VAKSINASI BCG MENINGKATKAN AKTIVITAS FAGOSITOSIS DAN SEKRESI

REACTIVE OXYGEN INTERMEDIATE (ROI) PADA MAKROFAG PERITONEUM KUCING

YANG DIINFEKSI DENGAN Mycobacterium tuberculosis

BCG VACINATION INCREASED PHAGOSISTOCYTE ACTIVITIES AND REACTIVE

OXYGEN INTERMEDIATE (ROI) SECRETION IN CAT PERITONEUM MACROPHAGES
WHICH INFECTED BY Mycobacterium tuberculosis

Ida Tjahajati
Bagian Ilmu Penyakit Dalam, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta,

ABSTRACT
The aim of this experiment is to study the effect of BCG vaccination on phagocyte activity and ROI secretion in cat
peritoneum macrophages which infected with M.tuberculosis. The experiment used twenty four healthy cats. The animals
were divided in 2 groups, 12 cats in each group. Group I were vaccinated with BCG, group II were control group which
unvaccinated. BCG vaccination was done twice in two weeks interval. Two days after vaccination each cat was infected
by 105 cfu M.tuberculosis intraperitoneally. The activity of macrophages were measured at 1st, 2nd, 12th, and 24th, after
infection using in vitro latex bead phagocyte and NBT reduction assay. Three cats were used to measure the macrophage
activity in each period, using triplicate sample for each cat. The results of the experiment showed that the phagocyte
activity and ROI secretion increased significantly in vaccination group (P<0.01) compared with the control group, and
these activities reached to the plateau level at 2 weeks after infection. Although these enhanced activities were gradually
diminished thereafter, higher levels of these activities were consistently observed until the end of experiment compared
with control group. BCG vaccination increased the cellular immunity especially phagocyte and ROI secretion activities of
peritoneual macrophages in cat infected with M.tuberculosis
Key words: BCG, phagocyte, ROI, M.tuberculosis, cat

