Departamento de Bioanálisis Clínico

Guía de laboratorio # 2

Asignatura: Bioquímica Clínica I

Tema: Determinación de proteínas y glucosa en líquidos corporales.
Objetivos:
1. Aplicar los métodos y técnicas para la cuantificación de las proteínas de interés clínico y
glucosa.
2. Interpretar los resultados de las proteínas y glucosa con base a los valores de referencia y
del método utilizado.
3. Establecer la correlación de los resultados de las proteínas y de la glucosa con otras pruebas
diagnósticas como parte del control de calidad.
4. Sugerir posibles condiciones clínicas relacionadas con los resultados, dados los valores del
paciente para proteínas y para glucosa.

I. INTRODUCCIÓN
Para la síntesis de las proteínas séricas se requiere un hígado sano en plenas funciones,
excepto en el caso de las gamma globulinas. El hígado tiene la capacidad de duplicar la
producción y salida de proteínas durante las enfermedades asociadas con pérdida de
proteínas. En consecuencia, no debe sorprender que las mediciones de proteínas totales
no se alteren sino hasta que haya ocurrido una disminución extensiva de la función
hepática.

La albúmina se disminuye en la enfermedad hepática crónica y generalmente se

acompaña por un incremento en las globulinas beta y gamma, debido a la producción de
IgG e IgM en la hepatitis crónica activa y de la IgM e IgA en la cirrosis biliar o alcohólica
respectivamente. Se debe hacer énfasis en que estas inmunoglobulinas no son producidas
en el hígado sino por las células plasmáticas del sistema reticuloendotelial. Se puede
facilitar la identificación de estas subclases de gamma globulinas mediante la
inmunoelectroforesis. Sin embargo, una disminución en la albúmina sérica no es
específica para la enfermedad hepática, puesto que la albúmina también disminuye en la
malabsorción, la desnutrición, la enfermedad renal, el alcoholismo y las enfermedades
malignas.

La concentración de glucosa en el LCR es un reflejo de la concentración en suero, siendo

aproximadamente un 50-75% de la concentración en suero. Un descenso en los niveles
de glucosa puede aparecer en meningitis bacterianas, hemorragia subaracnoidea y
procesos neoplásicos.

II. DESARROLLO

• ACTIVIDADES
1. Formar grupos de trabajo ya establecidos.
2. Organizar los materiales a utilizar (gradillas, tubos, pipetas, sueros controles).
3. Encender el espectrofotómetro.

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4. Llevar a cabo todas las medidas de bioseguridad establecidas para un laboratorio
clínico.
5. Realizar las determinaciones en orden y con disciplina siguiendo exactamente los
procedimientos para cada una, realizando una corrida analítica con una muestra.
6. Al finalizar, dejar el área de trabajo limpia y en orden.

• DETERMINACIONES

➢ Proteínas en Orina y LCR

Las clases de líquidos corporales que se estudian por su contenido de proteínas han
aumentado. Esto es en parte un resultado de la mayor sensibilidad de los métodos de prueba
disponibles en la actualidad.

La mayor parte de las proteínas halladas en la orina provienen de la sangre; sin embargo, las
proteínas urinarias también se originan del riñón y el tracto urinario, y de fuentes extrañas
con la vagina y la próstata. Las proteínas en la sangre aparecen en la orina porque pasan por
el glomérulo renal y no las reabsorben los túbulos renales. Las pruebas cualitativas para
proteinuria se llevan a cabo por lo regular con una tira de prueba de reactivo. Estos métodos
se basan en el cambio en la respuesta de un colorante indicador en presencia de proteína,
conocido como error de proteína de indicadores, donde una concentración de proteína de 6
mg/dl o mayor produce un cambio de color.

La mayor parte de los ensayos cuantitativos se llevan a cabo en muestras de 12 o 24 h. El

tiempo de 24 h toma en cuenta los cambios rítmicos circadianos en la excreción a ciertas
horas del día. El paciente debe evacuar, vaciar por completo la vejiga y desechar esta orina.
La orina se colecta desde ese momento durante las 24 h siguientes. Al final del período de
24 h, la vejiga se vacía por completo y esa orina se incluye en la muestra. Se mide con
precisión el volumen de la muestra programada y se registra. Los resultados se expresan por
lo general en términos del peso de proteína por 24 h calculando la cantidad de proteína
presente en el volumen total de orina colectada durante este tiempo.

El LCR se forma en el plexo coroideo de los ventrículos del cerebro por ultrafiltración de
sangre plasmática. La medición de proteína es una prueba que se requiere en el LCR, además
de la concentración de glucosa y el recuento diferencial, cultivo y sensibilidad. El intervalo
de referencia aceptado para pacientes entre 10 y 40 años de edad es 15 a 45 mg/dl de proteína
de LCR.

