GAMMA-GT (LIQUID) REAGENT

SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE

Serum Gamma-GT is stable for seven days at 2-8°C and two months frozen (-20°C) and
protected from evaporation.9 QUALITY CONTROL
INTENDED USE The integrity of the reaction should be monitored by use of a two level control with known
This reagent is intended for the in vitro quantitative kinetic determination of gamma INTERFERENCES values such as JAS Chemistry Controls (P/N: CON1-5 and CON2-5)
glutamyltransferase (Gamma-GT) in human serum. 1. Studies to determine the level of interference for hemoglobin, bilirubin, and lipernia
were carried out, the following results were obtained: EXPECTED VALUES (37°C) 7,8
SUMMARY AND EXPLAINATION 1,2 Hemoglobin: Adults: Female 9 - 36 U/L
Gamma-glutamyltransferase (Gamma-GT) is an enzyme present in liver and bile duct No significant interference ( 10%) from hemoglobin up to 1000 mg/dL. Male 12 - 64 U/L
which is the most sensitive indicator of hepatobiliary diseases. Due to a high negative Bilirubin: Children / Adolescents:
predictive value for these diseases the measurement of Gamma GT is widely used to rule No significant interference ( 10%) from bilirubin up to 22.7 mg/dL. 1 day – 6 months Female 15 - 132 U/L
out a hepatic or biliary orgin. Together with other enzymes Gamma-GT is a valuable tool Lipemia: Male 12 - 122 U/L
for the dfferential diagnosis in liver diseases. No significant interference ( 10%) from lipernia up to 1020 mg/dL measured as 6 months – 1 year Female 1 - 39 U/L
triglycerides. Male 1 - 39 U/L
METHODOLOGY 2. A number of drugs and substances may affect the accuracy of this test. See Young, et 1 – 12 year(s) Female 4 - 22 U/L
Methods for determining Gamma-GT are based on the use of glutamyl derivatives of aromatic amines as al.10 Male 3 - 22 U/L
substrate material.3 Orlowski and Meiser introduced Gamma-Glutamyl-p-nitroanilide as a substrate in 1963 4 13 – 18 years Female 4 - 24 U/L
with Kulhanek and Dimov (1966) adding glycylglycine and significantly increasing the speed of the
reaction.5 In 1969, Szasz published a kinetic procedure for Gamma-GT6 on whose principle the present ADDITIONAL EQUIPMENT REQUIRED BUT NOT PROVIDED Male 2 - 42 U/L
procedure is based. Szasz and Persijn 7 later reported that the 3-carboxyl derivitive, L-Gamma-glutamyl-3- 1. A clinical chemistry analyzer capable maintaining constant temperature (37°C) and It is strongly recommended that each laboratory determine its own reference range.
carboxy-4-nitroanalide could be substituted for the L-y-glutamyl-p-nitoanilide, producing a more water measuring absorbance at 405nm.
soluble and stable reagent. The Jas Diagnostics Gamma-GT reagent uses this soluble 3-carboxyl derivative. 2. Deionized water and related equipment, e.g.: pipettes PERFORMANCE
The JAS method is based on the kinetic photometric test, according to the International Federation of Clinical Linearity:
Chemistry and Laboratory Medicine (IFCC). 8 3. Analyzer specific consumables, e.g.: sample cups
4. Control material such as those provided by JAS Diagnostics. When run as recommended the assay is linear from 2.8 to 1000 U/L.
Principle
ASSAY PROCEDURE Method Comparison:
L-Gamma-Glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide + Glycylglycine
These instructions are to be used as a general guideline for adapting to select automated Studies performed between this procedure and a similar IFCC procedure yielded the
instruments. Refer to your specific JAS instrument application instructions available upon following results:
Gamma-GT
request. Number of samples pairs: 43
System Parameters Range of samples: 3.0 - 380.0 (U/L)
L-Gamma-glutamyl-glycylglycine + 5-amino-2-nitrobenzoate
Gamma-GT (Liquid) Correlation Coefficient: 0.9992
TEMPERATURE: 37°C Slope: 0.9880
Gamma-GT in the sample catalyzes the transfer of the glutamyl group from L-Gamma -
WAVELENGTH: 405 nm Intercept: -0.4 (U/L)
glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide to glycylglycine according to the above reaction. The
amount of 5-amino-2-nitrobenzoate formed is proportional to Gamma-GT activity and may ASSAY TYPE: Rate/Kinetic
DIRECTION: Increase Precision:
be measured kinetically at 405 nm by the increasing intensity of the yellow color formed.
