AKTIVITAS ANTIOKSIDAN FRAKSI AKTIF dari EKSTRAK METANOLIK

KULIT BUAH MANGGIS (Garcinia mangostana, L.)TERHADAP

1,1 Difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH)

Kadar Ismah, Mamik Ponco Rahayu, Titik Sunarni

Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi, Surakarta, Indonesia
ABSTRACT
Antioxidant is an essential compound to keep man’s health due to its function as radicals scavenging.
Mangosteen (Garcinia mangostana, L.) peels contain polyphenol compound. Flavonoid, tannin, and
xanton can be used as antioxidant. The aim of the experiment was to find out radicals scavenging
antioxidant activity of mangosteen (Garcinia mangostana, L) peels methanolic etract fractions,
potency of tha fractions, the most active fraction as radicals scavenging, and also the antioxidant
activity in each fraction with methanolic extract and positive control of mangosteen peels against
DPPH radical with IC50 parameter.

Mangosteen peels were extracted by maceration method using methanol as solvent. The obtained
extract was partitioned with water and n-hexane, and then with cloroform and ethyl acetate. The
antioxidant activities of the obtained fractions were tested against DPPH radical. The radicals
scavenging activities were measured with spectrophotometer at 517 nm wavelength and the IC50
values were determined. The experiment used Rutin as positive control.

The result of the experiment showed that mangosteen peels had antioxidant activity with IC50 values
of rutin, undissolve fraction, ethyl acetate fraction, methanolic etract, water fraction, chloroform and
n-hexane fractions, were 5.11 ppm, 5.55 ppm, 9.26 ppm, 21.24 ppm, and 29.49 oom, 38.50 ppm, and
57.51 ppm respectively. Fraction with the highest antioxidant activity belonged to undissolve fraction.

Keyworlds : Antioxidant, Garciana mangostana, L., DPPH, Methanolic Extract Fractions.

Pendahuluan kemampuannya menangkap radikal bebas.

