CHOLESTEROL

(LIQUID) REAGENT
INTENDED USE EXPECTED VALUES11
For the in vitro quantitative determination of Total Cholesterol in serum. INTERFERENCES Recommended Range:
1. Studies to determine the level of interference for hemoglobin, bilirubin, and Desirable Cholesterol: <200 mg/dL
SUMMARY AND EXPLANATION: lipemia were carried out, the following results were obtained: Borderline-High Cholesterol: 200 – 239 mg/dL
Measurement of serum cholesterol levels can serve as an indicator of liver function, Hemoglobin: High Cholesterol: >240 mg/dL
bilary function, intestinal absorption, propensity toward coronary artery disease, No significant interference ( 10%) from hemoglobin up to 400mg/dL. Each laboratory should establish it’s own normal range.
thyroid function and adrenal disease. Cholesterol levels are important in the Bilirubin:
diagnosis and classification of hyperlipoproteinemias. Stress, age, gender, No significant interference ( 10%) from bilirubin up to 4.5 mg/dL.
hormonal balance and pregnancy affect normal cholesterol levels Lipemia: PERFORMANCE
No significant interference ( 10%) from lipemia up to 1020 mg/dL measured Linearity:
METHODOLOGY as triglycerides. When run as recommended the assay is linear from 2.7 to 750 mg/dL
A Cholesterol method developed in the late 1800’s by Lieberman1 and Burchard2 2. A number of drugs and substances may affect the accuracy of this test. See
is still in use today despite its corrosive nature and it’s susceptibility to many Young, et al 10 Method Comparison:
interfering substances. Studies performed between this procedure and a similar methodology yielded the
ADDITIONAL EQUIPMENT REQUIRED BUT NOT PROVIDED following results:
Work on an enzymatic procedure was begun by Flegg3 and Richmond4 in the early 1. A clinical chemistry analyzer capable maintaining constant temperature (37°C) Number of samples pairs: 57
70’s. Allain5 and Roeschlau6 began using cholesterol esterase and oxidase, in a and measuring absorbance at 540-550 nm. Range of samples: 29.0-517.0 (mg/dL)
single reagent to determine total cholesterol in serum. Trinder’s 7 color system of 2. Deionized water and related equipment, e.g.: pipettes Correlation Coefficient: 0.9950
peroxidase / phenol /4-aminoantipyrine has been used successfully for some time 3. Analyzer specific consumables, e.g.: sample cups Slope: 1.045
now. The system’s only drawback was the corrosive properties of phenol. The 4. Control and Calibrator materials such as those provided by JAS Diagnostics. Intercept: 6.6 (mg/dL)
present method utilizes a phenol substitute that performs like phenol but without
being corrosive. ASSAY PROCEDURE Precision:
These instructions are to be used as a general guideline for adapting to select Within Run Level 1 Level 2 Level 3
PRINCIPLE automated instruments. Refer to your specific JAS instrument application Mean (mg/dL) 122.5 256.2 473.6
instructions available upon request. S.D. (mg/dL) 1.8 1.5 5.5
C. Esterase C.V. (%) 1.4 0.6 1.2
Cholesterol Esters Cholesterol + Fatty Acids SYSTEM PARAMETERS
Cholesterol Total Level 1 Level 2 Level3
C. Oxidase TEMPERATURE: 37°C S.D. (mg/dL) 2.8 3.7 7.6
Cholesterol + O2 Cholest-4-en-3-one+H2O2 WAVELENGTH: 540-550nm C.V. (%) 2.3 1.5 1.6
ASSAY TYPE: Endpoint
Peroxidase DIRECTION: Increase Sensitivity:
2H2 O2 + HBA + 4AAP Quinoneimine + 4H2O SAMPLE / RGT RATIO: 1: 100 A calibration factor of approximately 1761 was obtained, which is equivalent to a
(red dye) e.g. Sample Vol. 0.01 mL (10L) sensitivity of 0.0006  Abs per mg/dL.
Reagent Vol. 1.0 mL
The intensity of the red color produced is directly proportional to the total INCUBATION TIME: 5 Min NOTE: Performance established on the Synchron CX.
cholesterol in the sample when read at 540 - 550nm.
