3ème Année LMD Biochimie

Travaux dirigés Génie Génétique

Série n° :1
Exercice 01:
Quel est le sujet du Génie génétique et quels sont ses champs d’applications ? (brièvement)
Exercice 02:
A quelle famille appartiennent les enzymes suivantes? Et quelle est la réaction catalysée (démontrer sur un schéma)
par chacune des enzymes suivantes :
ADN polymérase I, ARN polymérase, Fragment de Klenow, DNAse, Enzyme de restriction, Ligase,
Exonucléase III, Taq pol, ADN méthyltransférase, Phosphatase alcaline,
Exercice 03:
Dans une expérience on a procédé au marquage radioactif (P32) de molécules d’ADN double-brin.
- Dites comment se fait le marquage par les enzymes suivantes : DnaseI-Polymérase I, Terminal-transférase,
Nucléotides Kinase.
- Quelles sont les molécules utilisées avec chaque enzyme ? Et quel phosphate doit être radioactif (P32) sur ces
molécules ? Justifiez.
Exercice 04:
1. Faites un schéma indiquant le résultat de la séparation sur gel d’Agarose de 5 fragments d’ADN dont les PM en Kb
sont : 3, 5, 8, 11 et 15.
2. Placez les amorces nécessaires, en précisant l’ordre, pour l’amplification par PCR du fragment d’ADN schématisé
ci-dessous :
5’ 3’
3’ 5’
ADN à amplifier
3. La séquence de l’ADN à amplifier est celle reportée dans l’exercice (06), quel sera la séquence de chacune des
amorces utilisées si la taille de celles-ci est de 10 bases ?
Exercice 05:
Soit le segment d’ADN suivant :
5’……ACTCGATAAGGATCCAC……3’
1. Ecrire la séquence des fragments (a) et (b) obtenus après coupure par l’enzyme Bam HI : G/GATCC, puis par
l’enzyme Taq I : T/CGA.
2. Quelle enzyme permettrait de ressouder les deux fragments pour chaque cas ?
Exercice 06:
Soient les enzymes de restriction BamH I, Pst I, Xho I et Mbo I dont les sites reconnus sont :
BamH I : 5'G/GATCC3' ; Pst I : 5'CTGCA/G3' ; Xho I : 5'C/TCGAG3' ; Mbo I : 5'/GATC3'.
1. Quelle est la spécificité des enzymes de restriction ?
2. Quelle serait –théoriquement- la taille probable des fragments engendrés par l’action de chaque enzyme ? Combien
aurait-on de sites de restriction, pour chaque enzyme, sur un fragment d’ADN dont la taille et de 20 Kb ?
3. La séquence d’un brin d’ADN bicaténaire, correspondant à un gène, est partiellement reportée ci-dessous.
5’ ATACGGGATCCGAGCTCTCGATCGTCTGCAGAAATTCC 3’
a) Sur la séquence de l’ADN double-brin encadrez les sites de restriction en indiquant la position des coupures des
enzymes précédentes.
Exercice 05 :
Soit le fragment d’ADN suivant :
5’……..GAGAATTCAA…………CCGAATTCCC……..3’
3’…….. CTCT TAAGTT ……...…GGCTTAAGGG……..5’
Et soit, d’autre part, un vecteur dont une partie est représentée par la séquence :
5’………gaattc………….aagctt………3’
3’………cttaag………….ttcgaa………5’
Sachant que le site restriction de l’enzyme Eco RI est : G/AATTC
- Ecrivez l’ensemble vecteur + fragment inséré au site Eco RI du vecteur (tout en conservant la conversion ci-dessus :
majuscule pour l’insert et minuscule pour le vecteur).