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Guia de Práctica de Interpretación de Análisis Clínicos Semestre 2023 Ii
Guia de Práctica de Interpretación de Análisis Clínicos Semestre 2023 Ii
GUÍA DE PRÁCTICA
2023 II
El laboratorio clínico dispone de los métodos de análisis clínicos, que estudia los diversos
procesos utilizados en la exploración clínica y hace la interpretación bioquímica y
patológica de los resultados.
Por su amplitud y por la evolución vertiginosa de especialización se ha dividido en:
hematología, inmunohematología, bioquímica clínica, microbiología clínica, parasitología
clínica y líquidos biológicos.
1.2. Competencias
1. Distingue los diversos métodos para la toma de muestra de los diversos líquidos
biológicos
2. Explica las diferencias entre los líquidos de sangre total, plasma y suero sanguíneo.
1.5. Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
1.6. Cuestionario
1. Desarrolle un mapa conceptual indicando los pasos para una toma de muestra de
sangre venosa, sangre arterial y sangre capilar.
2. ¿Cómo se obtiene el suero y el plasma sanguíneo en el laboratorio?
3. ¿Qué utilidad tienen la sangre desfibrinada en el laboratorio clínico?
4. ¿Cuál es la composición química del anticoagulante de Wintrobe y cómo actúa en la
sangre evitando la coagulación de la misma, refiera bioquímicamente?
5. ¿Cuál es la ventaja de obtener sangre con tubos Vacutainer, mencione los diversos
tipos que existen?
2.2. Competencias
1. Reconoce la cámara de Neubauer y los campos donde se efectúan los contajes
correspondientes de los elementos formes.
2. Opera con destreza el proceso del recuento de glóbulos rojos.
2.4. Procedimiento
1. Aspirar sangre hasta 0.5 ó 1 según la dilución 1 en 200 ó 1 en 100.
2. La sangre que moja la superficie externa de la pipeta se limpia rápidamente con
papel especial o con gasa.
3. Si la sangre pasa la marca de 0.5 ó 1 se retira por capilaridad tocando la punta de
la pipeta con gasa o algodón.
4. Completar con el líquido de dilución hasta la marca de 101.
5. Mientras se aspira el líquido de dilución, se hace girar la pipeta entre el pulgar y el
índice de la mano derecha.
6. Retirando la boquilla se imprimen movimientos durante 1 ó 2 minutos.
7. Desechar las primeras gotas y sin pérdida de tiempo tocar con una gota pequeña el
borde de la superficie pulimentada en que están en contacto la cuadricular de la
cámara y el portaobjeto.
8. Esta gota se insinúa por debajo del cubreobjeto por capilaridad.
9. La suspensión no debe escurrirse en los surcos laterales ni debe formarse burbujas
de aire.
10. Dejar transcurrir 3 minutos para que se depositen los glóbulos.
11. Llevar la cámara a la platina del microscopio. Iluminar bien. Comprobar si hay
uniforme distribución de hematíes.
12. Efectuar el recuento con el objetivo de gran aumento, manteniendo el condensador
bajo y el diafragma parcialmente cerrado, nunca se tocará el cubreobjeto con la
lente, ello induce a groseros errores al modificar la posición de los corpúsculos.
Para evitar toda confusión al contar los glóbulos, se incluyen los hematíes que tocan las
líneas divisorias izquierda y superior como si estuviera dentro de los cuadrados, los que
tocan los lados derecho e inferior no se toman en cuenta.
No debe haber diferencia de más de 18 unidades de número de glóbulos rojos entre los 5
cuadrados.
Cálculos:
Con la dilución al 1 en 200 contar los glóbulos comprendidos en 5 grupos de 16 luego se
aplica la siguiente fórmula: (Cálculo razonado)
N x 10 x 200 x 400
------------------------- = Hematíes por mm3 de sangre.
80
De donde:
N: número total de hematíes en 80 cuadraditos.
10: altura de la cámara.
200: dilución de la pipeta.
2.5. Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en esta práctica.
2.6. Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento del recuento de glóbulos rojos?
2. ¿Cómo actúan los componentes del líquido de Gower en la hematimetría?
3. Explique mediante un esquema la cámara de Neubauer y el Reticulo de Thoma
4. Describa bioquímicamente ¿Cómo se produce la anemia drepanocítica?.
5. ¿Por qué en las personas que habitan en alturas se encuentra Policitemia
fisiológica?.
2.4. Procedimiento
METODO DE LA CIANOMETAHEMOGLOBINA:
En dos tubos de ensayo rotular Blanco y Muestra, y realizar el siguiente proceso:
BLANCO MUESTRA
Reactivo de trabajo 2,5 mL 2,5 mL
Sangre total ------- 0,01 mL
2.5. Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en esta práctica.
2.6. Cuestionario
1. Explique el fundamento del dosaje de Hemoglobina
2. ¿Cuál es la composición química del Reactivo de Drabkin?
3. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de la hemoglobina?
4. ¿Cómo se relaciona el hematocrito con la hemoglobina?
2.2. Competencias
1. Determina los valores del hematocrito por el método correspondiente.
2. Realiza el procedimiento en el laboratorio del hematocrito.
2.4. Procedimiento
A. Toma de muestra.
SANGRE VENOSA:
La Sangre venosa obtenida y que se encuentra mezclada con el anticoagulante de
Wintrobe llenar con la pipeta capilar el tubo de Hematocrito hasta la marca 10.
Centrifuga a 3,000 rpm durante 30 minutos.
Cálculos:
Para calcular el Hc la altura de la columna de hematíes sedimentados dado en mm se
multiplica por 10.
Valores normales:
Mujeres: 42 mL%
Hombres: 45 mL%
Interpretación:
Están disminuidas en las anemias, en los casos de hemodilución tales como la hidremia
fisiológica (exceso de agua en la sangre) del embarazo.
Es alto en las poliglobulias genuina a una hemoconcentración debida a considerables
perdida de agua como en la deshidratación, quemaduras y schock.
