PRACTICA No 5

METABOLISMO DE LIPIDOS: HIGADO GRASO EXPERIMENTAL

RELACION DE EXPERIMENTOS

1. Producción de un hígado graso en rata

2. Determinación de ácidos grasos en el hígado de una:
- Rata control
- Rata a la cual se ha administrado Etionina
- Rata a la cual se ha administrado Etionina + Metionina

INTRODUCCION

El rol que cumple el hígado en el metabolismo lipídico es sumamente importante. En

este sentido podemos decir que los siguientes procesos se realizan en la:
- Oxidación de los ácidos grasos
- Síntesis de ácidos grasos y colesterol
- Síntesis de lipoproteinas plasmáticas :Lipoproteinas de muy baja densidad
(VLDL); lipoproteinas de alta densidad (HDL)
- Síntesis de ácidos biliares
- Se encarga casi exclusivamente de la síntesis de cuerpos cetónicos

En ocasiones puede ocurrir alteraciones de estos procesos en el hígado, lo que

determina un anormal aumento en su contenido graso, esta situación se denomina
hígado graso o esteatosis hepática. Esta entidad merece una especial atención del
médico ya que resulta ser con frecuencia el antesala de la cirrosis hepática.

Desde un punto de vista general podemos considerar hasta cuatro situaciones

importantes que pueden ocasionar hígado graso.

- Aumento en la cantidad de ácidos grasos que llegan al hígado; sea

procedentes de la alimentación o de otros tejidos
- Menor oxidación de los ácidos grasos en el hígado
- Mayor síntesis de ácidos grasos en el hígado
- Disminución en la salida lipídica del hígado generalmente debido a un
defecto en la síntesis de lipoproteinas plasmáticas.
 ATP PPi

METIONINA METIONIL - AMP

Metionil-tRNA Sinteasa
tRNA
ATP ATP Metionina Adenosil
Transferasa AMP
PPi + Pi Estrógeno

S-Adenosilmetionina Met-tRNA

Fosfatidil
etanolamina
Fosfatidil
colina Síntesis Proteica

S-adenosilhomocisteina
LIPOPROTEINAS

ATP PPi

ETIONINA ETIONIL - AMP

Metionil-tRNA Sinteasa
ATP tRNA
ATP Metionina Adenosil
Transferasa
PPi + Pi Estrógeno

S-Adenosiletionina
Fosfatidil
etanolamina
Fosfatidil
etilcolina Síntesis Proteica

S-adenosilhomocisteina
LIPOPROTEINAS

FIGURA Nº 8.1. Rol de la Metionina y efecto de Etionina sobre el

metabolismo

Arriba: Mecanismo por el cual la metionina participa en la síntesis de lipoproteinas.

Abajo: Como la etionina afecta la síntesis de lipoproteinas.

Nota: Las líneas discontinuas indican que el evento no se está realizando.

 Experimentalmente se puede inducir el hígado graso mediante la administración de
diversos agentes, como el tetracloruro de carbono, puromicina, ácido orótico, etionina,
etc. En esta práctica estudiaremos el hígado graso inducido por la etionina, tomando
como parámetro el contenido de ácidos grasos del hígado, ya que a pesar que el hígado
graso puede ser inducid de diversas formas, es común denominador el aumento de
triglicéridos

Etionina es un compuesto estructuralmente relacionado al aminoácido esencial

metionina y por lo tanto tiene un comportamiento de antagonista competitivo, en la
síntesis de proteínas y de fosfatidil colina, de esta manera bloquea la síntesis de
lipoproteinas y finalmente la salida de lípidos del hígado.

COOH COOH

CH – CH2 – CH2 – S – CH3 CH – CH2 – CH2 – S – CH2 – CH3

NH2 NH2
Metionina Etionina

Objetivos:

1.- Conocer el mecanismo bioquímico por el cual etionina induce esteatosis hepática
2.- Conocer el fundamento de la determinación de los ácidos grasos en el hígado
3.- Estudiar el efecto de la metionina sobre el hígado graso producido por metionina
4.- Indicar algunas alternativas de tratamiento en pacientes que sufren esteatosis
hepática

Metodología.
El día anterior a la práctica se inyecta vía intraperitoneal a un lote de tres ratas
hembras, las siguientes soluciones:

1.- Rata control: Solución salina isotónica 3 ml. Inyectar la misma cantidad a las
2:30, 5 horas y 7 horas después de la primera inyección.
2.- Rata tratada con Etionina: Se inyectará intraperitonealmente 3 ml de una
solución de DL-Etionina (16,7 mg/ml). Inyectar la misma cantidad alas 2,5 horas; 5
horas y 7 horas después de la primera inyección.
3.- Rata tratada con Etionina + Metionina: Recibe el mismo tratamiento que la rata
con etionina, pero además se le inyecta 3 ml de L-metionina ( 20 mg/ml ) una hora
 antes de la primera inyección de etionina y una hora después de cada inyección de
etionina.

En este experimento se usarán ratas hembras, debido a que el incremento de

grasa hepática es mucho más pronunciada en hembras que en machos.

DETERMINACION DE LOS ACIDOS GRASOS

- Transcurridas 24 horas de iniciado el tratamiento de los animales se les sacrifica y

se les retira rápidamente del hígado un trozo de 2,5 g, el que se fragmenta con la
ayuda de tijeras y se deposita en un Erlenmeyer de 250 ml.
- Se le añade luego 10 ml de hidróxido de potasio al 33% y 40 ml de etanol al 96%
con alcohol isoamílico al 0,4%.
- Se calienta la preparación en baño maría hirviente durante 20 minutos, teniendo
cuidado que no se proyecte el contenido.
- Añadir 17 ml de HCl al 25%, mezclar y dejar en reposo algunos minutos
- Añadir luego con pipeta volumétrica 25 ml de éter de petróleo.
- Tapar cuidadosamente el recipiente y agitar fuertemente durante un minuto. Dejar
en reposo por 10 minutos para conseguir una adecuada separación de las fases éter
de petróleo y etanol-ácido. Para esta última etapa se puede utilizar una probeta en
lugar del Erlenmeyer, con la ventaja de mirar mejor la separación de las dos fases.
- Retirar 5 ml de la capa etérea (superior), y colocarlos en un Erlenmeyer y añadir 1
ml de solución de etanol-alcohol isoamílico y dos gotas de azul de timol.
- Finalmente titular con NaOH 0.1 N hasta obtener un color azul verdoso que debe
permanecer estable por lo menos 3 minutos.

Para efecto de los cálculos asuma que el PM promedio de los ácidos grasos que se están
titulando es de 284.

Complete la siguiente tabla:

Características del hígado

Peso total Color Consistencia
Rata control 6.8 gr
Rata con etionina 7.3 gr
Rata con Etionina + Metionina 7.2 gr

Anote el contenido de ácidos grasos en miliequivalentes en el volumen de titulación y

en miligramos por gramo de tejido hepático húmedo.
 Contenido de ácidos grasos
NaOH 0,1 N mEq / 5 ml mEq / 25 ml mg de A.G.
ml gastados por gramo
de hígado
Rata Control 1.3

Rata con 3.6

etionina (E)
Rata con E + 2.0
Metionina

INTERROGANTES

1.- Haga una interpretación adecuada de los esquemas mostrados

2.- Porque la administración de adenina revierte en cierta forma los efectos de la

etionina

3.- Cite por lo menos cinco alteraciones bioquímicas que se producen en los animales
tratados con etionina

4.- Porqué la deficiencia de ácido pantoténico puede determinar hígado graso

5.- Qué conocimientos tiene, en relación al hígado graso inducido por etanol