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DOI:10.11817/j.issn.1672-7347.2014.06.008
www.csumed.org/xbwk/fileup/PDF/201406591.pdf
姜黄素对db/db小鼠肾组织p-STAT3及IκB蛋白的影响
陆苗苗1,2,陶立坚2,梅文娟2,骆仁娜2,府晓2,汪凌昊3,杨文君2,刘春燕4
(1. 辽宁医学院附属第一医院肾内科,辽宁 锦州 121001;2. 中南大学湘雅医院肾内科,长沙410008;
3. 中南大学湘雅三医院内分泌科,长沙 410013;4. 湖南中医药大学病理教研室,长沙 410208)
[摘要]目的:观察姜黄素对db/db小鼠糖尿病肾病的疗效,并探讨其可能的作用机制。方法:雌性db/db小鼠10
只,随机分为模型组和姜黄素治疗组,5只db/m小鼠为正常对照组,姜黄素治疗组予以姜黄素200 mg/(kg·d)连续灌胃
18周。实验结束时,尾静脉采血测血糖,ELISA检测小鼠24 h尿蛋白,PAS染色观察小鼠肾组织病理改变,免疫组织
化学检测IV型胶原以及纤连蛋白(fibronectin,FN)在肾组织的表达,Western印迹检测磷酸化的信号转导与转录激活因
子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)及IκB在肾组织的表达。结果:与db/m小鼠比较,db/db小鼠
体型肥胖,血糖明显升高,伴有大量蛋白尿;病理改变为肾小球肥大,系膜区扩张,基膜增厚,细胞外基质(extra-
cellular matrix,ECM)合成增加;Western印迹检测肾组织中磷酸化的STAT3表达增加,IκB表达减少。与db/db小鼠比
较,姜黄素治疗后明显降低db/db小鼠24 h尿蛋白,减少肾组织中IV型胶原以及FN的表达,抑制STAT3磷酸化及IκB降
解。结论:姜黄素可以减少2型糖尿病模型db/db小鼠的蛋白尿,减轻肾小球硬化,其作用机制可能与抑制STAT3磷酸
化及IκB降解有关。
[关键词] 姜黄素;糖尿病肾病;db/db小鼠;p-STAT3;IκB
(1. Department of Nephrology, the First Affiliated of Liaoning Medical University, Jinzhou Liaoning 121001;
2. Department of Nephrology, Xiangya Hospital, Central South University, Changsha 410008;
3. Department of Endocrinology, Third Xiangya Hospital, Central South University, Changsha 410013;
4. Division of Pathology, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China)
ABSTRACT Objective: To determine the effect of curcumin on diabetic nephropathy in db/db mice and its
possible mechanism.
Methods: Ten female db/db mice were randomly divided into 2 groups: one was treated with
收稿日期(Date of reception):2014-01-07
作者简介(Biography): 陆苗苗,博士,医师,主要从事肾脏纤维化发病机制与药物治疗方面的研究。
通信作者(Corresponding author):陆苗苗,Email: miaomiaolu2012@163.com
基金项目(Foundation item):国家自然科学基金–国际(地区)合作与交流项目(81061120524);湖南省自然科学基金(11JJ2051)。This work
was supported by the Funds for International Cooperation and Exchange of the National Natural Science Foundation of China (81061120524) and the Natural
Science Foundation of Hunan Province, P. R. China (11JJ2051).
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curcumin at 200 mg/(kg·d) and the other was a placebo group. Five age-matched db/m mice were
grouped as the controls. In the curcumin group, curcumin was administered to db/db mice for
18 weeks. At the end of the experiment, the blood glucose and albumin were measured, and the
kidney tissue sections were stained with PAS to observe the pathological changes. The expression of
collagen IV and FN in the kidney was detected by immunohitochemistry staining. Western blot was
used to detect the phosphorylation of signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3)
and IκB in the kidney.
Results: Compared with db/m mice, the weight and blood glucose of db/db mice were markedly
increased, accompanied with heavy proteinuria, glomerulus hypertrophy, mesangial area expansion,
thickening of basement membrane and ECM deposition. The phosphorylation of STAT3 was up-
regulated and the degradation of IκB was increased. Compared with the db/db mice, curcumin
significantly decreased the urinary albumin, inhibited the phosphorylation of STAT3 and the
degradation of IκB, and reduced the expression of collagen IV and FN in the kidney.
Conclusion: Curcumin can obviously decrease albuminuria and attenuate glomerular sclerosis in
diabetic db/db mice by inhibiting phosphorylation of STAT3 and degradation of IκB.
