ETIOLOŠKA DIJAGNOSTIKA INFEKTIVNIH BOLESTI

• DIREKTNA iz kliničkog materijala:

– Izravna detekcija uzročnika ili njegovih dijelova
SEROLOŠKA DIJAGNOSTIKA • antigeni, nukleinske kiseline
– detekcija antigena imunofluorescentnim ili imunoenzimskim testom
INFEKTIVNIH BOLESTI – metode molekularne biologije za detekciju genoma
– elektronski mikroskop
– svjetlosni mikroskop (inkluzijska tjelešca)
– Izolacija uzročnika (kultivacija)
Prim.dr.sc. Oktavija Đaković Rode • stanične kulture (CPE, hemadsorpcija, potvrda testom neutralizacije, interferencije,
imunofluorescencije); oploĎena jaja; pokusne životinje; bakteriološke podloge
Klinika za infektivne bolesti
“Dr. Fran Mihaljević”, Zagreb
• INDIREKTNA
– Dokaz specifičnog imunog odgovora - serologija

KARAKTERISTIKE PROTUTIJELA
Karakteristike IgG IgM IgA IgD IgE
KATEGORIJE IMUNOSNOG ODGOVORA
% ukupnih IgG 75 9 15 0.2 0.004
Prolaz kroz
+ - - ? -
placentu
• STANIĈNA IMUNOST (limfociti T) Poluvrijeme
života u krvi 21 10 6 3 2
(dani)

• HUMORALNA IMUNOST (limfociti B) Aktivacija

komplementa

Klasični put ++ +++ - - -

IMUNOGLOBULINI = PROTUTIJELA Alternativni put - - + - -
IgM, IgG, IgA, (IgE, IgD) Neutralizacija
Primarni odgovor
toksina, Prisutan na
na antigenu Sekretorna Medijator
opsonizacija površini ly B,
stimulaciju, protutijela; alergijskog
bakterija, veže antigene;
Glavna obiljeţja receptor za odgovora;
aktivacija štiti mukozne potiče ly B na
antigene na rezistencija na
komplementa; membrane produkciju
površini ly B; helminte
majčina protutijela
aglutinacija
protutijela

1
PRIMARNI I SEKUNDARNI IMUNOSNI ODGOVOR
IMUNOSNI ODGOVOR

ZNAČAJKE HUMORALNOG IMUNOSNOG

ODGOVORA KOJE SE KORISTE U SEROLOGIJI
• Dinamika stvaranja protutijela
• Primarni odgovor
• Sekundarni anamnestiĉki odgovor
– Specifiĉan (monoklonski)
– Nespecifiĉan (poliklonski)
SEROLOGIJA
=
DIJAGNOSTICIRANJE BOLESTI
ODREĐIVANJEM REAKCIJE
PROTUTIJELA I ANTIGENA

2
 POSTUPAK S UZORKOM
UZORCI ZA SEROLOŠKU OBRADU
• u sterilnu epruvetu (bez dodataka) u aseptiĉkim uvjetima
uzeti 5-10 mL pune krvi
PARNI SERUMI – ostaviti na sobnoj temperaturi da se odvoji koagulum
– centrifugirati (na 3000 rpm / 5-10 minuta)
– oprezno odvojiti supernatant - SERUM

• prvi ili akutni serum • ČUVANJE seruma na +2-80 C do 7 dana

– uzeti što ranije u poĉetku bolesti – za dulje ĉuvanje uzorke alikvotirati i ĉuvati na -200 C

• TRANSPORT UZORAKA u adekvatno zaštićenim

• drugi ili parni (rekonvalescentni serum) posudama u hladnim uvjetima
– uzeti oko 2-3 tjedna kasnije
KVALITETA UZORKA ZNAČAJNO UTJEČE NA
REZULTATE TESTIRANJA !

