UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS Y

BIOTECNOLOGÍA
CARRERA DE BIOTECNOLOGÍA

INFOGRAFÍA

TEMA: INFOGRAFÍA - TERAPIA GÉNICA

INTEGRANTES: Barreros Santiago
Ilvis Pablo
Jácome Fabricio
Larcos Mishell

GRUPO: 3

ASIGNATURA: Biotecología Biomédica

DOCENTE: ING. Lorena Núñez

CURSO: 6 “A”

FECHA: 14/06/2022

CICLO ACADÉMICO

ABRIL - SEPTIEMBRE 2022

 Desarrollo de un enfoque de edición de genes para
restaurar la pérdida de visión en la amaurosis
congénita de Leber tipo 10
La amaurosis congénita de Leber tipo 10 (LCA10) se trata de una
enfermedad degenerativa de la retina provocada por mutaciones
IVS26 en el gen CEP290 que provoca una pérdida de la visión al nacer
o durante la infancia. Para lograr la restauración de la expresión
normal del gen se estableció un mecanismo de edición del genoma,
el EDIT-101 (vector AAV5 empaquetado con ADN) el cual codifica la
proteína S. aureus Cas9 (SaCas9) en conjunto con 2 ARN guía.

Hipótesis: La corrección de la mutación CEP290 IVS26 en al

menos el 10% de los conos foveales conducirá a un beneficio
clinico en los pacientes.

Objetivo: Desarrollar un EDIT-101 (candidato terapéutico de edición del

genoma) para eliminar el donante de empalme creado por la mutación
IVS26 en el gen CEP290 y restaurar la expresión normal de CEP290.
La proteína codificada por el gen CEP290 se localiza en el cilio que
conecta el fotorreceptor y es necesario para la regeneración y
fototransducción del segmento externo.
Metodología
El vector AAV5 está constituido
Preparación del vector principalmente por dos ARN guías ARNg-323
El plásmido fue construido y ARNg-64 bajo el control de un promotor de
polimerasa III U6 y un S. aureus Cas9
mediante el método de expresado a través del fotorreceptor
ensamblaje de Gibson. específico GRKI (Rhodopsin Kinase).

1 Se trataron transgénicos CEP290 IVS26

2 El vector ingresa en la retina y se dirije a
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los fotorecptores en cono, que son
KI humanos de 6 a 12 semanas de edad
lo que se ven afectados por la mutación.
con una inyección subretiniana de
una dosis EDIT-101, en cada ojo.

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Terapias basadas en ácidos nucleicos
para las degeneraciones retinianas
hereditarias. Los vectores AAV se
pueden usar para administrar genes de
reemplazo que codifican ADNc en
enfermedades causadas por
mutaciones recesivas monogénicas,
como la mutación en el gen CEP290

Al realizar este procedimiento se provoca una

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deleción o inversión en la secuencia,
Los ratones se sacrificaron en puntos de
por lo cual los extremos de la secuencia se unen
tiempo especificados de retina neural de mediante recombinación no homologa. El Cas9
ratón para flanquean la mutación IVS26, cortando
extracción de ADN y ARN genómico. esa sección.
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Resultados

La edición del gen CEP290 en el

objetivo se determinó mediante el
método de secuenciación dirigida
unidereccional (UDiTaST).

En las imágenes se puede observar la expresión de la

proteína GFP como indicador de la corrección de la
mutación en el ojo del ratón. La expresión de ARNm y ARNg
de Cas9 se cuantificó mediante
Se logró sobrepasar la tasa terapéutica mínima de qRT-PCR.
Conclusión edición propuesta (10%) alcanzando niveles superiores
con distintas concentraciones de EDIT-101.

Los datos demuestran una tasa de edición productiva superior al 10%, lo que respalda la eficacia del EDIT-101. En base a estos
resultados es posible ejecutar posteriormente más tratamientos para pacientes con enfermedad retiniana asociada a CEP290.

Bibliografía: Maeder, M. L., Stefanidakis, M., Wilson, C. J., Baral, R., Barrera, L. A., Bounoutas, G. S., ... & Jiang, H. (2019). Development of a gene-
editing approach to restore vision loss in Leber congenital amaurosis type 10. Nature medicine, 25(2), 229-233.