1.

Introduction

Many animals have adapted to hypoxic environments by increasing their

haemoglobin-oxygen (Hb-O2) affinity. This affinity is usually expressed in relation to the
oxyhaemoglobin dissociation curve (ODC) as the partial pressure of O2 (PO2) at which Hb
is 50% saturated (P50). The direction of shift of the ODC, if any, is germane to the
mechanism of acclimatization of humans to altitude. A decreased P50 favours O2 loading
at the lung while an increased P50 favours O2 off-loading at the tissues (Lenfant et al.,
1971; Winslow, 2007). Investigators have argued the advantage of both changes (Barcroft,
1923; Lenfant and Sullivan, 1971), but animals that have adapted to altitude, such as rats,
camillae, geese, and frogs among others, have lower P50s than their low altitude cousins
(Banchero et al., 1971; Lenfant et al., 1971; Reynafarje et al., 1975; Johansen et al., 1976).
P50 can be determined in-vitro by drawing blood at the upper (most oxygenated) end
of the ODC and measuring oxyhaemoglobin concentration while progressively reducing
PO2 at constant partial pressure of CO2 (PCO2) in the sample (Astrup et al., 1965; Edwards
and Martin, 1966; Duvelleroy et al., 1970). Since P50 is also influenced by pH and PCO2
due to the Bohr effect, the P50 is usually determined at a standard pH 7.4 and PCO 2 - 40
mmHg (standard P50). In some studies the same pH and PCO 2 as measured at the time the
blood sample is drawn are used to determine the P 50; in this case it is referred to as
physiological P50.
A brief historical survey of investigations of the P50 at altitude is provided by
Winslow (2007). In 1923 Barcroft (1923) observed that Peruvian natives had lower P50
when dwelling at 4300 m than at sea level. An expedition in 1964 to confirm these
findings found instead that the in-vitro standard P50 of Peruvian highlanders was shifted to
the right (Hurtado, 1964). The in-vitro standard P50 in acutely acclimatizing lowlanders
was reported as increased, accompanied by a measured increase in 2,3-DPG (Benesch and
Benesch, 1967; Chanutin and Curnish, 1967). Later both Morpurgo et al. (1970) and
Torrance et al. (1970) reported a higher standard in-vitro P50 in Andean highlanders
compared to lowlanders. Lenfant et al. (1968, 1971) argued that the increase in 2,3-DPG
serves as metabolic compensation forthe respiratory alkalosis resulting from the acute
hypoxic ventilatory response.
In 1981 Winslow et al. (1981) revisited the Andes and repeated the measure of the
ODC using methods that could be performed on freshly drawn blood on location
(Winslow et al., 1978), thereby avoiding the degradation of 2,3-DPG that occurs when
blood is stored. They found that indeed, the standard in-vitro assay showed that the P50
was slightly increased and related to the increase in the concentration of 2,3-DPG. Their
analysis of blood, maintaining the PCO2 and pH at the time the blood was drawn, showed
that the compensatory respiratory alkalosis of altitude offsets the effect of 2,3-DPG,
resulting in P50 being unchanged from that in natives living at sea level. However,
Winslow et al. (1984) found that on ascent to over 6300 m there was a reduction in the
physiological P50 due to the effect of the enhanced respiratory alkalosis at this altitude
dominating over the effect of increases in 2,3-DPG. Mairbaurl et al. (1990) and Wagner et
al. (2007) studied lowlanders during progressive ascent to altitude and found the initial
decrease in physiological in-vitro P50 was followed by a return to the sea-level value
within a few days despite continued exposure to altitude. Again these changes were
attributed to the establishment of a physiologic balance between respiratory alkalosis and
2,3-DPG, while standard in-vitro P50 increased in tandem with 2,3-DPG (Mairbaurl et
al.,1993).
It is somewhat surprising that animals have adopted a reduction in P50 as part of their
adaptation to altitude yet humans have not been shown to exhibit this reduction as either
acclimatization or adaptation, despite some populating the high altitudes for over 25,000
years (Beall, 2007a). We therefore considered the possibility that measurement biases
arise from methods of measuring P50 invitro because they exclude the possibility of any in-
vivo responses affecting the Hb-O2 affinity.
In the past, measurements of P50 have been performed exclusively in-vitro because of
the technical difficulties of reliably providing suitable conditions for in-vivo measures.
However, such capability has recently become available with the development of means of
accurately controlling arterial PO2 and PCO2 (PaO2 and PaCO2) independently of each
other and of minute ventilation (Slessarev et al., 2007). Maintaining PaCO2 at a constant
value during measurement of the ODC is required to fix the position of the ODC, which
varies with pH; then the imposition of a range of hypoxic arterial blood gas tensions
provides a description of the ODC at that pH. With such means at hand, we set out to re-
examine the question of whether there are changes in the in-vivo ODC in lowlanders and
Andean highlanders as a result of acute and chronic exposure to hypoxia. We
hypothesized that, if a difference from the in-vitro data is detected, it would be in the
direction of a reduction in the P50, as in adapted animals.
1. Pendahuluan

