Materia: Química Biológica

Prof Adj.: Farm. Almiron, Romina Soledad

JTP: Lic. Patricia Bortnyk

Informe Tp2. “Enzimas”

Alumnos: Huerta Celeste Eugenia

Carrera: Licenciatura en Enología

AÑO – 2023
 ENZIMAS

a) Efectos de la temperatura y algunos inhibidores sobre la actividad enzima

Catalasa.

Desarrollo de actividades:

1. Rotulamos 12 tubos de ensayo

2. En cada 4 tubos agregamos trozos de hígado crudo, papa y manzana;
agregándole agua destilada hasta cubrir los tejidos.
3. Luego seguimos las indicaciones de la siguiente tabla en cada 4 tubos:

Contenido Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

Tejido Sin Hervir Hervido Sin Hervir Sin Hervir
NaCN 5% ------------ ------------- 5 gotas -----------
Pb(NO3)2 5% ------------ ------------- ------------ 5 gotas
H2O2 2ml 2ml 2ml 2ml

4. Por último marcamos con cruces de 1 a 5 según aprecie la intensidad de

burbujeo en cada serie de tubo al agregarle H2O2.

Resultados de la experiencia:

 Tubos 1: manzana, papa e hígado (sin hervir)

En base a nuestros resultados se observó que al preservarse

crudos los tejidos de la papa como en el de la manzana al
agregar los 2ml de H2O2, se presentó un burbujeo intenso en
la papa debido al desprendimiento de oxígeno de la reacción
catalizada por la enzima catalasa.

Tubos 2: manzana, papa e hígado (hervido)

En ambos tubos el tejido fue hervido previamente, se
agregaron 2ml de H2O2 sin embargo en este caso no se
presentó burbujeo tanto en la manzana como en el hígado.
Esto se debe a que al ser sometido el tejido a un incremento
de temperatura (en el baño maría), la enzima se desnaturalizó
por lo tanto perdió su estructura terciaria y con ello ocurre la
desnaturalización de su sitio activo. El único tubo que obtuvo
reacción fue el de la papa, debido a que está también posee
la enzima catalasa.
  Tubo 3: manzana, papa e hígado.

En la preparación de estos tubos, el tejido se encontraba sin

hervir, se adicionaron 5 gotas de NaCn 5% y 2 ml de H2O2,
durante la observación se encontró un burbujeo leve en el
hígado, debido a que el cianuro corresponde a un inhibidor
irreversible en la catalasa. El cianuro actúa sobre los iones
metálicos que se encuentran en la estructura de las
enzimas, inhibidor se une al Fe que se encuentra en la
catalasa lo que causa que se bloque su sitio activo y por lo
tanto su actividad enzimática.

 Tubo 4: manzana, papa e hígado.

Para estos tubos se agregó 5 gotas de Pb(NO3)2 5% y se

adicionaron 2 ml de H2O2 al tejido sin hervir. Se presentó
un burbujeo moderado en el hígado y leve en la papa, el
cual se debía a que el Pb interaccionaba con los grupos
SH de la catalasa.

INTENSIDAD DE BURBUJEO CON CRUCES:

CONTENIDO Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

RESULTADOS EN LA PAPA
INTENSIDAD +++++ +++++ 0 +
RESULTDOS EN LA MANZANA
INTENSIDAD ++ 0 0 0
RESULTADOS EN EL HÍGADO
INTENSIDAD + 0 +++++ ++++
b) Acción enzimática de los jabones en polvo para lavar la ropa.

Proteasas – Técnica:

-Preparar gelatina como indica el fabricante. Dejar que solidifique.

- Tomar una porción de la misma en un vaso de precipitad de 100 ml y agregar 10ml de
agua con una pipeta.
- Agregar 5g de jabón en polvo.
- Incubar 1 hora a temperatura ambiente.

En base a nuestros resultados, podemos decir que

la proteasas cumple con la función de acelerar la
degradación de proteínas y así crear la ruptura de
enlaces peptídicos.

c) CUANTIFICACIÓN

- Tomamos 2 tubos
- En uno de ellos agregamos 1µl de H2O + 1ml de reactivo de trabajo (lo ponemos a
baño maría por 10 minutos)
- En otro le agregamos 3µl Suero de cabra + 1ml de reactivo de trabajo

TUBO Patrón ABS Concentración (1g/µl)

1 5µl 0,18
2 10µl 0,21
3 15µl 0,44
Muestra 30µl 0,15
CUESTIONARIO

1. Describa que sucedió en el primer experimento al variar la temperatura. Justifique

su respuesta
2. Describa que sucedió en el segundo experimento al variar el pH. Justifique su
respuesta
3. Justifique lo observado con respecto a la enzima Catalasa en las diferentes
muestras
4. En cada una de las siguientes reacciones identifique la enzima como oxido-
reductasa, transferasa, hidrolasa, liasa, isomerasa o ligasa:

5. Indicar cuál, o cuáles, de las afirmaciones presentadas son correctas para

completar la siguiente expresión: “La actividad biológica de los enzimas”:
a. No se ve afectada por cambios de pH
b. Varía con los cambios de temperatura
c. No se ve afectada por cambios de temperatura
d. Es alterada por cambios de pH

6. Describir cuales son las diferencias y similitudes entre la teoría llave-cerradura y el

modelo de ajuste inducido.

Respuestas:
1)Lo que sucede en el primer experimento es que cuando un tejido es sometido a
temperaturas, como el baño maría, la enzima se desnaturaliza lo que hace que pierda su
estructura terciaria. En el caso de los vegetales su actividad disminuye debido a la
inactivación de su estructura proteínica enzimática.

3) Podemos decir que para tener una alta actividad enzimática, se necesita tener
controlada la temperatura y el pH de las enzimas para impedir que estas se
desnaturalizan y provoquen la disminución de la actividad enzimática.
Además también se observó el papel que juegan los inhibidores en la actividad
enzimática, es decir, cómo estos provocan que la actividad enzimática cambie de acuerdo
al tipo de inhibidor utilizado, en este caso, el NaCN es un inhibidor competitivo, debido a
que su tasa de reacción con respecto a la enzima sin inhibidor, no disminuyó su velocidad
de reacción, mientras que en el segundo inhibidor Pb(NO3)2 su tasa de reacción
disminuyó con respecto a tasa de reacción de la enzima sin inhibidor, demostrando que
es un inhibidor no competitivo.

4) Según lo que vemos:

A) Hidrolasa
B) Ligadasa
C) Liasa
D) Oxido-reductasa

5) Las afirmaciones correctas son:

B) Varía con los cambios de temperatura
D) Es alterada por cambios de pH

6) La principal diferencia entre ambos modelos es que mientras el primero supone que el
sitio activo de la enzima y el sustrato encajan perfectamente tal como una cerradura con
una llave, el modelo de encaje inducido propone que el sitio activo es mucho más flexible
que una cerradura y que por lo tanto la interacción física de ambas moléculas deforman
las superficies moleculares, lo que además impone cierta tensión en las moléculas
reaccionantes y facilita aún más las reacciones.