Professional Documents
Culture Documents
BÁO CÁO
PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH
Họ và tên MSSV
Mai Quế Trân 18180056
Nguyễn Võ Kỳ Duyên 18180181
Cao Văn Đức Hinh 18180196
Lý Quốc Huy 18180198
Trừ Lâm Yến Linh 18180218
MỤC LỤC
I. GIỚI THIỆU:................................................................................................................................................1
1. TỔNG QUAN:...............................................................................................................................................1
2. QUÁ TRÌNH PHÁT HIỆN:..............................................................................................................................1
3. PHÂN LOẠI:.................................................................................................................................................2
4. ĐẶC ĐIỂM:..................................................................................................................................................2
a. Hình thái:..............................................................................................................................................2
b. Cấu trúc,các loại kháng nguyên :.........................................................................................................2
c. Tính chất sinh hóa và yếu tố độc lực:...................................................................................................3
khuẩn học người Đức và người Anh, bao gồm cả Robert Koch
xác minh và xác nhận.[4]
Năm 1889, Chi “ Salmonella ” được đặt theo tên của Daniel
Elmer Salmon, một nhà nghiên cứu bệnh học thú y người Mỹ,
người quản lý chương trình nghiên cứu của USDA, và do đó
sinh vật này được đặt theo tên của anh ta, mặc dù thực tế là
nhiều nhà khoa học đã đóng góp vào nhiệm vụ.[5] Hình I.2: Daniel Elmer Salmon
3
3. Phân loại:
Có hơn 1800 huyết thanh đã biết mà phân loại hiện tại coi là các loài riêng biệt.[6]
Kháng nguyên H có thể xuất hiện ở một trong hai dạng hoặc cả hai dạng, được gọi là pha 1 và
pha 2. Các sinh vật có xu hướng thay đổi từ pha này sang pha khác. Kháng nguyên O xuất
hiện trên bề mặt của màng ngoài và được xác định bởi các trình tự đường cụ thể trên bề mặt tế
bào. Kháng nguyên Vi là kháng nguyên bề ngoài phủ lên kháng nguyên O; nó hiện diện trong
một vài serovars, quan trọng nhất là S typhi.[6]
c. Tính chất sinh hóa và yếu tố độc lực:
Cũng như các trực khuẩn Gram âm khác, vỏ tế bào của salmonella chứa cấu trúc
lipopolysaccharide (LPS) phức tạp được giải phóng khi ly giải tế bào và ở một mức độ
nào đó, trong quá trình nuôi cấy. Phần gốc LPS có thể hoạt động như một nội độc tố và có
thể quan trọng trong việc xác định độc lực của sinh vật. Phức hợp nội độc tố đại phân tử
này bao gồm ba thành phần, một áo polysaccharide O bên ngoài, một phần giữa (lõi R), và
một lớp lipid A bên trong. Cấu trúc lipopolysaccharide là quan trọng vì một số lý do.
Thứ nhất, bản chất của các đơn vị đường lặp lại trong chuỗi polysaccharide O bên ngoài
chịu trách nhiệm về tính đặc hiệu của kháng nguyên O; nó cũng có thể giúp xác định độc
lực của sinh vật. Salmonella thiếu trình tự hoàn chỉnh của các đơn vị lặp lại đường O được
gọi là thô vì các khuẩn lạc có bề ngoài thô ráp; chúng thường có độc lực hoặc ít độc lực
hơn các chủng trơn có bổ sung đầy đủ các đơn vị đường lặp lại O.
Thứ hai, các kháng thể chống lại lõi R (kháng nguyên vi khuẩn đường ruột thông thường)
có thể bảo vệ chống lại sự lây nhiễm của nhiều loại vi khuẩn Gram âm có chung cấu trúc
lõi hoặc có thể làm giảm tác dụng gây chết của chúng.
Thứ ba, thành phần nội độc tố của thành tế bào có thể đóng một vai trò quan trọng trong
cơ chế bệnh sinh của nhiều biểu hiện lâm sàng của nhiễm trùng Gram âm. Nội độc tố gây
sốt, kích hoạt bổ thể huyết thanh, kinin và hệ thống đông máu, làm suy giảm chức năng cơ
tim và thay đổi chức năng tế bào lympho. Nội độc tố tuần hoàn có thể là nguyên nhân một
phần gây ra nhiều biểu hiện của sốc nhiễm trùng có thể xảy ra trong nhiễm trùng toàn
thân.[6]
schottmuelleri gây sốt ruột; S choleraesuis gây nhiễm trùng huyết hoặc nhiễm trùng khu
trú; S typhimurium và S enteritidis gây viêm dạ dày ruột); đôi khi, bất kỳ loại huyết thanh nào
cũng có thể tạo ra bất kỳ hội chứng nào.
