1000 mg/dL.

The procedure is standardized by means of the millimolar absorptivity of pNP

taken as 10.1 at 405nm (9.2 at 415nm) under the test conditions described.
Bilirubin: No significant interference ( 10%) from bilirubin up to 22.7
INTENDED USE mg/dL. QUALITY CONTROL
For the in vitro quantitative determination of amylase activity in serum. Lipemia: No significant interference ( 10%) from lipemia up to 1020 The integrity of the reaction should be monitored by use of a two level control with
mg/dL measured as triglycerides. known values such as JAS Chemistry Controls (P/N: CON1-5 and CON2-5)
SUMMARY AND EXPLANATION 1 2. See Young, et al.2 or other interfering substances.
Amylase determinations are performed in the diagnosis and treatment of diseases of EXPECTED RANGE 1
the pancreas and the investigation of pancreatic function. Pancreatitis for example ADDITIONAL EQUIPMENT REQUIRED BUT NOT PROVIDED 25-125 U/L (37°C)
is associated with increases in amylase activity in serum. 1. A clinical chemistry analyzer capable of maintaining constant temperature It is strongly recommended that each laboratory establish its own reference range.
(37°C) and measuring absorbances at 405 - 420nm.
METHODOLOGY 1 2. Analyzer specific consumables, e.g.: sample cups PERFORMANCE
Historically, several methods for the assay of amylase activity have been used. 3. Control materials such as those provided by JAS Diagnostics (CON1-5 & Linearity:
Amyloclastic methods measured the disappearance of substrate, as the iodine-starch CON2-5). When run as recommended the assay is linear from 1.8 to 2000 U/L.
methods. Saccharogenic methods measured the production of sugars, as maltose
and glucose. These methods however, lack the linearity, sensitivity, and precision, ASSAY PROCEDURE Method Comparison:
of recent chromogenic methods, which yield colored products that can easily be These instructions are to be used as a general guideline for adapting to select Studies performed between this procedure and a similar methodology yielded the
measured spectrophotometrically. automated instruments. Refer to your specific JAS instrument application, available following results:
The JAS Amylase Reagent utilizes the chromogenic substrate E-pNP-G7 (or EPS). upon request. Number of samples pairs: 57
Range of samples: 11.0 - 282.0 (U/L)
PRINCIPLE SYSTEM PARAMETERS Correlation Coefficient: 0.9990
The reaction of amylase with EPS substrate results in the cleavage of the substrate Amylase Slope: 0.9078
into smaller fragments. These smaller fragments are then reacted upon by alpha TEMPERATURE: 37°C Intercept: 5.8 (U/L)
glucosidase, which causes the release of the chromophore, pNP. The rate of WAVELENGTH: 405 nm
formation of this chromophore is proportional to the activity of amylase in the ASSAY TYPE: Rate/Kinetic Precision:
sample. Amylase activity can be measured by the rate on increase in absorbance at DIRECTION: Increase Within Run Level Level 2 Level 3
405 to 420nm, caused by the formation of this chromophore. SAMPLE / RGT RATIO: 1: 40 Mean (U/L) 44.1 271.1 475.6
e.g. Sample Vol. 0.025mL (25L) S.D. (U/L) 0.7 2.1 2.1
REAGENT COMPOSITION Reagent Vol. 1.0 mL C.V. (%) 1.5 0.8 0.4
Active Ingredients Concentrations DELAY/LAG TIME: 60 Seconds
E-pNP-G7 1.1 mM READ TIME: 1-3 Min Total Level Level 2 Level 3
Alpha Glucosidase (microbial) >1000 U/L S.D. (U/L) 1.0 4.4 6.2
Sodium Chloride 51 mmol/L C.V. (%) 2.2 1.6 1.3
PROCEDURE NOTES
Buffers and Stabilizers
Samples with values above 2000 U/L should be diluted 1:1 with saline, re assayed
pH (6.8 – 7.2) Sensitivity:
and the results multiplied by two.
The sensitivity for this reagent when run as recommended is 0.149 mA / min per
PRECAUTIONS U/L.
CALCULATION
This reagent is for in vitro diagnostic use only.
One Unit (U/L) is defined as the amount of enzyme that catalyzes the
Note: Performance established on the Synchron CX4
transformation of one micromole of substrate per minute under specified
REAGENT PREPARATION
conditions. For Example:
Reagent is supplied ready to use.
Amylase (U/L) = Abs. /min x 1.025 x 1000 = Abs/min x 4059 REFERENCES
REAGENT STORAGE 1. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, 2 nd Edition, Philadelphia (PA), W.B. Saunders, p. 854-
1. Store the reagent at 2-8°C. 10.1 x 0.025 x 1.0
861 (1994).
Where
2. The reagent is stable until the expiration date when stored at 2-8°C. 2. Young, D.S., et al, Clin. Chem, 21:1D (1975).
Abs. /min. = Average absorbance change per minute 3. Expert Panel of Enzymes of the International Federation of Clinical Chemistry, Clin. Chem. 24: 497-
1.025 = Total reaction volume (ml) 510 (1986).
REAGENT DETERIORATION 4. Kaplan, L.A. and Pesce, J.J., Clinical Chemistry: Theory, analysis, and correlation, 3rd Edition, St.
DO NOT USE REAGENT IF: 1000 = Conversion of U/mL to U/L Louis (MO), Mosby, p. 567-568 (1996).
1. The initial absorbance, read against water at 405nm, is greater than 1.1 AU. 10.1 = Millimolar absorptivity at 405nm
2. The reagent fails to meet stated parameters of performance. 0.025 = Sample Volume (mL) JAS Diagnostics, Inc.
1.0 = Light path in cm 14100 NW 57th Court. Miami Lakes FL 33014
Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
SPECIMEN COLLECTION AND HANDLING1 www.jasdiagnostics.com
1. Unhemolyzed serum is the specimen of choice. Example: If the average absorbance change per minute is 0.10, then 0.10 x 4059 =
2. Anticoagulants, such as Citrate and EDTA, bind calcium, which is needed for 406 U/L
Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
amylase activity. Therefore, plasma with these anticoagulants should not be
Notes: Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
used.
AMYLASE (LIQUID)
Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
3. Amylase in serum is reported stable for 2 months when stored refrigerated (2- 1. To convert to nkat/L multiply U/L by 16.67. Email: mail@obelis.net
8oC). 2. If any of the test parameters are altered, a new factor must be calculated using