e.g. Sample Vol. 0.050 mL (50 L) Within Run Level 1 Level 2 Level 3
Reagent 1 Vol. 1.0 mL (1000 L) Mean (U/L) 34.0 81.6 148.2
REAGENT COMPOSITION (final test mixture)
Reagent 2 Vol. 0.250 mL (250 L) S.D. (U/L) 1.3 1.9 2.5
Active Ingredients Concentrations
DELAY/LAG TIME: 1 Min C.V. (%) 3.9 2.3 1.7
Reagent 1
READ TIME: 3 Min Total Level 1 Level 2 Level 3
Glycylglycine 150 mM
S.D. (U/L) 1.3 2.3 2.9
Reagent 2
Procedure Notes: C. V. (%) 3.9 2.8 2.0
L-Gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide 6.0 mM
Concentrations are those in the working reagent. 1. The reagent and sample volumes may be altered proportionally to accommodate various instrument
requirements. Sensitivity:
pH: (7.7 – 8.1)
2. Samples with values above 1000 U/L should be diluted 1:1 with saline, re-assayed and the results The sensitivity for this reagent when run as recommended is 0.0103 mA / min per U/L.
multiplied by two.
Precautions and Warnings: 3. If the spectrophotometer being used is equipped with a temperature controlled cuvette, the reaction * NOTE: Performance established on the Synchron CX.
1. For in vitro diagnostic use only. mixture may be left in the cuvette while the absorbance readings are taken.
2. DO NOT pipette by mouth. Avoid contact with skin and eyes. If spilt, thoroughly wash
Calculation REFERENCES
affected area with water. For further information, consult the JAS Gamma-GT Reagent
One Unit (U/L) is defined as the amount of enzyme that catalyzes the transformation of one 1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: TH-Books
Material Safety Data Sheet.
micromole of substrate per minute under specified conditions. For example: Verlagsgesellschaft; 1998. P.80-6.
3. Reagent contains Sodium Azide as a preservative. In a dry state may react with copper
2. Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In:Burtis CA, Ashwood ER, editors.
or lead plumbing to form explosive metal azides. Upon disposal, flush with large
U/L = AAbs./mIn. x 1.300 x 1000 = AAbs./min. x 2737 Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3 rd ed. Philadelphia: WB Saunders Company;
amounts of water to prevent azide build up.
9.5 x 1 x 0.050 1999. P. 617-721.
4. Do not use the reagent after the expiration date printed on the kit.
3. Demetriou, J.A., Drewes, P.A., Gin, J.B., Clinical Chemistry: Principles and Technics,
Where: AAbs /min = Absorbance change 2nd Ed., Hagerstown (MD), Harper Row, pp 872-873 (1974).
REAGENT PREPARATION
1000 = Conversion of U/ml to U/L 4. Orlowski, M., Meister, A., Biochem, Biophys. Acta 73:679 (1963).
Reagents are supplied in a two vial, ready to use, liquid form.
1.300 = Total reaction volume (mL) 5. Kulhanek, V., Dimov, D.M., Clin. Chem. Acta 14:619 (1966).
For some analyzers, the reagents can be combined to make a working solution by mixing 4
9.5 = Millimolar absorptivity of 5-amino-2- nitrobenzoate. 6. Szasz, G., Clin. Chem. 15:124 (1969).
parts of Reagent 1 with 1 part of Reagent 2 (e.g., 20mL Rgt 1 to 5mL Rgt 2).
1 = Light path in cm 7. Szasz, G., Persijn, J.P., et al, A Klin. Chem. Klin. Biochem. 12:228 (1974).
For instructions on use, consult the specific JAS Instrument Application Sheet for your
0.050 = Sample volume (mL) 8. Shaw LM, Stromme JH, London JL, Theodorsen L. International Federation of Clinical
instrument.