Procedure Notes
REAGENT COMPOSITION 1. The reagent and sample volumes may be altered proportionally to REFERENCES
Active Ingredients Concentration accommodate various instrument requirements. 1. Lieberman, C., Ber. 18:1803 (1885).
4-Aminoantipyrine 0.25 mM 2. Grossly lipemic serums require a “sample blank”. Add 0.01m l (10l) of 2. Burchard, H., Chem. Fentr. 61:25 (1890).
Cholesterol Oxidase 400 U/L sample to l.0mL saline, mix and read the absorbance against water. Subtract 3. Flegg, H.M., Ann. Clin. Blochem. 10:79 (1973).
Lipoprotein Lipase 300 U/L this value from the patient absorbance to obtain the corrected reading. 4. Richmond, W., Scand. J. Clin. Lab. Invest. 29:Suppl. 26, abstr. 3:25 (1972).
Horseradish Peroxidase 1000 U/L 5. Allain, C. C., et al, Clin. Chem. 20:470 (1974).
HBA 10 mM Calculations 6. Roeschlau, P., et al, Z. Kiln. Chem. Kiln. Biochem 12:226 (1974).
Surfactant 7. Trinder, P., Ann. Clin. Biochem. 6:24 (1969).
Buffer Abs. = Absorbance 8. Perlstein, M.T., et al, J. Microchem. 22:403 (1977).
pH (6.55 – 6.95) 9. Witte, D.L., etal, Clin. Chem. 20:1282 (1974).
Sodium Azide (0.01%) as a preservative. Abs. Sample x Concentration = mg/dL 10. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).
Abs. Standard of Standard 11. National Institute of Health Publication No.01-3670, 3rd Report of NCEP
Precautions Expert Panel on Detection, Evaluation, & Treatment of High Cholesterol in
1. This reagent is for in vitro diagnostic use only. Sample calculation: Adults (Adult Treatment Panel III) May (2001).
2. Reagent contains sodium azide. Poison; do not ingest. May react with lead and Abs. Sample = 0.400
copper plumbing to form highly explosive metal azides. Upon disposal, flush Abs. of Standard = 0.320
with a large volume of water to prevent build up. Concentration of Standard =200 mg/dL
JAS Diagnostics, Inc.
REAGENT PREPARATION 0.400 x 200 mg/dL = 250 mg/dL Cholesterol 7220 NW 58th St., Miami Florida 33166
Reagent is supplied in a ready to use form. 0.320 Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
www.jasdiagnostics.com
REAGENT STORAGE Limitations
Store the reagent at 2-8°C (refrigerated). Samples with values exceeding 750 mg/dL should be diluted 1:1 with saline and re-
The reagent is stable until the expiration date when stored at 2-8°C. run. The final answer should be multiplied by two.
REAGENT DETERIORATION CALIBRATION Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
The reagent should not be used if: A calibrator such as JAS Chemistry Calibrator (P/N: CAL1-5) , or an appropriate Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
1. The reagent is turbid. aqueous standard should be used to calibrate this test. Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
2. The working reagent does not meet stated performance parameters. Email: mail@obelis.net
QUALITY CONTROL
SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE The integrity of the reaction should be monitored by use of a two level control with
Nonhemolyzed serum is recommended. Cholesterol in serum is reported stable for known Cholesterol values such as JAS Chemistry Controls (P/N: CON1-5 and
seven days at room temperature (18-25°C) and six months when frozen and CON2-5)
properly protected against evaporation.8’9 PI: CHO2.JS01 REV: 06/07/07
 COLESTEROL (LIQUIDO)
INTERFERENCIA: CALIBRACIÓN:
1. Los siguientes resultados fueron obtenidos en estudios para determinar el nivel Esta prueba debe ser calibrada utilizando un calibrador como el Calibrador de
de interferencia de hemoglobina, y bilirubina. Quimica de JAS ( P/n: CAL1-5) o un estandard apropiado.
Hemoglobina:
USO: No interferencia significativa (+10) de hemoglobina hasta 400 mg/dL. CONTROL DE CALIDAD:
Reactivo utilizado para la determinación cuantitativa “in vitro” de Colesterol Total Bilirrubina: La integridad de la reaccion debe ser evaluada usando un control de dos niveles con
en muestras de suero humano. No interferencia significativa (+10) de bilirrubina hasta 4.5 mg/dL. valores conocidos como el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).