1.5
*
肾小球硬化指数
1.0
0.5 †
0.0
组
素 b+
黄 /d
组
/m
b
/d
姜 db
db
db
图 1 各组小鼠肾小球硬化程度的比较 (PAS,×400)
Figure 1 Comparison of degree of glomerulosclerosis among the 3 groups (PAS, ×400)
*P<0.05 vs the db/m group; †P<0.05 vs the db/db group
0.8
肾组织 IV 型胶原的表达
*
0.6
0.4
0.2 †
0.0
组
素 b+
黄 /d
组
/m
b
/d
姜 db
db
db
2.0
*
肾组织 FN 的表达
1.5
†
1.0
0.5
0.0
组
素 b+
黄 /d
组
/m
b
/d
姜 db
db
db
p-STAT3 IκB
β-actin
β-actin
db/m 组 db/db 组 db/db+ 姜黄素组
db/m 组 db/db 组 db/db+ 姜黄素组
4
p-STAT3 相对蛋白表达
1.5
IκB 相对蛋白表达
3 *
† 1.0 †
2
*
1 0.5
0 0.0
组
组
组
组
素
b
素
/m
/m
/d
b
黄
黄
/d
db
db
db
姜
db
姜
+
b+
db
/d
/
db
db
图4 Western印迹检测各组小鼠肾组织p-STAT3蛋白的表达 图5 Western印迹检测各组小鼠肾组织IκB蛋白的表达
Figure 4 Western blot showing the relative expression of Figure 5 Western blot showing the relative expression of IκB
p-STAT3 among the 3 groups among the 3 groups
*P<0.05 vs the db/m group; †P<0.05 vs the db/db group *P<0.05 vs db/m group; †P<0.05 vs db/db group
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3 讨 论 注肾损伤均具有保护作用[12]。Tikoo等[13]发现在STZ诱
导的糖尿病肾病的大鼠模型中,姜黄素可通过改变
近年来,随着社会经济的发展,生活水平的 组蛋白H3翻译后的修饰,降低热休克蛋白-27以及
提高,在全世界范围内糖尿病尤其是2型糖尿病的 丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein
发病率呈现出显著增长趋势,已经成为一种严重 kinase,MAPK)/P38的表达来发挥肾保护作用。
的社会问题。在糖尿病诸多的并发症中,糖尿病 本研究中模型组db/db小鼠表现为多饮、多
肾病是其中最常见而又危险的并发症,最终将发展 食、多尿,体型肥胖,血糖及尿蛋白较正常组明
为终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD),常常 显增高,肾脏病理表现为肾小球肥大,基底膜增
需要肾脏替代治疗,耗费大量的卫生医疗资源,因 厚,系膜区明显增宽,部分肾小球硬化呈分叶
此积极有效地防治糖尿病肾病具有重要意义。 状,IV型胶原及FN蛋白表达明显增多,上述结果
迄今为止,为了进行糖尿病肾病的体内实 表明本实验中db/db小鼠糖尿病肾病模型建立成
验研究,己建立了多种诱导糖尿病动物模型的方 功。与模型组db/db小鼠比较,姜黄素治疗组小鼠
法,主要有:1)手术切除胰腺;2)化学药物诱导, 血糖无明显变化,体质量略减轻,24 h尿蛋白减少
常见的链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导的糖尿 59.73%;PAS染色下观察发现肾组织病变得到了明
病模型;3)自发性糖尿病模型;4)转基因动物等。 显的改善,肾小球硬化指数评分降低了64.42%。
C57BLKs/J db/db小鼠是美国Jockson实验室在1966 研究 [9] 证实在db/db小鼠糖尿病肾病模型中,增多
年首先发现的先天性2型糖尿病小鼠模型,其发病 的ECM主要由IV型胶原和FN组成,我们通过免疫
过程与人类2型糖尿病非常相似,是国内外广为采 组织化学检测肾组织中IV型胶原及FN蛋白表达水
用的研究2型糖尿病的动物模型。研究 [6-9] 证实db/ 平。结果发现,模型组db/db小鼠肾组织IV型胶
db小鼠4周龄时开始出现血糖升高,16周达高峰, 原、FN蛋白表达均较正常组明显增多,经姜黄素
随着高血糖的发生,开始出现肾脏体积增大和高 治疗后,肾组织中IV型胶原、FN蛋白表达较模型
滤过,8周龄时出现微量白蛋白尿,12~14周后出 组分别降低了75.41%,19.30%。以上结果证实:姜
现明显的组织形态学改变,表现为肾小球肥大, 黄素可降低db/db小鼠尿蛋白,减少ECM的沉积,
系膜区增宽,基膜增厚,ECM(包括FN,IV型胶原 减轻肾小球硬化,提示姜黄素具有治疗db/db小鼠
等)过度积聚,20周龄后逐渐发展为肾小球硬化。 糖尿病肾病的作用。
目前,糖尿病肾病的治疗手段主要有: JAK/STAT信号通路是细胞因子信号转导的重
1)治疗原发病和控制恶化因素,如控制血糖、 要通路之一,对细胞的生理病理反应发挥重要 调
控制血压、调节血脂、调整饮食、戒烟等;2) 控 作 用 。 S TAT 作 为 J A K 的 靶 蛋 白 , 是 存 在 于 细
药物治疗,主要包括血管紧张素转化酶抑制剂 胞 胞 质 中 的 一 个 转 录 因 子 家 族 , S TAT 3 是 该 家
(angiotensin-converting enzyme inhibitors,ACEI) 族 的 重 要 成 员 。 研 究 [14-15] 表 明 S TAT 3 途 径 不 仅