Chemistry, (IFCC), Scientific Committee, Analytical Section. IFCC methods for the
Example: If your Abs / min. = 0.06 measurment of catalytic concentration of enzymes. Part 4. IFCC method for gamma-
REAGENT STORAGE
then 0.06 x 5333 = 320 U/L. glutamyl-transferase [(gamma-glutamyl)-peptide: amino acid gamma-
1. Store the reagents at 2-8°C (refrigerated).
NOTE: glutamyltransferase, EC 2.3.2.2]. J Clin Chem Clin Biochem 1983; 21:633-46.
2. The reagents are stable until the expiration date when stored at 2-8°C.
1. If test parameters are altered the factor has to be recalculated using the above formula. 9. Rosalki, S.B., Advances in Clinical Chemistry, Vol. 17, New York, Academic Press,
3. Working reagent is stable for 4 weeks when stored at (2-8°C).
2. To convert to Sl units (nkat/L) multiply U/L by 0.01667. p.53 (1975).
4. Do not freeze the reagents.
10. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).
5. Reagent 2 should be protected from light.
JAS Diagnostics, Inc.
REAGENT DETERIORATION CALIBRATION 14100 NW 57th Court Miami Lakes Florida 33014
DO NOT USE THE REAGENT IF: The procedure is calibrated by means of the millimolar absorptivity of 5-amino-2- Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
1. The reagent is turbid. nitrobenzoate taken as 9.5 at 405nm under the specified conditions. Results are based on www.jasdiagnostics.com
2. The reagent has an optical density greater than 1.5 at 405 nm. the change in absorbance per minute. All parameters must be known and controlled.
Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
Email: mail@obelis.net
 NO USE EL REACTIVO SI: CALIBRACIÓN
PI: GGT2.JS02 REV:10/19/09 1. El reactivo es turbio. El procedimiento es calibrado por medio de la absorbencia millimolar de 5-amino-2-
2. El reactivo tiene una densidad óptica mayor que 1.5 en 405 nm. nitrobenzoate tomado como 9.5 en 405nm en las condiciones especificadas. Los
resultados están basados en el cambio de absorbancia por minuto. Todos los parámetros
deben ser conocidos y controlados.

GAMMA-GT (LIQUIDA)
COLECCIÓN DE ESPÉCIMEN Y ALMACENAJE
La Gamma-GT de suero es estable durante siete días en 2-8°C y dos meses congelados CONTROL DE CALIDAD
USO (-20°c) y protegido de la evaporación 9 La integridad de la reaccion debe ser evaluada usando un control de dos niveles con
Este reactivo es usado para la determinación cinética cuantitativa vitro de la gamma valores conocidos como el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).
glutamyltransferase (Gamma-GT) en el suero humano. INTERFERENCIAS
1. Los estudios para determinar el nivel de interferencia para hemoglobina, bilirubin, y VALORES ESPERADOS (37°C) 7,8
RESUMEN EXPLAINACION 1,2 lipernia, fueron realizados, los resultados siguientes fueron obtenidos: Adultos: Mujeres 9 - 36 U/L
La gamma-glutamyltransferase (Gamma-GT) es una enzima presente en el hígado y en Hemoglobina: Hombre 12 - 64 U/L
el conducto de bilis el cual es el indicador más sensible de enfermedades Ninguna interferencia significativa ( 10%) de hemoglobina hasta 1000 mg/dL. Ninos / Adolecentes:
hepatobiliarias. Debido a un valor predecible negativo alto para estas enfermedades, la Bilirubin: 1 dia – 6 meses Mujeres 15 - 132 U/L
medida de GT gamma es extensamente usada para excluir un origen hepatico o biliar. Ninguna interferencia significativa ( 10%) de bilirubin hasta 22.7 mg/dL. Hombre 12 - 122 U/L
Juntos con otras enzimas Gamma-GT es un instrumento valioso para el diagnóstico Lipemia: 6 meses – 1 año Mujeres 1 - 39 U/L
diferencial en enfermedades de hígado. Ninguna interferencia significativa ( 10%) de lipernia hasta 1020 mg/dL medidos Hombre 1 - 39 U/L
como triglycerides. 1 – 12 años(s) Mujeres 4 - 22 U/L
METODOLOGÍA 2.Varias medicinas y sustancias pueden afectar la exactitud de esta prueba. Ver Joven, Hombre 3 - 22 U/L
Los métodos para determinar Gamma-GT están basados en el uso de derivados glutamyl de amines
aromático como substrate Orlowski material 3 y Meiser introdujo Gamma-Glutamyl-p-nitroanilide como
et al 10 13 – 18 años Mujeres 4 - 24 U/L
un substrate en 19634 con Kulhanek y Dimov (1966) añadieron glycylglycine y aumentaron EQUIPO ADICIONAL REQUERIDO PERO NO PROPORCIONADO Hombre 2 - 42 U/L
considerablemente la velocidad de la reacción 5 en 1969, Szasz publicó un procedimiento cinético para la 1. Un analizador de química clínico con temperatura de constante de mantenimiento Es fuertemente recomendado cada laboratorio determinen su propios valores de
Gamma-GT6 en cuyo principio el procedimiento presente está basado. El Szasz y Persijn 7 más tarde capaz (37°C) y medición absorbance en 405nm. referencia.