Banyak hewan telah beradaptasi dengan lingkungan hipoksia dengan meningkatkan

afinitas hemoglobin-oksigen (Hb-O2) mereka. Afinitas ini biasanya dinyatakan dalam
kurva oksihemoglobin disosiasi (ODC) sebagai tekanan parsial O2 (PO2) di mana Hb
adalah 50% jenuh (P50). Arah pergeseran dari ODC, jika ada, erat dengan mekanisme
aklimatisasi manusia untuk ketinggian. Sebuah P50 menurun nikmat O2 proses pada paru-
paru sementara P50 meningkat nikmat O2 pada jaringan (Lenfant et al, 1971;. Winslow,
2007). Peneliti berpendapat keuntungan dari kedua perubahan itu (Barcroft 1923; Lenfant
dan Sullivan, 1971), tetapi hewan yang telah beradaptasi dengan ketinggian, seperti tikus,
camillae, angsa, dan katak antara lain, memiliki P50s lebih rendah dari sepupu ketinggian
rendah ( Banchero et al, 1971;. Lenfant et al, 1971;.. Reynafarje et al, 1975;. Johansen et
al, 1976).
P50 dapat ditentukan in-vitro dengan menggambar darah di atas (paling teroksigenasi)
akhir ODC dan mengukur oksihemoglobin konsentrasi sementara progresif mengurangi
PO2 pada tekanan parsial konstan CO2 (PCO2) dalam sampel (Astrup et al, 1965;. Edwards
dan Martin, 1966;. Duvelleroy et al, 1970). Sejak P 50 juga dipengaruhi oleh pH dan PCO2
karena efek Bohr, P50 biasanya ditentukan pada standar pH 7.4 dan PCO 2 = 40 mmHg (P50
standar). Dalam beberapa studi pH dan PCO 2 yang sama yang diukur pada saat sampel
darah diambil digunakan untuk menentukan P50 tersebut; dalam hal ini disebut P50 sebagai
fisiologis.
Sebuah survei sejarah singkat investigasi dari P50 di ketinggian disediakan oleh
Winslow (2007). Pada tahun 1923 Barcroft (1923) mengamati bahwa penduduk asli Peru
memiliki P50 lebih rendah ketika tinggal di 4300 m dari pada permukaan laut. Sebuah
ekspedisi pada tahun 1964 untuk mengkonfirmasi temuan ini ditemukan bukan bahwa in-
vitro standar P50 dari dataran tinggi Peru telah bergeser ke kanan (Hurtado, 1964). In-vitro
standar P50 di akut dari dataran rendah dan dilaporkan meningkat, disertai dengan
peningkatan terukur dalam 2,3-DPG (Benesch dan Benesch, 1967; Chanutin dan Curnish,
1967). Kemudian Morpurgo kedua et al. (1970) dan Torrance et al. (1970) melaporkan
standar yang lebih tinggi di-vitro P50 di dataran tinggi Andes dibandingkan dengan dataran
rendah. Lenfant et al. (1968, 1971) berpendapat bahwa peningkatan 2,3-DPG berfungsi
sebagai kompensasi metabolik forthe alkalosis pernapasan yang dihasilkan dari respon
ventilasi hipoksia akut.
 Pada tahun 1981 Winslow et al. (1981) ditinjau kembali Andes dan mengulangi
ukuran dari ODC menggunakan metode yang dapat dilakukan pada darah segar yang
diambil dari lokasi (Winslow et al., 1978), sehingga menghindari degradasi 2,3-DPG yang
