exposición
sea la menor posible y que no suponga un riesgo para la persona expuesta. Considerando el
nivel umbral (nivel por debajo del cual no hay efecto) el punto de partida y se dividiría por
para asegurar que la concentración a la que nos exponemos no supone un riesgo
ENSAYOS DE CARCINOGENICIDAD IN VITRO
Siempre que se mide la capacidad de una célula para replicarse de forma anormal y
descontrolada, pudiendo llegar a producir un cáncer o tumor, es un proceso complejo con gran
cantidad de estados, interacciones biológicas por lo que es muy difícil su estudio in vitro.
El proceso de carcinogenicidad es el resultado de una secuencia de

estados e interacciones biológicas complejas. Los efectos adversos son
tan complejos que no hay un modelo sin animales capaz de comprender
todos los aspectos.

Como las alternativas y la directiva UE insisten en modelos
alternativos se utiliza una estrategia para acercarnos a lo que sería
la carcinogenicidad en la metodología alternativa.
Los expertos sugieren que el potencial carcinógeno de una

sustancia puede detectarse por combinación de:
1) Diversos ensayos de genotoxicidad in vitro

2) Ensayos de transformación celular, para observar los cambios que se producen en una
célula normal y hacen que se trasforme en una célula que prolifera incontroladamente.
3) El ensayo de comunicación intracelular a través de la unión entre células
Sin embrago prácticamente no existen datos y las conclusiones son muy limitadas

ENSAYOS DE CARCINOGENICIDAD IN VIVO
Información previa del potencial carcinogénico genotóxico a partir de los resultados de

los estudios sobre mutagenicidad y genotoxicidad.
Información complementaria a partir de los ensayos de toxicidad por administración
continuada (subcrónica) o crónica.
Información toxicocinética: detecta productos químicos con potencial carcinogénico
Estudios en profundidad: Ensayos de carcinogénesis, hoy en día estudios combinados
de toxicidad crónica y carcinogénesis.
ESTUDIOS IN VIVO
o Animal: preferente rata, también ratón y hámster (se aconsejan dos especies
diferentes)
" 50 animales por grupo/ambos sexo/para cada dosis (mínimo)
o Dosis: 3 dosis mínimo/ensayo + control. Administración diaria (3 vías; oral,
inhalatoria o dérmica)
Para seleccionar la dosis hay que considerar la dosis máxima tolerable. Una dosis
que en el animal cause efecto, pero no altere su supervivencia (no acorte vida, no mate y
no cree un efecto tóxico excesivamente visible).
o Duración del ensayo:
" 18 meses ratones y hámsters
" 24 meses ratas
" Se dará por concluido cuando la supervivencia del grupo control o grupo dosis
menor < 25%, es decir si la dosis está produciendo muerte al mes o a los dos meses
del grupo control o del grupo con menor dosis el ensayo se para y se reorganiza
pues pierde su viabilidad.
o Observaciones de cambio:
" Diarios en: piel, cabello, ojos, membranas mucosas, sistema respiratorio,
circulatorio, nervios, comportamiento, muerte y tumores (momento de aparición,
localización, dimensiones, aspecto y progresión de los tumor palpables).
" Semanalmente: control de peso, alimentación, bebida, etc.
" Depende del responsable: examen clínico pruebas hematológica (no en ratón ni
hámster porque el volumen sanguíneo no lo permite), orina, bioquímica
o Sacrificio: examen histopatológico de órganos y tejidos o sangre
o Respuesta: mayor incidencia de tumores palpables y descubiertos después del sacrificio
que el control y no observado en el control.
CRÍTICAS Y ARGUMENTOS A FAVOR DE LOS ENSAYOS DE CARCINOGENICIDAD
o CRÍTICAS
" Resultados obtenidos a elevadas dosis en animales comparados con los bajos
niveles de exposición en el hombre.
o A FAVOR
" Los carcinógenos químicos en seres humanos conocidos tienen un potencial
carcinógeno en animales.
" Muchos de los carcinógenos humanos se han descubierto a partir de los ensayos
con animales.
Ej., dietilestilbestrol, fenacetina, aflatoxinas, cloruro de vinilo
Dosis-Longevidad-Población
MUTAGÉNESIS
Capacidad de inducir una mutación, o cambio en la secuencia normal de los pares de bases
que caracterizan la estructura de cada molécula de DNA

Cambios transmisibles y permanentes en la estructura o cantidad de material genético de
un organismo que produce cambios en las características de su fenotipo
Pueden producir una mutación:
Espontánea: consecuencia de un error en la replicación o reparación del DNA

Inducida: por agentes físicos y químicos que han penetrado en el organismo vivo (se
unen al DNA y producen una alteración)
La mutación es un efecto sin umbral, a diferencia del cáncer donde los mecanismos
epigenéticos sí que tiene una dosis basal que establece un límite seguro. Al igual que los
mecanismos genotóxicos no hay nivel basal o umbral o dosis mínima para carcinógenos
genotóxicos o mutágenos (pues al fin y al cabo un cáncer genotóxico es un mutágeno)
CLASIFICACIÓN MUTAGÉNESIS
1. Categoría 1
Sustancias que, se sabe, son mutagénicas para el hombre.
Se dispone de pruebas suficientes: relación de causa/efecto entre la exposición del
hombre y la aparición de alteraciones genéticas hereditarias.
Pruebas positivas a partir de estudios epidemiológicos
2. Categoría 2
Sustancias que pueden considerarse mutagénicas para el hombre.
Pruebas positivas a partir de ensayos en células germinales in vivo
Se dispone de suficientes elementos para suponer que la exposición a la sustancia
puede producir alteraciones genéticas hereditarias.
La presunción se basa en estudios apropiados en animales y otro tipo de
información pertinente.

3. Categoría 3
Sustancias cuyos posibles efectos mutagénicos en el hombre son preocupantes.
Los resultados obtenidos de mutagénesis son insuficientes para clasificar dichas
sustancias en la segunda categoría.
Pruebas positivas a partir de ensayos en células somáticas in vivo
Mutación en células germinales: cambio hereditario
Mutación en células somáticas: disfunción metabólica, carcinogénesis y susceptibilidad para

contraer ciertas enfermedades
TIPOS DE MUTACIONES

Mutaciones genéticas puntuales reversibles (retromutación)
! Son de dimensiones reducidas.
! Afectan a uno o varios de las pares de bases, a uno o varios genes.
! Naturaleza reversible por ello también son denominadas retromutación.
Mutaciones o aberraciones cromosómicas
! Son cambios que afectan a grandes fragmentos de ADN o cromosomas
enteros.
! Pueden ser numéricas y/o estructurales
! No son reversibles
ENSAYOS DE MUTAGÉNESIS
Se pueden llevar a cabo en diferentes géneros o especies
Bacterias: Salmonella typhimurium, Escherichia coli

Levaduras: Sacharomyces cerevisie
Insectos: mosca Drosophila melanogaster
Mamíferios Roedores y cultivos celulares, etc
Modelos transgénicos: Animal o individuos en cuyas células se insertan y expresan
genes de interés de otros organismos diferentes, pudiendo introducir DNA de otra
especie
No hay un ensayo único capaz de definir la gran variedad de mutaciones, por lo tanto se utilizan
una serie de ensayos que entre ellos se complementan y que pueden ayudar a conocer el tipo
de mutación que se está produciendo.

Baterías de ensayos
1) Ensayo in vitro: mutaciones genéticas, normalmente en bacterias. Dependiendo del

resultado se realizan otros ensayos.
2) Ensayo in vitro: alteraciones cromosómicas (afectan grandes facciones de DNA) en
células de mamífero en cultivo
a) Aberraciones de cromosoma en metafase
b) Micronúcleos
c) Mutación del gen tk de linfoma de ratón
Se aconseja que al menos se realicen dos de ellos. Dependiendo de resultados obtenido
se realiza la última fase.
3) Ensayo in vivo: daño cromosómico en células hematopoyéticas de roedor (aberración
en metafase o micronúcleos).
In vitro
A. MUTACIONES GENÉTICAS PUNTUALES O RETROMUTACIÓN
Se emplea el test de Ames, que se estableció en los años 70, teniendo en cuenta que
todos los protocolos han de estar estandarizados de forma común se podría pensar que ha
quedado anticuado, pero se sigue haciendo ya que da resultados muy fiables
Test de Ames: Mutación reversa en Salmonella typhimurium (gen que codifica la histidina)
o E. coli (gen que codifica el triptófano) (retromutación).

Rápido: los resultados se obtienen en 72h
Económico porque se hace en placas de Petri con cepas, por lo que solo se invierte
en estos dos factores
Sencillo.
Proceso: Consiste (en este caso) la salmonella codifica el gen de

la histidina, de manera que no puede crecer en medio de cultivo en
ausencia de histidina.
Se adiciona la muestra control a la placa con medio sin histidina con

cepas de Salmonella y en otra placa con el mismo medio (ausencia
de hys) Salmonella a la que se adiciona la sustancia que es
mutágena.
Si la sustancia es mutágena revierte el gen que codifica la histidina,

por lo que la Salmonella es capaz de codificarla y en consecuencia,
dará lugar a crecimiento bacteriano porque la sustancia ha revertido
la mutación.
El control es negativo, pues como no es una sustancia mutágena no habrá crecimiento
Hay algunas sustancias que sabemos que son mutágenas a través de la

biotransformación. En este caso, el ensayo se hace con o sin actividad externa.
De forma que tiene un poco de hígado de rata estimulado con una sustancia
llamada Aroclor que es un inductor enzimático para activar al citp450 para ver si
es sustancia mutágena con o sin activación externa
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Las aberraciones puntuales producen numerosas enfermedades genéticas humanas. En
genes supresores de tumores en células somáticas intervienen en la formación de tumores
Si el resultado da positivo + pasamos al siguiente ensayo
B. MUTACIONES O ABERRACIONES CROMOSÓMICAS In vitro

Se empieza con ensayo in vitro y se pueden utilizar diferentes tipos de células.
Vamos a estudiar si hay alguna alteración en el DNA, que afecta a grandes facciones
de DNA o incluso cromosomas. Se va a observar si en la división celular (primera fase,
metafase) se está produciendo alguna ruptura de cromosomas, error en la división o alguna
alteración en el número de cromosomas