Nói chung, các bệnh nhiễm trùng nghiêm trọng hơn xảy ra ở trẻ sơ sinh, người lớn trên 50
tuổi và ở những đối tượng bị bệnh suy nhược.
Hầu hết các vi khuẩn salmonellae không phải thương hàn xâm nhập vào cơ thể khi ăn phải
thực phẩm bị ô nhiễm (Hình II.1.2). Sự lây lan salmonella từ người sang người cũng xảy
ra. Để có thể gây bệnh hoàn toàn, vi khuẩn salmonellae phải có nhiều thuộc tính được gọi là
các yếu tố độc lực.
Chúng bao gồm:
(1) khả năng xâm nhập tế bào
(2) một lớp áo lipopolysaccharide hoàn chỉnh
(3) khả năng sao chép nội bào
(4) có thể tạo ra (các) độc tố.
Sau khi nuốt phải, các sinh vật xâm nhập vào hồi tràng và ruột kết, xâm nhập vào biểu mô
ruột, và sinh sôi nảy nở trong biểu mô và các nang bạch huyết. Cơ chế mà vi khuẩn
salmonellae xâm nhập biểu mô được hiểu một phần và liên quan đến sự gắn kết ban đầu với
các thụ thể cụ thể trên bề mặt tế bào biểu mô sau đó là sự xâm nhập. Sự xâm lấn xảy ra bởi
sinh vật làm cho màng tế bào ruột trải qua quá trình "xù lông" và do đó kích thích quá trình
pinocytosis của sinh vật
6
( Hình II.1.3). Sự xâm lấn phụ thuộc vào sự sắp xếp lại của bộ xương tế bào và có thể liên
quan đến sự gia tăng inositol phosphate và canxi trong tế bào. Sự gắn và sự xâm nhập nằm
dưới sự kiểm soát di truyền riêng biệt và liên quan đến nhiều gen trong cả nhiễm sắc thể và
plasmid.
Sau khi xâm nhập vào biểu mô, các sinh vật nhân lên nội bào và sau đó lan đến các hạch bạch
huyết mạc treo và khắp cơ thể qua hệ tuần hoàn; chúng được hấp thụ bởi các tế bào lưới nội
mô. Hệ thống lưới nội mô giới hạn và kiểm soát sự lây lan của sinh vật. Tuy nhiên, tùy thuộc
vào loại huyết thanh và hiệu quả của việc bảo vệ vật chủ chống lại loại huyết thanh đó, một số
sinh vật có thể lây nhiễm sang gan, lá lách, túi mật, xương, màng não và các cơ quan khác
( Hình II.1.1 ). May mắn thay, hầu hết các huyết thanh đều bị giết ngay tại các vị trí
ngoài đường tiêu hóa, và bệnh nhiễm khuẩn Salmonella phổ biến nhất ở người , viêm dạ dày
ruột, vẫn chỉ giới hạn trong ruột.
Sau khi xâm nhập vào ruột, hầu hết vi khuẩn Salmonellae gây ra phản ứng viêm cấp tính, có
thể gây loét. Chúng có thể tạo ra độc tố tế bào ức chế tổng hợp protein. Liệu những độc tố tế
bào này có góp phần vào phản ứng viêm hoặc gây loét hay không vẫn chưa được biết. Tuy
nhiên, sự xâm lấn của niêm mạc khiến các tế bào biểu mô tổng hợp và giải phóng các
cytokine tiền viêm khác nhau, bao gồm: IL-1, IL-6, IL-8, TNF-2, IFN-U, MCP-1 và GM-
7
CSF. Những phản ứng này gây ra phản ứng viêm cấp tính và cũng có thể là nguyên nhân gây
ra tổn thương cho ruột. Do phản ứng viêm đường ruột nên thường gặp các triệu chứng viêm
như sốt, ớn lạnh, đau bụng, tăng bạch cầu và tiêu chảy. Phân có thể chứa bạch cầu đa nhân
trung tính, máu và chất nhầy.
