06-01 魚類細菌性病原

 養殖水產動物與陸上動物一樣，容易因微
生物感染而致病，特別是在集約式養殖環
境下。
 此一疾病問題為世界性問題，無論是海水
、半鹹水或淡水養殖都會發生。
 引起感染的病原生物包括寄生蟲、細菌、
黴菌、病毒等，其中大部份為二次感染，
僅少部份是絕對性感染。

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致病三要素
宿主

緊迫 次臨床
病
污染 病原體
水環境

個體 生病 死亡
企業經營 發病率 致死率
群飼
* 流行病學 死亡率 2
 魚類細菌性病原

目前至少已有 25 屬 (genus) 的細菌被証

實可以引起魚類疾病，所以細菌性魚病在
魚類死亡病例中亦佔有其相當的重要性。
絕大多數的病原菌是屬於機緣性病原
(facultative pathogen)
僅少數屬於絕對性病原 (strict pathogen)

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診斷上，時常會面臨所分離到的菌種與疾
病間的關聯性，增加許多判定上的困難
另外，各病原菌所產生的病變類似，所以
單憑症狀是無法確診
即使輔以實驗室診斷，仍需豐富經驗才可
達到滿意境界

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魚類全身性感染 (systemic infection) ，要
由分離細菌
純化細菌時 (purification bacteria) ，最好使
用營養性培養基 (nutritional media)
在鑑別培養基 (differential media) 上發育的
菌落，不能直接作生化鑑定
要領：
– 要曉得從那裡分離
– 要熟悉及利用微生物之一般特性
– 使用適當之方法 ( 培養基、溫度 ) 如厭氧
培養 ( 利用 cander jar)
– 越簡單越好
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The mechanism of identification
The first step in identification is to obtain
each organism
Pure culture
Isolation bacteria

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 Media

1. General media 營養性 ( 普通 ) 培養基

　 TSA 、 BHIA 、 BHIB 、 Blood Agar
2. Differential media 鑑別培養基
3. Specific Selective media 選擇培養基
　 Thiosulfate Citrate Bile salts Sucrose Agar
　　 (TCBS Agar)
　 MacConkey agar
　 Eosin Methylene Blue Agar
　 Rimler-Shotts media

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如 Bacteria 鑑定結果與現有分類不一
可能下列情況

1. 菌落不純
2. 染色錯誤 3 ％ KOH check
3. 試劑 (Reagent) 不好
4. 實驗方法不合適
5. Database 不足或環境細菌

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 Laboratory

A. Basic techniques of diagnostic bacteria

　 a. preparation of medium pH 7.3  0.2
　 b. Autoclave 121℃ 15 Ib 15 min.
　 c. Pour plate
　 d. Streak
　 e. Observation
　　 Viewer and Record
　　 Colony morphology (description and record)
　 f. Incubation temperature 28℃
　　 duration 　持續時間

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B. Cell observation
　 a. hanging drop
　 b. Gram's stain 3% KOH check
　 c. Biochemical test
　　 O-F test
　　 cytochrome oxidase
　　 nitrate

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 Haemolysis

α- Haemolysis
L. garvieae

β - Haemolysis
S. iniae

γ- Haemolysis
S. agalactiae
Antimicrobial susceptibility testing
 魚病細菌性病原菌之分類
Major group fish disease related bacteria ：
依據 Morphology 、 Metabolism
(Physiology) 、 Stain 等特性來分類
Basic techniques of diagnostic bacteria ：
如 single cell organisms → reproduce by binary
fission
three shapes ： rod (bacillus) 、 sphericcal
(cocci) 、 helical (spirillum)
Rickettsia 及 Chlamydia (intracellular bacterial
parasites)
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 與魚病有關的細菌

Gram’s positive bacteria, G (+)

一、 Cocci
Micrococcaceae 微球菌科
Staphylococcus catalase (+)
Staphylococcus epidermidis
病例很少→僅日本有報告在海水魚發生
　
Streptococcaceae 鏈球菌科
Streptococcus catalase (-)

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二、桿菌 Lactobacilli
Coryneform group of bacteria
　 Renibactreriuum salmoninarum 細菌性腎藏病
　 old culture 後，易變為 G (-) 要小心，
　多形性，由病魚 kidney isolation

Propionibacterium 科
　 Eubacterium taruntellus

Actinomycetales 目
　 Antinomycetes of Related bacteria 放線菌科
　 G (+) 但不穩定， (-) 很弱 (Varying with age) 、
　 slow grower 、 branching filament
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Nocardiaceae
 G (+) bacilli branching weak acid fast
 Nocardia asteroides (Chen and Tung, 1991)
 Nocardia salmonicida (Isik et al., 1999)
 Nocardia seriolae
– 台灣 (Chen et al., 2000 ; Lai, 2001 ;
Huang et al., 2004 ; Chen, 2006)
– 日本 (Itano and Kawakami, 2002)
– 中國 (Wang et al., 2005)