Lipemia:
SIGNIFICADO CLÍNICO: No interferencia significativa (+10) de lipemia bilirrubina hasta 1020 mg/dL. LIMITACIONES:
La medida de los niveles de colesterol puede servir como indicador del 2.Algunas drogas y substancias afectan las concentraciones de Colesterol. Ver Young, Muestra con valor mayor a 750 mg/dL debe ser diluida 1:1 con solución salina y
funcionamiento del hígado, funcionamiento biliar, absorción intestinal, propensión D.S.10 evaluada nuevamente. El resultado final debe ser multiplicado por 2.
a enfermedades arteria coronarias, funcionamiento del tiroides, enfermedad adrenal.
Los niveles de colesterol son importantes en el diagnóstico y clasificación de las EQUIPO ADICIONAL REQUERIDO PERO NO INCLUIDO: VALORES ESPERADOS 11
hiperlipoproteinemias, estrés, edad, género, balance hormonal y efecto del 1. Analizador de química clínica capaz de mantener temperatura constante a Colesterol deseado: <200 mg/dL
embarazo sobre los niveles normales de colesterol. 37°C y medir absorbancia a 540 - 550 nm. Limite del Colesterol Alto 200-239 mg/dL
2. Agua desionizada y equipo relacionado ejemplo: pipetas Colesterol Alto >240 mg/dL
MÉTODO: 3. Consumibles específicos para el analizador ejemplo: copillas para muestras Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango normal.
El método de Colesterol desarrollado a finales de 1800 por Lieberman 1 and Burchard 2 continua en 4. Material Control como los proporcionados por JAS
uso ignorando su naturaleza corrosiva y su susceptibilidad a interferencia de muchas substancias. DESEMPEÑO
3 4
El usar un procedimiento enzimático comenzó con Flegg y Richmond a principios de los 70’s.
Allain 5 y Roeschlau6 utilizaron colesterol esterase y oxidasa, en un solo reactivo (univial) para PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO: Linearidad:
7
determinar colesterol total en suero. Trinder desarrollo un sistema de color de peroxidasa/Fenol/4- Procedimiento para uso manual. Cuando el ensayo se trabaja como se recomienda, esta prueba es linear de 2.7 - 750
aminoantipIrina, el cual ha sido un éxito desde hace algún tiempo. La única desventaja de este 1) El reactivo se usa como se presenta. El reactivo debe estar a temperatura mg/dL
sistema son las propiedades corrosivas del fenol. El presente método utiliza un substituto de fenol ambiente antes de su uso.
que funciona como el sin ser corrosivo. 2) Identificar perfectamente los tubos de prueba, tanto para controles, estándar y Comparacion del Metodo:
muestras desconocidas. Los siguientes resultados fueron obtenidos mediante estudios realizados entre este
PRINCIPIO: 3) Coloque 1000 µL del reactivo en cada tubo de prueba e incubar a 37ºC. procedimiento y uno similar:
C. Esterasa 4) Agregar 10 µL de Estándar, muestra problema y/o suero control a su Numeros de pares de muestras 57
Colesterol Esters Colesterol + Ácidos grasos correspondiente tubo de prueba. Mezclar mientras se mantiene constante la Rango de muestras 29.0-517.0 (mg/dL)
temperatura. Coeficiente de Correlación 0.9950
5) Ajustar a cero el espectrofotómetro con blanco de reactivo a 540 - 550nm. Pendiente 1.045
C. Oxidasa 6) Incubar todos los tubos a 37ºC. durante 5 minutos. Intercepto 6.6mg/dL
Colesterol + O2 Colesterol-4-en-3-one + H2O2 7) Tome la medición de absorbancia a 540-550nm exactamente a los 5 minutos Precisión:
después de la adición de cada muestra. Lea y registre la absorbancia de los Entre Corridas Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
controles, estándar y muestras desconocidas de la misma forma. Promedio (mg/dL) 122.5 256.2 473.6
