KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC, KHOÁ 2018-2023

Tên đề tài: “Nghiên cứu phân lập và xây dựng quy trình định lượng một số
flavonoid trong quả Bưởi non trồng tại Bình Dương”
Giảng viên hướng dẫn: ThS. Nguyễn Thị Ánh Nguyệt
Sinh viên thực hiện: Nguyễn Kiều Quỳnh Trang
Mở đầu
Bưởi (Citrus maxima Burm. Merr) được trồng khắp các nước châu Á với nhiều công
dụng như hạ lipid máu, hạ đường huyết, bảo vệ gan… đã được chứng minh. Naringin
được biết đến là flavonoid chính có trong quả Bưởi, đặc biệt chiếm hàm lượng cao
trong quả Bưởi non, ngoài ra còn có các flavonoid khác. Để nâng cao năng suất trồng
Bưởi sẽ phải loại bỏ những quả Bưởi non vì thế Bưởi non là nguồn phụ phẩm dồi dào.
Chưa có nhiều tài liệu xây dựng quy trình định lượng các flavonoid trong quả Bưởi
non. Đề tài được thực hiện với mục tiêu phân lập các flavonoid và xây dựng quy trình
định lượng đồng thời 2 hợp chất chính trong Bưởi non là naringin và metilidin; ứng
dụng quy trình để định lượng một số giống Bưởi non trồng tại Bình Dương. Kết quả
thu được cung cấp thông tin hữu ích cho việc đánh giá chất lượng Bưởi non giữa các
độ tuổi và các giống được trồng tại Bình Dương.
Đối tượng và phương pháp nghiên cứu
Tinh chế chất chuẩn naringin bằng than hoạt sau khi lắc phân bố dichloromethan, sử
dụng sắc ký cột cổ điển và sắc ký lỏng điều chế hiệu năng cao phân lập chất chuẩn
melitidin từ phân đoạn n-butanol. Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng đồng
thời naringin và melitidin bằng phương pháp HPLC-PDA. Ứng dụng quy trình định
lượng đã xây dựng để xác định hàm lượng naringin và melitidin trong các giống quả
Bưởi non thu hái tại tỉnh Bình Dương.
Kết quả và bàn luận
Phân lập được 4 hợp chất tinh khiết, trong đó có 2 chất xác định được cấu trúc bằng
phương pháp phổ NMR và so sánh dữ liệu tham khảo, đó là naringin (CM1) và
melitidin (CM2). Quy trình định lượng đồng thời CM1 và CM2 sử dụng hệ thống máy
sắc ký lỏng siêu hiệu năng Acquity UPLC (Waters), phần mềm EMPOWER 3, đầu dò
PDA, cột sắc ký GL Sciences InertSustain C 18 (250 mm × 4,6 mm; 5 µm). Pha động:
Acetonitril (A) – dung dịch acid acetic 0,1% (C) với tốc độ dòng: 1 ml/phút và thể tích
tiêm mẫu 10 µL.Quy trình định lượng đã được đánh giá theo hướng dẫn của ICH [TL] về
tính tương thích hệ thống, tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính của naringin (1000 ppm –
50 ppm) có R2 = 0,9999 và R2 = 0,9998 đối với melitidin (500 ppm – 25 ppm) và độ
nhạy cao với LOD và LOQ của naringin là 0,05 𝜇g/ml và 0,15 𝜇g/ml; melitidin là 0,03
𝜇g/ml và 0,10 𝜇g/ml. Quy trình đạt độ lặp lại và độ chính xác trung gian đạt RSD dưới
2,0 %; độ đúng của naringin từ 102,03 - 103,97 và melitinin từ 95,08 - 102,94%.
FINAL ASSAY FOR THE DEGREE OF BS PHARM, COURSE 2018-2023
Title: “Research on isolating and developing a quantitative process for some
flavonoids in young pomelo grown in Binh Duong”
Instructor: MA. Nguyen Thi Anh Nguyet
Student: Nguyen Kieu Quynh Trang
Introduction
Pomelo (Citrus maxima Burm. Merr) is grown throughout Asia with many uses such as
hypolipidemia, hypoglycemia, and proven hepatoprotection. Naringin is known to be
the main flavonoid present in pomelo, which is especially high in young pomelo, in
addition to other flavonoids. To improve the yield of growing pomelo will have to
remove the young pomelo so young pomelo is a source of abundant by-products. There
are not many documents to build the process of quantifying flavonoids in young
Pomelo. The topic is implemented with the goal of isolating flavonoids and
constructing a simultaneous quantitative process 2 main compounds in young pomelo
are naringin and metilidin; applying the process to quantify some varieties of young
pomelo grown in Binh Duong. The resulting results provide useful information for
assessing the quality of young pomelo between the ages and varieties grown in Binh
Duong.
Materials and methods
Purification of the naringin standard with activated carbon after the shaking
dichloromethane distribution, using classical column chromatography and high-
performance preparation liquid chromatography isolates the melitidine standard from
the n-butanol fraction. Develop and validate a procedure for simultaneous
quantification of naringin and melitidine by HPLC-PDA method. Applying the
developed quantitative procedure to determine the naringin and melitidin content in
young pomelo varieties collected in Binh Duong province.
Results and discussion
Isolated 4 pure compounds, then by NMR spectroscopy and compared with reference
data that can identify naringin (CM1) and melitidine (CM2). The simultaneously
quantificative of CM1 and CM2 by UPLC-PDA system with GL Sciences InertSustain
C18 chromatographic column (250 mm × 4.6 mm; 5 µm). Mobile phase: Acetonitrile
(A) – 0.1% acetic acid solution (C); flow rate: 1 ml/min and injection volume 10 µL.
The developed method was validated according to the ICH guidelines including the
system suitability, linearity range (R2 = 0,999 for naringin (1000 ppm – 50 ppm) and
R2 = 0,9991 for melitidine (500 ppm – 25 ppm));LOD and LOQ for naringin (0,05 and
0,15 𝜇g/ml); melitidine (0,03 and 0,10 𝜇g/ml). The repeatability and intermediate
precision of this method with RSD below 2,0 %; recovery range for naringin from
102.03 to 103.97% and melitidine from 95.08 to 102.94%.