reportaron que derivitivado 3-carboxyl, L-Gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanalide podría ser 2. Agua de Deionizada y equipo relacionado, p.ej: pipetas
substituido por el L-y-glutamyl-p-nitoanilide, produciendo un reactivo mayor soluble al agua y estable.
El reactivo de Gamma-GT de Jas usa este derivado 3-carboxyl soluble. El método JAS está basado en la
3. Analizador bienes consumibles específicos, p.ej: tazas de muestra FUNCIONAMIENTO
prueba fotométrica cinética, de acuerdo a la Federación Internacional de Química Clínica y Medicina de 4. Controlar el material como aquellos proporcionados por el JAS Diagnostics. Linealidad:
Laboratorio (IFCC). 8 Cuando dirigido como recomendado el ensayo es lineal de 2.8 a 1000 U/L.
Principio PROCEDIMIENTO DE ENSAYO
Éstas instrucciones deben utilizarse como una guia general para adaptarse a Comparación de Método:
L-Gamma-Glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide + Glycylglycine instrumentos automatizados. Refiérase a las aplicaciones de instrumento disponibles en Los estudios realizados entre este procedimiento y un IFCC procedimiento similar
JAS. cedieron los resultados siguientes:
Gamma-GT Parametros Número de pares de muestras: 43
Gamma-GT (Liquida) Rango de muestras: 3.0 – 380.0 (U/L)
L-Gamma-glutamyl-glycylglycine + 5-amino-2-nitrobenzoate TEMPERATURA: 37°C Coeficiente de Correlación: 0.9992
LARGO DE ONDA: 405 nm Cuesta: 0.9880
La gamma-GT en la muestra cataliza la transferencia del grupo glutamyl de L-Gamma- TIPO DE ENSAYO: Rate/Cinetica Intercepto: -0.4 (U/L)
glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide a glycylglycine según la reacción anterior. La DIRECCION: Aumentativa
cantidad de 5-amino-2-nitrobenzoate formado es proporcional a la actividad Gamma- e.g. VOL. MUESTRA: 0.050 mL (50 L) Precision:
GT y puede ser medida cineticamente en 405 nm por la intensidad creciente del color Reactivo 1 Vol. 1.0 mL (1000 L) Entre corrida Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
amarillo formado. Reactivo 2 Vol. 0.250 mL (250 L) Promedio(U/L) 34.0 81.6 148.2
TIEMPO INCUBACION: 1 Min S.D. (U/L) 1.3 1.9 2.5
COMPOSICION TIEMPO LECTURA: 3 Min C.V. (%) 3.9 2.3 1.7
Ingredientes Activos Concentración
Reactivo 1 Notas de Procedimiento: Total Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
Glycylglycine 150 mM 1. El reactivo y los volúmenes de muestra pueden ser cambiados proporcionalmente S.D. (U/L) 1.3 2.3 2.9
Reactivo 2 para acomodar varias exigencias de instrumento. C. V. (%) 3.9 2.8 2.0
L-Gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide 6.0 mM 2. Las muestras con valores encima de 1000 U/L deberían ser diluidas 1:1 con la salina,
Concentraciones en el reactivo de trabajo. re ensayadas y los resultados multiplicados por dos. Sensitividad:
pH (7.7 – 8.1) 3. Si el espetrofotometro usado es equipado con una cubeta de temperatura controlada , La sensitividad de este reactivo cuando usado segun recomendado es 0.0103 mA / min
la mezcla de reacción puede ser dejada en la cubeta mientras las lecturas absorbancia por U/L
Precauciones y Advertencias: son tomadas.