Hiện nay người ta đã biết nhiều về cơ chế gây bệnh viêm dạ dày ruột và tiêu chảy
do Salmonella. Hình II.1.2 và 3 tóm tắt cơ chế bệnh sinh của bệnh tiêu chảy và viêm ruột
do Salmonella. Chỉ những chủng xâm nhập vào niêm mạc ruột mới có liên quan đến sự xuất
hiện của phản ứng viêm cấp tính và tiêu chảy (Hình II.1.4).
Tiêu chảy là do sự bài tiết chất lỏng và chất điện giải của ruột non và ruột già. Cơ chế tiết
không rõ ràng, nhưng tiết không chỉ đơn thuần là biểu hiện của sự phá hủy mô và
loét. Salmonella xâm nhập vào các tế bào biểu mô ruột nhưng, không giống
như Shigella và E. coli xâm nhập, không thoát khỏi phagosome. Do đó, mức độ lan tràn gian
bào và loét của biểu mô là tối thiểu.
Salmonella thoát ra từ mặt đáy của tế bào biểu mô vào lớp đệm. Sự lây lan toàn thân của các
sinh vật có thể xảy ra, làm phát sinh sốt ruột. Sự xâm lấn của niêm mạc ruột được theo sau
bởi sự hoạt hóa của adenylate cyclase niêm mạc; kết quả là sự gia tăng AMP vòng theo chu
kỳ gây ra sự bài tiết. Cơ chế kích thích adenylate cyclase vẫn chưa được hiểu rõ; nó có thể
liên quan đến việc sản xuất cục bộ các prostaglandin hoặc các thành phần khác của phản ứng
viêm. Ngoài ra, các chủng Salmonella tạo ra một hoặc nhiều chất giống độc tố ruột có thể
kích thích sự bài tiết của ruột. Tuy nhiên, vai trò chính xác của những chất độc này trong cơ
chế bệnh sinh củaViêm ruột và tiêu chảy do vi khuẩn Salmonella chưa được thành lập.[6]
Hình II.1.4: Hình ảnh chụp điện tử cho thấy sự xâm nhập lang bởi Salmonella. (Các mũi tên chỉ đến các sinh vật Salmonella xâm nhập)
typhimurium của các tế bào biểu mô hồi tràng chuột
8
Thời gian ủ bệnh viêm dạ dày ruột do vi khuẩn Salmonella (ngộ độc thực phẩm) phụ thuộc
vào liều lượng vi khuẩn. Các triệu chứng thường bắt đầu từ 6-48 giờ sau khi ăn phải thức ăn
hoặc nước bị ô nhiễm và thường ở dạng buồn nôn, nôn mửa, tiêu chảy và đau bụng. Đau cơ
và nhức đầu là phổ biến; tuy nhiên, biểu hiện cơ bản là tiêu chảy. Sốt (38°C đến 39°C) và ớn
lạnh cũng rất phổ biến. Ít nhất 2/3 số bệnh nhân phàn nàn về những cơn đau quặn bụng. Thời
gian sốt và tiêu chảy khác nhau, nhưng thường là từ 2-7 ngày.
Sốt ruột là dạng nhiễm khuẩn salmonellosis toàn thân nghiêm trọng. Sốt ruột được nghiên cứu
nhiều nhất là sốt thương hàn, dạng do S typhi gây ra, nhưng bất kỳ loài Salmonella nào cũng
có thể gây ra loại bệnh này. Các triệu chứng bắt đầu sau thời gian ủ bệnh từ 10-14 ngày. Sốt
ruột có thể có trước viêm dạ dày ruột, thường khỏi trước khi khởi phát bệnh toàn thân. Các
triệu chứng của sốt ruột không đặc hiệu và bao gồm sốt, chán ăn, nhức đầu, đau cơ và táo
bón. Sốt ruột là tình trạng nhiễm trùng nặng và có thể gây tử vong nếu không dùng kháng
sinh kịp thời.[6]
nhập vào các sản phẩm nướng, như ngũ cốc và bánh quy giòn. Thực phẩm cũng có thể bị
nhiễm bẩn khi mọi người xử lý không đúng cách, bằng cách không rửa tay kỹ sau khi đi vệ
sinh, thay tã hoặc chạm vào bề mặt bị ô nhiễm. Sự ô nhiễm cũng có thể xảy ra nếu bạn chuẩn
bị sản xuất trên bề mặt có thịt sống. Nhiệt độ của nước bạn sử dụng khi rửa tay cũng có thể
tạo ra sự khác biệt. “Cơ thể của chúng ta là 98 oF (37oC), đó là nhiệt độ tối ưu cho Salmonella,
vì vậy nước “ấm” sẽ không giết chết Salmonella”, Fankhauser nói.
