Bá o cá o thí nghiệm

Phần 2: Định Lượ ng Vi Sinh Vậ t

Sinh viên: Nguyễn Thị Tình

Mssv: 20180564

Mã lớ p:

I/ Cơ sở lý thuyết

1. Phương phá p định lượ ng trự c tiếp

- Định nghĩa: Định lượ ng trự c tiếp là nhữ ng phương phá p đếm trự c tiếp số
tế bà o vi sinh vậ t có trên tiêu bả n là m từ vậ t phẩ m nghiên cứ u.
- Đặ c điểm: Phương phá p đếm trự c tiếp có ưu điểm nhanh, dễ thao tá c, tuy
nhiên nhượ c điểm lớ n là kém chính xá c vì có thể đếm cả nhữ ng tế bà o đã
chết.
- Mộ t số phương phá p đếm trự c tiếp:
 Sử dụ ng buồ ng đếm hồ ng cầ u: thườ ng dù ng để đếm cá c vi sinh vậ t
có kích thướ c khá lớ n như tế bà o nấ m men, bà o tử nấ m mố c
 Phương phá p Brit: dù ng để định lượ ng vsv trong canh trườ ng lỏ ng.
B1: Đo đườ ng kính kính trườ ng củ a hệ thố ng ố ng kính
B2: Lấ y 0,01 ml mẫ u, dà n đều 2-4 cm2; để khô , nhuộ m đơn bằ ng
xanhmetylen
B3: Quan sá t dướ i kính hiển vi
2. Phương phá p định lượ ng giá n tiếp

a, Phương phá p sử dụ ng mô i trườ ng đặ c

- Là phương phá p định lượ ng vi sinh vậ t bằ ng cá ch gieo cấ y mộ t lượ ng nhấ t

định vậ t phẩ m nghiên cứ u lên mô i trườ ng thứ c ă n thích hợ p, nuô i và đếm
khuẩ n lạ c để suy ra số tế bà o ban đầ u.
- Đặ c điểm: Phương phá p nà y có ưu điểm chỉ đếm nhữ ng bà o tử hoặ c tế bà o
cò n số ng, tuy nhiên tố n thờ i gian, cô ng sứ c và kết quả có thể sai lệch do
mộ t số lý do như: Khuẩ n lạ c có thể đượ c hình thà nh từ mộ t hoặ c mộ t số tế
bà o ban đầ u. Đố i vớ i vsv số ng dính nhau thà nh chuỗ i, đô i,.. thì khó tá ch
khuẩ n lạ c, dẫ n tớ i phả n á nh kết quả khô ng chính xá c. Khuẩ n lạ c nếu để lâ u
có thể dính và o nhau, khó quan sá t. Việc sủ dụ ng mộ t mô i trườ ng dinh
dưỡ ng là m mô i trườ ng chung cho tấ t cả cá c vsv trong mẫ u cù ng phá t triển
là khô ng đá nh giá khá ch quan, chính xá c đượ c, vì khô ng có loạ i mô i trườ ng
 nà o cho phép mọ i vsv phá t triển vớ i tố c độ như nhau, vì vậ y việc đếm
khuẩ n lạ c có thể cho kết quả chưa thậ t chính xá c, nếu khuẩ n lạ c hình thà nh
cò n bé (mắ t thườ ng khô ng quan sá t đượ c) do vsv thích nghi vớ i mô i
trườ ng chậ m hơn, hay bà o tử thì sẽ cầ n mộ t thờ i gian nhấ t định để thích
nghi, sinh trưở ng và phá t triển,..

b, Phương phá p đo độ đụ c

c, Phương phá p dù ng số có khả năng nhấ t (MPN)

(Phương phá p này sẽ đượ c tiến hà nh và bá o cá o ở buổ i tiếp theo)

II/ Tiến hà nh thí nghiệm

Bà i thí nghiệm định lượ ng vi sinh vậ t trong 3 mẫ u: đấ t, nướ c, khô ng khí. Sử dụ ng

phương phá p định lượ ng giá n tiếp trên mô i trườ ng đặ c, đượ c tiến hà nh như sau:

1. Mẫ u nướ c

Bướ c 1: Tiến hà nh pha loã ng canh trườ ng

Lấ y 1 ml canh trườ ng cho và o bình tam giá c đã đự ng sẵ n 99 ml nướ c cấ t đã vô

trù ng, pha loã ng lầ n lượ t 10-1 lầ n đến khi đạ t độ pha loã ng nhỏ nhấ t là 10-11, sử
dụ ng dã y cá c ố ng eppendorf và nướ c muỗ i sinh lý để pha loã ng.

Bướ c 2: Gieo cấ y lên hộ p petri

Dù ng pipet lấ y 0,1 ml canh trườ ng đã pha loã ng ở cá c nồ ng độ 10-9, 10-10, 10-11 cho
lên mặ t thạ ch, sau đó vô trù ng que trang trên ngọ n lử a đèn cồ n và trang đều canh
trườ ng. Lưu ý chỉ mở hé nắ p hộ p petri.

Bướ c 3: Nuô i

Đặ t cá c hộ p petri đã cấ y vsv và o tủ ấ m trong 24-48h để nuô i, quan sá t khuẩ n lạ c

hình thà nh.

2. Mẫ u đấ t

Lấ y mộ t lượ ng đấ t cho và o cố i nghiền mịn, sau đó dù ng câ n phâ n tích câ n 1 gam

mẫ u đấ t. Cho 1 gam đấ t và o bình tam giá c đã đự ng sẵ n 99 ml nướ c muố i sinh lý
đã vô trù ng sẵ n. Tiến hà nh pha loã ng và gieo cấ y tương tự mẫ u nướ c.

Chú ý: Sau mỗ i lầ n pha loã ng ta phả i lắ c đều ố ng eppendorf bằ ng má y trộ n vortex

trướ c khi pha loã ng đến nồ ng độ tiếp theo.

3. Mẫ u khô ng khí
Nguyên tắ c: Trên mộ t diện tích rộ ng 100 cm2, mở ra trong 5 phú t, thì lượ ng vi
sinh vậ t rơi xuố ng tương đương vớ i lượ ng vi sinh vậ t có trong 10 lít khô ng khí
(CFU/10lit kk). Lưu ý, đặ t hộ p petri ở vị trí có khô ng khí ổ n định, ít ngườ i qua lạ i.
Phương phá p đơn giả n, dễ là m nhưng độ chính xá c khô ng cao.

Sau khi mở hộ p petri 5 phú t ngoà i khô ng khí thì đạ y nắ m lạ i và đặ t trong tủ ấ m,

nuô i 24- 48 h và quan sá t, đếm khuẩ n lạ c.

III/ Kết quả

Mẫ u đấ t
Độ pha loã ng 10 lầ n
-9

Độ pha loã ng 10-10 lầ n

Độ pha loã ng 10-11 lầ n