VJEŽBA 4.

Eritrocitna membrana

Medicinska biologija 2008/09

1. korak – uzeti uzorak krvi
Kompletna krvna slika (KKS) definira: • Broj crvenih krvnih stanica
• Broj bijelih krvnih stanica
• Broj krvnih pločica

Diferencijalna krvna slika (DKS) – njome odreñujemo

relativni udio pojedinih bijelih krvnih stanica u njihovom
ukupnom broju. DKS daje informaciju o strukturi te
eventualnoj prisutnosti nezrelih oblika leukocita.
• Crvene krvne stanice veličine 7,5 µm,
masa= 3 x 10 –11 g

• Uloga: izmjena O2 i CO2 u stanicama

• Žive 120 dana

• Brojnost u tijelu: 25 bilijuna

• Dnevno se sintetizira 208 milijardi

eritrocita
Eritrocitna membrana - EM
Proteini eritrocitne membrane

Ankirin – Veže se na
spektrin i za citoplazmatski
dio transmembranskog
proteina band 3 – učvršćuje
mrežu citoskeleta

Band 3 -
transmembranski protein
– sudjeluje u transportu
HCO3- , tj CO2 kroz
membranu

Glikoforin –
transmembranski
protein nepoznate
uloge
Spektrin - Dimer
dvaju paralelnih lanaca –
održava integritet i oblik
eritrocita – vezan je na
ankirin i band 4.1 i s
njima tvori mrežastu
strukturu na unutarnjoj
površini membrane
Spektrinska
mreža!
 1. Izolacija membrana eritrocita (“bijeli duhovi”)
POSTUPAK:
1. Krv centrifugirati 5 min na 4000 rpm. Otpipetirati
supernatant (plazma).

2. Eritrocitni talog isprati sa 3 ml 1%-tne NaCl.

Centrifugirati 5 min na 4000 rpm.

3. Otpipetirati supernatant (prvo ispiranje plazme)

4. Ponoviti točku 2 i 3 (drugo ispiranje plazme).

5. Eritrocitni talog hemolizirati dodatkom dH2O.

Resuspendirati pipetom.

6. Centrifugirati 10 min na 5000 rpm. Bijeli talog su

membrane eritrocita (“bijeli duhovi”).

RAD: Na predmetno stakalce dobit ćete otopinu sa membranama

eritrocita pripremljenu na navedeni način. Mikroskopirati !
Ponašanje eritrocita u otopinama različite koncentracije
Rad: OSMOZA, HEMOLIZA
Napravili smo nekoliko otopina krvi:

• 3 cm3 dest. H2O + 3 kapi svježe krvi = kompletna hemoliza

• 3 cm3 0,2% NaCl + 3 kapi svježe krvi = kompletna hemoliza
• 3 cm3 0,4% NaCl + 3 kapi svježe krvi = najveći volumen
eritrocita
• 3 cm3 0,9% NaCl + 3 kapi svježe krvi = normalni eritrociti
• 3 cm3 5% NaCl + 3 kapi svježe krvi = smežurani eritrociti

Postupak:
1. Na predmetno stakalce dobit ćete jednu od gore
navedenih otopina krvi.
2. Pokrijte pokrovnicom i mikroskopirajte.
3. Odgovorite u kojoj se otopini nalaze promatrani
eritrociti.
I koje su ovo otopine…?
 Hemoglobin
• 4 molekule hema (hem čine 4 pirolova prstena (protoporfirin)+ atom Fe
α lanca i 2β
• Globin: 2α β lanca
3D
Hemoglobinska
molekula
•Gen za hemoglobin
•Embriji imaju drukčiji hemoglobin nego odrasle individue
 Srpasta anemija – greška u
jednom nukleotidu
Srpasta anemija

Normalni eritrociti
Kristali hemoglobina

• Odreñivanje kristala HgB

je dokaz za prisustvo krvi.

• Kristali Hgb krvi čovjeka i

drugih sisavaca nisu jednaki
(različita globinska
komponenta)

• Oblik kristala je
karakterističan, najčešće
romboidan
RAD: Priprema kristala hemoglobina

1. Staviti kap defibrinirane krvi u sredinu

predmetnog stakalca i napraviti razmaz.
Ostaviti da se osuši na zraku.

2. Na osušeni razmaz nakapati 1-2 kapi ledene

octene kiseline i lagano izmiješati čačkalicom.

3. Pokriti pokrovnicom, tako da površina ispod

pokrovnice bude posve ispunjena kiselinom.

4. Iznad slabog plamena lagano zagrijavati

preparat dok ne nestane miris octene kiseline.
Ne smije kipiti.

5. Ostaviti preparat da se ohladi.

6. Mikroskopirati kristale.
A što je sa ostalim krvnim stanicama ?!
Postoje 3 vrste leukocita: • Granulociti ili granulirani leukociti
(neutrofili, eozinofili i bazofili)
• Monociti
• Limfociti
1. preparat - Razmaz krvi čovjeka
Nañite sve vrste leukocita u krvnom razmazu !!!