1. Ensayo citogenético de aberración cromosómica
Líneas celulares de ovario (CHO-K1) pulmón (V79), cultivos humanos
incluyendo células humanas (linfocitos de sangre periférica de mamíferos),
cultivos primarios, etc
Las aberraciones se analizan en la 1ª división mitótica tras el
tratamiento, se ponen en contacto las células que se desea analizar
y se espera el tiempo suficiente para que se dé una división celular
Se recogen las células en metafase, se tiñen y analizan al microscopio para detectar
aberraciones cromosómicas por ejemplo: si hay el mismo número, hay rotura, faltan
cromosomas
Con y sin activación hepática (fracción S9 es una fracción de hígado normalmente
obtenida de un animal vivo donde el citp450 está activado, de manera que es capaz
de actuar y biotransformar) y controles positivos
2. Ensayos micronúcleos en líneas celulares

Se determina la formación del micronúcleo durante la división celular. Se
observa si aparecen micronúcleos, son partes de material genético que ha
quedado rezagado, que se ha segregado de manera incorrecta durante la
división celular.
Al verlo, observamos si una sustancia ha producido una alteración o
aberración genética
Puede contener (tinción del centrómero para ver como se ha producido la división
celular):
! Un cromosoma
! Parte de un cromosoma que no se ha segregado correctamente
Con y sin activación hepática (fracción S9) y controles positivos
Resultados micronúcleos (EFSA, 2011)
! Negativo con ensayo in vitro: la sustancia no es genotóxica
! Contradictorio con ensayo in vitro: confirmar con otro ensayo in vitro, pues
hacemos ensayos en diferentes líneas celulares y repeticiones por lo que
pueden dar resultados contradictorios. Se debe confirmar la mutación
! Positivo con ensayo in vitro: pasar a la estrategia del ensayo in vivo
!
1. Ensayos micronúcleos en roedores
Se determina el daño mitótico en eritrocitos de la medula ósea de rata o

ratón.
Se expone el animal a la sustancia que se cree que es mutágena, se

espera durante el tiempo suficiente para que suceda la división celular y
se recogen las células sanguíneas, se tiñen y se analizan.
Los micronúcleos se forman a partir del material cromosómico que ha
quedado rezagado durante la mitosis.
TERATOGÉNESIS O TOXICIDAD SOBRE EL DESARROLLO, REPRODUCCIÓN Y MODULACIÓN

ENDOCRINA
o Toxicidad del desarrollo

Aquella inducida durante la gestación y que se manifiesta a través de muerte pre- o peri-
natal, retraso en el crecimiento intrauterino, malformaciones físicas o defectos
funcionales.
La sustancia que afecta al embrión se denomina Teratógeno/embriotóxico
o Toxicidad reproductiva:

Aquellos efectos adversos que resultan en alteraciones de la capacidad reproductiva de las
personas y que pueden expresarse como alteraciones de los órganos del sistema
reproductor, del sistema endocrino o del niño en gestación.
Algunos autores incluyen la modulación endocrina (estrogenicidad) dentro de esta
categoría.
La Comisión Europea (1999) define moduladores endocrinos sustancias químicas

capaces de alterar el equilibrio hormonal, pudiendo provocar diferentes efectos adversos sobre
la salud de las personas, animales o de sus
CLASIFICACIÓN TERATOGÉNESIS SEGÚN SU MECANISMO DE ACCIÓN
1. Categoría 1: Sustancias que imitan la acción de las hormonas producidas naturalmente.

2. Categoría 2: Sustancias que bloquean los receptores hormonales de las hormonas e
impiden su acción.
3. Categoría 3: Sustancias que interfieren en la síntesis, transporte, metabolismo y secreción
de las hormonas.
SUSTANCIAS IMPLICADAS
Sustancias que están implicadas y pueden causar teratogénesis:
Radiaciones: ambientales (90%. Por ejemplo: rayos gamma, en la mayor

parte a través del suelo de las rocas) y terapéuticas (rayos X) pueden
producir malformaciones genéticas
Agentes infecciosos: rubéola, sífilis, toxoplasmosis (protozoo; toxoplasma que suele ser
habitual en gatos), listeriosis, etc. algunas se adquieren a través de la dieta por lo que
durante la gestación es importante el control de la dieta.

Compuestos químicos:
! Etanol (síndrome alcohólico fetal): dismorfismo craneofacial cursa
con alteración en el cráneo, retraso de crecimiento intrauterino y
postnatal, retraso desarrollo psicomotor e intelectual. Por lo que el
consumo de alcohol durante el embarazo es perjudicial.
! Tabaco: Abortos espontáneos, muertes perinatales, aumento del
riesgo del síndrome de muerte súbita del bebé, aumento de los
trastornos del comportamiento de aprendizaje y de atención y menor peso al
nacer.
! Nicotina: neuroteratógeno en animales experimentación
*
Según la profesora se puede beber o fumar, pero muy limitadamente. Depende de
la dosis umbral, es decir la teratogénesis es un efecto o una toxicidad crónica con
dosis umbral y por tanto, hay una dosis por debajo de la cual no hay efecto.
! Talidomida (focomegalia) se trata de un fármaco que ayudó a los estudios de

FV
! Retinoides precursores de la vitamina A (malformaciones de
la cara, extremidades, corazón, SNC y esqueleto.), durante el
embarazo es una sustancia que produce teratogénesis con
dosis umbral a una concentración superior a 10.000 unidades,

pero por debajo se puede consumir.
Compuestos hormonales, beta-agonistas anabólicos, raptopamina
Otros: dioxinas, nitrosaminas
FACTORES MODULADORES DE ESTOS EFECTOS
1. SUSCEPTIBILIDAD DE LA ESPECIE
A. Diferencias en las vías metabólicas
Feto humano: la metabolización tiene lugar en el hígado y tejido
extrahepático. Las enzimas fundamentalmente están en el hígado, pero
también en la piel, riñones, glándulas suprarrenales
Fetos de ratas, cobayas, conejos y cerdos: NO metabolización
extrahepática
El principal órgano metabolizador es el hígado, pero hay que tener en cuenta que
algunos individuos o especies no hay metabolización extrahepática pues se trata
de un dato importante a la hora de seleccionar la especie
B. Diferentes metabolitos producidos

Las distintas enzimas pueden producir distintos metabolitos, en función del que se
genere puede producir teratogénesis o no. De manera que, dependiendo del
enzima que metabolice la sustancia y los metabolitos que produzca puede tener un
efecto teratógeno o no.
Por ejemplo:
El citocromo p450 o la N-metiltransferasa tienen distintos tipos de
isoenzimas
Imipramina (antidepresivo tricíclico).

C. Diferente transferencia a través de la placenta
La placenta puede transmitir gran cantidad de sustancias al individuo permitiendo

el paso de sustancias que depende de distintas propiedades:
Propiedades xenobiótico: liposolubilidad, grado de ionización (ionizadas

no pueden pasar), grado de unión a proteínas plasmáticas o PM (no pasan
las moléculas de gran tamaño)
Propiedades de la placenta: flujos sanguíneo materno y fetal, metabolismo
o edad de la placenta (a mayor edad de la placenta mayor flujo)
2. PERIODOS CRÍTICOS DE SUSCEPTIBILIDAD
Gastrulación u organogénesis, primero se forma la
gástrula y empieza a diferenciarse en los órganos.
Humano: 21 a 56 días
Rata: 6-15 días
Ratón: 6-14 día
Conejo: 6-18 días
Si hay contacto con teratógenos en este período, se va a alterar la formación de órganos,

por lo que los primeros meses de vida son decisivos e importantes.

3. DEPENDENCIA DE LA DOSIS
Teratogénesis es un efecto tóxico con umbral. A diferencia de la genotoxicidad y
carcinogenicidad
ENSAYOS DE TERATOGÉNESIS
Se utilizan 2 especies, número de individuos:

! Rata, ratón y hámster 20 animales, se utilizan roedores
pues se reproducen muy rápido (a partir de 2 semanas de nacer, ya son
reproductivos), pequeño tamaño, fácil manejo, necesitan menos comida
! Conejos: 12 animales
3 niveles de dosis
Distintos grupos de animales
! Grupos control de referencia positivo; se tratan con
azul de triptan y vitamina A, sustancias que producen
teratogénesis uniforme y establecida
! Grupos control negativo
Proceso
In vivo *Me da penita
1) Cuando gesta la hembra, confirmación de la gestación
2) Administración de la sustancia teratógena (3 dosis) hasta previamente el parto
3) Observación diaria de la madre
4) Interrupción de la gestación: histerectomía
5) Se extraen los fetos, el útero y se recogen los órganos reproductivos
6) Se contabilizan los fetos vivos y muertos
7) Necropsia y autopsia completa de la madre
8) Inspección de fetos para detectar malformaciones
9) Se inspecciona el útero (centros de reabsorción fetal)

Respecto a los ensayos sobre el desarrollo reproducción
In vivo
Ensayos de 2 generaciones
Incluye
! Estudios de trastorno sobre la fertilidad de los padres
Funcionamiento de las gónadas
Ciclo del estro (celo)
Comportamiento en el apareamiento
Índice de concepción (pre-implantación)
Organogénesis (primeros estadios gestación)
Gestación
! Estudios sobre el desarrollo de la descendencia madre y la progenie
Madre: lactación y aceptación de las crías
Progenie: crecimiento, desarrollo y maduración sexual.