Radikal bebas adalah molekul atau atom
yang mempunyai satu atau lebih elektron
yang tidak berpasangan dan bersifat sangat
reaktif (Fessendden 1986). Secara tidak
langsung, senyawa radikal bebas tersebut
akan menyebabkan terjadinya suatu
penyakit seperti penyakit liver, kanker,
dan kondisi yang berhubungan dengan
umur seperti alzheimer (Hernani dan
Raharjo 2005).
Antioksidan adalah suatu senyawa yang
dapat menetralkan atau melawan bahan
toksik (radikal bebas) dan menghambat
terjadinya oksidasi pada sel sehingga
mengurangi kerusakan sel. Aktivitas
antioksidan senyawa dapat diukur dari
Senyawa-senyawa yang tergabung dalam
antioksidan ini akan menyerahkan satu
atau lebih elektronnya kepada radikal
bebas sehingga menjadi bentuk molekul
yang normal kembali dan menghentikan
berbagai kerusakan yang ditimbulkan
(Caroline 2005).
Penelitian yang dilakukan terhadap spesies
Garcinia, diperoleh beberapa senyawa
yang memiliki aktifitas biologis dan
farmakologis seperti sitotoksik,
antiinflamasi, antimikroba, antifungi,
dapat menghambat xanthin oksidase dan
monoamin oksidase serta mempunyai efek
antioksidan. Spesies Garcinia yang telah
diteliti antara lain Garcinia dulcis,
Garcinia subelliptica, Garcinia nervosa,
Garcinia forbessi, Garcinia livingstonei,
Garcinia latissima, Garcinia mangostana,
Garcinia lateriflora, Garcinia cowa,
Garcinia assigu, dan Garcinia parvifolia
(Berna 2003).
Garcinia mangostana Linn. (manggis),
merupakan keluarga Guttiferae adalah
tanaman asli Thailand dan negara Asia
Tenggara lainnya, buah manggis adalah
salah satu buah populer yang di kenal
dengan sebutan “Ratu buah-buahan” .
Buah manggis telah dikenal mempunyai
nilai baik bagi pengobatan dan secara
tradisional dapat digunakan untuk
pengobatan sakit perut, diare, disentri, luka
yang terinfeksi, nanah, maag kronis, sakit
keputihan dan gonorrhea. Studi fitokimia
menunjukkan bahwa kulit buah manggis
mengandung metabolit sekunder seperti
tanin, triterpen, antocyanin, xanthon,
polisakarida, senyawa fenol, vitamin B,
Metode penelitian
Alat dan Bahan
Alat penyarian dan partisi adalah panci
untuk maserasi, corong pisah, vacum
rotaevaporator, alat gelas. Alat
kromatografi dan spektrofotometri adalah
bejana kromatografi (chamber), lampu
UV, pipa kapiler, oven, spektrofotometer
UV-Vis, timbangan analisis, kuvet, labu
takar. Alat lain yang digunakan seperti
Stopwatch, timbangan miligram,
waterbath, timbangan analitik, beaker
glass, pipet volume, mikropipet, pipet
ukur, siring. Bahan utama yang digunakan
dalam penelitian adalah kulit manggis
yang dibeli di Tawangmangu karanganyar.
Bahan penyari dan partisi adalah metanol
absolut sebagai pelarut dalam maserasi,
metanol p.a. sebagai pelarut DPPH,
n-heksan, kloroform, etil asetat, dan
aquadest untuk fraksinasi. DPPH sebagai
radikal bebas, rutin sebagai kontrol positif.
Lempeng silika gel GF254 untuk KLT,
kloroform, etil asetat untuk fase gerak,
B2, dan C, dan senyawa bioaktif lainnya
(Nuttavut et al. 2007). Kandungan kimia
buah manggis adalah xanton, mangostin,
garsinon, flavonoid dan tanin (Ivan 2007).