和 / 或 血 管 紧 张 素 I I 型 受 体 拮 抗 剂 (a ng i o te n s i n I I 是参与肾疾病发病过程中一个很重要的信号转
receptor blocker,ARB)等。ACEI/ARB是近年来临 导 途 径 ,而且与多种增生性肾小球疾病的发生密
床应用较为广泛的治疗糖尿病肾病的药物,能有 切相关。研究 [16] 报道,高糖或血管紧张素II可以激
效改善肾小球“三高”(高灌注、高压力、高滤过) 活体外培养的系膜细胞STAT3的磷酸化,且二者具
的状态、减少尿蛋白。本课题组前期研究也证实 有协同作用。本实验结果显示,db/m小鼠肾组织
氯沙坦可以通过抑制TGF- β 1和结缔组织生长因子 p-STAT3表达较弱,db/db小鼠肾组织p-STAT3表达
(connective tissue growth factor,CTGF)的表达,减 明显增高,提示STAT3磷酸化参与糖尿病肾病的发
少IV型胶原在糖尿病肾病大鼠肾小球中的沉积, 生发展。姜黄素可降低db/db小鼠肾组织p- STAT3
减轻肾小球硬化,改善肾功能 [10] 。但ACEI/ARB类 的表达,推测姜黄素可能通过抑制STAT3的磷酸化
药物在临床应用中仍存在一定的局限性,因此, 起到治疗糖尿病肾病作用。
积极寻找一种安全有效的治疗糖尿病肾病的药物 NF- κ B是细胞中一个具有多向性调节作用的核
是研究人员共同努力的方向。 转录因子,在细胞的信号传递和基因的诱导表达
近年来,姜黄素在肾脏病方面的研究逐渐 过程中起重要作用,参与多种炎症性细胞因子、
增 多 。 Jo n e s 等 [ 1 1 ] 在 大 鼠 单 侧 输 尿 管 梗 阻 模 型 中 趋化因子的产生、成纤维细胞的增生分化、细胞
发现,以姜黄素治疗可以增加血红素氧合酶的表 外基质交联及细胞凋亡等过程。在缺血再灌注损
达 , 从 而 起 到 肾 保 护 作 用 。 另 外 , 姜 黄 素 对 阿霉 伤、梗阻性肾病及败血症或中毒性急性肾损伤等
素所致的肾损害、氧化应激诱导的肾损害及缺血再灌 肾脏疾病的相关实验中,观察到损伤的足细胞、
姜黄素对 db/db 小鼠肾组织 p-STAT3 及 IκB 蛋白的影响 陆苗苗,等 597
正常时NF- κ B以P50-P65-I κ B存在于胞浆中, 8. Cohen MP, Masson N, Hud E, et al. Inhibiting albumin glycation
当受到细胞外来信号刺激时I κ B降解,P50-P65摆 ameliorates diabetic nephropathy in the db/db mouse[ J]. Exp Nephrol,
合调控基因的转录从而引发病理过程,I κ B主要的 mouse[ J]. Am J Physiol Renal Physiol, 2003, 284(6): 1138-1144.
此,对于研究NF- κ B信号通路来说,I κ B蛋白的研 的影响[ J]. 中南大学学报: 医学版, 2008, 33(9): 836-840.
究很重要。本实验结果显示,与db/m小鼠相比, XU Junying, TAO Lijian, WANG Ling, et al. The effect losartan on
db/db小鼠肾组织I κ B的表达明显降低,而姜黄素 glomerular sclerosis in rats with diabetic nephropathy[ J]. Journal of
可以增加db/db小鼠肾组织I κ B的表达,抑制其降 Central South University. Medical Science, 2008, 33(9): 836-840.
解,从而有可能阻断NF- κ B的活化,延缓糖尿病肾 11. Jones EA, Shahed A, Shoskes DA. Modulation of apoptotic and
白,减轻肾小球硬化,降低肾组织中IV型胶原和 12. Shahed AR, Jones E, Shoskes D. Quercetin and curcumin up-regulate
FN的表达,抑制STAT3的磷酸化及I κ B的降解,但 antioxidant gene expression in rat kidney after ureteral obstruction or
独立于降血糖以外的,改善2型糖尿病模型 db/db 13. Tikoo K, Meena RL, Kabra DG, et al. Change in post-translational
type 2 diabetic nephropathy: correlation with diabetic state and Renna, FU Xiao, WANG Linghao, YANG Wenjun, LIU Chunyan. Effect
progressive renal injury[ J]. Kidney Int, 2004, 65(1): 116-128. of curcumin on the expression of p-STAT3 and IκB in db/db mice[ J].
Journal of Central South University. Medical Science, 2014, 39(6): 591-597.
7. Allen TJ, Cooper ME, Lan HY. Use of genetic mouse models in the
DOI:10.11817/j.issn.1672-7347.2014.06.008
study of diabetic nephropathy[ J]. Curr Atheroscler Rep, 2004, 6(3):