PENDAHULUAN penyakit infeksi (3). Mycobacterium dari M.tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) meru-
pakan kuman tahan asam penyebab kematian hampir 3 juta
manusia, dan terdapat 8-12 juta kasus baru setiap tahunnya
(1). Penyakit yang berlangsung secara menahun (kronik)
tersebut, oleh World Health Organization (WHO) diperkira-
kan telah menyerang sepertiga penduduk dunia, dan mem-
punyai potensi berkembang ke arah penyakit reaktif (2).
Dengan berkembangnya human immunodeficiency virus/
acquired immunodeficiency syndrome (HIV/AIDS) serta
adanya masalah kekebalan kuman terhadap berbagai obat
tuberkulosis (multi-drugs resistant M.tuberculosis, MDR-
TB), menyebabkan tuberkulosis menjadi masalah kesehat-
an dunia. Di Indonesia, menurut Survei Kesehatan Rumah
Tangga Departemen Kesehatan Republik Indonesia pada
tahun 1992, diperkirakan 175.000 orang meninggal setiap
tahunnya, dan terdapat sekitar 500.000 kasus baru.
Tuberkulosis merupakan penyebab kematian nomor dua
terbesar di Indonesia setelah penyakit kardiovaskuler, dan
merupakan penyebab kematian nomor satu dari kelompok
Jurnal Kedokteran Brawijaya, Vol. XXI, No.2, Agustus 2005
Korespondensi: Ida Tjahajati; Bagian Ilmu Penyakit Dalam,
FKH Universitas Gadjah Mada Yogyakarta; Email:
ida_tjahajati@yahoo.com atau itjah@plasa.com
complex yang menyerang manusia telah diketahui juga
dapat menyebabkan tuberkulosis bentuk pulmonari, gas-
trointestinal, atau bentuk menyebar pada hewan piaraan
termasuk kucing (4, 5, 6, 7).
Usaha pencegahan terhadap tuberkulosis telah lama
diupayakan yaitu dengan melakukan vaksinasi mengguna-
kan M.bovis galur Bacillus Calmette-Guerin (BCG) yang
telah dilemahkan. Vaksin ini pertama kali digunakan pada
manusia tahun 1921, selanjutnya aplikasi penggunaannya
meluas ke berbagai negara di dunia dengan tingkat
protektivitas yang bervariasi (8, 9). Sifat imunopotensiator
BCG pada hewan percobaan telah banyak dipelajari dan
terbukti dapat meningkatkan reaktivitas imunologis dengan
berbagai mekanisme. Bacillus Calmette-Guerin dapat meru-
bah beberapa komponen respon imun, mengubah beberapa
tipe sel, dan dapat mendorong terjadinya efek stimulasi atau
penghambatan pada sistem imun tergantung pada bagai-
mana cara menggunakannya (10). Selain memacu respon
imun yang diperantarai sel T, BCG juga diketahui dapat
meningkatkan jumlah limfosit. Secara in vitro pemberian
BCG dapat meningkatkan jumlah limfosit CD4+ yang ter-
bukti dengan meningkatnya jumlah sel-sel blast CD4+ da-
lam kultur (11). Puncak proliferasi limfosit terjadi 2 minggu
 Jurnal Kedokteran Brawijaya, Vol. XXI, No. 2, Agustus 2005
setelah infeksi pada hewan coba yang diinfeksi dengan
BCG (12).
Pengaruh BCG terhadap kemampuan fagositosis
dan daya bunuh makrofag pada infeksi Staphylococcus
aureus dan efeknya dalam meningkatkan produksi tumor
necrosis factor alpha (TNF-α) oleh makrofag telah dilapor
kan oleh Djamiatun et al. (13). Peningkatan aktivitas pem-
bunuhan terhadap intraerythrocytic Plasmodium yoelii se-
cara in vitro karena efek BCG juga telah dilaporkan oleh
Supargiono (14). Laporan lain mengenai efek BCG terha-
dap pembunuhan Plasmodium berghei oleh makrofag dide-
montrasikan oleh Wijayanti (15). Hasil penelitian terdahulu
menunjukkan bahwa infeksi tuberkulosis pada kucing juga
mengikuti paradigma Th1 dan Th2 yang melibatkan aktivitas
makrofag dan T helper (16). Meskipun BCG sampai saat ini
digunakan di lapangan dan telah diketahui bersifat imuno-
potensiator, namun bagaimana pengaruhnya terhadap imu-
nitas seluler khususnya aktivitas makrofag dalam fagosito-
sis dan sekresi ROI pada kucing belum pernah dilaporkan.
Pada penelitian ini dipelajari bagaimana pengaruh
vaksinasi BCG terhadap aktivitas makrofag yang meliputi
aktivitas fagositosis dan sekresi ROI pada kucing yang
diinfeksi M.tuberculosis. Telah diketahui mekanisme respon
imun terhadap infeksi M.tuberculosis diperankan oleh imu-
nitas seluler yaitu sel makrofag dan sel T (T-cell mediated
immunity), dengan mekanisme utama meningkatnya aktifi-
tas sel T dan makrofag (17,18,19). Didasarkan pada BCG
yang bersifat imunopotensiator, maka hipothesis dalam
penelitian ini adalah ”Apakah kucing yang divaksin dengan
BCG setelah diinfeksi dengan M.tuberculosis akan menun-
jukkan aktivitas makrofag (baik dalam fagositosis maupun
sekresi ROI) yang lebih tinggi dalam usahanya memberikan
proteksi untuk memusnahkan M.tuberculosis yang masuk
dalam tubuh kucing?”
METODE
Hewan Percobaan
Dua puluh empat kucing sehat (jenis kelamin jantan
dan betina, umur 1-2 tahun, berat badan 1-2 kg) dibagi
secara acak dalam 2 kelompok masing-masing 12 ekor.
Kelompok I yaitu kelompok yang divaksinasi dengan BCG
dan kelompok II adalah kelompok kontrol yaitu kelompok
yang tidak divaksin BCG. Stimulasi BCG dilakukan secara
intraperitoneal, sebanyak 2 kali dengan interval 2 minggu
dengan dosis 0,1 ml. Dua hari setelah vaksinasi semua
kucing diinfeksi M.tuberculosis dengan dosis 105 cfu secara
intraperitoneal. Mycobacterium yang digunakan dalam pe-
nelitian ini adalah M.tuberculosis galur H37Rv yang dipero-
leh dari Balai Laboratorium Kesehatan Daerah, Daerah
Istimewa Yogyakarta.
Periode waktu pemeriksaan aktivitas makrofag
Aktifitas fagositosis makrofag peritoneum kucing
diukur pada minggu ke-1, 2, 12, 24 setelah dilakukan
infeksi. Pada masing-masing periode pengukuran aktivitas
makrofag digunakan 3 ekor kucing, dan masing-masing
kucing dibuat replikasi 3 kali.
Isolasi dan kultur makrofag peritoneum
Pada jadwal waktu yang telah ditentukan kucing dia-
nastesi dengan menggunakan AnesjectR (kethamine) deng-
an dosis 0,1 mg/kg BB, disuntikkan secara intramuskuler.
Setelah kucing tertidur, kemudian diletakkan pada posisi
terlentang (dorso lateral) pada gabus yang telah dilapisi
dengan aluminium foil steril, kemudian kulit bagian perut
didesinfeksi dengan alkohol 70%, selanjutnya kulit abdomen
dibuka dengan gunting steril, sehingga tampak lapisan
mesenterium dan cavum peritoneum beserta isinya dapat
terlihat dengan jelas.
Medium RPMI dingin kurang lebih 100 ml diinjek-
sikan ke dalam rongga peritoneum dan di-massage kurang