Những người có nguy cơ bị nhiễm Salmonella bao gồm trẻ nhỏ, người lớn tuổi, phụ nữ mang
thai và những người bị tổn thương hệ thống miễn dịch hoặc các bệnh về đường ruột, như bệnh
viêm ruột.Người trưởng thành khỏe mạnh cũng có thể dễ bị nhiễm Salmonella hơn bằng cách
uống thuốc kháng acid, làm giảm độ acid của dạ dày hoặc kháng sinh, làm giảm số lượng vi
khuẩn tiêu diệt Salmonella trong ruột.[Tạp chí Sinh học]
Vi khuẩn Salmonella typhi gây ra bệnh thương hàn với triệu chứng sốt kéo dài. Tình trạng
này nếu không được phát hiện và điều trị kịp thời thì nó có thể gây ra những biến chứng
nặng như:
o Viêm não nặng
o Xuất huyết tiêu hóa
o Thủng ruột
o Viêm cơ tim
10
c. Salmonellosis:
Salmonellosis là một bệnh nhiễm trùng có triệu chứng do vi khuẩn thuộc loại Salmonella
gây ra. Các triệu chứng phổ biến nhất là tiêu chảy , sốt , đau quặn bụng và nôn mửa .
Salmonellosis là một trong những nguyên nhân phổ biến nhất của bệnh tiêu chảy trên toàn
cầu.
Tác nhân gây bệnh là S. pullorum, vi khuẩn Gram (-), không di động. S. pullorum rất
thích hợp với khí hậu ôn hòa và có thể tồn tại được trong môi trường này vài tháng. Có thể
xông trại ấp trứng gà giống bằng formaldehyde để diệt S. pullorum. Triệu chứng đại thể
điển hình là xuất hiện các nốt màu trắng xám trên một hay một vài cơ quan sau: tim, phổi,
gan, thành của mề và ruột, phần phúc mạc.
Hầu hết các cơ quan bị nhiễm bệnh có chứa độc tố ruột (endotoxin) và là nguyên nhân
gây ra các triệu chứng của bệnh như tiêu chảy, mất nước và xuất hiện hỗn hợp lỏng dính
xung quanh hậu môn. Ruột bị viêm, xuất huyết và chảy dịch. Manh tràng chứa đầy
gelatine, sợi huyết và chất dịch giống-như-phô-mai. Đây là triệu chứng đặc trưng để xác
định bệnh do Salmonella gây ra, nhưng không phải tất cả các chủng đều gây ra triệu
chứng này. Chất dịch viêm có lẫn sợi huyết trong manh tràng thường có hình dạng y như
các nếp gấp của niêm mạc. Sự lây lan mầm bệnh này có thể cũng làm các nguồn protein
động vật bị nhiễm vi khuẩn (thịt và bột xương,…). Các loài gặm nhấm cũng là nguồn
chứa vi khuẩn gây ra bệnh phó thương hàn quan trọng.
Thông thường, để phát hiện vi khuẩn Salmonella, người ta tiến hành phân tích phân, máu,
nước tiểu,… Xét nghiệm thường được ưu tiên tiến hành vì cho kết quả chính xác nhất,
loại trừ bệnh do vi khuẩn này gây ra với những bệnh khác có cùng triệu chứng. Bệnh
thương hàn là bệnh truyền nhiễm cấp tính do Salmonella gây ra, rất nguy hiểm. Hiện nay,
người ta tiến hành xét nghiệm máu để phát
hiện Salmonella thông qua tìm kháng thể (Samonella widal).
Salmonella Widal:
Là xét nghiệm dựa phản ứng ngưng kết đặc hiệu giữa kháng nguyên - kháng thể phát hiện
kháng thể O và H kháng Salmonella trong huyết thanh bệnh nhân. Phản ứng dùng kháng
nguyên của 3 chủng: S. typhi (H), S. paratyphi A (AH) và B (BH), xét nghiệm làm 2 lần,
lần 1: cuối tuần 1, lần 2 cách lần 1: 7-14 ngày. Kết quả (+) khi hiệu giá kháng thể lần 2
tăng gấp 4 lần so với lần 1.