TIPOS DE ENSAYO
o Desarrollo prenatal
20 hembras grávidas (rata o conejos)
Método:
Animal: ensayo 20 hembras grávidas ( ratas o conejo)
Se administra el tóxico a las hembras 1 día antes de la implantación
Estudio previo a la implantación del embrión hasta 1 día antes del sacrificio
Observación durante la organogénesis y gestación
Contenido uterino (estado de gravidez, feto viables y no viables)
Feto (sexo y peso)
Anomalías externas visibles
Cambios en los tejidos blandos y esqueleto
Sacrificio 1 día antes de parir
o Ensayos toxicidad sobre el desarrollo y reproducción

10 ratas/sexo
Método
10 ratas/sexo
3 dosis (machos 28, hembras 54 días tratamiento)
Observación de efectos adversos, necrosis y alteraciones microscópicas sobre la
función gonadal, comportamiento, contracepción, evolución del parto.
No da información sobre la descendencia
o Ensayo sobre 1 generación

20 hembras grávidas (rata/ratón) y 20 machos
Método
Animal: 20 hembras grávidas (ratas o ratones) y 20 machos
1) Machos: durante la fase de crecimiento un ciclo completo de

espermatogénesis
2) Hembras: durante 2 ciclos ováricos completos
3) Se aparean los animales y se administra el tóxico a los dos sexos durante el
apareamiento.
4) Sólo a las hembras en período de gestación y lactancia
Efecto de la sustancia en la fertilidad, gestación y comportamiento materno, así
como de la lactancia, crecimiento y desarrollo de la primera generación desde la
concepción hasta el desarrollo.
o Ensayo sobre 2 generaciones

20 ratas grávidas y 20 machos procedentes de un ensayo de 1 generación o
de la generación parenteral
Método:
Animales: al menos 20 ratas grávidas y 20 machos procedentes de un ensayo de 1ª
generación o los animales de la generación parenteral.
Administración
" Después del desarrollo, se continua administrando la sustancia de la 1ª
generación durante todo el crecimiento, el período de apareamiento y el
nacimiento de la 2 generación hasta al destete de esta última.
Evaluar: integridad y funcionamiento del aparato reproductor, duración y
normalidad del ciclo estral en las hembras y los espermatozoides de los machos,
número y sexo de las crías, abortos, número de nacidos vivos y presencia de

anormalidades macroscópicas, y físicas, alteraciones del comportamiento de las
madres y las crías, desarrollo físico de la progenie (actividad motriz, funciones
sensoriales, reflejos, etc.)
*No hace falta aprender mirar anexo para ver cómo se realiza cada ensayo, me ahogo como
haya que saberselo
Ensayos de disrupción endocrina
Capacidad de una sustancia química para imitar en un sistema in vitro, in vivo o en ambos
los efectos de los estrógenos.
Unión a un receptor endocrino (ER)

Aumento de la síntesis de E2 (17-bestradiol=estrógeno natural)
Disminución o inhibición biotransformaciones del E2

TEMA 15: MÉTODOS ALTERANTIVOS AL USO DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN.
ENSAYOS DE TOXICIDAD IN VITRO. COMPONENTES DE LOS ENSAYOS IN VITRO

INTRODUCCIÓN
Cada año se sintetizan más de 1000 productos nuevos. Los animales que se utilizan para
comparar y evaluar al hombre: rata, ratón, hámster, cobaya, conejo, perro, gato, mono, rana,
peces y pájaros. Ejemplo: el pez cebra se utiliza en estudios de teratogenidad. En este caso, si el
estudio se realiza durante los primeros días de crecimiento se considera in vivo. Ahora bien, a
partir de un determinado día, ya se considera in vivo.

Cabe destacar que existen muchos laboratorios y empresas que se encargan de realizar estudios
de toxicidad. De este modo, se invierten:
o EEUU: 101,28 millones animales/año
o Canadá: 3,38 millones animales/año

o UE: >12 millones animales/año

REACH (sistema integrado de registro, evaluación, autorización y restricción de sustancias
químicas)
Las nuevas normas europeas para el sector químico (el llamado “paquete REACH”) tienen por
objetivo mejorar nuestra salud y proteger el medio ambiente. Las nuevas normas, que son
particularmente estrictas en cuanto a los productos tóxicos, dan a la industria química europea
un incentivo para elaborar sustancias nuevas y menos perjudiciales para las personas y el
medio ambiente.

RD 53/2013 – Directiva 2010/63/CE
En el Real Decreto 53/2013 sobre protección de los animales utilizados en experimentación y
otros fines científicos, estipula:
o Se debe garantizar que el número de animales empleados se reduzca al mínimo y se
eviten al máximo el dolor, sufrimiento o lesiones prolongadas innecesariamente
o Se debe fomentar la puesta a punto de métodos alternativos que puedan aportar el
mismo nivel de información que el obtenido mediante procedimientos con animales y
que supongan una menor utilización de estos.

LAS 3 R DE RUSSEL & BURCH, 1959
De este modo, se realizan ensayos o métodos alternativos que implican la aplicación de las 3R:
1. Reemplzar = Sustituir
- Uso de sistemas vivos: in vitro, otros animales y microorganismos.
- Uso de sistemas no vivos (QSAR y sistemas físicos y mecánicos à relacionan las
propiedades de las sustancias con su metabolismo in vivo).
- Uso de simulaciones por ordenador (ponemos una sustancia y predice su
comportamiento à Por ejemplo, en los procesos LADME).
2. Reducir = Disminuir
- Reparto de animales
- Reducción filogenética
- Mejorar la calidad de los animales (transgénicos)
3. Refinar = Perfeccionar
- Disminuir el grado y la intensidad de la invasión del organismo.
- Mejoramiento de la instrumentación.
- Mejoramiento del control del dolor.
- Mejoramiento del control de las técnicas.
- Uso de anestesia y analgesia.
4. Responsabilidad = Ética (Pérez-García 1991. Murcia ’91) à El científico es el responsable
que tiene que decidir cómo se realiza el ensayo.

Aplicación de las 3 Rs
1. Utilización de la información (mejoras en almacenamiento de datos) para evitar
repeticiones. Si ya existen ensayos previos sobre el compuesto a estudiar, evitaremis
realizar uno nuevo.
2. Modelos matemáticos que relacionen la estructura con la actividad.
3. Mejoras del diseño de experimentos para disminuir estrés y sufrimiento.
4. Uso de organismos pequeños no protegidos (sin SN por lo que no tienen sensación de
dolor). Ejemplo: Invertebrados, bacterias, hongos, algas...
5. Uso de vertebrados en 1as etapas del desarrollo (SN poco desarrollado, la sensación
de dolor es menor). En este caso, se utilizan embriones.
6. Técnicas in vitro sustitutivas de criba previas o complementarias para mejorar la
sensibilidad y especificidad en los estudios con animales. No se van a utilizar animales
de experimentación, sino que se va a trabajar con cultivos celulares.
7. Otros:
- Estudios en humanos (toxicovigilancia) à Seguimiento farmacoterapéutico (se
realizan una vez comercializado el medicamento à para observar los posibles
efectos tóxicos en más variedad de población y tiempo).
- Modelos en educación (audiovisuales, simulaciones, juegos).


JUSTIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS ALTERNATIVOS IN VITRO
Los métodos alternativos se justifican por razones:
o Morales y éticas: no hay estrés ni sufrimiento.
o Económicas: elevado coste de métodos de experimentación animal con especies no
roedoras. Una empresa si tuviera que realizar experimentos con animales tendría que
invertir mucho más dinero
o Científicas: las experiencias con células o fracciones celulares favorece el
entendimiento de procesos fisiopatológicos, alteraciones moleculares y medición
cuantitativa de efectos y acciones. Es decir, podemos observar y marcar moléculas, la
trayectoria de las mismas, mecanismos, aspectos genéticos, aparición de nuevos
productos, etc. (ya que el proceso a nivel molecular y celular es muy específico).
o Logísticas: disponer de suficientes medios (para mantener a los animales de
experimentación à lugar, comida, etc.)
o Socio-políticas: grupos sociales que exigen la abolición de la experimentación animal.
o Legales: la legislación europea y española exigen el reemplazo por métodos
alternativos si se dispone de otros métodos.

VENTAJAS DE LOS MÉTODOS IN VITRO
Los métodos in vitro presentan como ventajas:
o Ética y moralmente más aceptables
o Utilizan menos animales (si los precisan) à En ocasiones, se necesita el animal para
obtener las células sobre las que se va realizar el estudio.
o Material homogéneo (ya que trabajamos con un cultivo celular en una placa, lo que nos
permite trabajar con muchas células idénticas).
o Poblaciones celulares o fracciones subcelulares (permiten el entendimiento de
procesos fisiopatológicos, alteraciones moleculares, etc.).
o Objetivables y cuantificables.
o Mayor reproducibilidad (ya que la variabilidad es menor, debido a que las células son
idénticas).

o Mayor precisión en la dosis (en este caso, todo el tóxico que administremos estará en
contacto con el cultivo, mientras que si se realiza en un animal se puede ir perdiendo en
los procesos LADME).
o Control del tiempo de contacto.
o Nos permite observar los mecanismos de acción.
o Estudian influencias toxicocinéticas (a nivel celular).
o Ahorran tiempo (los protocolos de tiempo están muy bien establecidos y nos permiten
evaluar el resultado rápidamente) y dinero (ahorramos en personal especializado,
animales de experimentación, su cuidado, el espacio, etc.).
o Se utiliza menos cantidad de producto.
o Son puentes esenciales entre animales y humanos (se ven estudios a nivel molecular,
genético o celular).

INCONVENIENTES DE MÉTODOS ALTERNATIVOS IN VITRO
Ahora bien, los métodos alternativos in vitro, presentan los siguientes inconvenientes:
o Batería de ensayos (varios tipos) à No se puede con un único ensayo dar lugar a una
respuesta definitiva. Ejemplo: en los ensayos de mutaciones es necesaria la realización
de varios ensayos in vitro diferentes (que confirmen que no se producen mutaciones)
para poder realizar los ensayos in vivo.
o Ausencia de interacciones (con las distintas células o sustancias de los diferentes
órganos o sistemas del cuerpo). Es decir, en los estudios in vitro, falta de arquitectura
tridimensional.

o Limitada duración de actividad fisiológica à Dificultad de detectar toxicidad
retardada o crónica. Las células se reproducen unas 50 veces y luego entran en
apoptosis, por lo que nos va a limitar el tiempo de exposición de las células.
o Ausencia de fenómenos toxicocinéticos (entre órganos).
o Difícil empleo de sustancias volátiles, poco solubles, gaseosas o que se descomponen
rápidamente (ya que no se retienen en el medio de cultivo).
o Resultados erróneos (si hay modificaciones de las condiciones del ensayo).
o Complejidad de extrapolación (necesaria la información in vivo para poder extrapolar
de forma adecuada).

ENSAYOS ALTERNATIVOS IN VITRO
De este modo, los ensayos alternativos in vitro son ensayos previos, complementarios o
sustitutivos a la experimentación animal. Se han desarrollado de forma espectacular en los
últimos años debido:
o Gran evolución en métodos moleculares
o Mejoras en los cultivos de tejidos y cultivos celulares
o El uso de modelos por expresión diferencial de genes (genómica) y por perfil
bidimensional de proteínas (proteómica)

COMPONENTES DE LOS MODELOS EXPERIMENTALES IN VITRO
Los componentes de los modelos experimentales in vitro:
o Sustrato biológico: material orgánico, vivo o no, sobre el que se aplica in vitro el
xenobiótico y cuyas reacciones, ante tal estímulo, queremos extrapolar al hombre o
animal entero.
o Indicadores de toxicidad: parámetros que cuantifican las modificaciones producidas
por el xenobiótico sobre el sustrato.
o Evaluación: buena conjunción entre los sustratos biológicos y los indicadores de
toxicidad. Tiene gran trascendencia el protocolo utilizado para la exposición del tóxico
y el procedimiento estadístico utilizado (análisis de resultados à Evaluar
estadísticamente el resultado con el control).