SANGRE CAPILAR:
MICROHEMATOCRITO: Método de Guest-Wichsebaun
Hoy en día se está difundiendo el uso del microhematocrito que utiliza sangre obtenida
por punción digital.
Materiales y reactivos
Tubos capilares de 7 cm de largo por 1mm de diámetro interior cubiertos interiormente
con heparina al 1/1000 se tapona con arcilla moldeable (plastilina).
Procedimiento:
Se llena con sangre por capilaridad las tres cuartas partes del capilar.
Centrifugar en la microcentrifuga y leer sobre los normogramas que viene en cada equipo.
Cuando no se dispone de dicho equipo se pone el tubo dentro de un tubo de ensayo y se
centrifuga por 10 minutos a 2000 rpm. Luego se aplica la siguiente formula:
a
x 100=mL %
b
2.5. Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en esta práctica.
2.6. Cuestionario
3.2. Competencias
1. Conoce el procedimiento para el recuento de glóbulos blancos.
2. Diferencia los recuentos de glóbulos blancos y rojos.
3. Aplica fórmulas para el recuento de glóbulos blancos.
3.4. Procedimiento
3.5. Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
3.6. Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento del reactivo de Turck en el recuento de leucocitos?
3.2. Competencia
1. Utiliza el colorante adecuado para la identificación de los elementos formes en
sangre coloreada.
2. Identifica los diversos tipos de leucocitos de acuerdo a su forma, tamaño y color.
3. Aplica el método más conveniente para el recuento de los diversos tipos de
leucocitos.
3.5. Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
3.6. Cuestionario
1. Dibuje y coloree los diferentes tipos de leucocitos.
2. ¿En qué patologías se presentan linfocitosis, monocitosis, neutrofilia, eosinofilia y
basofilia?
3. ¿Cuál es la diferencia entre el Hemograma de Schilling y el Esquema de Arneth?
4. ¿Qué importancia clínica tiene el Esquema de Arneth?
5. ¿Cuándo se habla de desviación a la izquierda y desviación a la derecha?
3.4. Procedimiento
A. Metodo de wintrobe y landsberg
La eritrosedimentación se determina con el tubo de Wintrobe en la siguiente forma:
Recoger 5 mL de sangre con anticoagulante.
Llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca "O" de sangre utilizando la pipeta de Wright y
antes de que la muestra tenga más de dos horas de extraída.
Mantener el tubo en posición vertical tapar con un capuchón de goma y esperar una hora
para hacer una sola lectura o con intervalos frecuentes para expresar en gráficas.
Valores normales:
Hombre: 1 - 11 mm
Mujeres: 1 - 15 mm
Determinada la velocidad de sedimentación puede centrifugarse a 3000 rpm durante 30
minutos para comprobar el volumen globular.
En esta forma se corrige la eritrosedimentación si existen alteraciones ocasionadas por
anemia.
En el mismo tubo puede medirse el volumen de leucocitos, plaquetas y el índice ictérico.
B. Método de Cutler
Se emplea el tubo de sedimentación de Cutler que tiene 1 ml. de capacidad, 5mm de
diámetro interno y está graduado en 40 divisiones con el "O" a nivel del "Y que
representan milímetros.
Procedimiento:
1. Llenar el tubo con sangre con anticoagulante. Colocar en posición vertical y hacer
la lectura a la hora, cada 5 minutos para construir la gráfica.
2. Es mejor trabajar con sangre citratada en la siguiente forma:
3. Con una jeringa de 2 mL. aspirar 0.1 mL. de solución de citrato de sodio al 3.8 g
% y completar a 1 mL con sangre venosa.
4. Mezclar llenar el tubo de Cutler, tapar con un tapón de goma y mantener en
posición vertical.
5. En el nuevo tubo modificado de Cutler, se deposita 0.5 ml de anticoagulante
citrato de sodio 3.8% y se completa a 5ml con sangre venosa en la marca "O". la
cantidad insuficiente de citrato aumenta la VSG y un exceso disminuye o retarda.
Valores normales:
Las cifras normales a la hora de lectura son de:
2 - 10 mm para mujeres
2 8 mm para hombres.
3.5. Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
3.6. Cuestionario
1. ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de la velocidad de sedimentación?
2. ¿Qué diferencias existen en la utilización de los métodos de Wintrobe y Cutler para determinar la
eritrosedimentación?
3. ¿Cuál es el fundamento físico químico de la eritrosedimentación?
4. Explique Ud. el método del tubo capilar para determinar la eritrosedimentación.
5. ¿Por qué la diferencia de valores en la eritrosedimentación en varones y en mujeres?
RECUENTO DE PLAQUETAS
4.2 Competencia
1. Distingue los métodos directos e indirectos para el recuento de plaquetas
2. Aplica el método más conveniente para el recuento de plaquetas
4.4 Procedimiento
Método de fonio:
1. Sobre la yema del dedo limpio, seco y desinfectado colóquese una gota grande de
solución esterilizado de sulfato de magnesio al 14% para que la sangre no tome
contacto con el aire. A través de la gota puncionar la piel con una lanceta de tal
F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007
manera que salga espontáneamente una pequeña gota de sangre a razón de 1:5
aproximadamente.
2. Mezclar con el borde de un portaobjeto para homogeneizar e impedir la
aglutinación de las plaquetas.
3. Con la misma lanceta llevar una gota de la suspensión sobre un portaobjetos y
verificar el frotis como si tratara de sangre sola.
4. Al sacar la preparación toma un brillo aterciopelado y casi incoloro al trasluz, teñir
con Wright en la forma habitual dejando actuar el colorante un tiempo mayor de
dedicado a la formula leucocitaria.
5. Con objetivo de inmersión y aceite de cedro contar en varios campos
simultáneamente los glóbulos rojos y las plaquetas hasta completar 1000 a 2000
hematíes.
Cálculos
Para los cálculos se multiplica el número de plaquetas, contadas en el frotis, por el
número de hematíes por mmc. y dividir entre el número de eritrocitos contadas en la
extensión.