Peroxidasa S.D. (mg/dL) 1.8 1.5 5.5
2 H2O2 + HBA + 4AAP Quinoneimine + 4H2O Notas: C.V.(%) 1.4 0.6 1.2
1. Este ensayo requiere el uso de un Suero Calibrador o Estándar apropiado.
La intensidad del color rojo producida es directamente proporcional al colesterol 2. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente Total Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
total en la muestra cuando es leído a 540 - 550nm. para adaptarlos a los requisitos de varios instrumentos. S.D. (mg/dL) 2.8 3.7 7.6
C.V.(%) 2.3 1.5 1.6
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO: PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO:
Ingredientes Activos Concentración Estas instrucciones son para ser utilizadas como guía general para la adaptación al SENSIBILIDAD:
4-Aminoantipirina 0.25mM instrumento automatizado. Se encuentran disponibles a petición las aplicaciones de Fue obtenido un factor aproximadamente de 1761, el cual es equivalente a una
Colesterol oxidasa 400 U/L los reactivos JAS para los analizadores más comunes. sensibilidad de 0.0006 ∆ Abs. por mg/dL
Lipoproteína Lipasa 300 U/L
Peroxidasa de rábano 1000 U/L PARÁMETROS Nota: Datos obtenidos mediante pruebas realizadas en el Synchron CX.
HBA 10mM Colesterol (Liquido)
Sulfactante Temperatura: 37°C REFERENCIAS:
Buffer Longitud de Onda 540-550 nm 1. Lieberman, C., Ber. 18:1803 (1885).
Azida de Sodio (0.01%) como conservador. Tipo de Ensayo: Punto Final 2. Burchard, H., Chem. Fentr. 61:25 (1890).
pH (6.55 – 6.95) Dirección: Creciente 3. Flegg, H.M., Ann. Clin. Blochem. 10:79 (1973).
Proporción: Muestra/Reactivo 1:100 4. Richmond, W., Scand. J. Clin. Lab. Invest. 29:Suppl. 26, abstr. 3:25 (1972).
PRECAUCIONES: Volumen de Muestra 10 L 5. Allain, C. C., et al, Clin. Chem. 20:470 (1974).
1. Este reactivo es solo para uso de diagnostico “in vitro”. Volumen de Reactivo 1 mL 6. Roeschlau, P., et al, Z. Kiln. Chem. Kiln. Biochem 12:226 (1974).
2. Reactivo contiene azida de sodio. Veneno. No ingerir, éste puede reaccionar Tiempo de incubación: 5 minutos 7. Trinder, P., Ann. Clin. Biochem. 6:24 (1969).
con tuberías de plomo o cobre y formar sales explosivas. El Drenaje debe ser 8. Perlstein, M.T., et al, J. Microchem. 22:403 (1977).
enjuagado con abundante agua cuando se deseche el reactivo NOTAS AL PROCEDIMIENTO: 9. Witte, D.L., etal, Clin. Chem. 20:1282 (1974).
1. Sueros altamente lipémicos requieren un blanco de muestra. Añadir 10ul de 10. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).
PREPARACIÓN DEL REACTIVO: muestra y 1.0mL de solución salina, mezclar y leer 11. National Institute of Health Publication No.01-3670, 3rd Report of NCEP
El reactivo está listo para usarse. 2. la absorbancia, usando agua como referencia. Reste este valor de la Expert Panel on Detection, Evaluation, & Treatment of High Cholesterol in
absorbancia del paciente para obtener la lectura correcta Adults (Adult Treatment Panel III) May (2001).
ALMACENAJE DEL REACTIVO:
1. Almacenar el reactivo a temperatura de refrigeración (2 a 8°C). CALCULOS: JAS Diagnostics, Inc.
2. El reactivo es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta Abs. = Absorbancia 7220 NW 58th St., Miami Florida 33166
cuando se almacena de 2-8°C. Absorbancia de la muestra x Concentración del estándar (mg/dL) Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
Absorbancia del estándar. www.jasdiagnostics.com
DETERIORO DEL REACTIVO:
1. Turbidez Ejemplo de cálculos: Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
2. No recupera los valores de controles establecidos Abs. Muestra = 0.400 Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
Abs. Estandar = 0.320 Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
COLECCIÓN Y ALMACENAJE DE LA MUESTRA: Valor Estandar = 200 mg/dL Email: mail@obelis.net
1. Se recomienda usar sueros no hemolizados.
2. Muestras de suero almacenadas de 18-25°C son estables por 7 días y 6 0.400 x 200 = 250 mg/dL de Colesterol
meses si son congeladas y protegidas correctamente para evitar 0.320 PI: CHO2.JS01 REV: 06/07/07
evaporación.8,9