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생명과학 이메일: info@genaxxon.com

PCR 마스터믹스(2X)
Taq DNA 중합효소를 이용한

고양이# M3014.0100 M3014.0500 캡의 색상 코드

요소
표준 PCR을 위한 Premix 2‑time PCR 2x 1.25mL 10x 1.25mL 녹색
Mastermix입니다. 200x 25μL PCR 반응 1000x 25μL PCR 반응

25mM MgCl2 용액 1mL 1mL 녹색

제품 설명

Genaxxon bioscience PCR Mastermix(2X)는 Taq DNA 중합효소, PCR 완충액, MgCl2의 2배 농축된 즉시 사용 가능한 PCR 혼합물입니다.
그리고 dNTP. 2X Mix에는 DNA template와 Primer를 제외한 PCR에 필요한 모든 구성요소가 포함되어 있습니다. Genaxxon PCR Mastermix에는 강력한 Genaxxon 생명과학 Taq DNA 중합효소가 포함
될 뿐만 아니라 반복적인 동결/해동 단계로 보관하는 동안과 순환 반응 중에 중합효소와 뉴클레오티드를 안정화하는 성분의 특수 혼합물도 포함되어 있습니다. 혼합물은 높은 처리량 적용에 효과적인 것으로 나타났습
니다.

제품 사양

집중: 2회 즉시 사용 가능한 PCR 마스터 믹스

기질 유사물: dNTP, ddNTP, 형광 dNTP/ddNTP
연장율: 2‑4kb/분 72°C에서

5'‑3' 엑소뉴클레아제 활성: 예

A의 추가 추가: 예

3'‑5' 엑소뉴클레아제 활성: 아니요

뉴클레아제 오염: 아니요

프로테아제 오염: 아니요

RNase 오염: 아니요

자체 프라이밍 활동: 아니요

단위 정의

Genaxxon bioscience PCR Mastermix(2X)에 사용되는 Taq DNA Polymerase E 1단위는 표준 분석 조건 하에서 72°C에서 30분 내에 10nmol의 dNTP를 산불용성 분획에 통합하는 효소의 양
으로 정의됩니다.

품질 관리

증폭 효율: 증폭 효율성은 병렬 증폭 반응 및 추가로 경쟁사에 대해 테스트됩니다.

제품.
PCR 재현성: PCR 재현성은 병렬 증폭 반응에서 테스트됩니다.
엑소뉴클레아제 활성: 선형화된 DNA를 PCR Mastermix(2X)와 함께 배양합니다.
엔도뉴클레아제 활성: 플라스미드 DNA를 PCR Mastermix(2X)와 함께 배양합니다.
RNase 활동: RNA를 PCR Mastermix(2X)와 함께 배양합니다.
프로테아제 활성: PCR Mastermix(2X)를 저장 완충액에서 배양합니다.
자체 프라이밍 활동: PCR은 PCR 마스터믹스(2X)와 인간 게놈 DNA를 사용하여 프라이머 없이 표준 조건에서 수행됩니다.

‑ 1‑

GENAXXON bioscience GmbH 우리는 귀하의 성공을 목표로 합니다.

Söflinger Str. 70 • 89077 Ulm • 전무이사: Dr. 노르베르트 트뢴들
지방 법원: 89014 Ulm • HRB 641623 www.genaxxon.com
VAT ID 번호 DE 220 603 767 • 독일 세금 번호. 88002/33658
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애플리케이션
표준 PCR
낮은 타겟 카피 수 검출
2단계 RT‑PCR

안정
Genaxxon bioscience PCR Mastermix(2X)는 젖은 얼음 위에 배송되지만 실온(+15°C ~ +25°C)에서 최소 1주 동안 완전한 활성을 유지합니다.

완충액과 시약을 포함한 Genaxxon bioscience PCR Mastermix(2X)는 수령 즉시 ‑20°C에서 보관해야 합니다.
이러한 조건에서 보관하고 올바르게 취급하면 성능 저하 없이 최소한 만료일(튜브 라벨 참조)까지 이러한 제품을 보관할 수 있습니다. Genaxxon bioscience PCR Mastermix(2X)
는 +2°C~+8°C에서 최대 8주까지 보관할 수 있습니다.

제품 사용 제한

PCR Mastermix(2X)는 연구 목적으로만 개발, 설계 및 판매됩니다. 미국 식품의약국(FDA)이나 사용 국가의 적절한 규제 당국이 해당 목적에 대해 명시적으로 승인하지 않는 한 인간, 진단
또는 약물 목적으로 사용하거나 인간에게 투여할 수 없습니다. 본 설명서에 설명된 많은 물질을 취급할 때에는 모든 적절한 주의와 주의를 기울여야 합니다.

안전 정보
화학 물질로 작업할 때는 항상 적합한 실험실 가운, 일회용 장갑 및 보호용 고글을 착용하십시오. 자세한 내용은 해당 MSDS(물질안전보건자료)를 참조하세요. 이 내용은 PDF 파일로
온라인으로 제공되거나 요청 시(info@genaxxon.com) 제공됩니다.

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PCR 프로토콜 부분

PCR Mastermix(2X)를 사용한 프로토콜

이 프로토콜은 PCR 증폭을 위한 지침 역할을 합니다. 인큐베이션 시간 등 최적의 반응 조건,

온도, 주형 DNA의 양은 다양할 수 있으므로 개별적으로 결정해야 합니다.

시작하기 전에 중요한 참고 사항

• PCR Mastermix(2X)는 1.5mM MgCl2의 최종 농도를 제공하여 대부분의 경우 만족스러운 결과를 제공합니다.
사례.

• 모든 반응 혼합물을 DNA 준비 또는 PCR 산물 분석에 사용되는 공간과 별도의 공간에 설치하십시오.