50 x 4'800,000
----------------- = 240,000 plaquetas por mm3.
1000
Método de Rees-Ecker:
Se debe operar con suma rapidez y limpieza para evitar la aglutinación y para no
confundir impurezas con los trombocitos.
1. Aspirar líquido de dilución hasta la marca de 0.5 con la pipeta para glóbulos rojos
2. Llenar con sangre capilar hasta completar con líquido de dilución hasta la marca de
101.
3. Dejar en reposo por espacio de 5 minutos.
4. Cargar la cámara cuenta glóbulos y dejar en reposo de 15 a 20 minutos para que
sedimente las plaquetas.
5. Con el objetivo potente contar en todo el cuadrado central de retículo para hematíes
(25 cuadrados de 16 cuadraditos cada uno)
Cálculos: N X 10 x 200 = plaquetas por mm3.
N : número de plaquetas en el mm central de retículo
10 : para referir al 1 mm3
200 : dilución cuando se toma sangre hasta 0.5
Las plaquetas se presentan redondeadas, ovales, alargadas, en forma de cono o poliédricas
e irregulares.
Se las ve muy refringentes, plateada, veces de color lila.
Valores normales: 150,000 a 400,000 plaquetas por mm3 de sangre
Interpretación:
4.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
4.6 Cuestionario
1. Mencione los principales métodos directos e indirectos para el recuento de
plaquetas.
2. Explique el fundamento del método de Fonio.
3. Explique el fundamento del método de Rees-Ecker.
4. Mencione las patologías en que se presenta aumenta o disminución de las
plaquetas.
5. ¿En qué se diferencia la determinación del recuento de glóbulos rojos y el recuento
de plaquetas al utilizar la cámara de Neubauer?
RECUENTOS DE RETICULOCITOS
4.2 Competencia
1. Utiliza el método en forma conveniente para el recuento de reticulocitos.
2. Realiza el recuento de reticulocitos y aplica los cálculos correspondientes.
4.4 Procedimientos
Método húmedo en tubo:
En un tubo de Kahan se mezclan 2 gotas de sangre venosa o capital y 2 gts del reactivo.
Se tapa el tubo y se mantiene a la temperatura ambiente por el término de 2 a 30 minutos.
Luego se extrae 1 gota de la mezcla y se hace un frotis delgado, se seca al aire y se
práctica el recuento utilizando el objetivo de 100x y aceite de cedro para su observación.
Cálculos:
Se cuentan 1000 hematíes anotando todos los que tienen filamentos azules de reticulos.
Dividir por 10 para obtener el porcentaje.
Ej. 20/10 = 2%
Método de Wolfer
Procedimiento:
1. Sobre portaobjetos hace extensiones de la solución de azul cresil brillante. Secar al
aire.
2. Depositar 1 gota de sangre capilar y hacer un frotis sobre el cresil, cuyo alcohol se ha
evaporado. Dejar en reposo 10 minutos.
3. La sustancia retículo gránulo filamentoso de los reticulocitos se tiñe de azul claro con
este colorante supravital y ofrece el aspecto de madeja.
4. Mientras más tenues son las capas de la solución alcohólica y de las sangres mejor
será la lectura.
5. Después del desecado las muestras son ligeramente teñidas por Wright
6. Se observa con objetivo de inmersión.
Valores Normales
Adultos:0.5 -2.5%
Niños: 5-10%
Interpretación:
Aumento: Recién nacidos hasta 2 a 5 días después del nacimiento. Anemias
hemolíticas constitucionales Anemias que evolucionan con regeneración por tratamiento
específico de vit. B 12 en la anemia perniciosa, Ácido fólico en anemia megaloblásticas
del sprue Hierro, anemia microcítica e hipocrómica ferroprivas. Anemia hemolítica
4.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
4.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es la importancia clínica del recuento de reticulocitos?
2. ¿Describa las características de un reticulocito.
3. Indique y describa los tipos de reticulocitos.
4. Mencione y explique el fundamento de los métodos para el recuento de
reticulocitos.
5. ¿En qué patologías se presenta reticulocitos aumentados?
5.2. Competencia
1. Aplica las técnicas apropiadas para determinar el tiempo de coagulación, tiempo de
sangría y de protrombina.
2. Hace la interpretación clínica y correlacionar las coagulopatias.
3. Utiliza el método espectrofotométrico para el dosaje de fibrinógeno.
5.4. Procedimiento
1. Tiempo de coagulación:
A. Método de Burker: 2' - 8'
1. En una lámina portaobjeto colocar 2 gotas de sangre
2. Dejar en reposo 3'. Con el estilete a la 1ra. gota levantar c/ 30". Hasta formar la
FIBRINA.
3. Luego de 30" pasar a las 2da gota. Levantar hasta formar la FIBRINA.
4. Anotar dicho tiempo.
NOTA: El índice de coagulación está dado por el tiempo trascurrido entre colocar
la gota y la formación de fibrina
B. Método de Sabraze: 3' - 8'
1. Se trabaja con 2 tubos capilares (8 en. de largo)
2. Obtener sangre capilar, eliminar las 2 primeras gotas en la 3ra cargar los capilares.
3. Se deja en reposo 3'. Luego romper su trozo c/ 30' hasta que al romper se forme un
filamento de FIBRINA. Toma el tiempo.
C. Método de Lee y White: 5' - 10'
1. Se obtiene Sangre venosa (3,5 ml) verter en 2 tubos 1 mL de sangre cada uno.
2. Anotar el tiempo cuando la sangre fluye.
3. Se inclina uno de los tubos c/ minuto con un ángulo de 45° hasta que la sangre
coagulada no se desplace. Anotar el tiempo.
4. Para el otro tubo hacer la misma operación. Anotar el tiempo, se recomienda
reportar la lectura del 2do tubo, porque la agitación y manipulación aceleran la
coagulación.
2. Tiempo de sangría o de hemorragia
Método de Duke: 1' - 3'
1. Desinfectar el lóbulo de la oreja y pinche con una profundidad de 3 mm.
2. C/30" límpiese con papel de filtro la gota de sangre que fluye el papel no debe
rozar la piel.