SUSTRATOS BIOLÓGICOS UTILIZADOS IN VITRO
Podemos utilizar distintos organismos como sustrato biológico:
o Invertebrados
o Microorganismos
o Plantas
o Microalgas
o Preparaciones in vitro

Para incrementar la capacidad predictiva de los efectos en humanos utilizando modelos
experimentales in vitro se está aumentando la complejidad de los sistemas mediante el empleo
de cortes de tejidos o cultivos con diferentes tipos celulares, o alargando los periodos de
exposición mediante bioreactores.

El empleo de sistemas transgénicos resulta también muy útil.

Tipos de sustratos biológicos
1. Cultivo de embriones
2. Cultivo y baños de órganos à Su problema es que, a veces, al ser una parte del
órgano su viabilidad tiene un tiempo determinado.
3. Órganos perfundidos à Consisten en anestesiar a un animal, introducirle una
cánula y administrar la sustancia a testar en un órgano determinado,
monitorizándola. Posteriormente, se sacrifica al animal y se analizan las células del

órgano perfundido.
4. Explantes à Son parte de un órgano embrionario, por lo que las células tienen las
capacidades y características propias del órgano del que se han separado.
5. Cultivos de células
a) Cultivos primarios à Se realizan a partir de células que se obtienen de un
animal vivo (células primarias).
b) Reagregados celulares, células dispersas y monocapa
c) Líneas celulares establecidas, clones, etc. (sería un cultivo ceñular)
6. Modelos libres de células

Tipos de cultivo celulares
o Cultivo celular primario: células cogidas directamente del tejido vivo (por ej. biopsia,
embriones) y establecidas para crecer in vitro. El proceso para conseguir un cultivo
primario consiste en:
1) Extraer un pedazo de tejido
2) Disgregación mecánica del tejido
3) Obtención de las células en suspensión
4) Cultivo en una placa petri à Obtención
del cultivo primario

Después del primer cultivo, el cultivo primario se llama línea celular o sub-clon. Es decir,
si a partir del cultivo primario, obtenemos más cultivos que provienen del inicial, se
denominaran líneas celulares o subclones.

Cabe destacar, que los cultivos pueden soportar alrededor de las 50 divisiones entran
en apoptosis o empiezan a sufrir mutaciones, por lo que tienen un tiempo de vida
limitado.

Un cultivo primario es mejor porque es más reproducible ya que se trata de células
específicas de un determinado tipo, procedentes de un organismo vivo.

o Línea celular o sub-clon: poseen una duración de la vida limitada (pases celulares) y
presentan degradación (fenotipo y genotipo) con el tiempo.
- Pros: muy representativas de la función principal del tejido/tipos de células.
- Contras: no muy bien caracterizadas, vía limitada, proliferación lenta.

Proceso = transformación à Proceso en el cual las células de
un cultivo comienzan a tener vida infinita. A estas líneas
celulares se las denomina “Línea celular establecida”. La
transformación puede ser espontánea o inducida por
sustancias químicas, radiaciones o virus.

De este modo, a partir de esta línea celular establecida
podemos, continuamente, obtener células con las que
trabajar. Un ejemplo de ello son las células ELA (recordar

seminario) que se encuentran congeladas y de las que,
continuamente, se pueden coger muestras para realizar
ensayos.

Ahora bien, debemos tener en cuenta, que estas células, a pesar de tener un crecimiento
ilimitado, este llega un momento (alrededor de las 50 divisiones), en que deja de ser normal
debido a las mutaciones, por lo que deberíamos realizar los ensayos cuando las células crecen
en condiciones normales.

Las líneas celulares presentan una serie de ventajsa y desventajas:
o Ventajas:
- Gran cantidad de material homogéneo.
- Mantenimiento fácil.
- Resultados reproducibles en células aisladas.
- Utilización de diferentes técnicas sin interferencia de otras células, tejidos u
órganos.
o Inconvenientes:
- No hay estructura tridimensional
- Algunas células pueden no reflejar las funciones de las células, tejidos u
órganos originales.

INDICADORES DE TOXICIDAD UTILIZADOS IN VITRO
Tipos de mecanismos según el efecto tóxico:
o Mecanismos de citotoxicidad general: se deben a las interferencias producidas, por un
xenobiótico o sus metabolitos, sobre los procesos basales comunes a la mayor parte
de las células del organismo. Es decir, cualquier mecanismo que tenga lugar en
cualquier célula de forma común (procesos de apoptosis, necrosis, especies reactivas,
estrés, respiración, etc.).
o La toxicidad órgano-específica se dirige a órganos diana para ciertos tóxicos y explica
la mayor susceptibilidad y sensibilidad de éstos. Puede deberse a modificaciones de la
actividad basal de células especializadas, o pueden alterar mecanismos celulares
exclusivos de ese órgano o sistema, como por ejemplo la neurotransmisión. Es decir,
en este caso, debemos trabajar con la célula específica del órgano donde se produce el
proceso que queremos estudiar. Ejemplo: si quiere estudiar la neurotransmisión,
trabajaré con neuonas). Otro ejemplo podría ser trabajar con células de grandes núcleos
con nucleólos eosinofílicos prominentes (células de Hodgkin)

Tipos de indicadores de toxicidad in vitro
1. Morfología celular y tisular:
- Tamaño y forma celular, del núcleo, etc.
- Uniones y mecanismos de contacto intercelulares
- Vacuolas citoplasmáticas
2. Viabilidad celular
3. Actividad metabólica celular:
- Sustancias reguladoras
- Síntesis de macromoléculas
- Uso energía y enzimas
- Inducción
4. Proliferación celular
5. Membrana celular
- Composición y estabilidad
- Permeabilidad iónica
- Sistemas de transporte
6. Comunicación intercelular
7. Indicadores específicos (marcándolo por ejemplo con fluorescencia)

*El mantenimiento de la línea celular es una condición de trabajo no un indicador.

EVALUACIÓN Y ACEPTACIÓN DE LOS ENSAYOS IN VITRO

La comunidad científica acepta la utilidad y los resultados obtenidos por diversos
procedimientos in vivo y in vitro en investigación básica o aplicada de los efectos toxicológicos,
fisiológicos, mecanismos toxicodinámicos, de los procesos toxicocinétics, etc.

Para que los datos toxicológicos de un método experimental sean útiles para la evaluación de
los riesgos/peligro de una nueva sustancia y, permitir que esta pueda ser registrada, se requiere
que su protocolo haya sido validado científicamente y aprobado por las autoridades
legislativas, además, de proteger a los humanos, animales y medio ambiente.

En este sentido, cabe destacar la creación (1991) en Ispra (Italia) del Centro Europeo para la
Validación de Métodos Alternativos (ECVAM) à JOINT RESEARCH CENTER-EURL-ECVA 1991. Se
trata del organismo internacional que se encarga de validar y aceptar los ensayos.

Asimismo, en EEUU (1997) se creó el Comité Coordinador Interagencias para la Validación de
Métodos Alternativos (ICCVAM)

Funciones de la EURL-ECVAM
Según la Comisión Europea del Consejo y Parlamento (1991):
1. Coordinar la validación de métodos alternativos en la UE.
2. Actuar como un punto focal para el intercambio de información sobre el desarrollo de
métodos de ensayos alternativos.
3. Configurar, mantener y administrar una base de datos sobre los procedimientos
alternativos.
4. Fomentar el diálogo entre los legisladores, industria, científicos biomédicos,
organizaciones de consumidores y grupos de bienestar animal, con miras al desarrollo,
la validación y reconocimiento internacional de los métodos de ensayo alternativos.


Válidación y aceptación de los métodos in vitro
Para que los datos toxicológicos de un método experimental sean útiles para la evaluación de
los riesgos/peligro de una nueva sustancia y, permitir que esta pueda ser registrada, se requiere
que su protocolo haya sido validado científicamente y aprobado por las autoridades
legislativas, además, de proteger a los humanos, animales y medio ambiente.

Según la Directiva 2010/63/CE:
o Validación: “Proceso por el que se establece la reproducibilidad y relevancia de ese
procedimiento para un determinado propósito”.
- Reproducibilidad: repeticiones de los resultados entre diferentes laboratorios
y en el tiempo.
- Relevancia: validez científica y utilidad práctica.
- Propósito: aplicación que se pretende dar al procedimiento (objetivo)

o Aceptación: “Aprobación e inclusión de un procedimiento (por las autoridades
reguladoras) en las recomendaciones y normativas (nacionales, internacinales, OCDE,
UE) para su aplicación en estudios de evaluación del riesgo”.
1) Desarrollo del ensayo
2) Prevalidación: 3 fases
a) Perfeccionamiento del protocolo
La aceptación legislativa es un
b) Protocolo de transferencia
proceso complicado
c) Protocolo de actuación

3) Validación (estudios inter-laboratorio)
4) Evaluación
5) Progreso para su aceptación legislativa

CONCLUSIONES
Muchos de estos ensayos se utilizan de forma rutinaria, aunque no todos los resultados se
incluyen en los informes para ser registrados.

Hay diversos tipos de sistemas in vitro para evaluar la toxicidad. Es posible conseguir mucha
información sobre los mecanismos de toxicidad utilizando una o diversas técnicas, pero continua
siendo difícil realizar extrapolaciones de un sistema in vitro, que representa una parte
relativamente pequeña del proceso tóxico, al proceso completo, tal y como se produce en un
ser vivo.