ODREĐIVANJE PROTUTIJELA U ANTIBODY INDEX (AI)

DRUGIM TJELESNIM TEKUĆINAMA
• Uz TEKUĆINU iz koje se žele odrediti
protutijela obavezno je
ISTOVREMENO UZETI SERUM!
LIKVOR, OĈNA VODICA

• Iz istovremeno oduzetih uzoraka, npr.

likvora i seruma, uz odreĊivanje specifiĉnih
PROBLEM PORIJEKLA PROTUTIJELA !
protutijela treba odrediti i
ukupne imunoglobuline i/ili albumin i/ili
“surogat” protutijela

3
 PROCJENA Reiberova formula za procjenu
KRVNO-MOŢDANE MEMBRANE krvno-moţdane membrane

1. “normalan” kvocijent IgG 2. povećani kvocijent IgG

Qukupni < Qlim
AI = Qspec : Qukupni
Qspec = specifični IgG u likvoru : specifični IgG u serumu
Qukupni = ukupni IgG u likvoru : ukupni IgG u serum
npr. u multiplom mijelomu ili nekim kroničnim bolestima
Qukupni > Qlim
AI = Qspec : Qlim
Qlim (IgG) = 0.93 x Qalb2 + (6 x 10-6) - 1.7 x 10-3

Qlim (IgM) = 0.67 x Qalb2 + (120 x 10-6) - 7.1 x 10-3

Interpretacija nalaza likvorskih protutijela METODE U SEROLOGIJI

antibody indeks AI • REAKCIJA VEZANJA KOMPLEMENTA (RVK)
• REAKCIJA AGLUTINACIJE
– Bakterijska
• AI 0.5-1.5 – Latex
– Referentne vrijednosti za zdrave osobe – Hemaglutinacija
– Inhibicija hemaglutinacije
– Nema intratekalne sinteze
• REAKCIJA PRECIPITACIJE
• AI 1.5-2.0 (4.0) – Precipitacija u epruveti
– Graniĉni nalaz – Gel imunodifuija
– Protusmjerna imunoelektroforeza
• AI > 2.0 (4.0)
• NEUTRALIZACIJA
– Znaĉajan nalaz likvorskih protutijela – Virusa
– Toksina

4
 EIA – enzyme immunoassay
NOVIJE METODE ELISA – enzyme linked immunosorbent assay

• RADIOIMUNOTEST (RIA)
• FLUORESCENTNI IMUNOTEST (IFA)
• ENZIMSKI IMUNOTEST (EIA, ELISA)
• IMUNOBLOT / WESTERN BLOT (WB)
• REKOMBINANTNI IMUNOBLOT TEST (RIBA)

• TESTOVI AVIDNOSTI

EIA / ELISA IZRAŢAVANJE REZULTATA

• Reaktivno
• Nereaktivno
• Granično (“siva zona”)

• Toĉka “cut off”

• KVALITATIVNO: pozitivno / negativno

• KVANTITATIVNO: jedinice prema naputku proizvoĊaĉa:

– OD (ekstinkcija)
– Index (ratio)
– VE (value ELISA)
– IU/mL
– U/mL
– AU/mL
– titar

5
 ODREĐIVANJE STAROSTI INFEKCIJE
TUMAČENJE
SEROLOŠKOG NALAZA
• PRAĆENJE TITRA PROTUTIJELA U PARNIM
SERUMIMA

• TESTOVI AVIDNOSTI IgG KLINIČAR  MIKROBIOLOG

– AVIDNOST = ĉvrstoća veze antigena i protutijela
– protutijela veće avidnosti javljaju se kasnije tijekom
infekcije
– promjena niske avidnosti u visoku unutar 6 mjeseci!

VAŢNI ČIMBENICI ZA INTERPRETACIJU

SEROLOŠKIH NALAZA
Vrijeme oduzimanja uzorka

• vrijeme oduzimanja uzorka • Parni uzorci

1. akutni serum
2. rekonvalescentni serum
• nespecifični poticaji imunog
odgovora
• SEROKONVERZIJA
• ukriţene reakcije • PORAST TITRA PROTUTIJELA
• POJAVA SPECIFIĈNIH IgM PROTUTIJELA
• anamnestički odgovor

6
 Nespecifični poticaj Ukriţene reakcije

• POLIKLONSKA AKTIVACIJA LIMFOCITA B • ZAJEDNIĈKE ANTIGENE DETERMINANTE

– daje stvarne pozitivne rezultate – npr.