3. DOSAJE DE FIBRINÓGENO
Fundamento:
5.4 Procedimiento
Cálculos:
Proteinas totales (g/dL) = Factor x abs muestra
Factor = Concentración del std
Abs del Std
Valores normales
Fibrinógeno: 200 - 400 mg. %
5.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
5.6 Cuestionario
F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007
1. ¿Cuál es el fundamento del tiempo de coagulación?
2. ¿Cuál es el fundamento del tiempo de sangría?
3. ¿Cuál es el fundamento bioquímico del proceso de retracción del coagulo?
4. ¿Cuál es el fundamento para la determinación del fibrinógeno?
5. A través de un mapa conceptual, explique la Teoría de Morawitz.
6.2 Competencias:
1.-Distingue los diversos grupos sanguíneos del sistema ABO
2.- Diferencia el Rh positivo del negativo
3.-Aplica la Variante Du para la comprobación del Rh negativo.
6.4 Procedimiento
6.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
6.2 Competencias
1. Aplicar la variante Du para la comprobación del Rh negativo.
2. Realiza el proceso para la determinación de la variante Du
6. 3 Materiales y equipos
Materiales
Tubos de ensayo
Reactivos
Suero antihumano de Coombs
6.4 Procedimiento
1. Hacer una suspensión globular al 2% en SSF.
2. En un tubo pequeño depositar:
1 gota de suero anti-Rh + 2 gotas de la suspensión globular al 2%.
3. Incubar a 37 oC por 60 minutos para sensibilizar a las células.
4. Sacar el tubo de la incubadora y lavar las células 3 veces en tubo de ensayo llenos
de solución salina hasta cerca del borde del tubo.
6.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
6.6 Cuestionario
1. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de los grupos sanguíneos?
2. ¿Qué aplicación Ud. le daría a la determinación de los sistemas MN y P ?
3. ¿Porque es importante la determinación de la Variante Du?
4. ¿Qué diferencias encuentra entre la prueba de Coombs Directa y la prueba de
Coombs indirecta?
5. ¿Qué son las pruebas cruzadas directa e indirecta?
6.7 Fuentes de información
1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica panamericana; 1999.
2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a ed. Barcelona: Masson;
2005.
3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. Madrid: Masson; 2005.
4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Manual moderno, 2006.
6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 3a ed. Madrid:
Elsevier-Masson; 2006.
AGLUTINACIONES
7.2 Competencias
1. Realiza las determinaciones inmunológicas de las pruebas de aglutinaciones.
2. Explica los resultados obtenidos a través de las pruebas cualitativas y cuantitativas.
7.4 Procedimiento
Las determinaciones comprenden dos etapas:
1. Prueba presuntiva:
Con una pipeta serológica o una micropipeta depositar una gota de suero problema en
cada cuadrado.
A cada gota de suero se le añade una gota de cada antígeno previa agitación.
Mezclar con un palillo mondadientes para cada cuadrado y leer en el término de uno a
tres minutos.
Lectura: La reacción es positiva cuando aparece aglutinación en uno de los 5 cuadrados.
2. Prueba de titulación:
Se preparan 5 cuadrados limpios y con una pipeta depositar en cada uno el volumen de
suero:
0,08, 0,04, 0,02, 0,01 y 0,005 mL de suero respectivamente.
Los títulos serán: 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 y 1/320.
Agregar a cada suero una gota del antígeno. Mezclar.
Luego hacer la lectura.
Los resultados se expresan en términos de la más alta dilución que presenta aglutinación.
7.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
7.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de las pruebas de aglutinación?
2. ¿Cómo se relacionan las pruebas positivas de las aglutinaciones con el Hemograma
de Schilling?
3. ¿A qué se denominan los portadores sanos?
4. ¿Qué patologías dan falsos positivos para las aglutinaciones (Pruebas cruzadas)?.
DIAGNÓSTICO DE SIFILIS
7.2 Competencias
1. Determina los anticuerpos del Treponema pallidium a través de los métodos
serológicos no treponémicas.
2. Realizar una correcta interpretación de los resultados de las pruebas serológicas.
Materiales
Laminas portaobjetos
Equipos
Rotador eléctrico
Microscópio
Baño María
Reactivos
1. Solución antigénica de VDRL
2. Solución salina al 0,9%
3. Sueros controles
7.4 Procedimiento
A. MÉTODO DE VDRL
VDRL CUALITATIVO EN SUERO
1. Numerar los anillos de la lámina
2. Cargar 0.05mL de los sueros control reactivo y no reactivo al primer y tercer
anillo respectivamente
3. En el segundo anillo cargar la muestra problema.
4. Añadir con la micro pipeta 0.05mL de solución antigénica preparada sobre el
suero contenido en cada uno de los anillos de la lámina.
7.6 Cuestionario
1. ¿En qué se diferencian las pruebas de VDRL y RPR?
2. ¿Cuáles son las pruebas confirmatorias de análisis clínicos de un VDRL positivo?
3. ¿Cómo se relaciona el Hemograma de Schilling con un VDRL positivo?
4. ¿Qué es el fenómeno de prozona?
5. ¿Qué patologías dan falsos positivos para VDRL?
7. 7 Fuentes de información
1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica panamericana; 1999.
2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a ed. Barcelona: Masson;
2005.
3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. Madrid: Masson; 2005.
4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Manual moderno, 2006.
6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 3a ed. Madrid:
Elsevier-Masson; 2006.
7.2 Competencias
1. Explica el fundamento de la determinación de antiestreptolisina.
2. Realiza el proceso para determinar antiestreptolisina.
3. Interpreta los resultados cuantitativos para un ASTO positivo.
POSITIVO:
• En neumonía neumocócica, siendo considerada como un anticuerpo
antineumocócico.
• La prueba para la proteína C reactiva, también se utiliza para el control de la
actividad inflamatoria aguda en la fiebre reumática y en la artritis reumatoide.