ANEXO
Ensayos in vitro: Tipos de cultivos celulares. Ex. hígado

SOCRATIVE TEST
1. Se considera método alternativo:
a) Ensayos en líneas celulares
b) Ensayo preliminar de dosis fija
c) Ensayo de resistencia eléctrica transcutánea en rata
d) Ensayo con células primarias
e) Todas las respuestas son ciertas
2. Cuál de las siguientes respuestas no es una aplicación de las 3Rs:
a) Utilización de modelos matemáticos como por ejemplo los QSAR
b) Uso de vertebrados en las primeras etapas del desarrollo
c) Utilización de analgésicos y anestésicos
d) Técnicas in vivo
e) Utilización de bases de datos sobre estudios experimentales
3. Se consideran sustratos biológicos in vitro:
a) Órganos perfundidos
b) Líneas celulares establecidas
c) Explantes
d) Baños de órganos
e) Todas las respuestas son ciertas
4. Los cultivos celulares primarias se obtienen directamente de un tejido vivo conservando
sus funcione biológicas específicas, pero tienen un tiempo de vida limitado.
a) Verdadero

b) Falso
5. Las líneas celulares son líneas establecidas para crecer un vitro, se obtienen a partir de
un cultivo primario, son representativos de la función del tejido y tienen un tiempo de
vida prácticamente ilimitado.
a) Verdadero
b) Falso
6. Se considera una ventaja del cultivo celular:
a) Falta de estructura tridimensional
b) Aplicación a sustancias volátiles o que se descomponen rápidamente
c) Fácil extrapolación a modelos in vivo
d) Influencias toxicociénticas intracelulares
e) Gran reproducibilidad por tratarse de poblaciones celulares grandes
7. No es un indicador de toxicidad in vitro:
a) Determinación de la viabilidad y proliferción celular
b) Determinación de transporte transmembrana
c) Determinación de actividad metabólica
d) Alteración de morfología celular y tisular
e) Mantenimiento de la línea celular
8. Se consideran funciones del EURL-ECVAM (Centro Europeo de Validación de Métodos
Alternativos) la coordinación de la Unión Europea y mantenimiento, configuración y
administración de bases de datos de métodos alternativos.
a) Verdadero
b) Falso
9. La aceptación de un método alternativo por la EURL-ECVAM
a) Requiere la aprobación únicamente de los organismos nacionales
b) Es un proceso rápido en el que intervienen muchos organismos
c) La validación se realiza con estudios intra laboratorio
d) El objetivo es evaluar el riesgo para la salud humana
e) Las recomendaciones y normas para su aplicación las establece el país donde se
desarrolla el ensayo

TEMA 16. EPIDEMIOLOGÍA DE INTOXICACIONES AGUDAS. ANTAGONISTAS Y ANTÍDOTOS.
ASISTENCIA Y TRATAMIENTO EN INTOXICACIONES AGUDAS
1. INTRODUCCIÓN
Se debe conocer:
Fisiopatología del tóxico,

Metabolismo,
Posibles antagonistas,
Posibilidades de incrementar la inactivación y excreción,
Posibles secuelas
Para afrontar el tratamiento de una intoxicación aguda hay que conocer el tóxico, así sabemos cómo se metaboliza y
elimina, y si hay antídoto para ese tóxico. El intoxicado es un enfermo. Es una patología súbita y severa con un curso

rápido. Ante un cuadro de aparición brusca o sinuosa tras la administración, ingestión o contacto con sustancias
químicas, alimentos o medicamentos hay que pensar en una intoxicación.
2. MEDIDAS GENERAL EN EL TRATAMIENTO DE LAS INTOXICACIONES AGUDAS

Es importante:
Identificar la sustancia ingerida y toxicidad potencial,

Guardar los recipientes donde está el toxico y los restos del vómito del lavado gástrico
Determinar la necesidad o no de cuidados hospitalarios,
Diluir y extraer el tóxico del organismo si no está contraindicado
INTOXICACIÓN AGUDA:
1º) Soporte vital
2º) Tratamiento especifico: (a) Interferencia con la absorción (b) Antagonistas y antídotos y (c) Aumento de la
eliminación del tóxico
Si representamos una curva concentración tiempo, establecemos

que por debajo de la línea discontinua la salud del paciente es
normal, y por encima de dicha línea aparecen los síntomas clínicos
de la enfermedad. Intentaremos bajar esa meseta sombreada.
3 formas de disminuir el efecto del tóxico:
Esto se puede hacer impidiendo que se

absorba, y así la curva tiene menos pendiente
y tendemos menos concentración (A).
También facilitando que se elimine y así tiene
menos pendiente (B). O haciendo que el
estado de salud prevalezca a pesar de tener
una concentración alta, osea que el paciente
resista sin ponerse enfermo esas concentración de toxico (C).
Ante un intoxicado podemos:
A. Evitar que se produzca mayor absorción: interferencias con la absorción.

B. Neutralizar, bloquear o volver inocuo al tóxico: Al neutralizar estamos aumentando el umbral, porque
hacemos que no manifieste efecto clínico adverso en el paciente. Esto se puede hacer usando antídotos y
antagonistas.
C. Favorecer la eliminación del tóxico.
1
A. INTERFERENCIAS CON LA ABSORCIÓN: VÍA DE ABSORCIÓN
Vía inhalatoria: Retirar al paciente de la zona contaminada, respiración artificial, ventilación e ingestión de
líquidos.
Vía cutánea: Secado sin frotar y lavado.
Vía digestiva: Vómito o lavado gástrico, neutralización y eliminación. L
Inducción al vómito: es una de las medidas para evitar la absorción del tóxico ingerido. Está contraindicado:
o Si el paciente está con bajo nivel de conciencia se puede ahogar respirando su propio vómito.
o Si ha ingerido ácidos o álcalis fuertes.
o Si el tóxico rápidamente desencadena síntomas neurológicos importantes paciente convulsiona.
o Si son niños menores de 6 meses hacer un lavado gástrico con una sonda.
o
En pacientes debilitados neumonía con respiración del vómito.
o Si el paciente padece enfermedad respiratoria o cardíaca e hipertensión.
o Si ha ingerido hidrocarburos.
o Si hay vómitos abundantes.
Jarabes que inducen al vómito:
1) Jarabe de ipecacuana:
Es un antagonista de receptores dopaminérgicos, que favorece la eliminación. Los agentes activos son la emetina y la
cefalina. Está indicado hasta 6 - 8 horas post-ingesta. No debe administrarse con leche ni bebidas gaseadas. En niños
menores de 1 año tienen que hacerse en centros hospitalarios. No atraviesa la BHE.
Ventajas son: inducción del vómito en el 93% de los casos, es de uso extrahospitalario y es el emético de elección en

niños.
Inconvenientes son: ausencia de emesis en algunos casos, intervalo de tiempo hasta la emesis (el paciente puede entra
en coma antes de que haga efecto) y posible aparición de diarreas y miopatías. No está comercializado en España, se
prepara como fórmula oficinal.
2) Apomorfina: (agonista receptores D)
Actúa en los receptores de la dopamina en el bulbo raquídeo, y como atraviesa la BHE tiene efectos a nivel del SNC.
Puede producir una depresión del SNC, por eso está contraindicado cunado el toxico es depresor del SNC o cuando el
paciente ya tiene una depresión importante.
Está indicado en una intoxicación muy grave pero siempre que el tóxico no sea depresor del nivel de conciencia y se
haga antes de que pase 1 hora de la ingesta del tóxico. Es más rápido que el jarabe de ipecacuana o el aspirado-lavado
gástrica. También está indicado en intoxicación por paraquat.
Inconvenientes: Es muy efectiva pero a nivel del SNC puede producir somnolencia (depresión neurológica), depresión
respiratoria, y como es derivado de la morfina, sus efectos adversos pueden contrarrestarse con la Naloxona.
B. NEUTRALIZAR AL TÓXICO
La diferencia entre antídoto y antagonista es que el antídoto actúa directamente sobre el propio toxico, y el
antagonista actúa sobre los receptores. Si un tóxico está manifestando un efecto, es porque está actuando en un
receptor concreto y la manifestación clínica es consecuencia de la unión del toxico con su receptor.
Los antagonistas pueden ser específicos, que son los que actúan en el mismo receptor sobre el que actúa el toxico,
bloqueando el receptor o desplazando al toxico; y un inespecífico actúa sobre un receptor distinto al que actúa el
toxico, y puede ser que el efecto del antagonista sea una consecuencia fisiológica que se oponga al efecto del toxico,
por ejemplo, en una intoxicación por Digoxina, lo que hace es aumentar la fuerza y frecuencia de contracción y la
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toxicidad produce taquicardia y fibrilación ventricular que puede llevar a la muerte. Para contrarrestar con un
inespecífico, hacemos que el antagonista produzca una bradicardia para bajar esta frecuencia cardiaca.
ANTÍDOTOS actúan en 3 mecanismos de acción:
1) Destrucción o transformación química: Actuamos sobre el tóxico produciendo una reacción química que
transforme el toxico en algo menos toxico. En este grupo las reacciones que suceden son neutralización,
oxidación, reducción e hidrólisis.
2) Bloqueo: El toxico queda bloqueado y ya no se puede absorber. No interviene ninguna reacción química,
intervienen factores físicos y físico-químicos. Lo podemos hacer por dilución, adsorción, absorción,
precipitación y quelación.
Por dilución queremos administrar líquidos que disminuyan la concentración. Para diluir se aumenta el
volumen con agua albuminosa (vaso de agua con 2 claras de huevo), agua, y NUNCA debe usarse es la leche
porque puede ocurrir que la grasa de la leche favorezca la absorción de tóxicos lipófilos (solo podría usarse
cuando son productos cáusticos o alcohol). También se usan aceites minerales que son inertes, no se absorben

y no tienen efecto sistémico, lo que hacen es diluir y facilitar la evacuación porque aumenta el peristaltismo y
la presión osmótica.
En la adsorción se usa el carbón activo, que es el antídoto universal. Este tiene una gran superficie de contacto
y puede retener tóxicos en su superficie y después hay que administra un laxante porque el carbón activo es
astringente y estriñe mucho. El Cactivoes barato y efectivo.
Para la precipitación se forman sales insolubles o se hace por quelación. En el caso de formar sales insolubles,
se descartarían los anticuerpos especificos para la digoxina o para la colchicina porque estas intoxicaciones
pueden ser muy peligrosas. En el caso de la quelación, es añadir un compuesto voluminosos que se une al
toxico, lo hace insoluble y precipita.
3) Transformación en producto menos toxico sin que sea una oxidación, reducción, neutralización o hidrolisis:
Se puede usar cianuro, que produce metahemoglobinemia (hierro de la hemoglobina se oxida a hierro +3)
para evitar esto se usa el tiosulfato, que reacciona con el cianuro y da el tiosulfato sódico, que ya no es toxico
porque no tiene capacidad oxidante.

ANTAGONISTAS. 4 Mecanismos:
1) Favorecen la eliminación: En este grupo tenemos los eméticos, que estimulan el centro del vómito, que no
está protegido por la BHE. También usamos purgantes, que son los laxantes, que favorecen la eliminación por
vía fecal, se usa el sulfato de magnesio sobre todo o los aceites minerales. Los diuréticos se usan cuando el
toxico es hidrófilo, porque se eliminará por orina. Facilitamos la excreción renal de tóxicos ácidos si
basificamos la orina, y la de los básicos, acidificando la orina. Desplazadores: usamo gases ocmo O2.
Si la intoxicación ha sido vía respiratorio, hay que hacer un intercambio gaseoso, y esto se hace con
desplazadores.