• HSV-1 vs. HSV-2
• mumps vs. parainfluenca
• HHV-6 vs. CMV

RAZLOZI LAŢNO NEGATIVNIH SEROLOŠKIH

Anamnestički odgovor REZULTATA
• VRIJEME UZIMANJA UZORAKA
– prije stvaranja specifičnih protutijela

• POTICANJE REAKTIVACIJE IMUNOSNOG • KOMPETICIJA IgM i IgG za vezna mjesta na nosaču

ODGOVORA – IgM lažno negativan u suvišku IgG

• LOKALNE INFEKCIJE (npr. genitalni HSV, C.trachomatis)

– proizvodnja protutijela za ranije upoznat antigen
• REKURENTNA INFEKCIJA HSV
– nema porasta titra protutijela
“original antigenic sin”
• IMUNONEKOMPETENTNI
– imunokompromitirani koji ne razvijaju porast protutijela ili do porasta dolazi sporo -
djeca

7
 RAZLOZI LAŢNO POZITIVNIH SEROLOŠKIH EVALUACIJA TESTOVA
REZULTATA
• OSJETLJIVOST (%)
• ANTIGLOBULINI (reumatoidni faktor IgM) – Stvarno pozitivni /(stvarno pozitivni + lažno negativni) x100
• UKRIŽENA REAKTIVNOST • SPECIFIČNOST (%)
• POLIKLONSKA AKTIVACIJA LIMFOCITA B – Stvarno negativni /(stvarno negativni + lažno pozitivni) x100
• NEKVALITETAN UZORAK
– ikteričan, hemoliziran, lipemičan, kontaminiran • POZITIVNA PREDIKTIVNA VRIJEDNOST (%)
– Stvarno pozitivni /(stvarno pozitivni + lažno pozitivni) x100
• Anamnestički odgovor • NEGATIVNA PREDIKTIVNA VRIJEDNOST (%)
• Transplacentarni prijenos – Stvarno negativni /(stvarno negativni + lažno negativni) x100
• Transfuzije

KATEGORIZACIJA RUTINSKIH METODA U VIROLOŠKOJ DIJAGNOSTICI

D T
Mikroskop
Virus
Kultura Izravna dijagnostika
(EM, DFA, DNA/RNA
Imunosni I O
stanica (EIA, aglutinacija) odgovor
imunohistokemija)
J K
Arbo (KME) C D C B A
CMV A D B B A A S
EBV D D B B A G O
Parvo B19 D C C A A
Mumps A C B B A N P
Rubela B D C B A O L
Morbili B C B B A
HSV A B A B B
S A
VZV A D A C B T Z
Adeno A A B C B
Influenza A A A C B
I M
Parainfluenza A C A C C K O
RSV A A A C C
Entero A D D A C
A Z
HHV-6 C C C B C E

8
 T
O Serološka dijagnostika toksoplazmoze
K
S
• Neizravna dijagnostika – detekcija protutijela
O
P
L • IMUNOSNI ODGOVOR
A
Z
• Osnovna i najpouzdanija uz pravilnu interpretaciju!
M
O
Z
A

Toxoplasma gondii IgM Toxoplasma gondii IgG

• Javljaju se rano - unutar jednog tjedna nakon početka infekcije
• Javljaju se kasnije, postepeno rastu
• Obično nestaju unutar 6-9 mjeseci nakon infekcije
• Vrh oko 2-5 mjeseci nakon početka kliničkih simptoma
• Mogu perzistirati više od 18 mjeseci • Pokazatelj imunosti
• Perzistiraju predugo (godinama) da bi bili dobar indikator
recentne infekcije! • Praćenje dinamike protutijela pomaže u odreĎivanju
vremena infekcije
• IgM u novoroĎenčadi retestirati nakon 7-10 dana
• TESTOVI AVIDNOSTI IgG
– prijelaz od majke pri porodu !?
– promjena niske avidnosti u visoku unutar 6 mjeseci!
• poluvrijeme života IgM = 3-5 dana