Interpretación:
Resultado negativo: una suspensión lechosa uniforme no agulutinada.
Resultado positivo: aglutinación visible de la mezcla
PRUEBA SEMI-CUANTITATIVA:
Diluciones 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc.
Título: inversa de la máxima dilución a la que se produce aglutinación visible
macroscópicamente.
PRUEBA SEMI-CUANTITATIVA:
Diluciones 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc.
Título: inversa de la máxima dilución a la que se produce aglutinación visible
macroscópicamente.
7.5. Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
7.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de ASTO?
2. Mencionar los estados fisiológicos y medicamentos que interfieran con la prueba
de antiestreptolisina.
3. ¿Cuáles son los fundamentos para las pruebas de PCR y LATEX?
4. ¿Qué importancia clínica tienen las determinaciones de ASO, PCR y LATEX?
8.2 Competencias
1. Aplica el proceso físico-químico para el examen de orina
2. Identifica los diversos elementos en el examen microscópicos de la orina
3. Explica la interpretación clínica de los resultados del examen de orina
8.4 Procedimiento
Según la finalidad del análisis y no mediando indicaciones especiales del médico se
instruirá al paciente acerca de cómo procederá para la recolección de muestra de orina,
teniendo en cuenta:
Par los exámenes de rutina, es suficiente una muestra de reciente micción salvo en los
casos en que se necesario practicar determinaciones casos es preciso realizar los
exámenes en un muestra correspondiente a la mezcla de la orina total de 24 horas, es
decir que compensa el metabolismo de un almuerzo o de una cena. Para reunir esta
muestra, el paciente iniciará la recolección a las 8 a.m. vaciando la vejiga y desechando
esa primera micción. Luego las distintas micciones se recogerán en un recipiente de boca
ancha y perfectamente limpio incluyendo la micción de las 8 de la mañana del día
siguiente.
El recipiente conteniendo la muestra deberá conservarse en un ambiente fresco como para
impedir la descomposición prematura de la orina.
Para el examen microscópico del sedimento, se utiliza preferentemente una muestra de
reciente micción y en especial la obtenida por la mañana al levantarse el paciente.
Se prefiere las primeras muestras de la mañana, que suelen ser las más concentradas.
En todo examen de orina se tomará en cuenta:
1. EXAMEN FISICO:
Color
Olor
Espuma
Reacción
Densidad
2. EXAMEN QUIMICO: Determinación de:
Proteínas
Glucosa
Cuerpos cetónicos
Urea
Urobilinógeno
Pigmentos biliares
Hemoglobina
Hoy en día existe en el mercado la utilización de tiras reactivas para el análisis de
orina que facilita la determinación cualitativa y cuantitativa de los componentes
químicos de la orina.
8.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
8.6 Cuestionario
1. ¿Cuáles son las condiciones para una buena toma de muestra de orina?
2. ¿En qué casos se presentan proteínas positivas en un examen de orina?
3. ¿Explique el fundamento de la prueba de Thevenon?
4. ¿Cuáles son las pruebas bioquímicas que se utilizan para el examen de orina?
5. ¿Cuál es la importancia clínica al encontrar piocitos en una muestra de orina?.
8.2 Competencias
1. Adquiere experiencia en el manejo de otros líquidos biológicos.
2. Identifica elementos anormales en una muestra de semen.
8.4 Procedimiento
Recolección
Los médicos que solicitan el examen del semen en el estudio de la esterilidad deben
respetar el código moral que su religión impone a cada paciente.
De no haber dificultades desde el punto de vista religiosos, se instruye al paciente para
que recoja la muestra con no menos de cuatro días de abstinencia sexual.
El procedimiento de obtención del material por masturbación, o bien con preservativo,
debe desecharse categóricamente por antinatural.
Además, las muestras recogidas en preservativos no son satisfactorias, aun cuando éstos
fueran lavados previamente, ya que corrientemente se los trata con sustancias químicas
(polvo, licopodio, talco, etc), de energía acción espermicida y que, además, deforman las
imágenes del semen durante su observación posterior.
El procedimiento aconsejable para la obtención del material es por relación sexual
normal, de tal modo que una vez producida la eyaculación y la más mínima parte del
semen haya impregnado la vagina, se recoge el resto en un frasco bien limpio, seco, de
boca ancha, con tapa de vidrio de cierre esmerilado y preferentemente de color caramelo,
en el que se pegará un rótulo con la siguiente información, que el paciente llenará:
Una vez obtenida la muestra, el paciente debe llevarla al laboratorio, lo más pronto
posible (de preferencia antes de una hora), poniéndola en contacto con su cuerpo
durante este tiempo, a fin de evitar que la temperatura descienda mucho.
Notas.- El protocolo se debe registrar: a) abstinencia previa; b) la hora de la eyaculación,
y la hora de recepción en el laboratorio.
Con referencia al recipiente donde se recibe la muestra, debe ser de boca ancha para que
no surjan inconvenientes al recoger el eyaculado. En ambientes hospitalarios,
generalmente se usan frascos de crema o desodorante, por lo que es importante que estén
bien lavados con agua caliente y detergente, pues los restos de estas sustancias poseen
una acción negativa sobre la motilidad.
EXAMEN FISICO
VOLUMEN
Interpretación
Normalmente, antes de las dos horas de la eyaculación se encuentra una gran movilidad
en el 70% de los espermatozoides, con desplazamiento progresivo.
Una buena muestra seminal mantiene una considerable actividad, aún al cabo de 5 ó 6
horas de permanencia a la temperatura ambiente.
Cuando la motilidad es elevada pero está reducida a espermatozoides móviles “in situ” (1
+) o traslativos lentos (2+), no existiendo espermatozoides traslativos rápidos (3 ó 4 +),
el semen no tiene capacidad fecundante y se habla de una astenozoospermia absoluta.
Se habla simplemente de astenozoospermia cuando el porcentaje de espermatozoides de
movimiento traslativo rápido (4+) se encuentra disminuido en valores menores a un 30%.