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Mycobacteriaceae
　 Mycobacterium piscium 淡水
　 Mycobacterium marinum 海水
　 Mycobacterium fortuitum 海水
　 Mycobacterium salmaoniphilum
　 G (+) ， bacilli ， branching ， strong acid fast

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Rickettsia-like organism
Francisella -like organism
絕對細胞內寄生菌 (obliqate intracellular
parasite)
多形性、類似短桿或球菌

Salmon poisoning
1950 發生在 Dog → 接著在 Raw salmon
本病不直接傳播 (not transmitted directly)
經由 metacercariae 傳給 Salmon
1954 Ricketteia pisces 在魚類 monocytes 及
Blood plasma 中發現
頭部、身體有 necrotic ulcers
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 Gram negative bacteria G (-) ：
三、 Enterobacteria
Cytochrome oxidase (-) Fermentation
Edwardsiella tarda (Edwardsiella septicemia)
Edwardsiella ictaluri (enteric septicemia of catfish)
Emphysematous putrefactice disease
Edwardsiella hoshinae Edwardsiellosis

Yersinia ruckeri Red Mouth disease

(enteric redmouth disease)
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Defferentation base on ：
　 a. Utilization of various CH20
　 b. IMVIC Indole 、 motility
　 c. Urease
　 d. Decarboxlation
　　 Lysine, Ornithine, Arginine
　 e. H2S production
　 f. Motility 魚類病原菌大多具運動性

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四、 Vibrionaceae 弧菌科
Cytochrome oxidase (+) (-)rod ，只有弧形較大
Fermentation (EMP)

Haemophilus 鱒魚 Ulcer disease

　 Haemophilus piscium 潰瘍病 Ulcer disease

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 Vibrio

海水較多 ( 鹽度 5 ‰ 以上 )
 Vibrio anguillarum
 Vibrio parahaemolyticus
 Vibrio vulnificus
 Vibrio alginolyticus

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Pasteurella
Pasteurella piscicida 類結節病
　 Form ： Haemophilus 特別小
　 Motility ： Haemophilus 、 Pasteurella 不會
動
　 Growth on MacConkey agar ：
　　只有 Haemophilus 不生長
　 Special nutritional factor ：
　　只有 Haemophilus 需特別營養

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Family Aeromonadaceae 產氣單胞菌科
Genus Aeromonas
　 rod (-) Cytochrome oxidase positive
　原則上在淡水 ( 鹹分小於 0.5%)
Motile Aeromonas Septicemia ,MAS
　 A. hydrophila
　 A. caviae
　 A. sobria
　 A. veronil
　 A. schubertil
Aeromonas salmonicida (furunculosis)

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五、假單胞菌科 (pseudomonas septicemia)
Pseudomonas fluorescens
Pseudomonas putida
Pseudomonas anguilliseptica 赤點病
　 Indole (+) non oxidative or non fermentation
　 Motility
　 Growth on MacConkey
　 Penicillin sensitive
　 Indole productive

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 六、 Gliding Bacteria 滑走性細菌
G (-) long rod-shaped (3~6 μm)
由魚體上直接塗抹約 2~3 μ ，培養 2~ 十幾 μ
營養條件差異很大
菌落呈有滑走狀 ( 樹根狀擴散 )
由體表分離，爛腮、爛鰭、爛尾巴 ( 不是全身性疾 )

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Cytophagales 目
Cytophagaceae 科
　 Cytophaga columnaris
　　 Flexibacter columnaris
　　 Flavobacterium columnare
(columnaris disease)

　 Cytophaga psychrophila
　　 Flexibacter psychrophilus
　　 Flavobacterium psychrophilus
　　－ Cold water disease
　　－ Bacterial gill disease: fin rot

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七、 Uncertain
Flavobacterium ranacida sp. nov.
　 G (-) 0.7 ～ 0.9 ×1.8 ～ 5.3 μm
　神經、循環、消化系統：
　引起敗血、出血、臟器充血、潰癢、眼睛白濁凸
出及頭部歪斜

Chryseobacterium 屬
　 Flavobacterium meningosepticum
　 Chryseobacterium meningosepticum

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 Edwardsiella tarda (E. tarda)

G (-) 　 2-3  1 m, rod 　週鞭毛

facultative aerobes, moving via use of flagella
，普通寒天 (agor plate) 發育不良，
如 TSA 20℃ 24 hrs colony 0.5 mm 菌落周邊
完整隆起
Rimler-Shotts media 37℃ 24 hrs. colony 周圍
綠色，中心黑色
Cytochrome oxidase (-)
facultative aerobes → glucose (F) 、 fructose
(F)
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 Edwardsiella tarda (E. tarda)
Gram's stain － MR (methyl red) ＋
Cyto oxidase － VP －
Production of H2S ＋ Utilization of citrate －
Nitrate reduction ＋ Simmon's citrate －
Hydrolysis of starch － Indole ＋
Liquefaction of Gelatin － Utilization of malonate ＋
Arginine decarboxy. － Lysine decarboxylase ＋
Phenylalanine deaminase － Ornithine decarbbox. ＋
O.F test (one tube method) F Gas form glucose ＋
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