lebih 3 menit, kemudian medium diaspirasi kembali. Aspirat
yang telah diperoleh ditampung dalam tabung sentrifus
steril, kemudian disentrifus pada kecepatan 1200 rpm, 4oC
selama 10 menit. Supernatan dibuang kemudian ditambah-
kan 3 ml medium RPMI lengkap (mengandung FCS 10%)
pada pelet yang telah diperoleh (20).
Jumlah makrofag dihitung dengan menggunakan he-
mositometer kemudian diresuspensikan lagi dengan medi-
um RPMI lengkap sehingga didapat sel dengan kepadatan
2,5 x 106 sel/ml. Suspensi sel yang telah dihitung, kemudian
dikultur pada sumuran microplate 24 yang telah diberi cover
slips bulat, setiap sumuran 200 µl (5 x 105 sel), kemudian
diinkubasi dalam inkubator CO2 5%, 37oC selama 30 menit.
Setelah itu ditambahkan medium RPMI lengkap sebanyak
1ml pada setiap sumuran kemudian diinkubasikan lagi sela-
ma 2 jam. Selanjutnya sel dicuci dengan RPMI sebanyak 2
kali, kemudian ditambahkan medium RPMI lengkap 1 ml
pada tiap sumuran dan selanjutnya diinkubasikan selama
24 jam (20).
Uji Aktivitas fagositosis
Untuk mengukur kemampuan fagositosis makrofag
peritoneum kucing dilakukan dengan uji fagositosis non-
spesifik secara in vitro menurut Leijh et al. (20) dengan
menggunakan latex bead diameter 3 µm (Sigma Chem.
Co). Latex bead diresuspensikan dalam PBS sehingga
didapat konsentrasi 2,5 x 107/ml.
Setelah makrofag peritoneum kucing dikultur selama
sehari (24 jam), kemudian dicuci 2 kali dengan RPMI,
selanjutnya ditambahkan suspensi latex 200 µl/sumuran,
dan diinkubasikan selama 60 menit pada suhu 37oC, CO2
5%. Kultur dikeluarkan dari inkubator kemudian dicuci
dengan PBS 3 kali untuk menghilangkan partikel yang tidak
difagositosis, dan kemudian dikeringkan pada suhu ruangan
dan difiksasi dengan methanol absolute selama 30 detik,
selanjutnya methanol dibuang dan dikeringkan pada suhu
kamar. Setelah preparat kering, dilakukan pengecatan
dengan Giemsa 20% selama 30 menit. Selanjutnya hasil
 Prayitnaningsih, dkk., Perbandingan Antara Pemberian Asam Folat, ........
pengecatan dicuci dengan aquades, dan setelah kering
cover slips diangkat dari sumuran kultur dan dikeringkan
pada suhu kamar. Setelah kering ditaruh pada obyek gelas
untuk dilihat di bawah mikroskop cahaya (20).
Aktivitas fagositosis makrofag dinilai dari persentase
makrofag yang memfagositosis partikel latex, dihitung dari
100 makrofag yang terlihat di bawah mikroskop cahaya, dan
rerata jumlah partikel latex yang difagositosis oleh setiap
makrofag. Rerata jumlah partikel latex yang difagositosis
oleh setiap makrofag dihitung dengan cara membagi jumlah
partikel latex yang difagositosis dengan jumlah makrofag
yang memfagositosis partikel latex. Sebagai contoh, bila
pada saat membaca persentase makrofag yang memfagosi-
tosis partikel latex (yang dihitung dari 100 makrofag) ter-
dapat 10 sel yang memfagositosis partikel latex dan jumlah
partikel latex yang difagositosis sebanyak 30 partikel, maka
rerata jumlah partikel latex yang difagositosis oleh tiap
makrofag adalah 30:10 = 3 partikel (20)
Uji Sekresi ROI
Kemampuan makrofag peritoneum kucing dalam
mensekresi reactive oxygen reactive (ROI) diukur dengan
nitroblue tetrazolium (NBT) reduction assay. Pada assay ini
Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (PMA) akan menstimulasi
makrofag untuk mensekresi ROI, dan adanya ROI (anion
superoksida, O2-) akan menyebabkan NBT tereduksi se-
hingga membentuk presipitat formazan yang tidak terlarut
(20).
Untuk menstimulasi sekresi anion superoksida, kultur
sel distimulasi dengan PMA dengan konsentrasi akhir
125ng/ml. Urutan cara kerja adalah sebagai berikut. Kultur
makrofag dicuci 2 kali dengan RPMI, kemudian ditambah-
kan 500 µl larutan NBT (1mg/ml PBS) yang mengandung
125 ng/ml PMA untuk tiap sumuran dan diinkubasikan pada
incubator CO2 5%, 37oC selama 1 jam. Sel kemudian dicuci
dengan PBS 3 kali, dikeringkan pada suhu kamar dan
difiksasi dengan methanol absolute selama 30 detik.
a b
Gambar 1. Foto mikroskopik makrofag peritoneum kucing yang memfagositosis partikel latex secara in vitro setelah
infeksi M.tuberculosis dosis 1x105 cfu per ekor kucing (Pewarnaan Giemsa, 400x).
Terlihat makrofag yang memfagositosis latex (a): Kelompok yang divaksin BCG (b): Kelompok kontrol. Tanda panah menunjukkan
partikel latex yang difagositosis oleh makrofag.
Setelah kering dipulas dengan 2% Neutral Red Solution
selama 15 menit, kemudian dicuci dengan aquades.
Setelah kering cover slips diangkat dari sumuran microplate
untuk dilihat di bawah mikroskop cahaya dengan per-
besaran 400 kali (20).
Aktivitas makrofag untuk mensekresi ROI diukur
dengan menghitung persentase makrofag yang mensekresi
ROI yaitu yang menunjukkan pembentukan formazan
(warna gelap), dihitung 100 makrofag yang terlihat dibawah
mikroskop cahaya, dan skor derajat pembentukan formazan
oleh tiap 100 makrofag, dihitung dengan cara menjum-
lahkan besarnya skor yang dicapai oleh 100 makrofag. Skor
0 jika pada makrofag tidak terbentuk formazan, skor 1 jika
pada makrofag terbentuk formazan tetapi tidak memenuhi
seluruh sel, dan skor 2 jika formazan yang terbentuk meme-
nuhi seluruh sel. Sebagai contoh perhitungan skor, misal-
nya dari 100 makrofag terdapat 20 sel yang tidak mem-
bentuk formazan (besarnya skor 0), 40 sel membentuk
formazan tetapi tidak seluruh sel (besarnya skor 40) dan 40
sel membentuk formazan (besarnya skor 80), maka skor
pada 100 sel makrofag adalah 0 + 40 + 80 = 120 (20).
Analisis Data
Untuk mengetahui efek BCG terhadap aktivitas ma-
krofag dalam memfagositosis latex dan sekresi ROI antara
kelompok perlakuan dan kontrol, data hasil penghitungan
yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan uji T (21).
Dalam interprestasi dan penghitungan jumlah sel, se-
lalu menyertakan orang kedua untuk dapat diperoleh kon-
firmasi penghitungan dan interpretasi hasil yang obyektif.
HASIL PENELITIAN
Hasil foto mikroskopis aktivitas makrofag peritoneum
kucing yang memfagositosis partikel latex secara in vitro
pada kelompok kucing yang divaksin BCG dan kontrol (tidak
divaksin) disajikan pada Gambar 1.
 Jurnal Kedokteran Brawijaya, Vol. XXI, No. 2, Agustus 2005