Kulit buah manggis merupakan limbah
yang dimanfaatkan oleh masyarakat
Indonesia sebagai obat tradisional
(Syamsudin 2006).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui
aktivitas antioksidan penangkap radikal
bebas fraksi n-heksan, kloroform, etil
asetat, air dan fraksi tidak terlarut ekstrak
metanolik kulit buah manggis (Garcinia
mangostana, L.), berapa besar potensi
aktivitas antioksidan fraksi-fraksi kulit
manggis, manakah fraksi yang paling aktif,
dan bagaimanakah aktivitas antioksidan
diantara masing-masing fraksi dengan
ekstrak metanolik dan kontrol positif
terhadap radikal bebas DPPH dengan
parameter nilai IC50.
larutan FeCl3, serbuk Mg, Asam klorida
pekat, etanol, asam formiat.
Penelitian ini menggunakan kulit buah
manggis yang dikumpulkan dari daerah
Magetan. Kulit batang yang dikeringkan
pada suhu 25o C kemudian diserbuk.
Serbuk 500 gram dimaserasi dengan
methanol sebanyak 3750 mililiter.
Maserasi dilakukan selama tujuh hari
dengan penggojokan pada suhu kamar.
Setelah tujuh hari pisahkan sari dan ampas.
Ampas dikeringanginkan kemudian
ekstrak dipekatkan dengan rotary
evaporator (suhu tetap dijaga pada 40o C –
50o C) sampai pelarut metanol habis,
selanjutnya disebut ekstrak metanolik kulit
manggis. Sebanyak 7,5 gram ekstrak
metanolik kulit buah manggis di dipartisi
dengan aquadest 75 ml dan n-heksan 75 ml
(1:1) sebanyak tiga kali, dengan corong
pisah dan sari n-heksan dikumpulkan
kemudian diuapkan di atas waterbath, sari
n-heksan yang kering ini selanjutnya
disebut fraksi n-heksan. Lapisan berair sisa
partisi dengan n-heksan kemudian dipartisi
lagi dengan 75 ml klorofrom sebanyak tiga
kali. Lapisan klorofrom dipisahkan dan
dipekatkan di atas waterbath dan diperoleh
fraksi kloroform. Lapisan berair sisa partisi
dengan klorofrom kemudian dipartisi lagi
dengan 75 ml etil asetat sebanyak 3 kali.
Lapisan etil asetat dipisahkan dan
dipekatkan di atas waterbath dan diperoleh
fraksi etil asetat. Bagian bebas etil asetat,
kloroform dan n-heksan adalah fraksi air
yang kemudian disaring, fraksi tak terlarut
dikeringkan, fraksi air diuapkan di atas
waterbath sampai bobotnya konstan, yang
kemudian disebut fraksi air. Pemeriksaan
dilanjutkan dengan kromatografi lapis
tipis, dari masing-masing fraksi dengan
menggunakan fase gerak kloroform dan
etil asetat (7:3), dengan menggunakan
reaksi semprot FeCl3, sitroborat dan
amoniak. Bercak yang tidak terelusi
menggunakan fraksi gerak metanol dan
asam formiat (10 ml: 3 tetes).
Berat wadah
Berat awal Bahan yang
(gram) dihasilkan Kosong
(gram)
Hasil dan Pembahasan
Proses maserasi dilakukan dalam keadaan
tertutup agar metanol tidak menguap pada
suhu kamar. Hasil ekstrak kental metanolik
yang didapatkan dari 500 gram serbuk
adalah 67,354 gram. Setelah didapatkan
ekstrak kental metanolik kemudian
dilakukan partisi dengan n-heksan,
kloroform, etil asetat, dan air. Hasil partisi
dapat dilihat pada Tabel
Tabel 1. Hasil rendemen fraksi n-heksan,
kloroform, etil astat, air dan fraksi tidak
terlarut ekstrak metanolik kulit buah
manggis
Bagian Rendemen
+ Zat kental (%)
(gram) (gram)