La ausencia y motilidad se conoce con el nombre de azoospermia.
Morfología
Es estudio morfológico tiene por objeto comprobar la presencia de espermatozoides
anormales y establecer su porcentaje en relación a los normales.
Test de Williams
Este test permite también distinguir los espermatozoides muertos (necrospermia) de los
espermatozoides vivos (astenospemia): los primeros se colorean con una solución de
eosina – nigrosina, mientras que los segundos permanecen incoloros.
Reactivos
1. Solución acuosa de nigrosina al 10%.
2. Solución acuosa de eosina al 5%.
Técnica.
8.5. Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
8.6 Cuestionario
1. Explique Ud. las diferentes evaluaciones que se emplean en la actualidad para
descartar una infertilidad en el hombre.
2. ¿En qué casos se puede solicitar la prueba de la determinación de líquido
seminal?
3. ¿Qué factores alterarían la prueba del espermatograma?
4. ¿Cuáles son los requisitos que debe tener en cuenta todo pacientes que será
sometido a una prueba de determinación de líquido espermático?
9. 1 Marco teórico
El urocultivo es uno de los métodos de análisis microbiológico de suma importancia
para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas del tracto urinario y asi dar un
tratamiento adecuado y oportuno
9.2 Competencias
1. Aplica técnicas de laboratorio para la determinación del urocultivo y coprocultivo.
2. Utiliza los medios de cultivo adecuado para el desarrollo de los microorganismos
3. Interpreta los hallazgos de laboratorio
F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007
9.3 Material y equipos
Materiales
Tubos de ensayo
Asa de Kole
Placas Petri
Reactivos
1. Colorante Gram
Cristal violeta alcalino:
Sol. A: cristal violeta 1g. Agua destilada csp. 100 mL.
Sol. B: bicarbonato de sodio 5g. Agua destilada csp 100mL.
Sol. De yodo 1g. Ioduro de potasio 2g. Agua destilada csp 200mL.
Sol. Decolorante: eter 1 vol. Acetona 3 vol.
Colorante de contraste: safranina 0.5g agua destilada csp 100 mL.
2. Medios de cultivo:
Agar Mac Conkey ó EMB
Agar Azida Sangre
Agar Chapman
3. Coloración de Ziehl-Nelsen (bacilos ácido-resistente)
4. Sol. A: fucsina básica 0.3g alcohol de 95º. 10ml.
5. Sol. B: fenol 5ml. Agua destilada csp. 95ml.
6. Mezclar las soluciones a y b
7. Sol. Alcohólica de ácido clorhídrico
8. Sol. De azul de metileno
12.4 Procedimiento
RECOLECCION DE MUESTRAS:
1. La muestra para cultivo debe ser material del verdadero sitio de infección y debe
recogerse con un mínimo de contaminación de tejidos, órganos o secreciones
adyacentes.
2. Establecer periodos óptimos para la recolección de muestras a fin de tener la
mejor oportunidad de aislar los microorganismos causantes.
3. Obtener suficiente cantidad de muestra para llevar a cabo las técnicas de cultivo
solicitada.
4. Utilizar dispositivos de recolección, recipientes para las muestras y medios de
cultivo adecuados para asegurar el óptimo aislamiento de microorganismos.
5. Siempre que sea posible obtener las muestras antes de la administración de
antibióticos.
6. El envase recolector de la muestra debe estar correctamente rotulado.
UROCULTIVO:
Primer día: Recolección de la muestra.
- Examen de orina completo: físico, químico, microscopio, sedimento.
- Coloración Gram del sedimento.
- Sembrar en: Agar Mac Konkey ó EMB
9.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
9.6 Cuestionario
1. ¿Cuáles son los medios de cultivo utilizados en la identificación de
microorganismos gram negativos?
9.2 Competencias
1. Identifica los parásitos mas frecuente en muestro medio utilizando las
técnicas de examen directo y concentración
2. Relaciona el parásito hallado con el fármaco a utilizar para el tratamiento
b. Líquido de Deschiens:
Glicerina 100 mL.
Formaldehído al 40% 100 mL
Agua destilada 800 mL
c. Solución de De la Plaza:
Formaldehído al 40% 12.5 mL
Glicerina 12.5 mL
Sol. de Ringer o sol. fisiológica 250 mL
Sol. de Ringer ClNa 6g
ClK 75 g
Cl2Ca 100 mg
HCO3Na 100 mg
Agua destilada csp 1000 mL
Existe otros conservadores tales como: Sol. MIF (Mertiolato-Yodo-Fromaldehido) de
Sapreso y Lawles.
Sol de PVa (Alcohol Polivinilico)
REACTIVO DE FAUST:
Sulfato de Zinc al 33% (D>1,180)
9.4 Procedimiento
El estudio debe identificarse en las heces:
Las formas vegetativas
Huevos
Larvas
Quiste de los parásitos.
RECOLECCION DE LAS MUESTRAS
El paciente colocará la primera deposición sin mezclar con la orina en un recipiente de
vidrio de boca ancha limpia y seca, rotulará su nombre y será remitido inmediatamente al
laboratorio cerrándole herméticamente, no debe utilizar recipientes porosos; ya será de
papel o de cartón.
Cuando se quiere investigar protozoarios en su forma vegetativa se requiere muestra
fresca. Las muestras formadas son mejores para encontrar quiste, en cambio las líquidas
9.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
9.6 Cuestionario
1. ¿En qué consiste la Técnica de Graham?
2. ¿Cuáles son las condiciones para la toma de muestra de heces para un paciente
que se sospecha parasitosis?
3. ¿Desde el punto de vista patológico como se adquiere una tricuriasis?
4. ¿Cuál es el fundamento del Método del jarabe fenolado?