Principio del método

El método mide el desplazamiento del pico máximo de absorción de 460 a 600 nm del
complejo formado a pH ácido entre el rojo pirogalol-molibdato (RPM) y los grupos amino
básicos de las proteínas de la orina y del LCR. La intensidad del complejo coloreado formado
es proporcional a la concentración de proteína en la muestra.
pH 2,5
RPM + Proteína Orina/LCR Complejo RPM-Proteína
Preparación del reactivo
El reactivo de trabajo y el patrón están listos para su uso.

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Muestras
Orina recogida sin preservantes y LCR.

Muestras comúnmente empleadas: recogida de 24 h; nocturna (8 – 12 h); clínica o laboratorio

(1 – 2 h) y primera muestra matinal. Debido a la alta variación diurna e intraindividual
conviene ensayar tres muestras distintas.

Las muestras turbias deberán centrifugarse antes del ensayo.

Bilirrubina (< 5 mg/dl no interfiere), hemoglobina interfiere, otros medicamentos y

sustancias pueden interferir.

Los LCR contaminados por hematíes ocasionados por una punción lumbar traumática o por
una hemorragia intracerebral aumentan la concentración de proteína en unos 10 mg/l por
cada 1000 eritrocitos.

Procedimiento
1. Pipetear en tubos rotulados

Tubos Blanco Estándar Muestra

R1. 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml
Reactivo
Estándar ---- 20 µl
Muestra ---- ---- 20 µl

2. Mezclar e incubar los tubos 5 minutos a 37°C o 10 minutos a temperatura ambiente.

3. Leer la absorbancia de la muestra y el patrón a 600 nm frente al blanco de reactivo. El
color es estable 30 minutos protegido de la luz.
4. Cálculos

a) Orina muestras 24 h

A muestra x V x 2000 = mg/24 h proteínas V = litros de orina/24 h

A patrón 2000 = mg/l (patrón)

b) Orina muestras simples y LCR

A muestra x C patrón = mg/dl proteínas

A patrón

Nota: Para aumentar la sensibilidad en el rango normal analizar 50 µl de muestra y diluir el

patrón 1:4 (1 + 3) en solución salina, empleando la nueva concentración de 50 mg/dl para los
cálculos.

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Características de la prueba
El límite de detección de la prueba es de 8 mg/dl, la linealidad es hasta 400 mg/dl. Muestras
con concentraciones de proteínas superiores a 400 mg/dl deben diluirse 1:2 con solución
salina y repetir el ensayo. Multiplicar el resultado por 2.

Valores de referencia

a) Orina
Adultos:
Muestras 24 h: < 150 mg/24 h
Muestras simples: < 25 mg/dl
b) LCR
Adultos: < 45 mg/dl
Niños: < 100 mg/dl
El límite superior del valor normal para los neonatos es de 150 mg/dl (1.5 g/l) y tan alto
como de 400 mg/dl en los prematuros.

Control de calidad
El empleo de un calibrador para calcular los resultados permite obtener una exactitud
independiente del sistema o instrumento empleado.

Para un control de calidad adecuado se incluirán en cada serie controles de orina valorados
que se tratarán como muestras problemas.

➢ Otros líquidos corporales

Además del suero, el plasma, la orina y el LCR, el laboratorio de química analítica a menudo
analiza otros líquidos corporales, como el líquido amniótico, sudor, líquido sinovial y
líquidos serosos (pleural, pericárdico y peritoneal o ascítico).

La determinación de las proteínas del líquido sinovial tiene una sensibilidad del 52 % y una
especificidad del 56 % en los trastornos inflamatorios.

Valores de referencia
Proteínas: 11-22 g/L
Agregar fluoruro de sodio como anticoagulante al LS.

La concentración de proteínas totales en el líquido ascítico no es siempre un indicador fiable,

y la comparación entre la albúmina sérica y la ascítica puede ser mejor para el diagnóstico.

El gradiente entre albúmina sérica y ascítica (GASA) se define como la concentración de

albúmina en suero menos la concentración de albúmina en el líquido ascítico. El GASA se
correlaciona directamente con la presión portal. Los pacientes con GASA elevado (definido
como > 11 g/1) tienen hipertensión portal, mientras que aquellos con GASA bajo (< 11 g/l)
no la presentan.

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Valores de referencia
Proteínas: < 2,5 g/dl
Albúmina: < 18 g/dl

III. BIBLIOGRAFÍA

Bishop M. Química Clínica. Principios, procedimientos y correlaciones. Quinta edición. Ed,

Mc Graw Hill.
Gaw A., Murphy M., Srivastava R., Cowan R., & O’ Reilly D. Bioquímica Clínica. Texto y
atlas en color. Quinta edición. Ed, Elsevier.
Inserto Cromatest de proteínas en orina y LCR.

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