9
 SEROLOŠKA DIJAGNOSTIKA TOKSOPLAZMOZE - I
Toxoplasma gondii IgA
– OdreĎivanje protutijela IgM, IgG, IgA, (IgE)
• Pojava oko 5 dana nakon IgM • Metode:
• Nestaju kad IgG počinje padati, nešto ranije nego IgM – Enzimski imunotest (EIA, ELISA)
• Obično nestaju nakon 6-12 mjeseci – Imunosorbentni aglutinacijski test (ISAGA)
• Perzistira mjesecima (do više od 1 godine) – Imunofluorescencija (IFA)

– kontroverze je li IgA pouzdaniji indikator konatalne infekcije nego • Izražavanje testova – jedinice:
IgM (?) – internacionalne jedinice, titar, indeks, vrijednost optičke gustoće

TEST AVIDNOSTI PROTUTIJELA IgG

SEROLOŠKA DIJAGNOSTIKA TOKSOPLAZMOZE - II

• Sabin – Feldmanov dye test

– test bojanja tahizoita metilenom
• Tahizoiti izgube afinitet za metilensko modrilo u
prisutnosti protutijela IgG

• Indirektna hemaglutinacija (IHA)

• RVK

By Wilson M, McAuley JB. in Murray Manual of clinical microbilogy, 1999

10
 Interpretacija nalaza komercijalnih
Serološka dijagnostika toksoplazmoze seroloških testova za T.gondii
I-III
• Negativan IgM i/ili IgG isključuje akutnu toksoplazmozu
– U akutnoj infekciji oba moraju biti prisutna! IgG IgM Nalaz i/ili interpretacija za odrasle
Negativno Negativno Nema serološke potvrde infekcije s toksoplazmom.

• Ako je screening IgG pozitivan treba napraviti IgM Negativno Granično

Moguće rana faza akutne infekcije ili lažno pozitivno. Uzeti
novi serum – ako je drugi serum opet isti vjerojatno nema
infekcije s toksoplazmom.
Moguće akutna infekcija ili lažno pozitivno. Uzeti novi serum –
Negativno Pozitivno
• Kod sumnje na akutnu infekciju uzorke poslati u ako je drugi serum opet isti vjerojatno lažno-pozitivno.

referentni centar za dijagnostiku toksoplazmoze

– IgA (IgE), test avidnosti protutijela

Interpretacija nalaza komercijalnih Interpretacija nalaza komercijalnih

seroloških testova za T.gondii seroloških testova za T.gondii
II-III III-III
IgG IgM Nalaz i/ili interpretacija za odrasle
IgG IgM Nalaz i/ili interpretacija za odrasle
Pozitivno Negativno Infekcija s toksoplazmom prije više od godinu dana.
Granično Negativno NeodreĎeno. Uzeti novi serum za testiranje ili retestirati prvi na
IgG s drugim tipom testa. Pozitivno Granično Infekcija toksoplazmom vjerojatno prije više od godinu dana ili
Granično Granično NeodreĎeno. Uzeti novi serum za testiranje IgM i IgG. lažno pozitivna reakcija IgM. Uzeti novi serum za testiranje
IgM. Ako je rezultat drugog seruma isti, oba seruma treba
Granično Pozitivno Moguće akutna infekcija s toksoplazmom. Uzeti novi serum za poslati referentni laboratorij na dodatna testiranja.
testiranje IgM i IgG. Ako je rezultat drugog seruma isti ili IgG Pozitivno Pozitivno Moguće nedavna infekcija unutar zadnjih 12 mjeseci ili lažno
postane pozitivan, poslati oba seruma u referentni laboratorij na pozitivna reakcija IgM. Poslati uzorak u referentni laboratorij na
dodatna testiranja. dodatna testiranja.