INTERFERENCE
REAGENT
the above formula.

1. Studies to determine the level of interference for hemoglobin, bilirubin, and

lipemia were carried out, the following results were obtained: CALIBRATION
Hemoglobin: No significant interference (+ 10%) from hemoglobin up to
PI: AMY2.JS02 REV: 10/19/09
 .
Bilirrubina: Interferencia no significativa ( 10%) de la bilirrubina hasta 22.7mg/dL
1. Para convertir a nkat/L multiplica U/L por 16.67.
2. Si alguno de los parámetros de ensayo son alterados, un Nuevo factor debe ser
USO Lipemia: Interferencia no significativa ( 10%) de lipemia hasta 1020 mg/dL medida calculado utilizando la formula arriba descrita.
Reactivo para la determinación cuantitativa diagnóstica in vitro de a-amilasa en suero. como triglicéridos.
2. VeaYoung, et al.2 para otras sustancias de interferencia. CALIBRACION
RESUMEN Y EXPLICACION 1 EQUIPO ADICIONAL REQUERIDO, NO PROVISTO El procedimiento se estandariza por medio de la absorbencia mili molar de pNP tomada
Las determinaciones de Amilasa se llevan a cabo para el diagnóstico y tratamiento de 1. Espectrofotómetro manual ó automático capaz mantener una temperatura constante de como 10.1 a 405nm (9.2 a 415nm) bajo las condiciones de ensayo descritas.
enfermedades del páncreas y la investigación de la fusión pancreática. La Pancreatitis por 37ºC y de medir absorbancia a 405-420nm.
ejemplo, esta asociada con el aumento de la actividad de Amilasa en el suero. 2. Materiales o consumibles del analizador, e.g.: cubetas de muestra. CONTROL DE CALIDAD:
3. Material de Control como el proveído por JAS Diagnostics (CON1-5 & CON2-5). La integridad de la reaccion debe ser evaluada usando un control de dos niveles con
METODOLOGIA valores conocidos como el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).
Hay varios procedimientos para el ensayo de la actividad de amilasa en suero. Métodos PROCEDIMIENTO PARA USO MANUAL
Amilo clásticos miden la reducción de sustrato e incluyen el método de iodo-almidón. 1. Marcar un tubo de ensayo ó cubeta para el blanco y para cada muestra problema. VALORES ESPERADOS:1
Métodos sacarogènicos miden la producción de azucares como maltosa y glucosa. A 2. Añadir 1.0 mL de reactivo completamente disuelto a cada tubo ó cubeta y llevar a la 25-125 U/L (37°C)
ambos métodos le falta linealidad, precisión y sensibilidad cuando se comparan a métodos temperatura seleccionada. Preincubar todas las muestras. El número total de Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia.
cromogenitos, los cuales producen un producto colorizado que se puede leer con determinaciones a obtener con este producto depende de la cantidad de reactivo
espectrofotómetro. empleado para cada determinación a conveniencia del usuario según su método, ya sea FUNCIONAMIENTO
El reactivo de Amilasa distribuido por JAS utiliza el sustrato cromogenito E-pNP-G7 manual ó automatizado. Linealidad:
(EPS). 3. Calibrar el espectrofotómetro con un blanco apropiado de aire, agua ó blanco de Cuando se corre según recomendado el ensayo es línear desde 1.8 a 2000 U/L.
reactivo (1.0 mL de reactivo + 0.025 mL de agua).
PRINCIPIO 4. A intervalos medidos exactamente, agregar 0.025mL de muestra a cada tubo ó cubeta, Comparación del Método:
La reacción de Amilasa con el sustrato EPS resulta en el rompimiento del sustrato en mezclar y prepararse para medir la absorbancia, manteniendo la temperatura Estudios comparativos entre este procedimiento y una metodología similar llevaron a los
fragmentos más pequeños. Estos fragmentos más pequeños, entonces reaccionan sobre la constante. siguientes resultados:
alfa-glucosidazo, la cual causa la liberación del cromóforo pNP. La velocidad con la cual 5. Registrar la absorbancia inicial 1 minuto después de haber mezclado, y después a Numero de pares de muestras: 57
se forma este cromóforo es proporcional a la actividad de Amilasa en la muestra. La intervalos exactos de 30 ó 60 segundos, por lo menos durante 3 minutos. También Rango de muestras: 11.0 – 282.0 (U/L)
