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  • Citrate Simmons1

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    This document describes the citrate Simmons medium, which is used to study a bacterium's ability to use citrate as its sole carbon source. The medium contains citrate, magnesium sulfate, ammonium phosphate, dipotassium phosphate, sodium chloride, bromothymol blue pH indicator, and agar. If a bacterium can use citrate as its sole carbon source, it will alkalinize the medium and turn it blue due to bicarbonate production. Observing a color change to blue indicates the bacterium possesses a citrate permease and is citrate-positive.

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    1ère STL Fiche technique n°23

    LE MILIEU CITRATE DE SIMMONS

    1. Intérêt
    Ce milieu permet l’étude de l’utilisation, par la bactérie, du citrate (acide organique) comme
    seule source de carbone.

    2. Composition Milieu synthétique

    Composant Quantité (g/L) Rôle


    Sulfate de magnésium 0,2
    Phosphate monoammonique 1
    Source minérale + maintien de l’isotonie
    Phosphate bipotassique 1
    Chlorure de sodium 5
    Citrate de sodium 2 Lecture d’un caractère biochimique
    Bleu de bromothymol 0,08 Indicateur de pH
    Agar 15 gélifiant
    pH 7,1

    3. Principe
    Seules les bactéries possédant une citrate perméase peuvent utiliser le citrate comme seule
    source de carbone. La lecture de l’utilisation du citrate comme seule source de carbone est
    possible grâce à la présence :
     d’un indicateur de pH, le bleu de bromothymol
     d’un seul composé carboné, le citrate de sodium.

    L'oxydation du citrate entraîne la libération de CO2 volatil et la consommation de H+ :

    2 C6H5073 - + 9 O2 12 CO2 + 2 H2O + 6 OH -

    Le CO2, gaz acide, étant éliminé, on a dans le tube une alcalinisation (apparition des
    OH-) et non une acidification du milieu.

     La dégradation du citrate se traduit par une alcalinisation du milieu révélée par le virage
    du bleu de bromothymol à sa teinte basique.

    4. Ensemencement

     Par stries sur la pente à l’aide d’une pipette Pasteur fermée.


     Incuber 24 heures à 37°C, bouchon dévissé.

    5. Lecture et interprétation
    Observation Interprétation Conclusion
    Présence de culture Les bactéries utilisent le citrate Les bactéries possèdent une
    bactérienne comme seule source de carbone citrate perméase

    Milieu bleu avec alcalinisation du milieu Elles sont dites citrate +


    Présence de culture Les bactéries utilisent le citrate Les bactéries possèdent une
    bactérienne comme seule source de carbone citrate perméase

    Milieu inchangé (vert) sans alcalinisation du milieu Elles sont dites citrate +
    Absence de culture Les bactéries n’utilisent pas le Les bactéries ne possèdent pas
    bactérienne citrate comme seule source de de citrate perméase

    Milieu inchangé (vert) carbone Elles sont dites citrate -

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