Hasil kemampuan aktivitas fagositosis makrofag pada minggu pertama dan mencapai puncaknya pada
kelompok kucing yang divaksin BCG dan kelompok kucing minggu kedua, kemudian diikuti penurunan aktivitas sesuai
kontrol setelah diinfeksi dengan M.tuberculosis disajikan dengan berjalannya waktu sampai akhir penelitian. Hal yang
pada Gambar 2 dan 3. Seperti terlihat pada Gambar 2 serupa nampaknya juga terlihat pada pola hasil penghitung-
aktivitas fagositosis yang dinilai dari persentase makrofag an rata-rata latex yang difagositosis oleh setiap makrofag
yang memfagositosis latex, menunjukkan bahwa persen- (Gambar 3). Rata-rata latex yang difagositosis lebih tinggi
tase fagositosis kelompok kucing yang divaksin BCG lebih pada kelompok kucing yang divaksin BCG dibanding
tinggi dibandingkan dengan kelompok kontrol. Gambaran dengan kelompok kontrol, dan puncak rata-rata tertinggi
pola presentase makrofag yang memfagositosis latex bead latex yang difagositosis makrofag mencapai puncaknya
menunjukkan adanya kecenderungan adanya peningkatan pada minggu kedua setelah infeksi.
Persentase fagositosis (%)
180
160
140
120
100 Vaksin BCG
80 Kontrol
60
40
20
0
Mgg-1 Mgg-2 Mgg-12 Mgg-24
Waktu