11
 Dokaz konatalne toksoplazmoze RAZLIKOVANJE AKUTNE OD
KRONIČNE TOKSOPLAZMOZE
• PotvrĎena akutna toksoplazmoza tijekom trudnoće
• Dokaz parazita - PCR, kultivacija
• Protutijela IgM u fetalnoj krvi • Nemoguće iz jednog uzorka seruma!
– Potvrditi nalaz u novom uzorku nakon jednog tjedna

• IgG prolaze transplacentarno, dok IgM i IgA ne prolaze • Praćenje dinamike titra protutijela
• Test avidnosti IgG
• U 20-30% inficiranih fetusa ne mogu se dokazati IgM,
ni IgA • Direktna dijagnostika – PCR, kultivacija uzročnika
– Kontrola UZV
• rane promjene mozga (hidrocefalus, kalcifikati), jetre (povećanje,
kalcifikati, ascites)

Lyme borelioza (LB) Kliničke manifestacije LB

UZROČNIK • LB JE MULTISISTEMNA UPALNA BOLEST!
Borrelia burgdorferi sensu lato:
• Simptomi raznoliki, nespecifični:
Borrelia burgdorferi sensu stricto – upućuju na borelije
Borrelia afzelii – potpuno nespecifični
Borrelia garinii
• Često diferencijalno dijagnostički nejasno
Borrelia spielmanii
Borrelia lusitaniae
• 64% pacijenata s LB se ne sjeća ugriza krpelja!
Borrelia bissettii
Borrelia valaisiana

12
 Lyme borelioza (LB)
Lyme borelioza (LB)
• Povezana s genospecijesom koji uzrokuje bolest Tick bite
Abortive: 95% Lyme-Borreliosis: 5%
Stage 1
84%
• Borrelia afzelii: kožne manifestacije (ACA)
14%
• Borrelia garinii: neuroborelioza Early localized 8% Early
dissemination
Stage 2
• Borrelia burgdorferi sensu stricto: artritis 2%

<0,5%
Self limited 92%
Stage 3
<0,5%
Chronic manifestation
(skin, joints, brain)

Daghofer, 2005.

LB faza 1. LB faza 2.
• 5-40 dana (najčešće 10 dana) • Rana diseminacija: 2-12 tjedana
• Kožna manifestacija: – Karditis
– Erythema (chronicum) migrans (EM); – Neuroborelioza - Bannwarthov sy. –
– Lymphadenosis cutis benigna (borelijski limfocitom) meningo-poliradikuloneuritis
– Artritis
• Opći simptomi: “flu-like” bolest, mialgija,
artralgija

13
 DIJAGNOSTIKA LB
LB faza 3.
• KLINIČKA SLIKA - tipične kliničke manifestacije
• Kronične manifestacije: 6-12 mjeseci
– Dermatoborelioza: Acrodermatitis chronica
• MIKROBIOLOŠKA DIJAGNOSTIKA
atrophicans (ACA)
– IZRAVNA
– Neuroborelioza: • KULTIVACIJA, IZOLACIJA
• PCR
• ACA - associated mono(poly)-neuritis;
– NEIZRAVNA
• progresivni encefalomijelitis • SEROLOŠKO TESTIRANJE
– Artritis: Mono (poly-) arthritis

Nastanak specifičnih protutijela u LB

SEROLOŠKI TESTOVI ovisi o:

• OdreĎivanje specifičnih IgM i IgG protutijela • fenotipskim karakteristikama borelija

• Uzorci: serum, likvor, sinovijska tekućina • različitoj antigenskoj strukturi borelija

• različitoj geografskoj rasprostranjenosti borelija

• sposobnosti bolesnika da reagira na infekciju

14
 Borrelia burgdorferi IgM
• Pojava nekoliko tjedana nakon početka bolesti
• Vrh nakon 3-6 tjedana
• Pad nakon 6 mjeseci
• Moguća perzistencija godinama nakon terapije
• Ne mora biti znak akutne infekcije!
Borrelia burgdorferi IgG
• Pojava nekoliko tjedana nakon IgM
• 4-6 tjedana nakon infekcije >= 90% pacijenata
ima prisutna IgG
• Vrh 5 mjeseci do 7 godina nakon početka bolesti
• Spori pad titra protutijela

IMUNOSNI ODGOVOR NA Metode odreĎivanja specifičnih protutijela

B. burgdorferi sensu lato IgM i IgG nakon infekcije
B.burgdorferi sensu lato
• Javlja se relativno kasno - nekoliko tjedana do nekoliko
mjeseci nakon infekcije
– protutijela IgM nakon 3-6 tjedana • Imunoenzimski test (EIA)
– protutijela IgG od 6. tjedna do nekoliko mjeseci kasnije