1. Solo para uso diagnóstico in vitro . Nota: Datos obtenidos mediante pruebas realizadas en el Synchron CX..
2. No utilizar la pipeta con la boca. Evite el contacto con piel y ojos. De ser derramado, Cálculo
lave a fondo el área afectada con el agua. Para información adicional, consulte la Hoja Una Unidad (U/L) es definida como la cantidad de enzima que cataliza la REFERENCIAS
se Datos de Seguridad de GGT. 1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.
transformación de un microtopo de substrate por minuto en condiciones especificadas. P.80-6.
3. El reactivo contiene el Sodio Azide como un preservativo. En un estado seco puede Por ejemplo: 2. Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In:Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook
reaccionar con cobre o fontanería de plomo para formar el metal explosivo azides. Al of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders Company; 1999. P. 617-721.
descarte, echar cantidades grandes de agua para prevenir el crecimiento de acido. U/L = AAbs./mIn. x 1.300 x 1000 = AAbs./min. x 2737 3. Demetriou, J.A., Drewes, P.A., Gin, J.B., Clinical Chemistry: Principles and Technics, 2 nd Ed.,
4. No usar el reactivo después de la fecha de caducidad impresa en el equipo 9.5 x 1 x 0.050 Hagerstown (MD), Harper Row, pp 872-873 (1974).
4. Orlowski, M., Meister, A., Biochem, Biophys. Acta 73:679 (1963).
5. Kulhanek, V., Dimov, D.M., Clin. Chem. Acta 14:619 (1966).
PREPARACIÓN DE REACTIVO Donde: AAbs / minuto. = cambio de Absorbance 6. Szasz, G., Clin. Chem. 15:124 (1969).
Los reactivos son suministrados en dos frasco, listos a usar en forma líquida. 1000 = conversión de U/ml a U/L 7. Szasz, G., Persijn, J.P., et al, A Klin. Chem. Klin. Biochem. 12:228 (1974).
Para algunos analizadores, los reactivos pueden ser combinados para hacer una solución 1.300 = volumen de reacción total (mL) 8. Shaw LM, Stromme JH, London JL, Theodorsen L. International Federation of Clinical Chemistry,
de trabajo mezclando 4 partes del Reactivo 1 con 1 parte del Reactivo 2 (p.ej, 20mL 9.5 = absorbencia de Millimolar de 5-amino-2-nitrobenzoate. (IFCC), Scientific Committee, Analytical Section. IFCC methods for the measurment of catalytic
Rgt 1 a 5mL Rgt 2). Para instrucciones en el uso, consulte la Hoja de Aplicación de concentration of enzymes. Part 4. IFCC method for gamma-glutamyl-transferase [(gamma-glutamyl)-
1 = camino ligero en cm peptide: amino acid gamma-glutamyltransferase, EC 2.3.2.2]. J Clin Chem Clin Biochem 1983;
Instrumento JAS específica para su instrumento. 0.050 = volumen de muestra (mL) 21:633-46.
9. Rosalki, S.B., Advances in Clinical Chemistry, Vol. 17, New York, Academic Press, p.53 (1975).
ALMACENAJE DE REACTIVO Ejemplo: Si su Abs / minuto = 0.06 10. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).
1. Almacenar los reactivo en 2 8°C (refrigerado). entonces 0.06 x 5333 = 320 U/L.
2. Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad cuando almacenado en 2-8°C. JAS Diagnostics, Inc.
14100 NW 57th Court Miami Lakes Florida 33014
3. El reactivo de trabajo es estable durante. NOTA: Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
4 semanas cuando es almacenado en (2 -8°C).4. No congelar los reactivo. 1. Si los parámetros de prueba son cambiados el factor tiene que ser calculado de nuevo www.jasdiagnostics.com
5. El reactivo 2 debería ser protegido de la luz. usando la fórmula anterior.
Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
2. Para convertir a unidades Sl (nkat/L) multiplican U/L por .01667.
DETERIODO DEL REACTIVO Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
Email: mail@obelis.net
PI: GGT2.JS02 REV:10/19/09