Gambar 2. Rata-rata persentase makrofag yang memfagositosis latex kelompok kucing yang divaksin BCG dan
kelompok kontrol, setelah diinfeksi M.tuberculosis dosis 105 cfu

Latex yang difagositosis makrofag

10
9
8
7
6
Vaksin BCG
5
Kontrol
4
3
2
1
0
Mgg-1 Mgg-2 Mgg-12 Mgg-24
Waktu

Gambar 3. Rata-rata latex yang difagositosis oleh makrofag kelompok kucing yang divaksin BCG dan kelompok
kontrol, setelah diinfeksi M.tuberculosis dosis 105 cfu
Aktivitas makrofag peritoneum kucing yang formazan. Hasil foto mikroskopis aktivitas makrofag
mensekresi ROI diukur dengan NBT reduction assay, dan peritoneum kucing yang mensekresi ROI pada kelompok
diukur dari dua aspek yaitu persentase makrofag yang kucing yang divaksin BCG dan kontrol (tidak divaksin)
mensekresi ROI dan dari skor derajat pembentukan disajikan pada Gambar 4.
 Jurnal Kedokteran Brawijaya, Vol. XXI, No. 2, Agustus 2005

a b

Gambar 4. Foto mikroskopik makrofag peritoneum kucing yang mensekresi ROI setelah infeksi M.tuberculosis
dosis 1x105 cfu per ekor kucing (Pewarnaan Neutral Red, 400x).
Terlihat makrofag yang mensekresi ROI (a): Kelompok yang divaksin BCG (b): Kelompok kontrol. Tanda panah menunjukkan formazan
pada makrofag yang mensekresi ROI.
Hasil kemampuan aktivitas sekresi ROI makrofag divaksin BCG lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok
kelompok kucing yang divaksin BCG dan kelompok kucing kontrol. Gambaran pola presentase makrofag yang
kontrol setelah diinfeksi dengan M.tuberculosis disajikan mensekresi ROI menunjukkan adanya kecenderungan
pada Gambar 5 dan 6. Seperti terlihat pada Gambar 5 adanya peningkatan pada minggu pertama dan mencapai
aktivitas sekresi ROI yang dinilai dari persentase makrofag puncaknya pada minggu kedua, kemudian diikuti penurunan
yang mensekresi ROI, menunjukkan bahwa persentase aktivitas sekresi sesuai dengan berjalannya waktu sampai
makrofag yang mensekresi ROI kelompok kucing yang akhir penelitian.

Persentase sekresi ROi (%)

200
180
160
140
120
Vaksin BCG
100
Kontrol
80
60
40
20
0
Mgg-1 Mgg-2 Mgg-12 Mgg-24
Waktu