2) Evitan o retrasan la formación de metabolitos más tóxicos por competencia metabólica: Si el toxico es un
metabolito, podemos impedir que se forme ese metabolito. Tenemos el caso de una intoxicación por metanol.
Es el alcohol que acompaña algunas bebidas alcohólicas. El metanol se transforma en ácido fórmico, que se
deposita en el nervio óptico y causa ceguera. Para evitar que se forme ácido fórmico, se usa el etanol, que usa
las mismas enzimas (alcohol deshidrogenasa o aldehído deshidrogenasa) pero como resultado no da ácido
fórmico y se ha eliminado el metanol.
3) Competencia por receptores específicos: Oximas y naloxona. La naloxona junto con el flumacenilo y tiamina
es la triada anti-coma que hay en urgencias, ya que cuando un paciente llega a urgencias en coma y no se sabe
por qué, se intuye que es una intoxicación de alcohol o drogas, se da tiamina, flumacenilo y naloxona
(antagonista especifico de receptores
opioides).Las oximas son antagonistas
específicos de los inhibidores de
aetilcolinesterasa, osea de los
organofosforados, y por tanto puede
regenerar la acetilcolinesterasa. Reversión
total o parcial de la depresión respiratoria o
de la depresión del SNC en el recién nacido
cuya madre ha recibido opiáceos.
4) Recuperación o superación del efecto funcional: Un antagonista inespecífico para el caso de un inhibidor de
la acetilcolinestarasa es la atropina, ya que el efecto fisiológico contrarresta el bloqueo de la
acetilcolinesterasa.
El potasio es antagonista en una intoxicación por Digital, porque la digoxina es
un fármaco de estrecho margen terapéutico que se usa para la insuficiencia
cardiaca congestiva, el corazón no puede bombea con suficiente fuerza y
siempre queda un remanente de sangre en el corazón, se hipertrofia, la
contracción no es efectiva. La digoxina inhibe la ATPasa, que es la bomba de
sodio-potasio y lo que hace es sacar el sodio fuera de la célula. Si se inhibe, el
sodio no sale y aumenta su concentración dentro de la célula, y esto hace que se intercambie fácilmente por
calcio, por lo que aumentan los niveles de calcio intracelular, y eso hace que active la actina y miosina, y esto
hace que aumente la fuerza de contracción del corazón. La Digital lo que hace es bloquear la ATPasa y para
que esto ocurra la ATPasa tiene que estar fosforilada, y esta fosforilación no se produce si hay potasio. De esta
forma, si hay potasio, no está fosforilada la enzima y por tanto la Digital no actúa por mucho que haya. Esta
intoxicación puede ser muy frecuente y es muy grave, es frecuente por el medicamento digoxina.

ANTÍDOTOS RELACIONADOS:
En la tabla: la ultima columna son números (1 4) de En la tabla: la penúltima columna son letras que
cuanta evidencia hay q de que ese antídoto funciona describen la precocidad de aplicación para conseguir
realmente. efecto.
1=> generalmente aceptados como útiles A=> de uso inmediato (30 mins)
2=> ampliamente usados, pero universalmente B=> de uso en las primeras 2 horas
aceptados C=> de uso en las 6 primeras horas
3=> utilidad cuestionable
4=> obsoletos o sin valor
Saber:
a) La ACETILCISTEÍNA es el tratamiento adecuado en

una intoxicación por PARACETAMOL. Lo peligroso
del paracetamol es que su metabolito oxidado
produce hepatotoxicidad (necrosis hepática). Este
metabolito puede detoxificarse por conjugación
con glutatión, pero en una intoxicación hay mucho
metabolito y puede agotarse el glutation. No
podemos administrar glutation porque no se
absorbe, sino que administramos precursores de
este, como es la acetilcisteína. (1)
b) METIONINA antídoto de PARACETAMOL (1)
c) ETANOL antídoto de METANOL (1)
d) La TIMAINA para intoxicación por ETANOL.
e) FLUMAZENIL antídoto de las BENZODIACEPINAS (1)
f) SÍNDROME COLINÉRGICO se contrarresta con la ATROPINA (1)
g) Para una intoxicación por FE, la DESFERROXAMINA.
h) NALOXONA antídoto de OPIÁCEOS (1)
i) OXIMAS antídoto de ORGANOFOSFORADOS (1)
5

AGENTES TERAPÉUTICOS RELACIONADOS: Agentes utilizados con la intención de evitar la absorción de tóxicos,
aumentar su eliminación o tratar sintomáticamente sus efectos sobre las funciones corporales. Como:
a) Eméticos: APOMORFINA y IPECACUANA. No se usa ya tanto el jarabe de ipecacuana.

b) Agentes para modificar el pH urinario: SODIO BICARBONATO.
c) Catárticos y para hacer lavados intestinales: se usan ACEITES MINERALES.
d) Laxantes se usa, sobre todo, SULFATO DE MAGNESIO y MANITOL.
e) Como antídoto general que actúa evitando la absorción de sustancias tóxicas en el tracto
gastrointestinal: C ACTIVO. (1)
f) Agentes para evitar la absorción y/o daño en la piel primero lavamos y luego usamos MACROGOL.
CARBÓN ACTIVO: ABSORBENTE UNIVERSAL
Ventajas: Buena adsorción del tóxico en la primera hora (90%), útil durante 24 horas para fármacos de
liberación entérica, dosis repetidas facilitan la eliminación de sustancias con circulación enterohepática, y
aplicación en gestantes. Es eficaz, inocuo, económico y universal.
Desventajas: deficiente aceptación por los niños (sabor malo), intolerancia digestiva y es astringente, por lo
que después hay que administrar catárticos (laxantes).
Contraindicaciones son:
o No administrar con jarabe de ipecacuana hasta que se haya producido el vómito.
o No se debe emplear en la ingestión de cáusticos, corrosivos e hidrocarburos.
o No se debe emplear en intoxicaciones por paracetamol si no se dispone de N-acetilcisteína parenteral.
o En presencia de íleo paralítico, ya que aumenta la posibilidad de vómito.

o Si hay riesgo de hemorragia digestiva alta o de perforación gastrointestinal.
Se da si han pasado más de 2h y si tenemos un antídoto o antagonista específico. Es conveniente darlo en
dosis repetidas cuando:
o el producto es muy toxico (Ej. Organofosfatos),
o cuando son formas retardadas,
o con tóxicos con recirculación enterohepática o enteroentérica(digoxina, ADT, Amanita phalloides), o
o cuando son fármacos que ralentizan la motilidad gastrointestinal (hipnosedantes, anticolinérgicos).
LÍQUIDOS ALBUMINOSOS. PARA NEUTRANIZAR Y LA ABSORBER
Son 2 claras de huevo por vaso de agua. Protege la mucosa gástrica.

Está desaconsejado la utilización de leche, ya que favorece la absorción de sustancias liposolubles. Solo se
recomienda en la ingestión de cáusticos.
ANTÍDOTO POR DILUCIÓN
Se usan los aceites vegetales y minerales como el aceite de parafina y antiespumantes.

No se debe utilizar en niños menores de 2 años.
C. AUMENTO DE LA ELIMINACIÓN: CATÁRTICOS

Se usan cuando han pasado más de 4 horas, ya se ha absorbido y tiene que favorecerse la eliminación. Esto se hace
con catárticos (laxantes) o diuréticos. Si el toxico es hidrófilo, se elimina por orina y administramos diuréticos. En
cambio, si es lipófilo, se elimina por la bilis y se dan laxantes.
Para aumentar la eliminación podemos:
Aumentar el peristaltismo.
Dil i el ó ico acción o mó ica ec eción ab ndan e de ag a al l men in e inal e enida
Tras la ingestión de tóxicos liposolubles (fósforo, DDT)podemos usar purgantes salinos como:
o Sorbitol,

o Sulfato de magnesio, sulfato sódico, hidróxido de Mg y polietilenglicol (lavado intestinal total).
o Esto está contraindicado si el paciente tiene una enfermedad gastrointestinal, si ha ingerido cáusticos,
si ha sufrido una cirugía intestinal reciente o tiene vómitos.
DIURESIS RENAL (DIURESIS FORZADA)
Condiciones del tóxico para eliminarse por diuresis renal:

o Eliminación renal sin metabolización.
o Bajo VD,
o No unión a proteínas plasmáticas y PM bajo.
o Hidrosoluble y fácilmente ionizable.
Contraindicaciones:
o Insuficiencia renal orgánica (previa o aparecida en el curso de la intoxicación aguda).
o Insuficiencia cardíaca.
o Edema cerebral pulmonar.
o Hepatopatía crónica o aguda
Puede dar lugar a: hipopotasemia, hipernatremia, alcalosis metabólica.

Para tóxicos hidrófilos, que se elimina por la orina, se puede hacer una diuresis, que se hace con diuréticos
(FUROSEMIDA). Para forzar la diuresis hacemos que el volumen de orina eliminada sea mayor (normalmente es de 5-
10mil/min), pero esta también se puede forzar modificando el pH. Que un toxico esté hidrolizado depende de su pKa
y del pH del medio. Si basificamos la orina facilitamos la excreción de tóxicos ácidos, y viceversa.
Al administrar diuréticos aumentamos la filtración glomerular y disminuimos la reabsorción tubular activa.
Para cambiar el pH tubular:

o Diuresis alcalina: SALICILATOS, METOTREXANO, BARBITÚRICOS, FLUOR. pH < 7,5: bolos iv de 20 mEq
de bicarbonato 1 M.
o Diuresis ácida: QUINIDINA, QUININA, ANFETAMINAS, BROMURO Y FENCICLIDINA. pH urinario> 6,5:
bolos iv de 1g de ácido ascórbico.
o Diuresis neutra: LITIO, TALIO Y PARAQUAT Y AMANITA PHALOIDES.
En toda diuresis forzada hay que restablecer la volemia y el equilibrio electrolítico, con perfusión de suero fisiológico,
suero glucosado glucosalino a los que se añadirán KCl si se requiere (según ionograma) y diuréticos como urea,
dextrosa y manitol.
DEPURACIÓN EXTRARRENAL: Se lleva a cabo cuando aparece un cuadro de intoxicación aguda grave (6-10% de las
intoxicaciones agudas)
Cuando la diuresis NO es suficiente, se hace una diálisis. La DIÁLISIS con tóxicos hidrosolubles poco unidos a proteínas
plasmáticas. Tiene varios tipos:
a. Hemodiálisis: Para los enfermos de riñón. Se le extrae la sangre y pasa por una máquina que tiene una
membrana semipermeable, de forma que la sangre está en contacto con un líquido de lavado libre de tóxico.
Por diferencia de presión osmótica, pasan los tóxicos al líquido de lavado y la sangre entra limpia al paciente.
LI, SALICILATOS, METANOL O ETILENGLICOL.
b. Diálisis peritoneal: Para enfermos de riñón que en vez de ir a un centro de hemodiálisis, es una diálisis que se
hace en casa sin máquinas. El paciente tiene un catéter (especie de bolsa) permanente en el abdomen y 3 veces
al día a través del catéter se llena el abdomen con el líquido de lavado y la membrana del peritoneo es la que
7
hace de membrana semipermeable. La sangre circula normal y cuando llega a esta zona, la sangre se va
depurando y pasan los tóxicos aquí. Pasa un tiempo que está calculado para cada paciente y después se vacía
el líquido de lavado del abdomen.
c. Hemofiltración: Lo mismo pero con una membrana que tenga algo específico para atraer el toxico. Es más
potente, se usa más para intoxicación.
También se puede hacer por:
PLASMAFÉRESIS (1) y EXSANGUINOTRASNFUSIÓN (2): para casos graves. Sustitución del plasma (1) o sangre
(2;pediatría).
O por:
HEMOPERFUSIÓN es que la sangre la ponemos en contacto con sustancias absorbentes (carbón activado o resinas).
Cuando la diálisis convencional no está indicada. Eficaz Vd medio, alta unión a proteínas y PM > 500. BARBITÚRICOS,
DIGOXINA, TEOFILINA, GLUTETIMIDA, METAQUALONA, L- TIROXINA Y AMANITINAS.
Existe una controversias suscitadas sobre qué procedimiento es el más aconsejable (emesis, lavado gástrico, catárticos
o carbón activado) en tratamiento de intoxicaciones agudas.
El mejor procedimiento de descontaminación del tubo digestivo es el carbón activado; la irrigación de todo el
intestino se utiliza para pocas indicaciones y el jarabe de ipecacuana, el lavado gástrico y los catárticos no se
recomiendan, salvo en situaciones e peciale

TEMA 17: INTOXICACIONES AGUDAS POR MEDICAMENTOS
1. INTRODUCCIÓN
Intoxicaciones agudas en la población en general:
Incidencia: 25-30/100.000. 80% intento suicidio (alteraciones psiquiátricas). 15% autolisis.

Hombres: productos agrícolas e industriales.
Mujeres y niños: medicamentos y productos domésticos.
Intoxicaciones agudas medicamentosas:
Medicamentos (70% mujer suicidio): BDZ, Antidepresivos (ISRS), fenotiazinas, analgésicos, etc.
Medicamentos (niños accidental).

Intoxicaciones agudas en niños:
2. INTOXICACIONES MEDICAMENTOSAS
2.1. PARACETAMOL
Para evitar error en la dosis, la AEMPS recomienda prescribir en mililitros la dosis de paracetamol
endovenoso que deba administrarse (Tabla). Y recuerda que el intervalo entre 2 dosis endovenosas no debe
ser inferior de 4 horas y que no pueden superarse las 4 dosis diarias.
Tiene acción antipirética y analgésico para el tratamiento del dolor leve a moderado.
SÍNTOMAS:
Sintomatología mínima (12- 14 h).

Síntomas digestivos como náuseas, malestar general y diaforesis.
Hepatotoxicidad (>24 h).
Dolor abdominal, hepatomegalia y elevación de las enzimas hepáticas.
Puede producirse la muerte por fallo hepático (6-8 días).
TRATAMIENTO:
Dosis oral tóxica: 150mg/kg.
Carbón activo y purgantes (<75min.)
Antídoto: N-acetilcisteina y metionina.
El normograma de Rümack-Matthew nos da una idea

del daño hepático que produce una dosis de
paracetamol en función del tiempo. Por encima de la
línea hay daño hepático y por debajo, no. En las
primeras horas de la intoxicación, no hay síntomas.
Aparecen los primeros síntomas difusos a las 12 14h, donde
hay problemas gastrointestinales como náuseas, malestar

general y diaforesis. A las 24h aparece hepatotoxicidad, hay
dolor abdominal, hepatomegalia y elevación de las enzimas
hepáticas (transaminasas). A los 6 8 días puede producirse
la muerte por fallo hepático.
La dosis toxicas es a partir de 150 mg/kg. Lo indicado para el

tratamiento de esta intoxicación es carbón activo y algún
purgante, si han pasado menos de 4 horas. Los niños pueden
morir por esta intoxicación antes porque tienen el hígado
poco desarrollado.
No se puede eliminar por vía renal porque el paracetamol no

es hidrosoluble, pero sí que sabemos que hay un antídoto
específico, que es la N-acetilcisteína-metionina, porque para
que la célula no sufra ninguna necrosis, tiene que tener
cantidades suficientes de glutatión, así que administramos
un precursor porque el glutatión como tan no se absorbe.

2.2. SALICILATOS
Tienen acción analgésica, antipirética y antiinflamatoria. Son ácidos débiles con

PM 180 y pKa 3.5. Son fármacos con pH ácido y se eliminan por la orina.
Con el monograma de Done, podemos ver la gravedad de esta intoxicación. Por

encima de la última línea hay una intoxicación grave y por debajo, leve o
asintomática. Hay que distinguir la intoxicación aguda (por dosis única) de la crónica (por dosis repetidas).
En una aguda, podemos encontrar tres grados de gravedad:
Leve: 20 30 mg/100Ml. Es asintomática.
Moderada: 30 40 mg/100mL. Aparece sintomatología que incluye hipertermia, vómitos,
hiperglucemia, acidosis metabólica y alcalosis respiratoria transitoria.
Grave: >40 mg/100 mL. Afecta al SNC y disminuye la frecuencia respiratoria. Esto unido a
somnolencia, confusión y convulsiones, puede llevar a la muerte. Aunque es menos probable morir
por esta intoxicación que por la de paracetamol.

SÍNTOMAS:
Interfiere en el ciclo de Krebs limitando la producción de ATP y aumenta la producción de ácidos

orgánicos.
A nivel del SNC, la estimulación bulbar hace que haya hiperventilación y produce demasiado CO 2, lo
que lleva a una acidosis respiratoria. Además, hay vómitos, cefalea, acúfenos, disminución de la
audición, confusión mental y somnolencia.
Efectos metabólicos: Aumenta el consumo de oxígeno e hipertermia, hiperventilación con
alteraciones del equilibrio ácido-base y de la termorregulación, hipo/hiperglucemia y glucosuria.

Aumento de la fragilidad capilar y disminución de la agregación plaquetaria: petequias y hemorragias.

Aunque es poco frecuente, en niños aparece el SÍNDROME DE REYE. Es una encefalopatía guda de
origen hepático, anictérica, que presenta un cuadro cerebral agudo tóxico, hepatomegalia por
infiltración grasa, aumento de la glutámico oxalacético transaminasa (GOT = AST), amonio en sangre
y leve hipoglucemia. Aparece a dosis terapéutica, y aunque sea poco frecuente, si aparece, la
mortalidad es muy alta. Aparece en menores de 16 años por la administración de AAS frente a un
proceso viral.
Salicilismo: Es una intoxicación crónica debida a una ingesta prolongada de dosis de 80 a 100
mg/kg/día. Se caracteriza por acúfenos, gastritis, úlcera gástrica, hemorragia digestiva alta, daño
hepático, pérdida de peso, erupción cutánea y vómitos.
TRATAMIENTO:
Lo primero son medidas de soporte, después carbón activo, y luego alcalización urinaria. Si es grave, se
recurre a hemodiálisis.
2.3. BENZODIACEPINAS: como el diacepam, flunitracepam, clonacepam, temacepam, clordiacepóxido,

nitracepam, loracepam, alprazolam y triazolam.
Dosis tóxica: 15-20 >terap utica de e i n SNC.

o Somnolencia, diploipia, Incoordinaci n motora (ataxia, disartria), hiporreflexia
o Alteraciones visuales.
Dosis tóxica: 100 >terapéutica depresión cardíaca.
o Hipotensi n
o depresi n cardiorrespiratoria y coma.
Aumenta edad y alcohol; disminuye tabaco.
TRATAMIENTO:
Primero medidas de soporte, donde controlamos las vías aéreas, los líquidos intravenosos y
vasopresores para la hipotensión.
Si hay un coma profundo, hay que poner ventilación asistida.
Se haría un lavado gástrico + catártico si han pasado menos de 4 horas.
Se puede dar carbón activo si ha pasado 1 2h.
Lo bueno es que tiene un antídoto, que es un antagonista competitivo específico, que es el
Flumazenilo.

2.4. ANTIDEPRESIVOS
1) IMAO (inhibidores de la monoaminooxidasa).
SÍNTOMAS:
Estimulan el SNC, producen fiebre, taquicardia, taquipnea, hipertensión, náuseas, vómitos y edema de
papila.
TRATAMIENTO:
Descontaminación GI + carbón activado + purgantes.
Hi e e mia dan oleno
Hi e en i n ni o ia o
Ta ica dia o anolol
Hi o en i n lí ido ao eoe dencia .
Con l ione ben odiace ina .
2) ISRS (inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina).
SÍNTOMAS:

Producen aturdimiento, trastornos GI, somnolencia, efectos cardiovasculares, trastornos de la función
hepática, convulsiones y coma.
TRATAMIENTO:
No existen antídotos específicos.

Emesis, lavado gástrico o carbón activado en casos graves.
Medidas de soporte.
No útiles: diuresis forzada ni diálisis
3) ADT (antidepresivos tricíclicos):
SÍNTOMAS:
Aparecen síntomas con dosis de 10 mg/kg y es mortal con dosis de 30 mg/kg. Tiene efectos anticolinérgicos,
efectos sobre el SNC, efectos cardiovasculares, depresión respiratoria, hipotensión, shock, vómitos e
hiperpirexia.
TRATAMIENTO:
Sintomático y de soporte.
Émesis contraindicada con convulsiones inminentes
Lavado gástrico
Carbón activado+ catártico
Monitorizar el ECG.
Ingestión de líquidos.