Phương pháp này có thể được tiến hành trên giấy, hoặc trên ống nghiệm. Tuy nhiên, thực
hiện trên ống nghiệm sẽ mang lại kết quả có độ tin cậy cao hơn.
Cách tiến hành:
Trên phiến giấy:
Đánh số trên giấy để ký hiệu.
Hút 0,08ml, 0,04ml, 0,02ml, 0,01ml và 0,005ml huyết thanh lên một hàng của vòng
tròn đường kính = 3cm, chúng ta sẽ hút thành 2 hàng để kiểm tra 2 kháng nguyên O và
H.
Lắc chai hóa chất đều và thêm 1 giọt lên mỗi ô huyết thanh.
Trộn đều bằng que khuấy và xoay tròn đều slide trong 1 phút để kiểm tra độ ngưng
kết.
Kết quả ngưng kết sau 1 phút:
Nồng độ huyết thanh 0,08 mL 0,04 mL 0,02 mL 0,01 mL 0,005 mL
Mức độ dương tính 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320
Thêm một giọt huyền phù kháng nguyên WIDALTEST (O, H, AH và BH) từ các lọ thuốc thử
vào tất cả 8 ống nghiệm của mỗi bộ, trộn đều.
Đậy nắp ống và ủ ở 37 ° C qua đêm (khoảng 18 giờ).
Nhẹ nhàng tháo nút lắng xuống và quan sát sự kết tụ.
Đọc kết quả:
oNgưng kết với kháng nguyên chỉ ra sự hiện của kháng thể.
oPhản ứng Salmonella Widal âm tính: nếu hỗn hợp phản ứng đồng nhất.
oPhản ứng Salmonella Widal dương tính: các hạt ngưng kết có thể quan sát được bằng mắt
thường.
Kháng thể O: ngưng kết hạt nhỏ, bền vững, lắc khó tan.
Kháng thể H: ngưng kết như bông, hạt to, khi lắc dễ tan.
Hiệu giá kháng thể được tính ở ống huyết thanh nào có độ pha loãng lớn nhất vẫn còn hiện
tượng ngưng kết xảy ra.
Nhiễm trùng Salmonella nặng có thể gây sốt (sốt thương hàn) sẽ được điều trị bằng kháng
sinh theo chỉ định của bác sĩ. Bổ sung nước, ăn uống kĩ càng, tránh sử dụng những thực phẩm
15
từ sữa để không làm cho tình trạng tiêu chảy nặng hơn. Bệnh nhân có thể cần truyền dịch khi
tiêu chảy nặng, mất nước quá nhiều.
Rửa tay thật kỹ bằng xà phòng và nước nóng trước khi xử lý thức ăn và sau khi tiếp xúc
với động vật và thức ăn hoặc môi trường sống của chúng.
Không để các loài bò sát, lưỡng cư vào những nơi bạn cho trẻ nhỏ ăn hoặc tắm, những
người có hệ miễn dịch yếu.
Nấu kỹ tất cả các loại thịt, đặc biệt là thịt gia cầm, kiểm tra bằng nhiệt kế thực phẩm
Không ăn trứng sống hoặc nấu chưa chín.
Tránh dùng các sản phẩm từ sữa hoặc nước trái cây chưa tiệt trùng.
Giữ thực phẩm trong tủ lạnh dưới 4oC trước và sau khi nấu, rã đông thịt và gia cầm
trong tủ lạnh thay vì ở nhiệt độ phòng.
Bảo quản thực phẩm đúng cách, tách riêng thực phẩm chín và sống.
Chỉ uống nước đóng chai khi đi du lịch.
Tránh tiếp xúc với người bị nhiễm bệnh hoặc động vật có nguy cơ nhiễm vi khuẩn
Salmonella như rùa trong kỳ sinh sản.
Gọi cho bác sĩ nếu bạn bị mất nước (nếp nhăn da, khô da và nước tiểu ít hay sẫm màu)
hoặc có các triệu chứng kéo dài hơn 48 giờ như sốt cao, tiêu chảy nặng, da hoặc mắt vàng.
[Khoahoc.tv]
[King County]
[Medlatec]
TIẾNG ANH:
[1] S. Steve Yan, M. L. Pendrak, B. Abela-Ridder, J. W. Punderson, D. P. Fedorko, and S. L.
Foley, “An overview of Salmonella typing: Public health perspectives,” Clin. Appl. Immunol.
16