5. Dibuje los quistes y huevos de los parásitos más encontrados de nuestro medio.
10.2 Competencias
1. Utiliza métodos bioquímicos para la determinación de la glucosa en sangre
2. Interpreta los resultados y correlacionarlos con otras determinaciones
solicitados en análisis clínicos
10.4 Procedimiento
METODO ENZIMÁTICO COLORIMÉTRICO:
Preparar 3 tubos y agregar en ellos:
BLANCO STANDARD MUESTRA
(mL) (mL) (mL)
10.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
10.6 Cuestionario
1. ¿En qué consiste la prueba de la tolerancia a la glucosa?
2. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de la hemoglobina glicosilada?
3. ¿Cuál es el fundamento del método enzimático para determinar glucosa en
sangre?
COLESTEROL TOTAL
10.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función lipídica en muestras de suero o
plasma utilizando las técnicas de laboratorio para su análisis, cumpliendo y
haciendo cumplir las normas de bioseguridad y ética.
2. Determina el colesterol por métodos espectrofotométricos conociendo sus
propiedades físico-químicas, a partir de una muestra de sangre (suero
sanguíneo)
Reactivos
1. REACTIVO ENZIMATICO:
2. Mantener en congelación hasta el momento de su reconstitución.
3. El reactivo, después de reconstruirse contiene:
4. 4- amino-antipirina 0.40 mmol/L, colesterol esterasa = 2,000 U/L, activadores,
estabilizadores y buffer.
5. STANDARD DE COLESTEROL
Contiene 200 mg/dL de colesterol en etilen glicol mono metileter y
surfactantes. Refrigerar (2-8°C).
10.4 Procedimiento
10.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
10.6 Cuestionario
1.¿Cómo explica Ud. las reacciones que ocurren en la determinación de colesterol
total por el método enzimático?
2.¿Qué precauciones se debe tener con respecto a la toma de muestra para la
determinación del colesterol?
3.¿Qué lipoproteínas transportan al colesterol?
4.¿Por qué es importante la determinación de colesterol en una persona de edad
avanzada?
5.Bioquimicamente como relaciona el colesterol con la glucosa.
10.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función lipídica en muestras de suero o
plasma utilizando las técnicas de laboratorio para su análisis, cumpliendo y
haciendo cumplir las normas de bioseguridad y ética.
2. Determina los triglicéridos por métodos espectrofotométricos conociendo sus
propiedades físico-químicas, a partir de una muestra de sangre (suero sanguíneo).
Reactivos
Mantener en congelación hasta el momento de su reconstitución.
STANDARD DE TRIGLICERIDOS
Solución a base de glicerol, equivalente a 200 mg/dL de trioleína. Contiene
perseverantes y estabilizadores. Conservar en refrigeración.
10.4 Procedimiento
PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS EN SUERO
En caso que se requiera obtener un volumen final mayor de 1.0 mL, se puede agregar
inmediatamente antes de realizar la lectura, hasta 1.2 mL de agua destilada en todos
los tubos incluyendo el blanco.
La coloración rosa del reactivo reconstituido es normal. Reactivos con blancos hasta
0.4 unidades de absorbancia puede ser empleados.
Si se desea que el blanco del reactivo reconstituido imprescindible mantenerlo bajo
refrigeración (2-8°C) el mayor tiempo posible.
Debido a que con el transcurrir del tiempo el reactivo reconstituido va oscureciéndose
ligeramente, es importante que siempre se realicen las lecturas contra el blanco de
reactivo.
El método es lineal hasta 700 mg/dL.
Valores normales:
Menores de 30 años 10 – 140 mg/dL
Entre 30 y 39 años 10 – 150 mg/dL
Entre 40 y 49 años 10 - 160 mg/dL
De 50 años a más10 – 190 mg/dL
10.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
10.6 Cuestionario
1. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de los triglicéridos?
2. ¿Cómo trabajaría Ud. Un suero lipémico, para la determinaciones bioquímicas?
3. ¿Qué recomendaciones daría Ud. al paciente para obtener una buena muestra de
sangre para determinar triglicéridos?
4. ¿Cuál es el fundamento de la determinación de triglicéridos?
PRACTICA No 11 ENZIMAS
11.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas enzimáticas en muestras de suero o plasma.
2. Utiliza las técnicas de laboratorio para su determinación, cumpliendo y haciendo
cumplir las normas de bioseguridad y ética
11.4 Procedimiento
TUBO BLANCO STANDARD MUESTRA
Reactivo No.1 mL 0,5 0,5 0,5
Preincubar 3 minutos a 37 oC
Agua destilada 0.05 -- --
Solución Standard -- 0,05 --
Muestra mL -- -- 0,05
Mezclar e incubar EXACTAMENTE 10 minutos a 37º C
Reactivo No 2 (Revelador) mL 2,5 2,5 2,5
Mezclar y leer las absorbancias a 590 nm llevando a cero el instrumento con el blanco reactivo.
Cálculos:
• ACTIVIDAD PAL (UI/L) = FACTOR X Absorbancia muestra
• Factor = 100
Abs standard
Valores referenciales:
• Suero: 30 a 125 UI/L a 37º C
11.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
11.6 Cuestionario
1. ¿Explique qué otras pruebas bioquímicas corroboran los resultados elevados de
fosfatasas acidas?
2. ¿Qué precauciones debemos tener con la muestra sanguínea (suero) cuando
realizamos las pruebas de fosfatasa tanto alcalina como ácida?
3. ¿Qué otras pruebas de laboratorio corroboran una amilasa aumentada?
4. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de lactato deshidrogenasa?
5. Indique las pruebas enzimáticos que se utilizan en un infarto al miocardio.
A. DETERMINACION DE BILIRRUBINAS:
12.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función hepática en muestras de suero o
plasma
2. Utiliza las técnicas de laboratorio como la espectrofotometría para su
determinación, cumpliendo y haciendo cumplir las normas de bioseguridad y
ética.
12.4 Procedimiento
BILIRRUBINAS TOTALES:
Reactivo de 1 1 1
trabajo (mL)
Agua destilada --- ---- 0,10
(mL)
Reactivo de trabajo 1 1
(mL)
Agua destilada (mL) ------------ 0,10
12.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
12.6 Cuestionario
12.2 Competencias
1.Determina e interpreta las pruebas de función hepática en muestras de suero o
plasma.