Gambar 3. Rata-rata persentase makrofag yang mensekresi ROI kelompok kucing yang divaksin BCG dan
kelompok kontrol, setelah diinfeksi M.tuberculosis dosis 105 cfu
Hasil penghitungan skor ROI nampaknya tertinggi skor ROI pada minggu kedua setelah infeksi.
memberikan gambaran yang serupa dengan persentase Setelah minggu kedua, skor ROI berangsur-angsur
makrofag yang mensekresi ROI (Gambar 6). Skor ROI yang menurun sesuai berjalannya waktu dan tetap lebih tinggi
disekresi oleh makrofag (formazan yang terbentuk) dibanding dengan kelompok kontrol sampai akhir penelitian.
diperoleh lebih tinggi pada kelompok kucing yang divaksin
BCG dibanding dengan kelompok kontrol, dengan puncak
 Prayitnaningsih, dkk., Perbandingan Antara Pemberian Asam Folat, ........
Skor ROI
350
300
250
200
150
100
50
0
Mgg-1 Mgg-2
Waktu
Gambar 4. Rata-rata skor ROI makrofag kelompok kucing yang divaksin BCG dan kelompok kontrol, setelah
diinfeksi M.tuberculosis dosis 105 cfu
DISKUSI
Hasil analisis dengan uji T terhadap aktivitas
fagositosis oleh makrofag menunjukkan bahwa terdapat
perbedaan yang bermakna (P < 0,01) antara persentase
makrofag yang memfagositosis latex pada kelompok yang
divaksin BCG dan kelompok kontrol yang tidak divaksin
BCG. Demikian juga hasil analisis terhadap rata-rata latex
yang difagositosis oleh tiap makrofag, menunjukkan adanya
perbedaan yang bermakna (P < 0,01) antara kelompok
kucing yang divaksin dan yang tidak divaksin BCG.
Dari hasil tersebut menunjukkan bahwa adanya
vaksinasi BCG dapat meningkatkan aktivitas fagositosis
makrofag peritoneum kucing secara signifikan. Menurut
Hennesey (10) BCG merupakan imunopotensiator yang
dapat menstimulasi imunitas seluler dengan mengaktifkan
aktivitas sel T dan makrofag dengan berbagai mekanisme.
Demangel et al. (l2) membuktikan bahwa pemberian BCG
secara in vitro dapat memacu maturasi sel-sel dendritik
(APC, antigen precenting cell) yang ditunjukkan dengan
adanya peningkatan ekspresi antigen MHC II, dan molekul
kostimulator CD80 dan CD86. Hasil penelitian mengenai
efek BCG pada aktivitas makrofag pada tikus BAL/c yang
diinfeksi dengan Sthaphylococcus aureus telah dilaporkan
oleh Djamiatun et al. (13). Demikian juga efek BCG dapat
meningkatkan daya bunuh terhadap infeksi Toxoplasma
gondii pada mencit telah dilaporkan oleh Muthmainah (22).
Data aktivitas fagositosis makrofag peritoneum kucing
penelitian yang diperoleh membuktikan bahwa vaksinasi
BCG pada kucing dapat meningkatkan aktivitas fagositosis
makrofag. Atau dengan kata lain BCG dapat bertindak
sebagai imunopotensiator yaitu dengan meningkatkan
secara bermakna kemampuan fagositosis makrofag dalam
usahanya untuk memuskahkan M.tuberculosis yang masuk
pada tubuh kucing.
Hasil analisis dengan uji T terhadap aktivitas sekresi
ROI oleh makrofag menunjukkan bahwa terdapat perbeda-
Vaksin BCG
Kontrol
Mgg-12 Mgg-24
an yang bermakna (P<0,01) antara persentase makrofag
yang mensekresi ROI pada kelompok yang divaksin BCG
dan kelompok kontrol yang tidak divaksinasi BCG. Demikian
juga hasil analisis terhadap skor ROI yang disekresi oleh
makrofag, menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna
(P<0,01) antara kelompok kucing yang divaksin dan yang
tidak divaksin BCG.
Dari hasil tersebut menunjukkan bahwa vaksinasi
BCG pada kucing dapat meningkatkan aktivitas makrofag
dalam sekresi ROI dalam usahanya untuk memusnahkan
M.tuburculosis yang masuk pada tubuh kucing. Hasil pene-
litian terdahulu menunjukkan bahwa adanya infeksi M.
tuberculosis pada kucing meningkatkan sekresi ROI oleh
makrofag dan mencapai puncaknya pada minggu kedua
setelah infeksi, yang dihubungkan dengan mekanisme
pembunuhan efektif terhadap M.tuberculosis (23). Pening-
katan aktivitas makrofag dalam sekresi ROI yang mencapai
puncaknya pada minggu kedua setelah infeksi, juga di-
dukung dengan hasil penelitian berikutnya yang menunjuk-
kan bahwa pada minggu kedua setelah infeksi selain
aktivitas sekresi ROI yang mencapai puncak, aktivitas
makrofag dalam fagositosis juga mencapai puncaknya pada
waktu yang sama (24). Reactive oxygen intermediate
merupakan produk oksidatif makrofag yang memainkan
peranan penting dalam mekanisme pembunuhan M.
tuberculosis, yang aktivitasnya diinduksi oleh sitokin IFN-γ
dan TNF-α (25, 26). Kemampuan BCG dalam menstimulasi
respon imun seluler khususnya dalam mekanisme sebagai
efektor oksidatif pada mencit telah banyak dilaporkan.
Supargiono (l4) mendemontrasikan peningkatan aktivitas
oksidatif makrofag mencit dalam membunuh intraery-
throcytic Plasmodium yoelli secara in vitro. Percobaan
serupa juga telah dilakukan oleh Shear cit Wijayanti (l5)
dalam pembunuhan Plasmodium knolesi, dan dalam
pembunuhan Plasmodium berghei (15). Aktivitas pembu-
nuhan oksidatif terhadap Toxoplasma gondii juga telah dila-
 Jurnal Kedokteran Brawijaya, Vol. XXI, No. 2, Agustus 2005