500 serbuk
kulit Ekstrak metanolik 120,709 188,063 67,354 13
manggis

Fraksi n-heksan 262,200 262,420 0,220 3

Fraksi kloroform 262,700 266,270 3,570 47
7,560
ekstrak Fraksi etil asetat 173,532 173,993 0,461 6
metanol
Fraksi air 175,509 177,781 2,272 30
Fraksi tak terlarut 0,583 0,874 0,291 4

Analisa kualitatif dilakukan terhadap
ekstrak metanolik, fraksi n-heksan,
kloroform, etil asetat, air, dan fraksi tidak
terlarut ekstrak metanolik kulit buah
manggis. Identifikasi senyawa polifenol
dilakukan dengan kromatografi lapis tipis.
Fase diam yang digunakan adalah silikagel
GF254 dan fase gerak yang digunakan
adalah kloroform : etil asetat dengan
perbandingan berturut-turut 7 : 3 dan
pendeteksi yang digunakan adalah
sitroborat dan FeCl3. Hasil kromatogram
dapat dilihat di Gambar 1
 100 Keterangan:

80 A. Bercak ektrak metanolik

B. Bercak fraksi n-heksan
60 C. Bercak fraksi kloroform
D. Bercak fraksi etil asetat
E. Bercak fraksi air
40 F. Bercak fraksi tak terlarut
20

0
A B C D E F

Gambar 1. gambar hasil KLT, ekstrak metanolik, fraksi n-heksan, fraksi kloroform, dan fraksi etil asetat
ekstrak metanolik kulit buah manggis dengan fase diam silikagel Gf 254 dan fase gerak kloform :
etil asetat (7 : 3) setelah direaksikan dengan sitroborat pada UV 366.

Tabel 2. Kromatogram hasil KLT

No Nama bercak hRf Warna bercak setelah di Penafsiran

semprot dengan kandungan
Uap amoniak FeCl3 / vis Sitroborat
NH3 / vis
A. Ekstrak metanolik 92,50 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
86,25 Kuning Coklat Merah kekuning Xanton
atau pinang
masak
72,50 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
63,75 Kuning Coklat Merah Xanton
kekuningan
50 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
B. N-heksan 90 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
82,5 Kuning Coklat Merah Xanton
kekuningan
71,25 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
60 Kuning Coklat Merah Xanton
kekuningan
C. Kloroform 90 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
82,50 Kuning Coklat Merah Xanton
kekuningan
70 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
60 Kuning Coklat Merah Xanton
kekuningan
 46,25 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
38,75 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
D. Etil asetat 88,75 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
81,25 Kuning Coklat Merah Xanton
kekuningan
67,50 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
58,75 Kuning Coklat Merah Xanton
kekuningan
45 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
38,75 Kuning Coklat Kuning Flavonoid
26,25 Kuning Coklat Biru terang Aglikon flavonoid
16,25 Kuning Coklat Biru Aglikon flavonoid