• 교차 오염을 최소화하려면 소수성 필터가 포함된 일회용 팁을 사용하십시오.

절차

1. 프라이머 용액 해동
완전히 해동하신 후 얼음 위에 보관하시고, 사용 전 잘 섞어주세요.

선택 사항: 멸균된 비디스트 물을 사용하여 적절한 농도의 프라이머 믹스를 준비합니다. 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 여러 증폭 반응을 수행해야 하는 경우 이 방법을 사
용하는 것이 좋습니다. 희석된 프라이머 혼합물과 4단계에서 첨가된 주형 DNA의 최종 부피는 반응당 25μL를 초과해서는 안 됩니다.

2. PCR Mastermix(2X)를 RT 또는 얼음 위에서 해동합니다.

완전히 해동한 후 용액을 얼음 위에 보관하십시오. 이를 방지하려면 사용하기 전에 PCR Mastermix(2X)를 잘 혼합하는 것이 매우 중요합니다.
소금 농도의 지역적 차이. Genaxxon bioscience PCR Mastermix(2X)는 2X 농축액으로 제공됩니다(즉, 최종 용량이 25μL인 PCR 반응에는 12.5μL 용량의 PCR
Mastermix(2X)가 필요합니다). 50μL보다 작은 용량의 경우 PCR 마스터믹스(2X)와 희석된 프라이머 믹스, 템플릿 DNA 및 물의 비율을 1:1로 유지해야 합니다. 모든 실험에는
음성 대조군(주형 DNA가 없는 PCR)이 포함되어야 합니다. PCR 튜브를 얼음 위에 보관하는 것이 좋습니다.

그들은 열 순환기에 배치됩니다.

3. 희석된 프라이머 믹스의 적절한 양을 PCR 마스터믹스(2X)가 들어 있는 PCR 튜브에 분배합니다.

4. 개별 PCR 튜브에 템플릿 DNA(<1μg/반응)를 추가합니다 .

RT‑PCR의 경우 역전사효소 반응에서 분취량을 추가합니다. 추가되는 부피는 최종 PCR 부피의 10%를 초과해서는 안 됩니다.

표 1: PCR Mastermix(2X)를 사용한 PCR 반응 구성 요소 (25μL PCR 반응)

구성요소 수량

PCR 마스터믹스 12.5μL

희석된 프라이머 믹스
처음 1: 가변 용량: 0.1 ‑ 0.25μM(5 ‑ 12 pmol 절대값)
처음 2개: 가변 용량: 0.1 ‑ 0.25μM(5 ‑ 12 pmol 절대값)
템플릿 DNA 가변 용량: < 5ng 플라스미드 DNA
가변 용량: < 250ng 게놈 DNA
멸균, 증류수 최대 25μL

5. 뚜껑이 가열된 써멀사이클러를 사용할 때는 미네랄 오일을 사용하지 마십시오. 6단계로 바로 진행하세요. 그렇지 않으면 다음과 같이 오버레이하세요.
미네랄 오일 약 50μL.

6. 제조업체의 지침에 따라 열순환기를 프로그래밍합니다 .

일반적인 PCR 사이클링 프로그램은 표 2에 요약되어 있습니다. 최대 수율과 특이성을 위해 온도와 사이클링 시간은 각각의 새로운 표적 또는 프라이머 쌍에 대해 최적화되어야 합
니다.

7. PCR 튜브를 열순환기에 넣고 프로그램을 시작합니다.

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표 2: PCR 조건 (열 순환기)

단계 시간 온도 코멘트

초기 변성: 3분 95°C

3단계 사이클링
변성: 0.5~1분 95°C
0.5~1분 50 – 68°C 프라이머의 Tm보다 약 5°C 낮습니다.
가열 냉각:
확대: 0.5~1분 72°C 1kb보다 긴 PCR 산물의 경우 약 1min./kb DNA의 연장
시간을 사용하세요.

사이클 수 25 – 35
최종 연장 10 분. 72°C

참고: 증폭 후 샘플은 밤새 +2°C ~ +8°C에서 보관할 수 있으며 장기간 보관할 경우 ‑20°C에서 보관할 수 있습니다.

표 3: 표준 PCR‑프라이머에 대한 권장 사항

길이: 18‑30개의 뉴클레오티드

GC 콘텐츠: 40‑60%
팀: 유사한 Tm 값을 갖는 프라이머 쌍을 디자인합니다.
최적의 어닐링 온도는 예상 Tm보다 높거나 낮을 수 있습니다. 시작점으로 Tm 값이 더 낮은 프라이머의 Tm보다 3°C~5°C 낮은 어닐링 온도를
사용합니다.
순서: 프라이머 쌍의 3' 말단에서 2개 이상의 염기의 상보성을 피하십시오.
3' 끝 부분에 3개 이상의 G 또는 C가 실행되지 않도록 하세요.
3'말단 T를 피하세요.

프라이머 내부와 프라이머 쌍 사이에 상보적인 서열을 피하십시오.

표 4: 일부 젤 추적 염료의 마이그레이션 차트

CAS 고양이 번호.

아가로스 젤에 염색 0.5%‑1.5% 2.0%‑3.0%
번호 제낙손

자일렌시아놀 10000bp ‑ 4000bp 750bp – 200bp 2650‑17‑1 M3312

크레졸 레드 2000bp ‑ 1000bp 200bp – 125bp 62625‑29‑0 M3371
브로모페놀블루 500bp ‑ 400bp 150bp – 50bp 115‑39‑9 M3092
오렌지G <100bp <20bp 1936‑15‑8 M3180
타르트라진 <20bp <20bp 1934‑21‑0

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