• Kod nekih pacijenata imunosni odgovor se ne razvija • Imunofluorescentni test (IFA)

– imunosna nereaktivnost bolesnika na infekciju
– slabi ili spori reaktori
• Imunoblot test (Western blot (WB))
• Specifična protutijela nisu protektivna
– dijagnostičko značenje

• Prisutna u zdravih osoba

• Testovi hemaglutinacije

15
 Serološki testovi Kriteriji serološke dijagnostike prema
Centers for Disease Control (CDC)
• Nisu standardizirani
• Specifičnost i osjetljivost je različita
• Serološka dijagnostika u dva koraka
• Testovi se razlikuju prema:
– vrsti borelije, odnosno soju unutar vrste od kojeg se • Sve reaktivne i granične rezultate EIA ili IFA treba
pripravlja antigen dodatno testirati imunoblot (WB) testom
– načinu priprave antigena
• cijela borelija • Ako je nalaz WB negativan, reaktivne EIA/IFA
• pročišćeni borelijski antigeni testove treba interpretirati kao lažno pozitivne!
• rekombinantni antigeni
– metodi testiranja

BORELIOZA NIJE SEROLOŠKA DIJAGNOZA LYME BORELIOZA

• TIPIČAN SEROLOŠKI NALAZ ZA LB FAZA 1.
– IgG negativno, IgM pozitivno TIPIČAN SEROLOŠKI NALAZ ZA LB FAZA 2.
•AT detektirana u 20-50% •IgG (slabo) pozitivan, IgM pozitivan
–AT detektirana u 70-90 %
• ALI: •ALI:
– Protutijela se mogu pojaviti kasno
•IgG mogu ostati negativna
– IgM se uopće ne mora pojaviti (oprez: reinfekcije)
– rijetko; većinom u djece s parezom facialisa

– IgM može biti pozitivan mjesecima (ekstremno godinama) čak i nakon
uspješne antibiotske terapije
– Ustrajno negativan IgG mogući je pokazatelj uspješnosti terapije faze 1.
•IgM može biti negativan (kao u reinfekciji)
•Neuroboreliozu treba dijagnosticirati jedino u paru likvor/serum
•Likvor/ serum indeks koji upućuje na intratekalnu produkciju
AT može biti pozitivan mjesecima unatoč adekvatnoj terapiji
•Porast titra IgG može se dogoditi i tijekom terapije

16
 HUMANI HERPESVIRUSI

BORELIOZA JE KLINIČKA DIJAGNOZA OZNAKA VIRUS PODOBITELJ BOLESTI

HHV-1 Herpes simplex virus - 1 α1 Gingivostomatitis, herpes labialis,

(HSV-1) keratokonjunktivitis, encefalitis, genitalni herpes
TIPIČAN SEROLOŠKI NALAZ ZA LB FAZA 3. HHV-2 Herpes simplex virus - 2 α1 Genitalni herpes, neonatalne infekcije, meningitis,
(HSV-2) gingivostomatitis, herpes labialis
HHV-3 Varicella zoster virus α2 Vodene kozice, zoster
•IgG visoki titar, IgM pozitivan ili negativan (VZV)
–AT detektirana u gotovo 100% HHV-4 Epstein-Barr virus γ1 Infektivna mononukleoza (IM); Burkittov limfom;
(EBV) nazofaringealni karcinom; limfoproliferativne bolesti,
XLP; T-stanični limfom; Hodgkinov limfom
•Negativan IgM može još uvijek značiti progresivnu fazu
HHV-5 Cytomegalovirus β1 Asimptomatska infekcija; IM; retinitis; infekcije u
borelioze (CMV) imunokompromitiranih; konatalne infekcije
HHV-6 Human herpesvirus - 6 β2 Mononukleoza; roseola infantum (Exanthema
(HHV-6) subitum)
•!!! Visoki IgG bez kliničkih simptoma nije indikacija za
HHV-7 Human herpesvirus – 7 β2 Mononukleoza?; roseola infantum; pytiriasis rosea?
antibiotsku terapiju (HHV-7)
HHV-8 Human herpesvirus – 8 γ2 Kaposiev sarkom; multicentrična Castelmanova
(HHV-8, KSHV) bolest; primarni efuzijski (tekući) limfom (PEL)