Hasil KLT pada gambar pada UV 254 nm, sedangkan pada UV 366
menunjukkan nilai hRf dengan nm bercak berfluoresensi merah
menggunakan fase gerak kloroform : etil kekuningan atau pinang masak untuk
asetat (7 : 3), ternyata bercak antara senyawa xanton, untuk senyawa flavonoid
ekstrak metanolik dan senyawa hasil berwarna kuning, warna biru muda pada
fraksinasi hampir sama, hanya yang noda bercak etil asetat, kemungkinan
membedakannya adalah jumlah bercak adalah aglikon dari flavonoid yang
yang nampak dalam plat. Bercak pada merupakan suatu senyawa polifenol, yang
silika gel GF254, mengalami peredaman masih terikat kuat pada gugus gulanya.
dengan muncul sebagai warna noda hitam,

100

80

60
40
20
0

Gambar 6. gambar kromatogram fraksi air dan fraksi tidak terlarut

dengan fase diam silikagel Gf 254 dan fase gerak metanol : asam
formiat ( 10 ml : 3 tetes ) pada UV 366.

Keterangan :
E. Fraksi air

F. Fraksi tidak terlarut

 Hasil KLT menunjukkan bahwa
pada fraksi air dan fraksi tidak terlarut,
dengan menggunakan fase gerak
kloroform dan etil asetat perbandingan 7 :
3, bercak tidak terelusi sempurna bersama
dengan fase geraknya yang bersifat semi
polar, hal ini dapat membuktikan bahwa
bercak fraksi air dan residu bersifat lebih
polar di bandingkan dengan hasil fraksi
Tabel 3. Hasil kromatogram KLT
Kode Nama Bahan HRf
Bercak
Uap amoniak
NH3 / vis
E. Fraksi Air 52 Pinang masak
F. Fraksi tidak 80 Kuning
terlarut
64 Pinang masak
Deteksi senyawa polifenol juga
dilakukan dengan menggunakan pereaksi
semprot FeCl3, yang ditunjukkan warna
biru bila trihidroksi fenolik, dan warna
hijau bila dihidroksi fenolik, sedangkan
untuk warna hitam yang kuat, merah, dan
coklat untuk senyawa fenolik lainnya, hasil
kromatogram yang telah kita semprot
menunjukkan warna coklat untuk ekstrak
metanolik, fraksi n-heksan, kloroform,
sedangkan untuk fraksi etil asetat, air, dan
fraksi tidak terlarut menunjukkan warna
hitam setelah disemprot dengan pereaksi
semprot FeCl3. Bercak pada fraksi air, dan
fraksi tidak terlarut dengan menggunakan
fase gerak kloroform dan etil asetat ( 7 : 3
), ternyata bercak tidak dapat terelusi
dengan sempurna, hal ini dikarenakan
senyawa yang tersari dalam fraksi air dan
lainnya dan juga ekstrak metanolik kulit
buah manggis. Mengetahui Rf dari fraksi
air dan fraksi tidak terlarut, maka
menggunakan fase gerak metanol : asam
formiat, dengan perbandingan 10 ml
metanol ditambah 3 tetes asam formiat,
hasil KLT yang dapat di lihat pada gambar
2 dan tabel 3.
Warna bercak disemprot dengan Penafsiran
Kandungan
FeCl3 / vis Sitroborat
Hitam Merah kekuningan Xanton
atau pinang masak
Biru muda Aglikon flavonoid
Hitam
Merah kekuningan Xanton
atau pinang masak
fraksi tidak terlarut masih terikat kuat
dengan gugus gulanya. Menurut Harborne
(1987) satu xanton yaitu mangiferin larut
dalam air. Fase gerak yang digunakan
untuk suatu senyawa yang masih terikat
kuat dengan gugus gulanya, menggunakan
metanol dan asam formiat dengan
perbandingan (10 ml : 3 tetes), hasil dari
percobaan bercak air dan fraksi tidak
terlarut terelusi, fraksi air menunjukkan
satu bercak sedangkan fraksi tidak terlarut
dua bercak.
Bercak pada fraksi air berwarna
merah kekuningan atau pinang masak
setelah diuapi amonoia, yang
menunjukkan adanya xanton dalam fraksi
air, fraksi tidak terlarut menunjukkan dua
bercak yang terelusi, bercak yang pertama
berwarna merah kekuningan atau pinang
masak dan bercak yang kedua berwana
biru muda.
Data selanjutnya dihitung dengan
persamaan regresi linier berdasarkan
rumus Y = a + bx dengan metode probit.
Persamaan regresi linier digunakan untuk
menghitung IC50, yakni daya konsentrasi
larutan uji yang mampu meredam 50 %
larutan radikal bebas DPPH. Semakin kecil
harga IC50, maka semakin efektif sebagai
antioksidan. Tabel 7 memperlihatkan
keefektifan rutin (kontrol positif)
mempunyai perbedaan yang tidak terlalu
mencolok dari aktivitas senyawa yang
terdapat pada ekstrak kulit buah manggis.
Residu memiliki aktivitas antioksidan
terbesar dilihat dari harga IC50, yang
selanjutnya diikuti oleh aktivitas fraksi etil
asetat, ekstrak metanolik kulit buah
manggis, fraksi air, fraksi kloroform, dan
fraksi n-heksan. Secara berturut-turut
harga IC50nya adalah 5,55 ppm, 21,24
ppm, 29,49 ppm, 38,50 ppm, dan 57,51
ppm. Harga IC50 dapat dilihat pada Tabel
4.