terjadi ketika darah disimpan . Mereka menemukan bahwa memang, standar in-vitro
menunjukkan bahwa P50 itu sedikit meningkat dan berhubungan dengan peningkatan
konsentrasi 2,3-DPG. Analisis mereka darah, menjaga PCO 2 dan pH pada saat darah
diambil, menunjukkan bahwa alkalosis pernapasan kompensasi dari ketinggian
mengimbangi efek dari 2,3-DPG, sehingga P 50 menjadi tidak berubah dari yang di pribumi
yang tinggal di permukaan laut. Namun, Winslow et al. (1984) menemukan bahwa pada
pendakian ke lebih dari 6300 m ada pengurangan P50 fisiologis karena efek dari alkalosis
pernapasan ditingkatkan di ketinggian ini mendominasi atas efek dari kenaikan 2,3-DPG.
Mairbaurl et al. (1990) dan Wagner et al. (2007) mempelajari dataran rendah selama
pendakian progresif untuk ketinggian dan menemukan penurunan awal dalam fisiologis
in-vitro P50 diikuti dengan kembali ke nilai permukaan laut dalam beberapa hari
meskipun paparan lanjutan untuk ketinggian. Sekali lagi perubahan ini dikaitkan dengan
pembentukan keseimbangan fisiologis antara alkalosis pernapasan dan 2,3-DPG,
sementara standar in-vitro P50 meningkat seiring dengan 2,3-DPG (Mairbaurl et al.,
1993).
Hal ini agak mengherankan bahwa hewan telah mengadopsi pengurangan P50 sebagai
bagian dari adaptasi mereka untuk ketinggian manusia belum ditampilkan untuk
menunjukkan pengurangan ini baik sebagai aklimatisasi atau adaptasi, meskipun beberapa
mengisi ketinggian tinggi selama lebih dari 25.000 tahun (Beall, 2007a) . Oleh karena itu
kami mempertimbangkan kemungkinan bahwa bias pengukuran timbul dari metode
pengukuran P50 invitro karena mereka mengesampingkan kemungkinan ada tanggapan di-
vivo mempengaruhi afinitas Hb-O2.
Di masa lalu, pengukuran P50 telah dilakukan secara eksklusif di-vitro karena
kesulitan teknis andal menyediakan kondisi yang cocok untuk tindakan in-vivo. Namun,
kemampuan tersebut baru-baru ini menjadi tersedia dengan pengembangan sarana PO 2
mengendalikan akurat arteri dan PCO2 (PaO2 dan PaCO2) secara independen satu sama
lain dan ventilasi menit (Slessarev et al., 2007). Mempertahankan PaCO 2 pada nilai
konstan selama pengukuran dari ODC diperlukan untuk memperbaiki posisi ODC, yang
bervariasi dengan pH; maka pengenaan berbagai hipoksia ketegangan gas darah arteri
memberikan gambaran dari ODC pada pH itu. Dengan cara seperti di tangan, kami
berangkat untuk memeriksa kembali pertanyaan apakah ada perubahan dalam ODC in-
vivo di dataran rendah dan dataran tinggi Andes sebagai akibat akut dan kronis hipoksia.
Kami berhipotesis bahwa, jika perbedaan dari data in-vitro terdeteksi, akan ke arah
pengurangan P50, seperti pada hewan disesuaikan.