porkan oleh Muthmainah (22). Dari data hasil aktivitas
makrofag peritoneum kucing yang diperoleh, membuktikan
bahwa BCG juga mampu meningkatkan respon imun pada
kucing melalui peningkatan aktivitas sekresi ROI dalam
usahanya memproteksi untuk memusnahkan M.tuberculosis
yang masuk dalam tubuh kucing.
KESIMPULAN
Dari hasil dan diskusi tersebut di atas maka dapat
disimpulkan bahwa vaksinasi BCG pada kucing dapat
meningkatkan secara bermakna respon imun seluler, yaitu
melalui peningkatan aktivitas makrofag baik dalam aktifitas
fagositosis maupun sekresi ROI. Pengaruh peningkatan
aktivitas makrofag terlihat sejak awal infeksi M.tuberculosis
sampai akhir penelitian, hal ini dapat diartikan bahwa dam-
pak perlindungan pengaruh vaksinasi BCG yang diberikan
dapat dipertahankan dalam waktu yang lama, yang diha-
rapkan dalam aplikasinya di lapangan dapat memberikan
perlidungan yang efektif terhadap infeksi kuman tersebut.
UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis mengucapkan terimakasih kepada yang
terhormat Prof. Dr. Marsetyawan HNE, Prof. Dr.
Supargiono, dan dr.Yanri Wijayanti Subronto, Ph.D.
Fakultas Kedokteran, Universitas Gadjah Mada, yang telah
banyak memberikan petunjuk, masukan, dan saran, selama
melakukan penelitian, sehingga beberapa kendala selama
penelitian dapat teratasi. Ucapan terimakasih juga penulis
haturkan kepada Kepala Laboratorium Hayati, Universitas
Gadjah Mada, yang telah memberikan ijin dan fasilitas
selama penelitian, dan Drh. Wieklati, MS., selaku Kepala
Bagian Mikrobiologi, Balai Laboratorium Kesehatan Daerah,
Daerah Istimewa Yogyakarta, yang telah memberikan
bantuan untuk memperoleh isolat dan fasilitas selama
penelitian. Penulis juga mengucapkan terimakasih kepada
Sdr. Suprihatin yang telah membantu selama penelitian
berlangsung, dan semua pihak yang tidak dapat penulis
sebutkan satu persatu, sehingga selesainya penelitian ini.

DAFTAR KEPUSTAKAAN
1. Raviglione MC, Snider Jr DE, and Kochi A. Global Epidemiologu of Tuberculosis: Morbidity and Mortality of a Wordwide
Epidemic. JAVMA 1999; 273; 220-226.
2. Dolin JP. Global Tuberculosis Incidencs and Mortality during 1990-2000. Buletin World Health Organization 1994; 72:
(2): 213-220.
3. Manaf A. Permasalahan Pemberantasan Tuberkulosis di Indonesia. Seminar Nasional Tuberkulosis dan Lepra.
Yogyakarta: Pusat Kedokteran Tropis Universitas Gadjah Mada; 1997.
4. Snider WR. Tuberculosis in Canine and Feline: Review of the literature. American Review Respiratory 1971; 104: 877-
887.
5. Anonim. The Merck Veterinary Manual. A Handbook of Diagnosis, Therapy, and Disease Prevention and Control for the
Veterinarian. 8th Ed. USA: Merck and Co., Inc. Rhaway NJ; 1998; 492.
6. Bennet M and Gaskell RM. Feline and Canine Infectious Diseases. Berlin, Germany: Blackwell Wissenschafts-verlag
GmbH kurfurstendamm; 1996; 130-132.
7. Montali RJ, Mikota SK, and Cheng lI. Mycobacterium Tuberculosis in Zoo and Wildlife Species. Rev. sci Tech., 2001;
291-303.
8. Huebner RE dan Comstock GW. BCG Vaccine. In: Friedman, L.N. Ed. Tuberculosis Current Concepts and Treatment.
Florida: CRS Press; l994; 335-344.
9. Huebner RE. BCG Vaccination in the Control of Tuberculosis. In: Shinnick, T.M. Ed. Tuberculosis. Berlin: Springer;
1996; 263-279.
10. Hennesey LR dan Baker JR. Immunomodulator dalam Basic and Clinical Immunology. Ed. Stites DP, Terr Al, 8th Ed.
Conecticut: Appleton and Lange; l994; 781-785.
11. Yaqoob P dan Calder PC. The Effect of Dietary Lipid Manipulation on The Production of murine T-cell Derived Cytokine.
Cytokine; 1995; 7: 548-553.
12. Demangel C, Bean AG, Martin E, Feng CG. Protection Against Aerosol Mycobacterium tuberculosis using
Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guerin infected dendritic cell. Eur. J. Immunol 1999; 29 (6): 1972-1979.
13. Djamiatun K, Dharmana E, Kristina T, Indar R. Pengaruh vitamin A dan BCG pada produksi TNF-α dan aktivitas
fagositosis makrofag terhadap Staphylococcus aureus. Laporan Akhir Tahun I Risbin Iptekdok. Yogyakarta: Fakultas
Kedokteran, Univesitas Gadjah Mada. l998.
14. Supargiono. Production, Proliferation and Functional Activities of Mononuclear Phagocytes during Plasmodium vinkei
petteri Infection in Mice. [PhD Thesis] London, UK: King’s College; l993; 37.
 Jurnal Kedokteran Brawijaya, Vol. XXI, No. 2, Agustus 2005