Tabel 4. Nilai IC50 dari masing-masing zat uji

Harga IC50 (ppm)
Fraksi Fraksi
Replik Ekstrak Fraksi Fraksi
Fraksi n- air tidak
asi Rutin metanoli klorofor etil
heksan terlaru
k m asetat
t
1. 5,06 21,08 57,36 38,26 9,15 28,64 5,61
2. 5,18 20,75 57,39 38,60 9,41 30,67 5,32
3. 5,09 21,90 57,78 38,65 9,21 29,15 5,71
Rata- 5,11 21,24 57,51 38,50 9,26 29,49 5,55
rata ± ± 0,592 ± 0,234 ± 0,212 ± ±1,056 ±0,203
X± 0,062 0,136
SD

Gambar 3. Aktivitas antioksidan penangkap radikal bebas berdasar harga IC50

 Tiap fase memiliki persen
peredaman rata-rata yang berbeda, dapat
dilihat perbedaannya melalui Gambar 3.
Fraksi tidak terlarut memiliki harga IC50
terkecil yakni 5,55 ppm dibandingkan
dengan ekstrak metanol dan fraksi lainnya,
dimana hal tersebut mengartikan bahwa
fraksi tidak terlarut lebih potensial
meredam radikal dibandingkan fraksi
lainnya.
Persen peredaman radikal bebas
ekstrak metanolik lebih besar di
bandingkan fraksi n-heksan, kloroform dan
air. Fraksi n-heksan punya aktifitas
peredaman kecil dibandingkan fraksi
lainnya, sedangkan kloroform mempunyai
aktifitas peredaman yang lebih tinggi
dibandingkan dengan n-heksan, tetapi
lebih kecil dibandingkan dengan fraksi etil
asetat, fraksi air, fraksi tidak terlarut, fraksi
etil asetat mempunyai persen peredaman
radikal bebas lebih tinggi dibandingkan
dengan fraksi n-heksan, kloroform, air dan
ekstrak metanolik. Fraksi air persen
peredaman radikal bebasnya lebih tinggi
dibandingkan dengan kloroform dan
n-heksan, tapi lebih rendah dibandingkan
etil asetat dan fraksi tidak terlarut. Maka
dapat disimpulkan bahwa fraksi n-heksan
mempunyai aktifitas peredam radikal
bebas terendah dibandingkan fraksi
lainnya, dan fraksi tidak terlarut punya
aktifitas terbesar peredam radikal bebas,
namun lebih rendah dibandingkan kontrol
positifnya (rutin).
Fraksi tidak terlarut kemungkinan
mengandung senyawa xanton yang masih
terikat kuat dengan gugus gulanya dan
suatu aglikon dari flavonoid yang masih
terikat dengan gugus gulanya. Aglikon
flavonoid adalah suatu senyawa polifenol
oleh karena itu punya sifat kimia senyawa
fenol, yaitu bersifat agak asam sehingga
dapat larut dalam basa. Penyebab fraksi
tidak terlarut paling aktif diantara semua
hasil fraksinasi adalah dalam fraksi tidak
terlarut terkandung senyawa xanton yang
masih terikat kuat dengan gugus gulanya
dan juga mengandung suatu senyawa
aglikon flavonoid yang berupa suatu
senyawa polifenol.
KESIMPULAN
Uji aktivitas kulit buah manggis pada
penelitian ini dapat diambil kesimpulan
yaitu; pertama, fraksi fraksi yang diperoleh
dari ekstrak metanolik kulit buah manggis
yaitu n-heksan, kloroform, etil asetat, air
dan fraksi tidak terlarut memiliki aktivitas
antioksidan. Kedua, nilai IC50, ekstrak
metanolik, fraksi n-heksan, fraksi
kloroform, fraksi etil asetat, fraksi air dan
fraksi tidak terlarut secara berturut-turut
memiliki aktivitas antioksidan dengan IC50
sebesar 21,24 ppm, 57,51 ppm, 38,50 ppm,
9,26 ppm, 29,49 ppm dan 5,55 ppm.
Ketiga, dari lima fraksi yang diperoleh
fraksi yang paling aktif adalah fraksi tidak
terlarut dengan nilai IC50 sebesar 5,55
ppm. Keempat, aktivitas antioksidan fraksi
paling aktif yaitu fraksi tidak terlarut (IC50
sebesar 5,55 ppm), lebih kuat dibanding
dengan ekstrak metanolik (IC50 sebesar
21,24 ppm), lebih lemah dibanding dengan
kontrol positif (IC50 sebesar 5,11 ppm).
DAFTAR PUSTAKA
Fessenden, R.J.,Fessenden, J.S.,1986,
Kimia Organik, jilid I, Edisi
III,223-226,238-240, Alih
Bahasa : A.H. Pudjaatmaka,
Erlangga, Jakarta.
Hernani dan Raharjo M, 2005. Tanaman
Berkhasiat Antioksidan, cetakan
kesatu. Penebar Swadaya,
Jakarta, hal.9,16-20.
Caroline, 2005, Uji Aktivitas Antioksidan
Antiradikal Bebas dan Penentuan
EC50 dari Daun Cincau Hijau
(Cycla barbata Miers), Jurnal
Obat Bahan Alam, Vol 4, 11, 12,
14.
Berna, 2003, Isolasi dan karakterisasi
senyawa kimia dari ekstrak n-
 heksan kulit batang Garcinia
rigida(online),
(http://pkbt.ipb.ac.id/pages/exsu
m/2003-manggis.pdf di akses 14
februari 2010).

Nuttavut, Youn, Primchaenien,2007,

Antioxidant and Cytoprotective
Activities of Methanolic Extract
from Garcinia mangostana Hulls
(online),(http:
//www.scienceasia.org/2007.33.n
3/v33_283_292.pdf di akses 8
Februari 2010)

Ivan, Titi, Yasmiwar, 2007, Isolasi dan

Identifikasi Senyawa Golongan
Xanton dari Kulit Buah Manggis
(Online), (http://
journal.uii.ac.id/index.php/JIF/art
icle/viewFile/471/382, diakses 9
Februari 2010).

Syamsudin., Mustofa., Wahyuono

Subagus., Santo, S.T., Marleta
R., 2006, Efek Antiplasmodium
dari Ekstrak kulit buah
manggis(Garcinia mangostana)
secara In Vitro dan In Vivo,
Majalah Obat Tradisional, Vol
11.

Markham, K.R., 1988, Cara

Mengidentifikasi Flavonoid,
diterjemahkan oleh Kosasih
Padmawinata, 15-16,19,21 ITB.
Bandung.

Harborne, J, B., 1987, Metode Fitokimia

Penuntun Cara Modern
Menganalisa Tumbuhan, Alih
bahasa : K. Padmawinata, 102-
104, ITB, Bandung.