Bicarbonato sódico IV rápida (pH sangre > 7,45 y evitar las arritmias (fenitoína, lidocaina, propanolol,
fisostignina).
Alteración SNC Diazepam
HTA fisostignina
Hipotensión adrenalina (dopamina no responde)
2.5. ANAFILAXIA
Es un mecanismo inmunológico de Ig-E-dependiente.
TRATAMIENTO:
Administrar de forma subcutánea o intramuscular adrenalina.
Suspensión del fármaco.
Evitar administración de AINE (liberación histamina).
Administración paracetamol.
TEMA 18: INTOXICACIONES AGUDAS POR PRODUCTOS DOMÉSTICOS

INTRODUCCIÓN
o Las intoxicaciones por productos domésticos representan aproximadamente un tercio
de las consultas al Servicio de Información Toxicológica en España.
o Los productos de limpieza son responsables de un gran número de intoxicaciones en
niños.
o En los niños suele deberse a poca cantidad de producto.
o Ciertos productos originan importantes lesiones

ADULTOS
Lejía (hipoclorito sódico, NaClO)


NIÑOS
INTOXICACIONES AGUDAS DOMÉSTICAS
o La capacidad tóxica se relaciona con:
- pH
- Concentración
- Volumen ingerido
- Tiempo en contacto
- Plenitud o vaciamiento gástrico
o Dificultad en el manejo de los intoxicados por la complejidad de las fórmulas
o Se debe trasladar al hospital à Nunca actuación bucofaríngea, lavado gástrico o
provocar el vómito

IRRITANTES (NO LO HA MENCIONADO)
o Lavavajillas a mano
o Detergente lavado ropa a mano/máquina
o Jabones
o Suavizantes
o Abrillantadores
o Quitamanchas
o Limpia metales
o Ambientadores
o Insecticidas, antipolillas
o Etc.

CÁUSTICOS
o Son muy tóxicos y peligrosos.
o Si se produce una intoxicación por productos cáusticos se debe llamar inmediatamente
al Servicio de Información Toxicológica y llevar al hospital.

Tipos de cáusticos:
o Cáusticos ácidos
o Cáusticos básicos

Cáusticos ácidos
Los principales cáusticos ácidos son:
o Salfumán (HCl)
o Limpiador WC (HCl, H2SO4, oxálico, NaHSO4), desatascador, pulidor muebles, limpia
metales (H3PO4), anticorrosivos (oxálico, H3PO4), plateado metales (H2SO4), etc.

Provocan:
o Lesiones predominantemente gástricas (pasan rápido al estomago)
o Necrosis (1ó2 capas del estómago) por coagulación proteica
o Pérdida de agua
o Formación escaras (limita la lesión)

Cáusticos básicos
Los principales cáusticos básicos son:
o Lejía (hipoclorito sódico >10%)
o Limpia hornos, jabones caseros, desatascadores, desincrustantes (NaOH)
o Lavavajillas a máquina (sales sódicas)
o Amoniacales (pulimento de metales, limpiadores de WC), etc


Provocan:
o Lesiones predominantemente esofágicas (en poca cantidad, neutralización estomago),
insípidas, inodoras y viscosas
o Necrosis por licuefacción
o Desnaturalización de proteínas
o Saponificación de grasas
o Trombosis capilar
o Edema epiglótico y faríngeo (puede causar la muerte)
o Retención de agua.
o Periodo crítico de ulceración, hemorragia y perforación à 5-12 días tras la ingestión

Tratamiento
En ingestión:
o No provocar el vómito
o Evitar la posición de Trendelenburg (prevenir un posible reflujo, mayor lesión y
broncoaspiración).
o No recomendado neutralizantes (leche, agua u otros diluyentes) por falta de eficacia y
por razones de seguridad (puede inducir el vómito, reacción exotérmica). Es decir, si
por ejemplo se toma un ácido, no tomar un básico. Además, la cantidad necesaria para
diluir el cáustico resulta demasaido grande para ser eficaz en la práctica.

Asimismo:

o En contacto dérmico o ocular: lavar / suero fisiológico durante 15 min.
o Corticoides:
- Contraindicados en perforación o sangrado intestinal.
- Indicados en edemas laríngeos (prevenir respuesta inflamatoria)
o Antibióticos: si hay perforación o si se están administrando corticoides.

PLAGUICIDAS
El 4% de las intoxicaciones son por plaguicidas y de éstas aprox. el 60% en niños.

Tratamiento general
o Medidas de soporte vital.
o Descontaminación cutánea (lavado con agua y jabón) y ocular (lavado con agua)
o Descontaminación GI à Lavado gástrico y carbón activo

En cuanto a los plaguicidas encontramos:
o Plaguicidas organoclorados (POC)
- Tratamiento à Tratar convulsiones con BDZ
o Rodenticidas: warfarina (es un fármaco hemorrágico).
- Tratamiento:
• Inducir vómito + carbón activo + purgante salino
• Fitonadiona (vit K1, evita hemorragias)
o Piretroides: provocan dermatitis de contacto, crisis asmáticas, reacciones
anafilactoides e insuficiencia circulatoria periférica.
- Tratamiento:
• Descontaminación dérmica (agua+jabón) e intestinal (carbón
activado+catártico)
• Tratamiento de las convulsiones.
o Plaguicidas organofosforados (POF)/carbamatos: inhibidores de la acetilcolinesterasa,
reversibles (carbamatos) e irreversibles (POF)

- Tratamiento à Antídoto:
• Oximas (pralidoxima: antagonista específico regenera colinesterasa y
prevé neuropatía retardada)
• Atropina (antagonista inespecífico de la colinesterasa recupera el
efecto funcional)


o Herbicidas: paracuat y dicuat
- Tratamiento:
• Descontaminación gastrointestinal inmediata con bentonita, tierra de
batán o carbón activo
• No administrar oxígeno (pues el órgano diana de los herbicidas son los
pulmones

El mecanismo de acción de los herbicidas consiste en que se oxidan, reducen el O2 y
producen ROS, que producen, a su vez, fibrosis pulmonar.

RESUMEN DEL TRATAMIENTO EN INTOXICACIÓN POR PLAGUCIAS
o Medidas generales según vía de exposición (según vía de exposición):
- Descontaminación de la víctima evitando la contaminación del personal
sanitario.
- En general, si es reciente, carbón activo y purgantes salinos.
o En organoclorados:
- Tratamiento sintomático de la hiperexcitación neuronal.
- No inducir el vómito y no administrar grasas o leche.
- No existe antídoto específico.
o En organofosforados:
- Antagonistas específicos: pralidoxima
- Antagonistas inespecíficos: atropina
o En carbamatos: unión a la acetilcolinesterasa reversible
- Pralidoxima: controvertido
- Atropina
o Paraquat
- El oxígeno empeora
- Corticoides (prevención de fibrosis pulmonar)
o Rodenticidas:
- Inducir vómito
- Fitonadiona


Toxi Temas 14-18

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TEMA 14.

- ENSAYOS ESPECÍFICOS: CARCINOGÉNESIS, MUTAGÉNESIS, TERATOGÉNESIS O

La carcinogénesis es un proceso de inducción de neoplasias malignas por agentes físicos,

Reservados todos los derechos.

Sinónimo: tumor: el cual puede ser benigno, pero cuando comienza a

Carcinógeno: sustancia que induce tumores

Carcinógenos genotóxicos: producen cáncer actuando directamente sobre el DNA

CLASIFICACIÓN CARCINÓGENOS SEGÚN LA IARC

Agencia Internacional de Investigación sobre el Cáncer (IARC) de la OMS (05/10/2020)

Clasifica las sustancias toxicas en grupos:

Reservados todos los derechos.

1) Calidad científica de los estudios individuales de peligro; estadística adecuada, factores

Estudiar sin publi es posible. Compra Coins.

Evidencia suficiente carcinogenicidad: pruebas sólidas de relación causal entre el agente

Reservados todos los derechos.

Grupo 2A. Carcinógenos probables a humanos.

Se realizan al menos 2 evaluaciones y por lo menos una de ellas en humanos o en células o

Pruebas limitadas en humanos evidencia sólida en animal de experimentación de que la

Grupo 2B. Carcinógenos posibles a humanos.

Se realiza sólo 1 evaluación. No se requiere ninguna prueba en humanos o en células o tejidos

Se aplican consideraciones adicionales cuando hay pruebas sólidas de que el mecanismo de

Estudiar sin publi es posible. Compra Coins.

Grupo 3. No clasificable por su carcinogenicidad a humanos.

No indica no carcinogenicidad ni seguridad general

Genotóxicos: No dosis mínima. No niveles seguros de exposición.

Cuando una sustancia se une al DNA:

Apoptosis si las malformaciones y alteraciones en la

Reservados todos los derechos.

ENSAYOS DE CARCINOGENICIDAD IN VITRO

El proceso de carcinogenicidad es el resultado de una secuencia de

Estudiar sin publi es posible. Compra Coins.

Los expertos sugieren que el potencial carcinógeno de una

1) Diversos ensayos de genotoxicidad in vitro

Reservados todos los derechos.

Información previa del potencial carcinogénico genotóxico a partir de los resultados de

CRÍTICAS Y ARGUMENTOS A FAVOR DE LOS ENSAYOS DE CARCINOGENICIDAD

Reservados todos los derechos.

Pueden producir una mutación:

Espontánea: consecuencia de un error en la replicación o reparación del DNA

Estudiar sin publi es posible. Compra Coins.

Mutación en células somáticas: disfunción metabólica, carcinogénesis y susceptibilidad para

Reservados todos los derechos.

Se pueden llevar a cabo en diferentes géneros o especies

Bacterias: Salmonella typhimurium, Escherichia coli

Estudiar sin publi es posible. Compra Coins.

1) Ensayo in vitro: mutaciones genéticas, normalmente en bacterias. Dependiendo del

Reservados todos los derechos.

Proceso: Consiste (en este caso) la salmonella codifica el gen de

Se adiciona la muestra control a la placa con medio sin histidina con

Si la sustancia es mutágena revierte el gen que codifica la histidina,

El control es negativo, pues como no es una sustancia mutágena no habrá crecimiento

Hay algunas sustancias que sabemos que son mutágenas a través de la

Compra Coins y descarga sin publicidad.

Si el resultado da positivo + pasamos al siguiente ensayo

B. MUTACIONES O ABERRACIONES CROMOSÓMICAS In vitro

Reservados todos los derechos.

2. Ensayos micronúcleos en líneas celulares

Se determina el daño mitótico en eritrocitos de la medula ósea de rata o

Se expone el animal a la sustancia que se cree que es mutágena, se

Los micronúcleos se forman a partir del material cromosómico que ha

TERATOGÉNESIS O TOXICIDAD SOBRE EL DESARROLLO, REPRODUCCIÓN Y MODULACIÓN

o Toxicidad del desarrollo

Reservados todos los derechos.

La Comisión Europea (1999) define moduladores endocrinos sustancias químicas