2.Utiliza las técnicas de laboratorio como la espectrofotometría para su
determinación de las proteínas totales y fraccionadas., cumpliendo y haciendo
cumplir las normas de bioseguridad y ética.
12.4 Procedimiento
METODO DE BIURET PARA DETERMINACION DE PROTEINAS
TOTALES
a. Fundamento. Las proteínas debido a sus enlaces peptídico reaccionan, en
medio alcalino con el ión cúprico del Reactivo de Biuret, estabilizado
con el tartrato, formando un complejo de color violeta. La intensidad del
color es proporcional a la concentración de proteicas existentes en el suero, la
absorbancia se mide a longitud de onda de 555 nm.
b. Reactivos:
1. Reactivo de Biuret para proteínas.
2. Standard de proteínas 3.4 g/dL
c. Equipos: 1. Espectrofotocolorimetro.
12.6 Cuestionario
1. ¿Qué métodos existen para determinar proteínas totales y fraccionadas?
2. ¿Utilizar un standard de proteínas con una concentración por debajo de las cifras
normales, lleva a resultados poco exactos?
3. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de las proteínas totales?
4. ¿En qué casos se solicitan determinación de proteínas en orina?
12.2 Competencia
1. Conoce el método de laboratorio para determinar de albúminas
2. Explica el procedimiento para la determinación de albúminas
12.4 Procedimiento
1. Disponer en una gradilla tubos de prueba y proceder como sigue:
12.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
12.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento para la determinación de las proteínas totales?
2. ¿Cómo se determinan las globulinas en el laboratorio?
3. ¿Cuál es el fundamento para la determinación de las albuminas?
13.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función renal en muestras de suero o
plasma Y orina utilizando las técnicas de laboratorio para su análisis,
cumpliendo y haciendo cumplir las normas de bioseguridad y ética.
2. Permite al estudiante la oportunidad de aplicar sus conocimientos y practicar
con muestras clínicas la monitorización de algunos fármacos nefrotóxicos.
13.4 Procedimiento
DETERMINACIÓN DE UREA SALICILATO (UREASA)
VALTEK
Reactivos:
Reactivo No 1: Ácido salicílico y nitroprusiato.
Reactivo No 2: Hipoclorito e Hidróxido de Sodio.
F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007
Reactivo No 3: Ureasa
13.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
13.6 Cuestionario
B. DETERMINACION DE CREATININA
13.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función renal en muestras de suero o
plasma Y orina utilizando las técnicas de laboratorio para su determinación,
cumpliendo y haciendo cumplir las normas de bioseguridad y ética.
2. Permite al estudiante la oportunidad de aplicar sus conocimientos y practicar
con muestras clínicas la monitorización de algunos fármacos nefrotóxicos.
a) Material biológico :
1. Orina de 5 o 24 horas según indicación médica
2. Suero obtenido estando el paciente en ayunas.
DETERMINACIÓN DE CREATININA
(Jaffé punto final) Wiener
Desproteinizado (mL) -- -- 3
R A (mL) 2 2
Valores normales:
13.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
13.6 Cuestionario
1. ¿Qué tipo de muestras biológicas se requieren para la depuración de creatinina?
2. ¿Por qué la orina se diluye previamente al 1/10 con agua destilada ?
3. ¿Cuál es la interpretación clínica y los valores normales de la depuración de
cratinina?
4. ¿Cuál es la interpretación clínica del incremento de la creatinina?
ELECTROLITOS: CALCIO
A. CALCIO
13.2 Competencia
1. Determina e interpreta las pruebas por espectrofotometría de los principales
electrolitos en muestras de suero, plasma y orina.
2. Analiza e interpreta los resultados relacionando con las diversas enfermedades
que se presentan cuando hay disminución o incrementos.
13.4 Procedimiento
Reactivos:
Reactivo 1: Buffer alcalino
Reactivo 2: Cresolftaleina.
Std.
MUESTRA : suero o plasma heparinizado.
Reactivo de trabajo:
Mezclar 1 mL de Buffer alcalino con 1 gota (50uL) de Reactivo CFC.
MUESTRA -- -- 0,01 mL
REACTIVO DE 1 mL 1 mL 1 mL
TRABAJO
13.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
13.6 Cuestionario
PRACTICA Nº 14 HORMONAS
14.2 Competencias
Materiales:
Pocillos sensibilizados: 48 pocillos separables individualmente con anticuerpo policlonal
anti-hCG adsorbidos en su superficie.
Enzima-Conjugado: un frasco gotero con 2.5 ml de anticuerpo monoclonal anti-βhCG
conjugado con peroxidasa. El reactivo posee un colorante rosado en su composición para
facilitar la visualización de su agregado en cada pocillo.
Reactivo A: un frasco gotero conteniendo 4 ml de solución de peróxido de hidrógeno.
Reactivo B: un frasco gotero conteniendo 4 ml de solución de tetrametilbenzidina en
buffer fosfatos-citrato 50 mmol/l, pH = 5.0
Control Negativo: un frasco gotero conteniendo 1 ml de una solución proteica de,
aproximadamente, 25 mUI/ml hCG
Control Positivo: un frasco gotero conteniendo 1 ml de una solución proteica de reacción
negativa para hCG Solución lavadora: 2 frascos goteros conteniendo, cada uno, 60 ml de
solución salina tamponada a pH = 7.4 Accesorios: Un soporte para los pocillos.
PROCEDIMIENTO:
Pocillos sensibilizados 1 2 3
14.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
14.6 Cuestionario
1. ¿Qué métodos conoce Ud. para la determinación de HCG?
2. ¿Qué otras patologías se puede diagnosticar con la determinación de la HCG?
3. ¿Cómo es el proceso para la determinación de HCG cuantitativo?.
4. ¿Cuál es el fundamento de la determinación de HCG por el método indirecto?
5. ¿Cuál es el fundamento de la determinación de HCG por el método de ELISA?