actividad de Amilasa puede ser medida mediante la razón en el aumento en la absorbancia puede registrarse la absorbancia en forma continua sobre papel registrador. Usar el Coeficiente de Correlación: 0.9990
a 405-420nm, causada por la formación del cromóforo. mismo tiempo en todas las muestras. Pendiente: 0.9078
Intercepto: 5.8 (U/L)
COMPOSICION DEL REACTIVO PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO
Ingredientes Activos Concentración Las instrucciones están diseñadas para instrumentación manual, pero pueden ser Precisión:
PNPG7 1.1 mM adaptadas a aparatos automatizados. Instrucciones específicas están disponibles a Dentro de la corrida Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
-glucosidazo (maltasa) >1000 U/L petición. Promedio (U/L) 44.1 271.1 475.6
Cloruro de sodio 51 mmol/L PARAMETROS D.S. (U/L) 0.7 2.1 2.1
Buffers and Stabilizers Amilasa C.V. (%) 1.5 0.8 0.4
pH (6.8 – 7.2) Temperatura 37ºC
Longitud de onda 405 nm Total Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
ADVERTENCIA Dirección aumentativa D.S. (U/L) 1.0 4.4 6.2
Este reactivo es solamente para uso in Vitro. Razon Muestra/ React. 1:40 C.V. (%) 2.2 1.6 1.3
Volumen de reactivo 1.0 mL
PREPARACIÓN DEL REACTIVO Sensitividad:
Volumen de muestra 0.025 mL (25L)
El reactivo está listo para ser utilizado. Tiempo de espera 60 Segundos La sensitividad de este reactivo cuando usado segun recomendado es 0.149 mA / min por U/L
Tiempo de lectura 1-3 minutos
ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO Nota: Datos obtenidos mediante pruebas realizadas en el Synchron CX4.
1. Almacene el reactivo de 2-8°C. CALCULOS
2. El reactivo es estable hasta su fecha de expiración si es almacenado de 2-8°C. REFERENCIAS
Una unidad (U/L) esta definida como la cantidad de enzima que cataliza la transformación 1. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, 2 nd Edition, Philadelphia (PA), W.B. Saunders, p. 854-
de un micro mole de sustrato por minuto bajo condiciones específicas. Por ejemplo: 861 (1994).
DETERIORO DEL REACTIVO 2. Young, D.S., et al, Clin. Chem, 21:1D (1975).
NO USE EL REACTIVO SI: Amilasa (U/L) = Abs. /min. x 1.025 x 1000 = Abs/min. x 4059 3. Expert Panel of Enzymes of the International Federation of Clinical Chemistry, Clin. Chem. 24: 497-
1. La absorbancia inicial, leída contra agua a 405nm, es mayor que 1.1 AU. 10.1 x 0.025 x 1.0 510 (1986).
2. El reactivo falla en cumplir los parámetros de funcionamiento establecidos. 4. Kaplan, L.A. and Pesce, J.J., Clinical Chemistry: Theory, analysis, and correlation, 3rd Edition, St.
Donde: Louis (MO), Mosby, p. 567-568 (1996).
Abs. /min. = cambio en la absorbancia promedio por minuto
TOMA Y MANEJO DE LA MUESTRA1 1.025 = Volumen total de la reacción (ml)
1. Suero no hemolizado es la muestra adecuada. 1000 = Conversión de U/mL a U/L JAS Diagnostics, Inc.
2. Anticoagulantes, tales como Citrato y EDTA, se enlazan con calcio, el cual es 10.1 = Absorbencia millimolar a 405nm 14100 NW 57th Court. Miami Lakes FL 33014
necesario para la actividad de Amilasa. Por lo tanto, plasma con estos anticoagulantes 0.025 = Volumen de la muestra (mL) Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
no debe ser utilizado. 1.0 = Trayectoria de luz en cm www.jasdiagnostics.com
3. Amilasa en suero es estable por 2 meses cuando es almacenada de 2-8oC. Ejemplo: Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
Si el promedio del cambio en absorbancia por minuto = 0.10 Entonces 0.10 x 4059 = 406 Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
INTERFERENCIA U/L Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
1. Se llevaron a cabo estudios que determinan el nivel de interferencia para hemoglobina,
bilirrubina y lipemia, se obtuvieron los siguientes resultados: AMILASA (LIQUIDA) Email: mail@obelis.net

Hemoglobina: Interferencia no significativa (+ 10%) de la hemoglobina hasta 1000

mg/dL
.

NOTAS:
PI: AMY2.JS02 REV: 10/19/09