Epstein-Barrov virus (EBV) EBV

• VCA (viral capsid antigen)
– VCA IgM pojava u 2-3 tjednu infekcije • PRIMARNA INFEKCIJA
– VCA IgG pojava 4-7 tjedana nakon pojave simptoma;
perzistira doživotno
– AKUTNA FAZA
– “PROLAZNA” SUBAKUTNA FAZA
• EA-D (early antigen diffuse) – REKONVALESCENTNA FAZA
– EA-D IgG vrh u 3. tjednu
– prisutni tijekom replikacije virusa • RANIJA (PROŠLA) INFEKCIJA
• EBNA (EBV nuclear antigen)
– marker prijelaza akutne u rekonvalescentnu fazu (6-12. tjedan); • REAKTIVACIJA
uglavnom perzistiraju doživotno

17
 Serološki status u EBV infekciji
VCA IgM VCA IgG EA-D IgG EBNA IgG EBV infekcija
Cytomegalovirus
- - - - EBV negativan (CMV)
- + - +
Ranija (prošla) EBV
- +* - - infekcija
-/+# +# +# +# • Anti-CMV IgM
+ + + - Primarna EBV – Pojava 3-4 dana nakon infekcije
infekcija
+ - +/- - (akutna faza) – Pad nakon nekoliko tjedana i dalje sporo kroz 4-6
+ + + + Primarna EBV mjeseci
infekcija
- +* - - (prolazna faza)
– Trajanje do 8 mjeseci, a u transplantiranih do 2
Primarna EBV
godine
- +* - - infekcija
- + + + (rekonvalescentna
faza)
• Anti-CMV IgG
Reaktivacija EBV
-/+# +# +# +# infekcije – Pojava 1 tjedan nakon pojave IgM

Problemi interpretacije serološkog Serološka dijagnostika HSV

nalaza u CMV infekciji
• PRIMARNA INFEKCIJA
• RAZLIKOVANJE PRIMARNE I
– SEROKONVERZIJA – kasno, nakon 2-3 tjedna
SEKUNDARNE INFEKCIJE
• Zajedniĉki epitopi izmeĊu HSV-1 i HSV-2 rezultiraju
– Reaktivacija može inducirati IgM ukriženom reaktivnosti protutijela
• Rekombinantini antigeni u testovima
• HETEROTIPNI IMUNI ODGOVOR
– ukrižena reaktivnost • REKURIRAJUĆE INFEKCIJE
– NEMA POUZDANE SEROLOŠKE METODE !!
• INDUKCIJA POLIKLONOG IMUNOSNOG – NAJČEŠĆE NEMA ZNAČAJNE PROMJENE
ODGOVORA LIMFOCITA B TITRA PROTUTIJELA !!

18
 Anti-HSV IgM
• Neonatalna HSV infekcija
• Recentna primarna genitalna infekcija
trudnice
– CNS infekcije
• Molekularna dijagnostika !!!
• OdreĊivanje protutijela u likvoru, iako se IgM
javljaju kasno
Varicella zoster virus (VZV)
• Anti-VZV IgG
– Pojava 4-6 dana nakon simptoma
– Vrh 4-8 tjedana kasnije
– Postepeni pad tijekom nekoliko godina
– Doživotno prisutna u niskom titru
Varicella zoster virus (VZV)
• Anti VZV IgM
– Pojava 2-5 dana nakon simptoma
– Vrh 8-11 dana kasnije
– Pad unutar nekoliko tjedana nakon smirivanja
simptoma
– ~Trajanje ~3 mjeseca
Varicella zoster virus (VZV)
• Anti-VZV IgA
– Pojava 3-5 dana nakon poĉetka osipa
– Trajanje 1-3 tjedna nakon smirivanja osipa;
povišen 1-2 mjeseca; postepeni pad
– Obiĉno nedetektabilna 4 mjeseca nakon
smirivanja infekcije
– ~ 10% odraslih može imati detektabilnu nisku
razinu IgA
– Značajan pokazatelj reaktivacije VZV !
19