15. Wijayanti MA. Peranan makrofag dalam imunitas terhadap infeksi malaria: Kajian kemampuan fagositosis dan sekresi
ROI makrofag peritoneum mencit yang diimunisasi dan tidak diimnisasi in vitro. [Thesis]. Yogyakarta: Program Studi
Ilmu Kedokteran Tropis, Pascasarjana, Universitas Gadjah Mada. l996.
16. Tjahajati I, Prodjoharjono S, Soebono H, Asmara W, Subronto YW dan Harada N. Profil Sitokin Th1-Th2 Terhadap
Infeksi M.tuberculosis pada Kucing. Media Medika Indonesiana 2004; 39(3):137-145.
17. Graham A, Rook W, dan Bloom BR. Mechanism of Phathogenesis in Tuberculosis. In: Tuberculosis Pathogenesis and
Control. Bloom, B.R. Editor. Washington, DC: American Society for Microbiology; l994; 485-502.
18. Ryan JL. Bacterial Disease in Medical Immunology, 9th Ed. Stites DP, Terr AI, Parslow TG. London: Prentice-Hall
International Inc; l997; 627-636.
19. Flyn JL, and Chan J. Immunology of Tuberculosis. Annu.Rev.Immunol 2001; 19: 93-129.
20. Leijh PCJ, Furh RV, dan Zwet TLV. In Vitro Determination of Phagocyte and Intracellular Killing by Polymorphonuclear
and Mononuclear Phagocyte. In: Weir DM Ed., Cellular Immunology. London: Blackwell Scientific Publication; l986; 46.1
- 46.21.
21. Kinnear PR and Gray CD. SPSS for Window Made Simple, 3rd Ed. Lawrence Erbaum, l999.
22. Muthmainah. Studi tentang aktivitas makrofag mencit yang distimulasi dengan protein soluble Toxoplasma dan BCG
selama infeksi Toxoplasma gondii. [Thesis]. Yogyakarta: Program Studi Ilmu Kedokteran Tropis, Pascasarjana,
Universitas Gadjah Mada. 2002.
23. Tjahajati I, Prodjoharjono S, Soebono H, Asmara W, dan Harada N. Aktivitas Sekresi Reactive Oxygen Intermediate
(ROI) pada Makrofag Peritoneum Kucing yang Diinfeksi dengan M.tuberculosis. Yogyakarta: Journal Sain Veteriner
2004b, Vol XXII (1):46-53.
24. Tjahajati I, Prodjoharjono S, Soebono H, Asmara W, dan Harada N. Peningkatan Aktivitas Fagositosis pada Makrofag
Peritoneum Kucing yang Diinfeksi dengan M.tuberculosis. Yogyakarta: Journal Sain Veteriner 2004c, Vol XXII (2):61-65.
25. Barnes P, Modlin RL and Ellner JJ. T-cell responses and cytokines. In: B Bloom, editor. Tuberculosis: Pathogenesis,
Protection, and Control. Washington, DC: ASM Press; 1994, 417-435.
26. Akaki T, Tomioka H, Shimizu, Dekio S, dan Sato K. Comparative Roles of Free Fatty Acids with Reactive Nitrogen
Intermediates and Reactive Oxygen Intermediates in Expression of the Anti-Microbial Activity of Macrophages Agains
Mycobacterium tuberculosis. Clinical & Experimental Immunology 2000; 121: 320-332.