PROTOKOLL-PBMC:er

1. Markera exempeldata på etiketten i en bok (gul);

2. Centrifugera proverna vid 1300 G/22 sanguin i 8 min;
3. Återvinna plasman och förvara den i criovials (max 2) för att indikera ”plasma -
patienttorsk. - timing - datum
4. På en tredje kryovials indikerar PBMS och patienttorsk. (inte den kod som rapporterats på
provröret utan på den bärbara laboratoriedatorn);
5. Häll blodet direkt i en 50 ml falk;
6. Återhämta blodet kvar i provröret genom att tvätta väl med PBS (~3 ml) och häll i falken;
7. Gör falken upp till 35 ml med PBS;
8. Skaka innehållet i falken väl för att homogenisera innehållet.
*Obs: Skaka proverna omedelbart före nästa steg för att undvika
bildandet av en gradient;
9. Tillsätt 10 ml Ficoll till falken: Ställ pipetten till s (långsam) och ta den mycket långsamt.
Häll sedan långsamt den i falken från botten tills du ser en liten bubbla. Ta försiktigt bort
pipetten;
10. Centrifugera falken vid 2500 varv/min/22 och/6 enligt/3 dec under 25 min (centrifug med
broms i det skrämmande rummet);
11. Under tiden, frysa plasma-innehållande kryorör vid -20 sanguin och kasta provrören som
innehåller resterande blod efter tvätt med blekmedel;
12. Efter centrifugen, använd en pipett eller pasteur för att försiktigt andas ut ringen som
bildas i 50ml falken som innehåller PBMS och häll i en ny falk;
13. Fyll upp till volym falken som innehåller PBMS med PBS till 50 ml;
14 centrifug vid 1500 rpm/22 per 10 min;
15. Kasta sup direkt från falken i den tomma undvika kontakt mellan de två;
16. Tillsätt 2 ml ACK till falken i 2 min för Lys och återupplivning;
17. Fyll på upp till 10 ml med PBS och centrifugera vid 1500 rpm/22 µl i 10 min;
18. Upprepa steg 15;
19. Återupplivning celler i PBS för cell räkna (~20/30 ml) RÄKNA;
20. Markera upp20. Marcar en